miR-335 调控 Survivin 和 NF-κB 表达对 B 细胞淋巴瘤细胞侵袭、迁移和凋亡的影响

目的：探讨miR-335调控Survivin和NF-κB表达对B细胞淋巴瘤细胞侵袭、迁移和凋亡的影响。方法：取对数生长期的B细胞淋巴瘤细胞株SU-DHL-4,分为对照组（不做任何处理）、空转染组（转染空载体）和过表达组（转染miR-335）。转染48 h后采用RT-PCR和Western blot分别检测各组细胞miR-335水平和Survivin、NF-κB蛋白的相对表达量。采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力。流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：与对照组相比,空转染组miR-335表达水平、Survivin蛋白表达水平、细胞迁移率、侵袭细胞数和细胞凋亡率差异无统计学意义（P>0.05）,过表达组miR-335表达水平和细胞凋亡率明显升高（P<0.05）,Survivin和NF-κB蛋白表达水平、细胞迁移率和侵袭细胞数明显降低（P<0.05）。与空转染组相比,过表达组miR-335表达水平和细胞凋亡率明显升高（P<0.05）,Survivin和NF-κB蛋白表达水平、细胞迁移率和侵袭细胞数明显降低（P<0.05）。结论：miR-33...     

STAT3siRNA对肺腺癌A549细胞STAT3表达和细胞生物学行为的影响

目的:观察经RNA干扰沉默STAT3基因对人肺腺癌细胞A549生长和凋亡的影响。方法:设计并经化学合成了针对STAT3基因不同位点的3条小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列(STAT3siRNA1、STAT3siRNA2、STAT3siRNA3),在脂质体(LipofectamineTM2000)介导下转染人肺腺癌细胞株A549,采用RT-PCR法检测STAT3mRNA表达变化,筛选出抑制作用最强的STAT3-siRNA。免疫印迹法检测细胞STAT3、Cyclin D1、BAX、Bcl-2、Caspase-9蛋白表达。AM-BLUE法测定A549细胞体外增殖情况。流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:经RNA干扰能有效降低A549细胞STAT3mRNA表达水平(P0.05),转染STAT3siRNA后,A549细胞STAT3、Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达水平均显著降低(P0.05),而BAX、Caspase-9蛋白的表达水平升高(P0.05)。STAT3蛋白表达分别与CyclinD1、Bcl-2蛋白表达呈正相关(r=0.854,0.910,P0.05);与BAX蛋白表达呈负相关性(r=-0.848,P0.05);与Caspase-9蛋白表达呈无相关性(r=-0.787,P0.05)。RNA干扰法沉默STAT3基因表达后,A549细胞增殖受到明显抑制,细胞凋亡率明显增加。结论:STAT3siRNA可有效抑制A549细胞STAT3表达,抑制A549细胞生长并促进其凋亡。     

miR-4500靶向STAT3调节免疫抑制基因PD-L1及对胃癌细胞生物学行为的影响

目的：分析微小RNA(miR)-4500靶向STAT3调节程序性死亡受体-配体1(PD-L1)及对胃癌细胞生物学行为的影响。方法：RT-qPCR检测胃黏膜细胞和胃癌NCI-N87细胞中miR-4500水平。双荧光素酶报告实验验证miR-4500和STAT3的靶向关系。将NCI-N87细胞分为NC组、miR-4500组、STAT3组和miR-4500+STAT3组，根据组别转染miR-4500 mimic或STAT3过表达质粒。CCK-8法、划痕愈合和Transwell实验检测细胞增殖活力、迁移和侵袭能力。Western blot检测STAT3和PD-L1蛋白表达量。结果：与胃黏膜细胞相比，胃癌细胞中miR-4500表达显著降低（P<0.05）。双荧光素酶报告证实NCI-N87细胞中miR-4500靶向STAT3。与NC组比较，miR-4500组细胞STAT3 mRNA和蛋白表达水平、OD值、划痕前缘迁移距离百分比（26.79±1.56）%、侵袭细胞数（85.17±2.19）和PD-L1蛋白表达水平显著降低，而STAT3组的上述指标均升高。miR-4500+STAT3组STAT3 ...     

