钾通道对大鼠肺动脉平滑肌细胞[Ca2+]i的调节

目的:探讨在常氧、低氧条件下钾通道对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)[Ca²⁺]_i的调节。方法:采用钙荧光探针(Fura-2/AM)负载培养的大鼠PASMCs,观察常氧、低氧培养后3种钾通道抑制剂(4AP,TEA、Glib)对PASMCs[Ca²⁺]_i的调节,同时用四唑盐(MTT)比色法比较4AP、TEA、Glib对大鼠PASMCs增殖的影响。结果:(1)常氧状态下,PASMCs[Ca²⁺]_i为(156.91±8.60)nmol/L,低氧时为(294.01±16.81)nmol/L(P＜0.01)。(2)常氧状态下,4AP可引起PASMCs[Ca²⁺]_i升高,达(280.52±23.21)nmol/L(P＜0.01),而TEA、Glib无此作用。(3)低氧时,4AP和TEA都可引起PASMCs[Ca²⁺]_i的升高,分别为(422.41±24.28)nmol/L、(380.84±11.02)nmol/L(P<0.01),Glib无作用。(4)MTT比色法中,常氧和低氧状态下4AP均引起吸光度(A)值升高,分别是0.582±0.062,0.873±0.043(P＜0.01)。TEA仅在低氧时A值升高(0.729±0.041,P＜0.05),而Glib无论常氧还是低氧均无影响。结论:无论常氧还是低氧条件下,电压依赖性钾通道(K_V)对PASMCs[Ca²⁺]_i及其增殖起主要作用。钙激活的钾通道(K_Ca)在常氧条件下对[Ca²⁺]_i不起调节作用,而在低氧下使[Ca²⁺]_i降低,反应性地调节PASMCs增殖。ATP敏感性钾通道(K_ATP)无论在常氧还是低氧情况下对[Ca²⁺]_i的调节不起作用。     

H2O2对大鼠肺动脉平滑肌细胞Kv通道的作用

 目的:观察H₂O₂在常氧时对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）的Kv的影响, 探讨H₂O₂对肺动脉平滑肌细胞的Kv通道的作用。 方法:用酶解法急性分离单个PASMCs，以全细胞膜片钳技术记录PASMCs膜上的电压依赖性钾通道 (voltage-gated potassium channel, Kv) 电流。 结果:常氧下 H₂O₂可显著增加Kv电流，电流-电压关系曲线左上移；而且Kv电流呈浓度依赖性增加。 结论:常氧下H₂O₂ 可使Kv通道开放。     

Ca2+载体A23187对受精失败人类成熟卵母细胞的补救激活作用

目的:观察Ca²⁺载体A23187对受精失败人类成熟卵母细胞的补救激活及激活后的胚胎发育情况。方法:收集常规体外受精(IVF)及卵浆内单精子注射(ICSI)后24h仍无受精征象的成熟卵母细胞作为研究对象,5μmol/LCa²⁺载体A23187中处理5min,观察第二极体排出及原核形成情况,激活后卵母细胞在体外继续培养2d。结果:IVF组及ICSI组卵母细胞激活率分别为64.9%(24/37)和73.2%(30/41)。ICSI组受精失败卵母细胞激活后主要表现为二极体二原核(2PB+2PN)(80%,24/30),而IVF组仅有20%的被激活卵母细胞表现为2PB+2PN,两组间差异具极显著(P＜0.01)。31个2PN卵母细胞继续培养,25个发生分裂,11个发育到2-4细胞,8个发育到4-8细胞,6个发育到8-细胞以上阶段。结论:Ca²⁺载体A23187能够有效地激活ICSI后受精失败卵母细胞恢复受精并继续发育成胚胎。     

大鼠创伤性深静脉血栓形成中Ca2+通道相关基因表达研究

分析Ca2 通道相关关键基因在大鼠创伤性肢体深静脉血栓形成中的表达变化,初步探讨该信号通路在此病理过程中的生物学意义。采用定量击打双侧大腿 双后肢石膏固定的方式,对150只SD大鼠造模,建立创伤性深静脉血栓形成动物模型。应用Genechip Rat Genome 430 2.0芯片,检测创伤性深静脉血栓形成过程中8种不同生物学状态下(正常对照、创伤即刻、血栓形成初始期、高峰期血栓形成、高峰期血栓不形成、血栓消退、血栓不消退、血栓不形成)股静脉RNA表达情况,筛查出差异表达基因,并进行pathway分析。重点关注高峰期血栓形成与不形成两种生物学状态下C,a2 通道相关关键基因表达变化。结果显示:高峰期血栓形成组与不形成组比较,Ca2 通道中CaMK、IP3 3K、CaN等多个关键基因表达均呈现下调,可能使包括内皮细胞在内的多种血管细胞,增殖、分化、代谢等功能受到抑制,并影响下游信号通路,引起组织细胞功能失调,最终导致血栓发生。因此,推测Ca2 通道功能受抑制可能与TDVT发生有关。     

