Fas过表达逆转胃癌细胞顺铂耐药

目的：探究Fas在胃癌细胞顺铂耐药中的作用及可能的作用机制。方法：Westernblot及RT-qPCR检测胃癌细胞株SGC-7901及胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP中Fas的表达情况。构建Fas过表达腺病毒载体,上调胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP中Fas的表达,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,Westernblot法检测Fas、P38/p-P38、JNK/p-JNK、cleavedcaspase-8/caspase-8和cleavedcaspase-3/caspase-3蛋白水平。结果：耐药细胞株SGC7901/DDP中Fas的mRNA及蛋白表达水平均明显低于亲本细胞株;并且在亲本细胞株SGC7901中,Fas的蛋白表达水平随着顺铂的浓度增加不断降低。过表达Fas可抑制胃癌耐药细胞SGC7901/DDP的细胞活力,并诱导其凋亡;同时上调p-P38、p-JNK、cleavedcaspase-8和cleavedcaspase-3的蛋白水平。结论：胃癌顺铂耐药细胞中过表达Fas可恢复细胞对顺铂的敏感性,促进细胞凋亡并抑制细胞生长,其机制可能与JNK和P38MAPK信号通路的激活有关。     

miR-134调控人肺腺癌细胞顺铂耐药

目的:探讨微小RNA-134(miR-134)在人肺腺癌细胞顺铂耐药中的作用及机制。方法:采用miRNA芯片筛选A549/CDDP和A549细胞差异表达miRNA,应用real-timePCR验证miR-134的表达。将miR-134模拟物和抑制物分别转染A549/CDDP和A549细胞,应用MTT法检测肺癌细胞对顺铂的敏感性。Westernblot技术检测miR-134对叉头框蛋白M1(FOXM1)和多药耐药相关蛋白1(MRP1)表达的影响。结果:miRNA芯片显示,13种miRNAs在A549/CDDP和A549细胞中呈显著表达;其中,miR-134下调最显著。miR-134模拟物转染组A549/CDDP细胞对顺铂的敏感性较阴性对照组显著提高(P<0.01),而miR-134抑制物转染组A549细胞对顺铂的敏感性较阴性对照组显著降低(P<0.01)。FOXM1siRNA能够有效抑制FOXM1蛋白表达,si-FOXM1转染组A549/CDDP细胞对顺铂的敏感性较阴性对照组显著提高(P<0.01)。此外,Westernblot结果显示miR-134能够抑制MRP1蛋白表达。结论:miR-134能够增加肺腺癌细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与调控FOXM1和MRP1表达有关。     

沉默miR-21对子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP的影响

目的:观察沉默miR-21对子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP的影响.方法:以Lipofectamine 2000介导miR-21抑制剂转染Ishikawa/DDP细胞株,同时设置阴性组和耐药组.采用反转录PCR检测miR-21、多药耐药基因MDR1、促凋亡基因Bax和抗凋亡基因Bcl-2的表达.采用蛋白印迹法检测多药耐药蛋白P-gp、促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达.采用噻唑蓝比色法检测细胞对顺铂的敏感性.采用流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果:与耐药组和阴性组比较,抑制剂组miR-21,MDR1和Bcl-2 mRNA表达显著下调(P＜0.0l),而Bax mRAN表达显著上调(P＜0.00l);抑制剂组P-gp和Bcl-2蛋白表达显著低下调(p＜0.05),而Bax蛋白表达显著上调(P＜0.001).与耐药组和阴性组比较,顺铂对抑制剂组的IC50值显著(P＜0.001);顺铂对抑制剂组细胞的诱导凋亡率显著增加(P＜0.00l).结论:沉默miR-21可显著提高Ishikawa/DDP细胞株对顺铂的敏感性,并促进细胞凋亡,其具体机制可能与下调MDR1,P-gp和Bcl-2表达,以及上调Bax表达有关.     