慢性乙型肝炎患者外周血NKG2A+NK 细胞与Treg 的关系研究

目的:探讨慢性乙型肝炎病毒(CHB)患者外周血NKG2A+NK 细胞与调节性T 细胞(Treg)的关系及临床意义。方法:收集46 例CHB 患者和17 例健康对照者外周血,采用实时荧光定量PCR 法检测血清HBV DNA;采用流式细胞术检测NKG2A+NK 细胞及Treg 的比例。结果:将CHB 患者分为Low HBV DNA 组(300 ~ 104 U/ ml)及High HBV DNA 组(105 ~108 U/ ml)。我们发现High HBV DNA 组ALT 明显高于Low HBV DNA 组(P<0.05)。High HBV DNA 组CD56dim NK 细胞及NKG2A+CD56dim NK 细胞的比例均分别明显高于Low HBV DNA 组(P<0.05)。且High HBV DNA 组Treg 明显高于Low HBVDNA 组和对照组(P<0.05)。此外,NKG2A+CD56dim NK 细胞的比例与High HBV DNA 载量及Treg 水平均呈正相关性(r =0.59,P<0.05;r =0.53,P<0.05)。结论:CHB 患者的NKG2A+CD56dim NK 细胞的水平与HBV 的免疫逃逸及疾病的进展相关。     

miR-93-5p靶向MICA基因促进宫颈癌细胞活力并上调NK细胞Th1细胞因子表达

为研究miR-93-5p、主要组织相容性复合体Ⅰ类相关基因A(MHC classⅠchain-related gene A, MICA)对宫颈癌细胞增殖及NK细胞Th1细胞因子分泌的影响及机制,采用qRT-PCR法检测人正常宫颈细胞Ect1/E67、人宫颈癌细胞HeLa中miR-93-5p的表达;在miR-93-5p mimics组(转染miR-93-5p mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、pcDNA 3.1-MICA组(转染pcDNA 3.1-MICA)和pcDNA 3.1组(转染pcDNA 3.1)中用脂质体转染HeLa细胞,并与NK细胞共培养;MTT法检测各组细胞增殖率;ELISA检测各组细胞中Th1细胞因子IFN-γ、TNF-α含量;Western blotting检测各组细胞中MICA蛋白的表达量。结果显示,与Ect1/E67细胞相比,HeLa细胞中miR-93-5p的表达水平显著升高(P0.05),且miR-93-5p靶向MICA;抑制miR-93-5p、过表达MICA均可显著下调HeLa细胞的增殖率,上调IFN-γ、TNF-α表达。由此,miR-93-5p可促进宫颈癌细胞增殖,抑制NK细胞杀伤能力,或可为宫颈癌的靶向治疗提供新靶点。     

共培养体系中IL-15通过激活NK细胞ULBP1/NKG2D信号抑制食管癌细胞的迁移和侵袭北大核心CSCD

目的:探讨IL-15对食管癌细胞和自然杀伤(NK)细胞共培养体系中NK细胞活性以及对食管癌细胞迁移和侵袭的影响和机制。方法:qRT-PCR和Western blot检测人正常食管上皮细胞(HEEC)和食管癌细胞系TE-1中IL-15水平。TE-1与NK细胞共培养,共培养体系分为对照组(无处理)、IL-15组(0.2、0.4、0.8μg/ml的IL-15)、IL-15+anti-NKG2D组[UL16结合蛋白/自然杀伤组蛋白2D(ULBP1/NKG2D)的阻断剂anti-NKG2D联合IL-15(0.8μg/ml)]、anti-NKG2D组、IL-15+anti-ASIALO-GM1组[NK细胞抑制剂anti-ASIALO-GM1联合IL-15(0.8μg/ml)]及anti-ASIALO-GM1组。细胞划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测TE-1细胞的迁移和侵袭能力,CCK-8法检测NK细胞增殖率,Western blot检测各组NK细胞表面ULBP1/NKG2D表达,免疫共沉淀技术检测NKG2D与ULBP1的相互作用。结果:TE-1细胞中IL-15水平低于HEEC细胞(P<0.05)。0.2、0.4、0.8μg/ml IL-15处理共培养体系提高NK细胞增殖率,但降低TE-1细胞的迁移率和侵袭率(均P<0.05)。在TE-1与NK细胞的共培养体系中,IL-15组(0.8μg/ml)NK细胞膜蛋白ULBP1和NKG2D水平较对照组上调(均P<0.05);anti-NKG2D抑制了NKG2D表达,并抑制了NKG2D与ULBP1的相互作用,与IL-15(0.8μg/ml)组相比,IL-15+anti-NKG2D组NKG2D表达水平和NK细胞增殖率均降低(均P<0.05),但TE-1细胞的迁移率和侵袭率升高(均P<0.05),且NK细胞抑制剂anti-ASIALO-GM1与anti-NKG2D的作用效果一致。结论:IL-15通过激活细胞表面ULBP1/NKG2D信号促进NK细胞活性,从而抑制食管癌细胞的迁移和侵袭。     