Ca2+离子对榛子过敏原Cor h 1二级结构和抗原活性影响研究

目的:研究Ca2+离子对非CaBPs蛋白类过敏原二级结构和抗原活性的影响。方法:以重组榛子主要过敏原Cor h 1为研究对象,用圆二色谱(CD)研究了系列浓度的Ca2+和EDTA各自存在情况下,不同蛋白浓度溶液中rCor h 1二级结构的变化及规律,并以榛子过敏患者血清为一抗,用ELISA实验分析了Ca2+和EDTA对rCor h 1抗原活性的影响。结果:在高浓度rCor h 1溶液中Ca2+的加入可以引起椭圆率的增加,而在低浓度的rCor h 1溶液中则引起椭圆率的降低;EDTA在高浓度和低浓度的rCor h 1溶液中均能引起rCor h 1二级结构相对含量的降低;椭圆率增加(或降低)的幅度与Ca2+、EDTA终浓度成正比。ELISA实验表明Ca2+和EDTA都能显著降低rCor h 1的抗原活性。结论:Ca2+离子可以显著影响rCor h 1的二级结构,降低其抗原活性,为非CaBPs蛋白类低致敏原的研究奠定了较好的前期研究基础。     

ATP敏感性和Ca^2＋激活的钾通道对血管平滑肌的作用

动脉平滑肌的钾通道开放，可导致膜超极化，而使血管舒张；阻断钾通道，则导致膜去极化，血管收缩。本文主要讨论ＡＴＰ敏感性钾通道（Ｋ（ＡＴＰ））以及Ｃａ（２＋）激活的钾通道（Ｋ（Ｃａ））在血管乎滑肌功能性调控中的作用及特性。Ｋ（ＡＴＰ）细胞代谢变化起反应，它是合成的和内源性血管扩张剂的靶部位。Ｋ（Ｃａ）对细胞内Ｃａ（２＋）浓度和膜电位的变化产生反应，可调节阻力血管的内部张力，并有助于调节动脉对压力和缩血管物质的反应。     

RNA阵列技术检测自发性高血压大鼠肌浆网Ca2+-ATP酶和受磷蛋白基因表达

目的:探讨肌浆网Ca²⁺-ATP酶(SERCA)和受磷蛋白(PLB)在原发性高血压发病过程中的变化特点及其相互关系。方法:提取2、4、6、8、10、12不同周龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)和正常血压大鼠(WKY)的心室肌、血管平滑肌、肝脏和肾脏组织的总RNA,共294个样品,利用高通量RNA阵列技术(RNAarray)检测SERCA和PLB基因在不同周龄SHR和WKY中mRNA表达谱改变。结果:SHR在6、8、10、12周龄血压出现显著高于同周龄WKY(均P<0.01),10、12周龄心室肌重量／体重比出现显著增加(均P<0.01),心肌和血管平滑肌SERCA的表达在4、6、8、10、12周龄出现显著高于同周龄WKY(P<0.05或P<0.01)。PLB基因表达在两组间无显著差异(P>0.05)。心肌的SERCA与PLB表达量比值在6、8、10、12周龄出现显著大于同周龄WKY(P<0.05或P<0.01),而血管平滑肌的SERCA与PLB表达量比值在4、6、8、10、12周龄出现显著大于同周龄WKY(P<0.05或P<0.01)。结论:肌浆网SERCAmRNA表达改变及SERCA与PLB比例失常是高血压发生和发展过程中重要的分子生物学机制。     