CEACAM1和CD34蛋白表达与胃癌侵袭转移的关系

目的探讨癌胚抗原相关黏附分子1(CEACAM1)和CD34蛋白表达与胃癌侵袭转移的关系。方法免疫组化SP法检测90例胃癌组织和30名正常胃黏膜组织中CEACAM1及CD34的表达情况,分析CEACAM1和CD34标记的微血管密度(MVD)与胃癌患者临床病理特征的关系。结果 CEACAM1和CD34蛋白在胃癌中的阳性表达明显高于正常胃黏膜组织(P0.05)。CEACAM1蛋白的表达程度与肿瘤分化、侵袭深度、是否淋巴结转移及病理分期相关(P0.05),胃癌组织中MVD与肿瘤大小、分化、侵袭深度、是否淋巴结转移及病理分期相关(P0.05)。CEACAM1表达程度及CD34标记的MVD在胃癌中的表达呈正相关关系(P0.05)。结论 CEACAM1与CD34参与了胃癌的侵袭和转移,有望成为胃癌发生、发展和预后的预测指标。     

miR-195靶向调控PDK4表达抑制肝癌细胞增殖和促进凋亡

目的 探讨miR-195调控PDK4表达在肝癌增殖和凋亡中的作用.方法 体外培养肝癌细胞,分别转染miR-195模拟物或阴性对照质粒Nc,转染48h后,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测迁移能力,Western blot和PCR检测PDK4表达.采用双荧光素酶实验检测miR-195与PDK4的靶向调控关系.结果 转染miR-195可明显抑制肝癌细胞内PDK4的表达,抑制肝癌细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡.HEPG2细胞转染miR-195 mimics后,细胞增殖率和细胞迁移能力较对照组和miR-NC组显著下降(P＜0.05);细胞凋亡率较对照组和miR-NC组显著升高,PDK4 mRNA及蛋白表达水平较对照组和miR-NC组显著下降(P＜0.05).Target Scan结果提示PDK4可能是miR-195的下游靶基因,miR-195能够抑制野生型PDK4 3'UTR报告基因载体的荧光素酶活性,但是对突变型PDK4 3'UTR无明显影响.结论 上调miR-195能靶向抑制PDK4,进而对肝癌细胞起抑制增殖、迁移和促进凋亡的作用.     

顺铂诱导大鼠C6胶质瘤细胞凋亡

为深入进行胶质瘤细胞凋亡的分了生物学研究及提高胶质瘤辅助化疗疗效打下基础。通过光镜,电镜,荧光显微镜分析,DNA断裂分析及流式细胞仪分析,进行顺铂诱导C6胶质瘤细胞调亡研究。本研究证实在3μg／mLCDDP作用72h,C6细胞出观细胞凋亡;光镜和电镜可见细胞形态学上出现细胞皱缩,染色质浓集贴达;流式细胞仅结果提示有凋亡峰出现,凋亡细胞占细胞总数17.3％±1.2％;荧光显微镜观察出现染色质浓集,染色质断裂：DNA电泳未表现出DNA呈梯状带型断裂。上述结果提示用顺铂成功地诱导大鼠C6胶质瘤细胞发生凋亡。     

Annexin A3抑制顺铂诱导人卵巢上皮癌细胞凋亡

目的 进一步探讨annexin A3能否通过凋亡途径调节卵巢癌细胞对顺铂敏感性.方法 运用反转录病毒载体构建及目的细胞感染技术,获得annexin A3稳定上调和稳定下调卵巢癌细胞系,运用annexin V/碘化丙啶分析方法和免疫印迹法检测细胞凋亡率、细胞内caspase蛋白裂解水平和annexin A3表达水平.结果 顺铂敏感细胞annexin A3表达水平上调后,60μg/mL顺铂诱导细胞凋亡率由68.72%±1.01%下调至29.13%±2.61%(P<0.05);高浓度顺铂诱导caspase和PARP蛋白裂解.相反,顺铂耐药细胞内mumxin A3水平下调后,凋亡率由35.05%±3.06%上升至76.73%±6.42%(P<0.05),低浓度顺铂诱导caspase和PARP蛋白裂解.此外,annexin A3还能够显著抑制卵巢癌细胞内P38 MAPK磷酸化.结论 Annexin A3能通过抑制细胞凋亡调节卵巢癌细胞对顺铂的敏感性.     