HIV感染后CD4~+ T细胞表面NK相关受体表达的变化

目的研究人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染后CD4+T细胞表面NK相关受体表达的变化。方法选取25例未经高效抗逆转录病毒治疗的HIV感染者、11例AIDS患者、15例进行高效抗逆转录病毒治疗(highly activeantiretroviral therapy,HAART)者和13例HIV抗体阴性健康对照,用流式细胞仪检测研究对象外周血CD4+T细胞表面NKG2D、NKG2A和KIR3DL1的表达。结果 AIDS患者CD4+T细胞表面NKG2D表达的百分比显著高于其他各组,且NKG2D表达的百分比与CD4+T细胞的绝对数量呈负相关(R=-0.352,P<0.05),与HIV病毒载量呈正相关(R=0.426,P<0.05)。AIDS患者CD4+T表面NKG2A表达的百分比显著高于其他各组,NKG2A+NKG2D-表达的百分比显著高于其他各组,且NKG2A表达的百分比与CD4+T细胞的绝对数量呈负相关(R=-0.432,P<0.01)。结论 HIV感染机体后,CD4+T细胞NK相关受体表达变化与疾病进展相关。     

miR-300通过LEF-1调控卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡的实验研究

目的探究miR-300介导LKF-1调控卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用的机制。方法体外培养卵巢癌SK0V3细胞及正常卵巢上皮细胞,使用RT-PCR检测卵巢癌SK0V3细胞及正常卵巢上皮细胞中LEF-1及miR-300的表达情况;利用生物信息学软件预测LEF-1为miR-300的靶基因,并通过双荧光素酶等实验进行验证;将卵巢癌细胞分为空白对照组、空白转染组和miR-300抑制剂组。空白转染组使用miR-NC转染卵巢癌SKOV3细胞;miR-300抑制剂组采用miR-300 inhibitor转染细胞。使用CCK-8检测细胞增殖情况;使用蛋A质印记检测各组细胞的增殖相关蛋白Ki-67表达情况;划痕实验法检测各组细胞迁移能力;使用蛋白质印记法检测迁移相关蛋白N-cadherin、E-cadherin表达情况;使用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;使用蛋A质印记法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达情况。结果卵巢癌SK0V3细胞中LEF-1及miR-300的表达显著高于正常卵巢上皮细胞(T=4.528,P=0.017;T=6.328,P=0.017);相比空白对照组,空白转染组卵巢癌细胞增殖、迁移能力均无显著改变(P>0.05);相比空白转染组,miR-300抑制剂组Ki-67蛋内相对表达(T15.687;P=0.001)、增长率(T=9.732;P=0.024)、划痕愈合率(T=11.558;P=O.005)、E-cadherin蛋白相对表达(T=18.558;P=0.003)、Bcl-2蛋白相对表达(T=11.001;P=0.035)均显著降低;N-cadherin蛋白相对表达(T=22.478;P=0.001)、B ax蛋白相对表达(T=18.528;P=0.004)、细胞凋亡率(T=19.975;P=0.000)均显著升高。结论miR-300可以介导LEF-1抑制卵巢癌细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制与调控增殖、凋亡相关蛋白和调控EMT过程相关。     