蛋白激酶C活性下调对钙库操纵的钙通道活性和气道平滑肌细胞增殖的作用

目的:研究蛋白激酶C(PKC)活性下调对大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)的Ca2+库操纵的Ca2+通道(SOC)和ASMCs增殖的影响。方法:分离培养大鼠支气管平滑肌细胞;利用激光共聚焦显微镜测定ASMCs的fluo-3/AM的荧光信号;利用长时间暴露于PKC活化剂诱导PKC活性下调,观察PKC活性下调对ASMCs的SOC通道和增殖的影响;Alamar blue还原率测定法测定ASMCs的增殖。结果:PKC激活剂PMA(10μmol/L)和PDBu(1μmol/L)作用24h下调PKC活性后可以抑制ASMCs的增殖,PKC抑制剂chelerythrine同样抑制ASMCs的增殖;PKC活性下调和chelerythrine均可以抑制ASMCs的SOC通道活性;小剂量PKC激活剂PMA(100nmol/L)可以促进ASMCs的增殖,这种作用被SOC通道抑制剂SKF-96365抑制。结论:PKC活性下调或抑制导致SOC通道的活性下降,表明PKC可能参与了SOC通道功能调控;SOC通道开放可能参与了PKC促进ASMCs增殖的作用。     

调节性容积减小过程中Ca2+和pH对钾通道的调控

动物细胞在低渗环境中容积胀大时可以发生保护性的调节性容积减小(regulatory volume decrease,RVD),K+通道的开放所介导的K+外流是这一过程的重要机制[1].然而,由于研究技术和方法的限制,对于离子通道活动的研究往往会破坏细胞的完整性和调节能力,因此RVD过程中整体细胞水平的K+通道活动调节仍需进一步探讨.而在已经充分掌握单个K+通道特性的基础上,可以将不同的调节因素加以整合,构建RVD过程中整体细胞水平K+通道活动的调节网络.许多动物细胞的RVD过程中存在胞浆Ca2+浓度和pH值的改变,本文就这一变化的发生机制及其对RVD过程中K+通道活动的调节作用作一综述.     

生长抑素对人脐静脉内皮细胞Ca2+及其膜通道的调控研究

目的观察生长抑素(SOM)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)膜上Ca2+通道及胞浆内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)的调控作用.方法应用共聚焦激光扫描显微术(CLSM)和膜片钳单通道记录技术对体培养HUVEC胞浆内[Ca2+]i、膜上Ca2+通道开放情况进行观察.结果SOM促使HUVEC胞浆内[Ca2+]i明显升高.胞膜上Ca2+通道的开放出现1～2 min的潜伏期后也开放但其开放概率明显降低.结论SOM对HUVEC胞浆内[Ca2+]i的调节可能首先通过细胞内储存的Ca2+释放及稍后的细胞膜上Ca2+通道开放,从而达到其调节效应.     

虎杖甙对大鼠细动脉平滑肌细胞ATP敏感钾通道的影响

目的 :探讨中药虎杖提取物 -虎杖甙扩张休克动物细动脉、改善微循环灌流的作用机制。方法 :应用膜片钳技术的细胞贴附式观察虎杖甙对大鼠肠系膜细动脉平滑肌细胞 ATP敏感钾通道 ( KATP)的影响。结果 :细胞外液加入 0 .2 m mol/L虎杖甙后 ,通道电流幅度无明显改变 ,说明虎杖甙不影响 KATP通道电导 ;但加入虎杖甙后KATP通道动力学发生了明显变化 ,通道开放时间短成分 τ0 1 和长成分τ0 2 增大 ,通道开放时间 Tom延长 ,通道开放概率 Po提高 ,提示KATP通道激活。结论 :虎杖甙具有激活 KATP通道的作用 ,它可能通过使细动脉平滑肌超极化而扩张细动脉 ,从而改善休克动物微循环。     

苯那普利对自发性高血压大鼠心肌缺血-再灌注心功能、氧自由基和肌浆网Ca2+-ATP酶的影响

目的:探讨血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)对自发性高血压大鼠(SHR)心肌缺血-再灌注心功能、氧自由基和肌浆网Ca²⁺-ATP酶的影响。方法:30只10周龄雌性SHR分为2组,SHR对照组(SHR)、SHR+B组(每日10mg/kg苯那普利);另15只同周龄、同性别Wistar大鼠作为对照组(Wistar)。治疗12周后,每组大鼠结扎左冠状动脉前降支30min,再灌注30min,观察血流动力学参数,左室心肌丙二醛(MDA)含量、超氧化物岐化酶(SOD)活性及肌浆网(SR)Ca²⁺-ATP酶活性。结果:与Wistar组比较,SHR组血压、左心室重/体重较高,左心功能损害程度较重,心肌MDA含量较高,SOD活性和SRCa²⁺-ATP酶活性较低;SHR+B组血压、左心室重/体重、左心功能损害程度,SRCa²⁺-ATP酶活性无显著性差异,但心肌MDA含量较低,SOD活性较高。结论:苯那普利可逆转SHR左室肥厚,促进缺血-再灌注心肌SRCa²⁺-ATP酶活性的恢复和减少氧自由基损害,从而减轻缺血-再灌注心功能损伤。     