miR-152-3p 靶向TCF4 对人胃癌SGC-7901 细胞增殖和凋亡的调控作用

目的:探究miR-152-3p 对人胃癌SGC鄄7901 细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法:用miR鄄152 类似物(miR-152 mimic) 转染细胞,RT鄄PCR 检测miR-152 及转录因子4(TCF4) 的表达;荧光素酶报告实验证明miR1523p 与TCF4 的靶 向关系;miR-152 mimic 和TCF pcDNA 重组质粒(pc鄄TCF4) 分别或同时转染细胞,Western blot 检测TCF4 的表达,CCK8 检测细 胞增殖情况;流式检测细胞凋亡情况。结果:miR152 mimic 能显著升高SGC鄄7901 细胞miR-1523p 的表达水平,降低TCF4 的 mRNA 水平;同时,miR152 mimic 还能显著降低TCF4 野生型荧光素酶活性;此外,miR-152 mimic 能显著降低SGC-7901 细胞 的增殖倍数,升高细胞凋亡率;pc-TCF4 能显著减弱miR-152 mimic 抑制SGC7901 细胞增殖及诱导细胞凋亡的作用。结论: miR-1523p 能抑制人胃癌SGC7901 细胞增殖并诱导细胞凋亡,作用机制与靶向调控TCF4 表达有关。     

circ_0044516靶向miR-1281促进食管癌细胞增殖、抑制细胞凋亡北大核心CSCD

目的:探索circ_0044516是否通过靶向miR-1281影响食管癌Eca109细胞增殖和凋亡。方法:将食管癌Eca109细胞分为si-NC组、si-circ_0044516组、miR-NC组、miR-1281组、si-circ_0044516+anti-miR-NC组和si-circ_0044516+antimiR-1281组。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定食管癌组织及Eca109细胞中circ_0044516和miR-1281表达。运用CCK-8法检测Eca109细胞增殖能力,克隆形成实验测定克隆形成,Western blot测定活化的半胱氨酸蛋白酶(cleaved-caspase)3蛋白和cleaved-caspase9蛋白表达,流式细胞术测定细胞凋亡。采用荧光素酶报告实验分析circ_0044516与miR-1281的靶向结合。结果:食管癌组织中circ_0044516表达量比相匹配的癌旁组织增加2.70倍左右,miR-1281表达量较癌旁组织显著减少(P<0.05)。食管癌Eca109细胞中干扰circ_0044516表达或miR-1281过表达可使cleaved-caspase3蛋白、cleaved-caspase9蛋白表达量和凋亡率升高,细胞增殖能力降低,克隆形成数减少(P<0.05)。circ_0044516靶向调控miR-1281的表达。干扰circ_0044516表达对食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的作用被下调miR-1281表达所逆转。结论:食管癌Eca109细胞中干扰circ_0044516表达通过靶向miR-1281抑制细胞增殖并促进其凋亡。     

阿糖胞苷与顺铂联用对耐药鼻咽癌细胞的生长抑制作用增强且细胞凋亡增加

目的研究抗肿瘤药物阿糖胞苷(Ara-C)与顺铂(DDP)联用,或单独使用抗肿瘤药物,作用于具有顺铂耐药性的TW03/DDP鼻咽癌细胞,探讨细胞生长抑制和凋亡的差异及可能机制。方法体外培养TW03/DDP细胞,运用实时定量PCR和Western blot法检测细胞中肺耐药相关蛋白(LRP)的表达;Ara-C与DDP联用或单独使用处理TW03/DDP细胞和不具耐药性的TW03鼻咽癌细胞后,运用CCK-8法检测其生长抑制率,流式细胞术检测其凋亡率。结果相对于TW03细胞,TW03/DDP细胞中LRP蛋白表达升高;Ara-C与DDP单独使用均能抑制TW03/DDP细胞和TW03细胞的生长并诱导凋亡,但DDP对TW03/DDP细胞作用弱;Ara-C与DDP联用可抑制以上两种细胞的生长,抑制率和凋亡率均大于二者单独应用的效果。结论Ara-C与DDP联用可以增强对耐药性鼻咽癌细胞的生长抑制作用和凋亡诱导作用。     

miR-451a表达抑制宫颈癌细胞侵袭和顺铂耐药的影响及作用机制

目的 探讨miR-451a对宫颈癌细胞侵袭和顺铂(DDP)耐药的影响及作用机制研究。方法 qRT-PCR检测miR-451a在宫颈癌组织中的表达水平,分析miR-451a的表达水平与患者临床病理参数的关系。宫颈癌细胞HeLa分为对照组(NC HeLa组)和miR-451a模拟物组(miR-451a mimic HeLa组),分别进行各组mimic转染,Boyden实验检测各组细胞侵袭能力。采用药物递增诱导法建立DDP耐药细胞株HeLa(DDP-HeLa),qRT-PCR检测HeLa和DDP-HeLa细胞中miR-451a的表达。DDP-HeLa细胞分为NC DDP-HeLa组和miR-451a mimic DDP-HeLa组,分别进行各组mimic转染,MTS实验检测NC HeLa组、miR-451a mimic HeLa组、NC DDP-HeLa组和miR-451a mimic DDP-HeLa组对DDP敏感性的影响。Western blotting检测各组细胞中EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达。结果 miR-451a宫颈癌组织中的表达...     