RNA干扰UBQLN1基因表达对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及机制研究

目的：观察抑制泛素1（UBQLN1）基因表达对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响。方法： Western blot检测UBQLN1在乳腺癌T47D、BT549、MDA-MB-231、MCF7细胞中相对于正常乳腺上皮细胞MCF-10A的蛋白表达;用Lipofectamine^TM2000将干扰UBQLN1表达的siRNA（UBQLN1-siRNA）转染MDA-MB-231细胞,同时转染阴性对照组（NC组）,并设置空白对照组,收集转染48 h的细胞Western blot检测其UBQLN1的蛋白表达;CCK8法检测UBQLN1-siRNA转染24 h、48 h和72 h的细胞活力;流式细胞仪及Transwell小室分别检测UBQLN1-siRNA转染48 h的细胞凋亡率及侵袭能力;Western blot检测促凋亡蛋白p53和抑凋亡蛋白Survivin、侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）及STAT3和磷酸化的信号转导与转录因子3(p STAT3)的蛋白表达。结果：与MCF-10A细胞比较,UBQLN1在T47D、BT549、MDA-MB-231、MCF7乳腺癌细胞中的表达均显著升高（P<0.01）;与NC组比较,UBQLN1-siRNA组UBQLN1的蛋白表达显著降低,24 h、48 h和72 h的细胞活力均显著降低,细胞凋亡率显著升高,细胞侵袭能力显著降低,Survivin、MMP-2、MMP-9和p-STAT3的蛋白表达均显著降低,p53蛋白表达显著升高（P<0.01）,三组间STAT3的蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论：抑制乳腺癌细胞中UBQLN1基因表达可降低乳腺癌细胞活力和侵袭能力,并诱导细胞凋亡和下调STAT3信号通路。     

miR-137对肾癌GRC-1细胞增殖与凋亡的影响

目的 研究miR-137对肾癌GRC-1细胞增殖与凋亡的影响.方法 采用miR-137模拟物转染至肾癌GRC-1细胞,实验分为未转染组(未进行miR-137模拟物转染)、miR-137对照组(转染随机序列)、miR-137转染组(进行miR-137模拟物转染).荧光定量PCR检测各组转染后48h细胞中miR-137表达水平,应用噻唑蓝细胞增殖试验(MTT)、流式细胞检测技术与免疫荧光评价miR-137对肾癌GRC-1细胞增殖和凋亡的影响.结果 转染miR-137模拟物48h后,荧光定量PCR检测发现未转染组、miR-137对照组及miR-137转染组GRC-1细胞中miR-137的相对表达量依次为(24.43±2.03)％、(26.57±2.55)％、和(73.30±3.29)％,差异有统计学意义(P＜0.05).MTT细胞增殖实验与流式细胞仪检测结果显示,与未转染组、miR-137对照组相比,miR-137转染组转染48h后肾癌GRC-1细胞的增殖率显著降低,凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05),而未转染组、miR-137对照组肾癌GRC-1细胞的增殖率、凋亡率比较差异无统计学意义(P＞0.02).结论 miR-137可明显抑制肾癌GRC-1细胞增殖和促进其凋亡,故有望成为肾癌基因治疗的新靶点.     

吉非替尼上调NKG2D配体表达增强A549细胞对NK细胞杀伤的敏感性北大核心CSCD

目的:研究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼对人肺腺癌A549细胞NKG2D配体表达及NK细胞杀伤活性的影响及其分子机制。方法:MTT法测定吉非替尼对A549细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测吉非替尼、EGFR下游分子LY294002(PI3-K抑制剂)、SB203580(MAPK抑制剂)、STAT21(STAT3抑制剂)、Rottlerin(PKC抑制剂)作用A549细胞24小时后A549细胞NKG2D配体的表达。乳酸脱氢酶释放法检测不同效靶比时,NK细胞对吉非替尼作用前、后A549细胞的杀伤活性。结果:吉非替尼上调A549细胞MICB、ULBP1表达,增强A549细胞对NK细胞杀伤的敏感性,EGFR下游分子MAPK、STAT3抑制剂不影响A549细胞NKG2D配体的表达,PI3-K抑制剂下调A549细胞MICA表达,PKC抑制剂上调ULBP1表达。结论:吉非替尼上调NKG2D配体表达增强A549细胞对NK细胞杀伤的敏感性。     