血管活性肠肽对人脐静脉内皮细胞Ca~(2+)及其膜通道的调控

目的　观察血管活性肽 (VIP)对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)膜上Ca2 + 通道及胞浆内游离Ca2 +([Ca2 + ]i)的调控作用。方法　应用共聚焦激光扫描显微术 (CLSM)和膜片钳单通道记录技术对体外培养HU VEC胞浆内 [Ca2 + ]i、膜上Ca2 + 通道开放情况进行观察。结果　VIP促使HUVEC胞膜上Ca2 + 通过道的开放概率和胞浆内 [Ca2 + ]i 均明显升高。结论　IVP对HUVEC胞浆内 [Ca2 + ]i的调节可能除通过细胞内储存的Ca2 +释放外还依赖细胞膜上Ca2 + 通道开放 ,从而达到其调节效应     

天麻钩藤饮对SHR血清Ca2+浓度及血管平滑肌细胞钙通道的影响

目的：探讨天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠(SHR)的血管平滑肌细胞钙通道电生理特征的影响，以期进一步阐明天麻钩藤饮对血压干预的作用机制。方法:选用12周龄自发性高血压雄性大鼠45只，随机分为5组，即天麻钩藤饮组（A组）、天麻钩藤饮去石决明组（B组）、硝苯地平组（C组）、石决明组（D组）、生理盐水对照组（E组）。治疗4周后，测定血清游离钙浓度；用全细胞模式膜片钳技术记录分析血管平滑肌细胞L型电压依赖性钙通道的特性。结果:用药前后天麻钩藤饮组和硝苯地平组血清游离钙浓度改变没有统计学意义(P>0.05)，天麻钩藤饮去石决明组、石决明组、生理盐水组血清游离钙浓度低于用药前 (P<0.05) ，以生理盐水组最明显(P<0.01)。天麻钩藤饮组、硝苯地平组有明显减少血管平滑肌细胞ICa-L内流的作用，石决明组作用较弱，天麻钩藤饮去石决明组、生理盐水组没有减少血管平滑肌细胞ICa-L内流的作用。结论:天麻钩藤饮可以提高血清游离钙离子浓度。天麻钩藤饮有明显的阻滞血管平滑肌细胞L型钙离子通道的作用，这可能是其降压作用机制之一。     

OX-LDL及辛伐他汀对平滑肌细胞PKC活性和胞内Ca2+的影响

目的:探讨OX-LDL是否对大鼠主动脉平滑肌细胞(ASMC)蛋白激酶C(PKC)活性和胞浆内游离钙([Ca²⁺]i)水平有影响。方法:应用γ-[³²P]-ATP磷酸转移法和Fluo-3/Am荧光负载、流式细胞术分别检测PKC活性和胞内([Ca²⁺]i)水平。结果:OX-LDL呈剂量依赖方式促进ASMCPKC总活性增加,并可引起ASMC中PKC发生浆膜的转移。胞浆内[Ca²⁺]i以2个时相升高,即快速相和持续相。而辛伐他汀能明显抑制OX-LDL引起的ASMC中PKC活性的浆膜转移,并显著降低持续相胞浆内钙水平,而对快速相无影响。结论:OX-LDL能引起ASMC内信号通路PKC及[Ca²⁺]i的动态变化,二者密切相关。     

细胞外Cd2+对内向整流钾通道的阻断作用

目的:本文旨在研究细胞外Cd²⁺对非洲爪蟾卵母细胞表达的内向整流钾通道(IRK1)的阻断作用。方法:采用双微电极电压钳(TEV)技术。结果:细胞外Cd²⁺浓度分别为0,0.1,0.15,0.3,0.9,2.7和5.4mmol/L,K⁺浓度为90mmol/L时,可见Cd²⁺对IRK1的瞬间电流(施加电压后1.5ms)具有Cd²⁺浓度依赖性、时间依赖性和电压依赖性阻断作用;阻断剂Cd²⁺对IRK1的门控特性和外向电流几乎无影响;细胞外加Cd²⁺后反转电位没有变化,因而IRK1对之不通透;细胞外Cd²⁺可增加IRK1的规一化电导。三级指数拟合的结果表明:拟合的时间常数不随Cd²⁺浓度的增减而增减,这表明细胞外Cd²⁺对IRK1的抑制作用可能通过表面电荷机制或Cd²⁺在通道中的阻断位点在通道表面。因为Cd²⁺浓度较低时,阻断的效力与Cd²⁺浓度较高时的差异不大,所以Cd²⁺不会通过表面电荷机制进行IRK1阻断。结论:Cd²⁺是IRK1的一种快速开放通道阻断剂,其阻断位点在通道表面。     