circUBAP2靶向miR-2467-3p对肝癌Huh-7细胞增殖和凋亡的影响

目的：探索circUBAP2靶向miR-2467-3p对肝癌Huh-7细胞增殖和凋亡的影响。方法：qRT-PCR测定43例肝癌组织中circUBAP2和miR-2467-3p表达。在肝癌Huh-7细胞中转染si-NC(si-NC组)、si-circUBAP2(si-circUBAP2组)、miR-NC(miR-NC组)、miR-2467-3p模拟物（miR-2467-3p组）,或共转染si-circUBAP2+anti-miR-NC(si-circUBAP2+anti-miR-NC组)、si-circUBAP2+anti-2467-3p(si-circUBAP2+anti-2467-3p组),CCK-8和平板克隆实验测定细胞活性与克隆形成,Western blot测定cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白表达,流式细胞术测定细胞凋亡。双荧光素酶报告实验确定circUBAP2与miR-2467-3p的靶向关系。结果：43例肝癌组织中circUBAP2表达比癌旁组织升高,miR-2467-3p表达比癌旁组织减少（P<0.05）。circUBAP2和mi...     

白藜芦醇联合顺铂对神经胶质瘤细胞的作用

目的： 探讨白藜芦醇联合顺铂对神经胶质瘤细胞C6 的作用。方法：不同浓度的白藜芦醇与顺铂单独联合 作用于神经胶质瘤细胞C6,24、48 h 和72 h 后,CCK8法检测增殖,并选出合适浓度进行后续试验;不同浓度的 药物作用于细胞24 h 后,吖啶橙法观察细胞形态变化、流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期和免疫印迹检测蛋白 Bax、Bcl-2 和p-Erk1/2 变化。结果：白藜芦醇与顺铂能协同抑制神经胶质瘤细胞C6 的增殖。联合用药后细胞周 期抑制在S 期。免疫印迹结果显示凋亡蛋白Bax 的表达量增加,而凋亡抑制蛋白Bcl-2 的表达量减少,细胞外调 节蛋白激酶p-Erk1/2 的表达量减少。结论：白藜芦醇与顺铂联合对神经胶质瘤细胞具有相互增敏作用,能够协同 抑制细胞增殖,并通过Ras-Raf-MEK-Erk 信号通路促进其凋亡。     

miR-21靶向FasL对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的调控

目的探讨miR-21是否能够通过靶向抑制FasL基因调控人骨肉瘤MG-63细胞的增殖。方法利用荧光素酶报告基因实验验证FasL基因是否为miR-21的靶基因,应用阳离子脂质体Lipofectamine~(TM)2000将miR-21 mimics或inhibitor转染至MG-63细胞,利用real-time PCR和Western blotting分析转染后MG-63细胞FasL m RNA和蛋白表达的变化,通过MTT法分析转染后MG-63细胞增殖水平变化。结果荧光素酶报告基因实验证实FasL基因为miR-21的靶基因。与对照组相比,转染miR-21 mimics后,MG-63细胞FasL mRNA与蛋白的表达均显著降低,增殖能力明显升高(P0.01);与对照组相比,转染miR-21 inhibitor后,MG-63细胞FasL mRNA与蛋白的表达均显著升高,增殖能力明显降低,P0.01。结论 miR-21可能通过靶向FasL基因促进人骨肉瘤MG-63细胞增殖。     