阿糖胞苷通过调控miR-126表达抑制急性髓系白血病细胞增殖及诱导细胞凋亡的分子机制研究北大核心CSCD

目的:探讨阿糖胞苷是否可通过调控微小RNA-126(miR-126)表达抑制急性髓系白血病细胞增殖及诱导细胞凋亡。方法:体外培养急性髓系白血病细胞HL-60,分别加入不同浓度的阿糖胞苷处理;采用甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-126的表达量;分别将miR-126 mimics、antimiR-126转染至HL-60细胞,采用上述方法检测细胞增殖及凋亡;Western blot检测增殖标记蛋白细胞增殖核抗原67(Ki67)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-caspase-3)与磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路相关蛋白磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的表达量。结果:阿糖胞苷可显著降低细胞增殖率(P<0.05),增高细胞凋亡率(P<0.05),抑制Ki67、p-PI3K、p-AKT表达(P<0.05),促进miR-126、Cleaved-caspase-3表达(P<0.05);转染miR-126 mimics后,细胞增殖率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Ki67蛋白水平显著降低(P<0.05),Cleavedcaspase-3蛋白水平显著升高(P<0.05),而转染anti-miR-126的作用与之相反;转染anti-miR-126可降低阿糖胞苷对HL-60细胞增殖及凋亡的作用,并可促进p-PI3K、p-AKT的表达(P<0.05)。结论:阿糖胞苷可能通过上调miR-126表达及抑制PI3K/AKT信号通路的活化从而抑制急性髓系白血病细胞增殖及诱导细胞凋亡。     

miR-140在人胃癌组织中的表达及对SGC-7901胃癌细胞功能的影响

 目的: 研究microRNA-140(miR-140)在人胃癌和正常胃组织中的表达水平,以及调控miR-140表达后对SGC-7901胃癌细胞功能的影响。方法: 采用实时荧光定量PCR检测miR-140在人胃癌和正常胃组织中的表达水平;将miR-140 mimics(miR-140上调表达)和miR-140 inhibitors(miR-140下调表达)分别通过脂质体转染至人胃癌SGC-7901细胞中,同时设置未转染对照组(control组)和miRNA无义序列转染对照组(NC组)。实时荧光定量PCR检测转染后各组细胞中miR-140的表达变化;MTT方法检测各组细胞的生长活力和顺铂(DDP)作用下的生长抑制率;流式细胞术检测各组的细胞周期和凋亡率;Transwell实验检测各组细胞侵袭能力;Western blot检测各组细胞中组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)蛋白表达。结果: miR-140在人胃癌组织中表达水平显著低于正常胃组织(P<0.05)。与control和NC组相比,miR-140 mimics组中SGC-7901细胞活力和侵袭能力下降,细胞周期被阻滞,DDP作用下细胞生长抑制率和凋亡率上升,且HDAC4蛋白表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05);而miR-140 inhibitors组中SGC-7901细胞活力和侵袭能力上升,细胞周期被促进,DDP作用下细胞生长抑制率和凋亡率下降,且HDAC4蛋白表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论: miR-140在胃癌组织中低表达,可作为抑癌因子调控胃癌细胞活力、细胞周期变化、凋亡、侵袭并通过下调HDAC4发挥作用。miR-140可能作为胃癌诊断和治疗的新靶点。     

甲基莲心碱通过调控miR-29a-3p/AQP4表达抑制Aβ1-42致PC12细胞的损伤

目的探讨甲基莲心碱(Nef)在β淀粉样蛋白(Aβ1-42)损伤大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞PC12的作用及其分子机制。方法将PC12细胞分为对照组、模型组(4μg/mL Aβ1-42培养24 h)和干预组(低、中、高剂量甲基莲心碱)。MTT法检测PC12细胞存活;流式细胞计量术检测细胞凋亡;Western blot检测水通道蛋白4(AQP4)、Bcl-2和Bax表达量;qPCR检测细胞中miR-29a-3p和AQP4 mRNA表达。生物学信息预测和双荧光素酶基因报告分析miR-29a-3p和AQP4的靶向关系。在模型组转染miR-29a-3p、si-AQP4,或转染anti-miR-29a-3p并进行高剂量Nef干预,考察其对Aβ1-42损伤PC12细胞存活和凋亡的影响。结果与模型组相比,甲基莲心碱组细胞存活率和Bcl-2、miR-29a-3p表达明显升高,细胞凋亡率和Bax、AQP4 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05)。AQP4是miR-29a-3p的靶基因。miR-29a-3p过表达和抑制AQP4表达均显著提高PC12细胞存活率和Bcl-2表达量(P<0.05),降低细胞凋亡率和Bax蛋白水平(P<0.05)。抑制miR-29a-3p表达逆转甲基莲心碱对Aβ1-42损伤PC12细胞存活、Bcl-2蛋白水平的促进作用,以及逆转甲基莲心碱对细胞凋亡率、Bax蛋白表达的抑制作用。结论甲基莲心碱通过miR-29a-3p/AQP4抑制Aβ1-42所致PC12细胞损伤,促进细胞存活,并抑制细胞凋亡。     