二十二碳六烯酸对大鼠肺动脉平滑肌细胞大电导钙激活性钾通道的影响

 目的： 探讨二十二碳六烯酸（DHA）对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）大电导钙激活性钾离子通道（BKCa）的作用。方法：采用酶解法获得单个活性良好的PASMC,PASMCs的BKCa电流变化采用全细胞膜片钳技术记录,PASMCs胞浆内游离钙离子浓度(［Ca2+］i)采用激光共聚焦显微镜技术测定。结果：DHA 0.01 μmol/L对BKCa无显著激活作用;0.1、1、10 μmol/L DHA可显著激活BKCa。不同浓度的DHA（0、0.1、1、10 μmol/L）在指令电压为+60 mV时,BKCa电流密度分别为(30.5±6.5) pA/pF、(59.4±5.8) pA/pF、(87.2±4.3) pA/pF和(117.3±7.1) pA/pF (P<0.01)。急性缺氧在指令电压为+60 mV时,BKCa电流密度从(32.7±8.5) pA/pF降低至(11.9±5.8) pA/pF (P<0.01)。DHA (10 μmol/L) 能明显逆转急性缺氧对BKCa的抑制作用（P<0.01）,同时DHA触发PASMCs内［Ca2+］i的增加,最大增加速率为（71.9±4.1）%（P<0.01）。结论：DHA通过增加PASMCs［Ca2+］i激活BKCa,逆转急性缺氧对BKCa的抑制作用,具有舒张肺血管的作用。     

缺氧对肺动脉平滑肌细胞钾通道Kv1.2、Kv1.6基因表达的影响

目的:研究不同缺氧时间对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)不同亚型钾通道(Kv)mRNA和蛋白质表达的影响。方法:采用半定量RT-PCR和Western-blot方法对常氧和不同缺氧时间后PASMC上Kv1.2、Kv1.6mRNA和蛋白质的表达进行测定。结果:(1)PASMC在常氧和缺氧时均有Kv1.2、Kv1.6mRNA和蛋白质表达;(2)缺氧18h使Kv1.2mRNA和蛋白质表达增强,缺氧48h则使其表达减弱且低于常氧时的表达;(3)缺氧18h、48h对Kv1.6的mRNA和蛋白质表达无影响。结论:Kv1.6不是氧敏感的钾通道;作为氧感受器的Kv1.2,其mRNA和蛋白质表达随缺氧时间而改变。     

抗钠钙交换体特异位点抗体对大鼠单个心室肌细胞钙瞬变的影响

目的:观察抗钠钙交换体(Sodium calcium exchanger,NCX)特异位点124HNFTAGDLGPSTIVGSAAFNMF145 抗体对正常成年大鼠心室肌细胞钙瞬变的影响。方法:利用Langendorff 灌流方法,分离得到单个大鼠心室肌细胞;负载荧光染料Fura-2/ AM 和2%牛血清白蛋白后,利用离子影像分析系统记录激发光为340 nm 和380 nm 时心室肌细胞成对系列图像,计算钙瞬变峰值(F340/ F380)、细胞钙恢复90%时程(TR90 )以及钙敏感性(F340/ F380 与细胞缩短数值的比值)。结果:抗NCX 特异位点抗体可以增加正常成年大鼠单个心室肌细胞F340/ F380,缩短TR90 ,对钙敏感性无显著影响;尼卡地平和KB-R7943 分别预处理心室肌细胞可以抵消大部分抗体对F340/ F380 和TR90 的增加或缩短效应,联合使用二者预处理心室肌细胞后,该抗体对钙瞬变不再有显著影响。结论:抗NCX 特异位点124 HNFTAGDLGPSTIVGSAAFNMF145 抗体可以增加心室肌细胞钙瞬变峰值,同时缩短细胞钙恢复时程,这种效应主要与其激动L-型Ca2+通道和NCX 的作用有关。