芦荟苷通过降低热休克蛋白70的表达增强顺铂诱导的胃癌细胞凋亡

目的：探讨芦荟苷能否通过降低热休克蛋白70(HSP70)的表达,增强顺铂诱导的胃癌细胞凋亡。方法：胃癌HGC-27细胞分为对照组、200 mg/L芦荟苷组、5 mg/L顺铂组和两者联合组（200 mg/L芦荟苷+5 mg/L顺铂）。DAPI染色和流式细胞术分别检测细胞凋亡形态改变及凋亡率;RT-qPCR检测HSP70 mRNA的表达水平;Western blot检测HSP70和凋亡相关蛋白的表达;免疫沉淀（IP）检测HSP70的泛素化水平。结果：DAPI染色结果显示,与药物单独刺激组相比,联合组细胞核浓缩与核碎裂现象显著增强。流式细胞术分析细胞凋亡率表明,顺铂组细胞凋亡率为16.71%,显著高于对照组的6.95%(P<0.01)。虽然芦荟苷组与对照组相比,凋亡率无显著差异,但是其与顺铂联合作用后,细胞凋亡率为33.74%,显著高于顺铂和芦荟苷单独刺激组（P<0.01）。RT-qPCR显示,芦荟苷能够显著下调顺铂诱导的HSP70 mRNA表达（P<0.01）。Western blot结果表明,联合组cleaved PARP和cleaved caspase-3/-7的表达...     

姜黄素联合顺铂调控PI3K/Akt信号通路对卵巢癌耐药细胞增殖、迁移和凋亡的影响北大核心CSCD

目的:讨论姜黄素联合顺铂对卵巢癌耐药细胞增殖、迁移及凋亡能力的作用,并分析其与PI3K/Akt通路的关系。方法:首先用不同浓度的姜黄素及顺铂单独处理细胞株,根据各浓度细胞的存活率确定35µmol/L姜黄素、4.0 mg/L顺铂疗效最好,用于后续实验。将卵巢癌耐药细胞分为空白对照组、姜黄素单独处理组(35µmol/L)、顺铂单独处理组(4.0 mg/L)、姜黄素+顺铂联合处理组(35µmol/L+4.0 mg/L),采用MTT法、Transwell小室、流式细胞术检测四组细胞的生长抑制率、迁移细胞数及细胞凋亡率;Western blot检测四组细胞中p-PI3K及p-Akt蛋白表达水平;PCR检测四组细胞中PI3K、Akt、Ki67、Bcl-2、Bax mRNA表达水平。结果:与空白对照组比较,其余三组细胞生长抑制率及细胞凋亡率均显著升高,迁移细胞数显著减少(P<0.05),且姜黄素+顺铂联合组细胞生长抑制率及细胞凋亡率显著高于姜黄素组、顺铂组,迁移细胞数则低于姜黄素组、顺铂组(P<0.05);与空白对照组比较,姜黄素处理组及姜黄素+顺铂联合组细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt、Ki67、Bcl-2 mRNA表达水平均显著降低、Bax mRNA显著升高(P<0.05),且联合组细胞表达量明显低于姜黄素处理组(P<0.05),而顺铂单独处理组细胞中PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt、Ki67、Bcl-2、Bax mRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。结论:姜黄素联合顺铂能够提高卵巢癌耐药细胞的敏感性,抑制细胞的增殖及迁移,同时诱导细胞凋亡,这一过程可能通过下调PI3K/Akt通路的表达实现。     

Mir－526 b可促进顺铂诱导非小细胞肺癌凋亡

目的：观察microRNA分子miR－526 b对非小细胞肺癌细胞A549的化疗敏感性的影响。方法将miR－526 b基因转染到A549细胞中;通过细胞活性检测测定A549细胞对顺铂（ diamminedichloroplatinum, DDP）的敏感性,通过流式细胞技术以及Western印迹检测细胞凋亡水平。结果筛选获得稳定表达miR－526 b的克隆细胞。细胞活性检测显示miR－526 b可明显提高非小细胞肺癌细胞A549对顺铂的敏感性,流式细胞技术显示DDP处理后miR－526 b稳定转染细胞的凋亡细胞率（10．2％±1．1％）较对照组A549细胞（3．5％±0．3％）以及DDP未处理对照A549细胞（0．4％±0．1％）明显升高。 Western印迹实验表明DDP处理后miR－526 b非小细胞肺癌细胞A549凋亡指标cleavaged caspase－3、 Bax明显升高。结论 MiR－526 b可促进顺铂诱导非小细胞肺癌凋亡。     

lncRNA PVT1靶向miR-146a对胃癌MKN-45细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨lncRNARNAPVT1对胃癌MKN-45细胞增殖和侵袭的影响及可能机制.方法 将PVT1抑制物转染胃癌MKN-45细胞,将细胞分为对照组(untreated组)、阴性对照组(si-NC组)及沉默PVT1组(si-PVT1组),实时定量PCR方法检测各组MKN-45细胞PVT1和miR-146a的表达,双荧...