miR-29b通过调控Bax基因抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞系A549凋亡

目的探讨miR-29b对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞系A549凋亡的影响及其机制。方法将体外培养的A549细胞分为对照组、LPS组(给予10 mg/L的LPS处理)、LPS+miR-NC组(转染miR-29b mimics阴性对照后给予LPS处理)、LPS+miR-29b组(转染miR-29b mimics后给予LPS处理);用RT-qPCR检测细胞中miR-29b的表达水平;MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验检测Bax和miR-29b的靶向关系。结果与对照组相比,LPS组、LPS+miR-NC组和LPS+miR-29b组细胞中miR-29b、Bcl-2蛋白的表达水平和细胞存活率均明显降低,而细胞凋亡率和Bax、cleaved caspase-3蛋白的表达水平均明显升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+miR-29b组细胞中miR-29b、Bcl-2蛋白的表达水平和细胞存活率均明显升高,而细胞凋亡率和Bax、cleaved caspase-3蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实Bax是miR-29b的潜在靶基因。结论miR-29b可抑制LPS诱导的A549细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控Bax表达有关。     

miR-19a介导JAK/STAT信号通路促进卵巢癌细胞增殖的研究

目的 探讨miR-19a对卵巢癌细胞增殖的影响及可能机制.方法 选取人卵巢癌细胞株SKOV3、正常人卵巢表面上皮细胞HOSEpiC以及30例上皮卵巢癌组织和20例癌旁组织为研究对象.对SKOV3细胞株进行转染,分为NC组(未进行任何处理)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-19a组(转染miR-19a mimic).MTT检测细胞增殖能力;克隆形成实验检测细胞生长;流式细胞术检测细胞周期;采用实时荧光定量PCR检测卵巢癌中miR-19a、JAK2、STAT3、p-JAK2和p-STAT3基因mRNA水平;Western blot检测细胞JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平.结果 卵巢癌组织miR-19a水平高于正常卵巢组织,SKOV3细胞株中miR-19a表达水平高于HOSEpiC细胞(P<0.01).转染后48 h和72 h,与NC组、miR-NC组相比,miR-19a组细胞增殖能力明显升高(P<0.05).与NC组、miR-NC组相比,miR-19a组细胞克隆数目、S期细胞百分比明显升高(P<0.05).与NC组、miR-NC组相比,miR-19a组细胞p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平,p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值明显升高(P<0.05).与NC组、miR-NC组相比,miR-19a组细胞p-JAK2、p-STAT3基因mRNA表达水平,p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值明显升高(P<0.05).结论 卵巢癌组织miR-19a高表达,miR-19a过表达可能通过Akt/mTOR通路促进卵巢癌细胞的增殖.     

miR-133-3p对甲状腺癌SW579细胞生物学行为和移植瘤生长的影响

目的 探究miR-133-3p对甲状腺癌SW579细胞和体内移植瘤生长的影响。方法 甲状腺癌SW579细胞分为对照组,miR-NC组,miR-133-3p mimic组,按分组转染miR-NC和miR-133-3p mimic。qRT-PCR检测甲状腺癌组织和癌旁组织及转染后细胞中miR-133-3p的表达,克隆形成;EDU染色检测细胞增殖;流式检测细胞凋亡和线粒体膜电位变化;Western blot检测Survivin,caspase-3蛋白表达;试剂盒检测细胞上清液中SOD和MDA含量。裸鼠皮下注射转染miR-133-3p mimic或miR-NC的SW579细胞,qRT-PCR检测瘤组织中miR-133-3p表达量,记录瘤组织体积,TUNEL检测瘤组织凋亡,免疫组化检测瘤组织中Survivin和caspase-3的表达。结果 甲状腺癌组织中miR-133-3p的表达降低。体外细胞实验结果显示,与对照组相比,miR-133-3p组miR-133-3p表达量增加,细胞克隆形成率、EDU阳性细胞率和Survivin蛋白表达降低,细胞凋亡率和caspase-3的蛋白表达升高,线粒体膜电位...     

miR-129抑制鼻咽癌细胞系CNE2增殖

目的检测miR-129对鼻咽癌细胞系CNE2细胞生物学功能的影响。方法人工合成miR-129模拟物(mimics)和抑制物(inhibitor),转染至鼻咽癌CNE2细胞中,RT-qPCR检测细胞miR-129表达;CCK8法检测细胞增殖;Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡能力。结果与对照组相比,转染miR-129 mimics组的miR-129表达水平明显升高(P0.05);转染miR-129 inhibitor组的miR-129表达水平均明显降低(P0.05);与对照组相比,转染miR-129 mimics组CNE2细胞增殖能力、侵袭能力显著下降(P0.05),凋亡显著增多(P0.05);与对照组相比,转染miR-129 inhibitor组CNE2细胞增殖能力、侵袭能力显著升高(P0.05),凋亡显著下降(P0.05)。结论 miR-129抑制鼻咽癌细胞系CNE2的增殖和迁移能力,促进细胞凋亡。     

miR-137对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭与凋亡的影响及可能机制

目的探讨miR-137对喉癌Hep-2细胞增殖及迁移能力的影响及可能机制。方法采用miR-137模拟物转染喉癌Hep-2细胞,实验分为空白对照组组(未进行转染)、miR-137阴性对照组(转染无关序列)、miR-137模拟物转染组(进行miR-137模拟物转染)。real-time PCR法验证转染效率,采用CCK8法检测miR-137对喉癌Hep-2细胞增殖的影响,采用Transwell实验检测转染后Hep-2细胞的侵袭能力变化,采用流式细胞术检测miR-137对Hep-2细胞凋亡的影响;Western blot检测转染后Hep-2细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3以及侵袭相关蛋白T细胞因子-4(TCF-4)蛋白表达的变化。结果与空白对照组或阴性对照组相比,miR-137模拟物转染组Hep-2细胞miR-137的表达水平显著高于对照组(P0.01),喉癌Hep-2细胞的增殖与侵袭能力显著降低,细胞凋亡率明显升高,凋亡相关蛋白Bcl-2表达水平降低,而Bax与caspase-3蛋白表达升高,侵袭相关蛋白TCF-4表达降低。结论过表达miR-137抑制Hep-2细胞增殖与侵袭、诱导细胞凋亡,与上调Bax、caspase-3蛋白表达和下调Bcl-2、TCF-4表达相关。     

青海高原藏族胃癌患者自然杀伤细胞活化性受体D及其配体MICA表达的研究

目的： 研究高原藏族胃癌患者外周血NK细胞表面活化性受体D(NKG2D)的表达及局部肿瘤组织和癌旁正常组织中相应配体MICA 的表达,探讨宿主NKG2D 在抗胃癌中的作用及其与肿瘤免疫逃逸的关系。方法: 对33例高原藏族胃癌患者及20 例健康人,采用流式细胞术检测外周血NKG2D 的表达状况,RT-PCR 和免疫组织化学技术检测在局部肿瘤组织和癌旁正常组织标本中MICA 的表达。结果: 高原藏族胃癌患者外周血NKG2D 的表达为(13.47 ±5.26)%，明显低于正常组（32.62±10.08)%，2组之间差异显著(P<0．05); 藏族胃癌组织MICA mRNA的表达水平显著高于癌旁正常组织（P<0.05）。胃癌组织MICA蛋白表达在癌旁正常组织中为(21.21%,7/33),胃癌组织阳性率为(78.79%，26/33),高分化组(60.00%,3/5),中分化组(72.73%,8/11),低分化组(88.24%,15/17),组间差异显著(P<0.05),而与肿瘤的大小、性别、年龄、淋巴结转移无关（P>0.05）。 Spearman相关分析显示，MICA表达水平与mRNA的表达水平显著正相关（r=0.903,P<0.01）。结论: 高原藏族胃癌的免疫逃逸可能与NKG2D 表达下调及其配体MICA 的表达升高有关，高原藏族胃癌患者外周血NK细胞活性降低,其NKG2D 表达的下降是NK细胞活性下降的原因之一。NKG2D配体MICA 的基因表达可能与高原胃癌患者的恶性转化有一定的相关性。