86株鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶耐药基因分析及同源性研究

目的 分析北京康复医院住院患者分离的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的分布特点、耐药性及同源性.方法 收集2017年12月至2018年12月北京康复医院临床感染病例中非重复分离的86株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌,采用Phoenix BD 100进行菌株鉴定和药敏试验.采用基因组重测序技术检测其携带的耐药相关基因并进行进化树分析,...     

多重耐药鲍曼不动杆菌中OXA碳青霉烯酶基因的研究

目的 调查我院院内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌中OXA碳青霉烯酶基因的存在情况,为临床合理使用抗菌药物和控制院内感染的发生提供科学依据.方法 用WalkAway 96 PLUS NC31复合板鉴定菌种,用微量稀释法和K-B纸片扩散法测定菌株的药敏情况,PCR法检测OXA23、OXA24、OXA48、OXA55、OXA58、OXA60、OXA64、OXA66基因在46株院内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌中的存在情况,对部分阳性基因进行测序.结果 46株多重耐药鲍曼不动杆菌中,41株(89.1%)OXA23组基因阳性,其余基因检测均阴性.结论 我院院内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要原因之一是产OXA23组碳青霉烯酶.     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药机制及同源性分析

摘要 目的 <\b>了解鲍曼不动杆菌在院内流行情况,研究鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的分子生物学机制。方法 <\b>使用法国梅里埃VITEK 2型全自动细菌鉴定及药敏分析仪进鉴定和药敏试验。采用PCR检测鲍曼不动杆菌编码的OXA-23型碳青霉烯酶基因blaOXA-23。采用ERIC-PCR对分离到的鲍曼不动杆菌进行同源性分析。结果 <\b>分离到的17株碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌中共有16株产OXA-23型碳青霉烯酶,且为同源性相同。结论 <\b>鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药的重要机制为产OXA-23型碳青霉烯酶,该院存在鲍曼不动杆菌克隆流行。     

碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行病学及碳青霉烯酶类型的研究

目的 了解碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌的耐药性、同源性及碳青霉烯酶类型。方法 收集本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌45株，浓度梯度法(Etest)测定最低抑菌浓度(MIC)；采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析同源性；通过等电点聚焦电泳(IEF)、三维试验、2-巯基丙酸抑制试验、聚合酶链反应(PCR)、克隆测序等方法分析碳青霉烯酶类型。结果 45株细菌均为多重耐药株，仅对头孢哌酮/舒巴坦、氨苄西林/舒巴坦耐药率较低分别为2．2％和6．5％，敏感率分别为63．0％和43．5％。45株菌株PFGE图谱分为A、B两型，A型是主要流行株(44株)，主要集中在重症监护病房(ICU)。B型1株来自血液科病房。45株菌中有43株产碳青霉烯酶，其中16号株(PFGE为B型)等电点有6．6、7．2两个条带，pI6．6为OXA-23，其余42株(A1～A4亚型)pIs均有6．4、7．0两个条带，均不被克拉维酸、氯唑西林及2-巯基丙酸抑制，PCR方法也未能检出OXA-23、OXA-24系列的基因。结论 本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行主要为医院感染所致，该流行株呈多重耐药，未发现金属酶，仅1株产OXA型碳青霉烯酶，为OXA-23。     

昆明地区多重耐药鲍曼不动杆菌耐药特征及同源性分析

目的 研究昆明地区多重耐药鲍曼不动杆菌(MDRAB)耐药流行特征,通过分子流行病学调查明确菌株间亲缘关系,在丰富该地区当前MDRAB耐药数据的同时为临床制订合理有效的用药策略提供依据。方法 收集2018年1月至2020年12月昆明地区两家三级甲等医院(简称医院甲、医院乙)临床分离的非重复MDRAB菌株共92株,采用微量肉汤稀释法和纸片扩散法检测MDRAB对临床常用抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应扩增7种β-内酰胺酶耐药基因,同时对92株MDRAB进行分子分型,分析菌株同源性关系。结果 92株MDRAB对所检测抗菌药物耐药程度均较高,其中医院甲对氨基糖苷类和喹诺酮类抗菌药物(除环丙沙星)耐药率普遍高于医院乙,而相对于医院乙检出的MDRAB对替加环素14.3%的耐药率,医院甲尚未检测到耐药发生。耐药基因检测结果显示,两家医院检出率较高的是OXA-23、TEM和ADC基因,未检出SHV、IMP、VIM、OXA-58基因。测序及比对结果显示,92株MDRAB包括12个序列型(ST),两家医院主要型别有所不同,医院甲以ST208型(58.0%)为主要型别,而医院乙以ST368型(31.0%)为...     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药表型和碳青霉烯酶基因型分析

目的检测广州市第一人民医院20株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的耐药性,研究并分型其碳青霉烯酶基因。方法用法国生物梅里埃公司VITEK2全自动细菌鉴定仪进行菌株鉴定和药敏试验,用6种碳青霉烯酶特异性基因引物进行PCR扩增和基因型的测序分析,并通过网上GenBank进行比对以确定编码酶基因的类型。结果 20株鲍曼不动杆菌对哌拉西林-他唑巴坦、左氧氟沙星和阿米卡星的耐药率分别为85%、50%和25%。对其他所测抗菌药的耐药率均在90%以上。扩增结果显示17株(85%)细菌携带碳青霉烯酶OXA-23基因,16株(80%)携带OXA-51基因,1株(5%)携带OXA 58基因。OXA-24、VIM、IMP基因引物PCR扩增均为阴性,随机抽取OXA-23基因阳性株进行双向测序后在网上GenBank比对与OXA-23标准株99%同源,OXA-51基因阳性株与OXA-66标准株99%同源,OXA-58基因阳性株与OXA-58标准株99%同源。结论我院耐碳青霉烯类抗生素的鲍曼不动杆菌呈现出多重耐药现象,对阿米卡星的耐药率最低,OXA-23型碳青霉烯酶基因检出率最高,OXA-23/OXA-51类基因占60%,应引起临床高度重视,防止在医院内广泛传播。     

碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型研究

目的了解临床分离的耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌的耐药情况以及碳青霉烯酶的基因型。方法收集21株耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌,采用纸片扩散法（K—B法）进行药敏试验,PCR方法检测碳青霉烯酶基因型。结果21株碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌对阿米卡星、左氧氟沙星和氨曲南的耐药率分别为35．7％、42．9％和78．6％,对其余抗菌药物耐药率均高达92．9％～100％。21株中检出OXA-23基因阳性17株（80．9％）,OXA-51基因阳性15株（71．4N）,OXA-58基因阳性2株（9．5％）。12株（57．1％）含OXA-23＋OXA-51基因,1株（4．8％）含OXA-23＋0XA-51＋OXA～58基因。上述菌株中均未检出OXA-24、IMP和VIM耐药基因。结论碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌多重耐药情况严重,碳青霉烯酶基因型OXA-23和OXA-51携带率高,且以OXA-23＋OXA-512种基因型同时存在为主。     

鲍曼不动杆菌基因同源性分析

目的探讨我院2001年8月至2002年3月临床分离到鲍曼不动杆菌是否存在基因同源性。方法用脉冲场凝胶电泳分析对这一时期的鲍曼不动杆菌进行分型，明确其是否为同一菌株的克隆。结果25株鲍曼不动杆菌有7株对碳青霉烯类等多种抗生素耐药，脉冲场凝胶电泳将其分为：A型2株，A1型2株，A2型1株。A1型与A2型之间的相似系数达94．6％，它们与A型的相似系数达84．9％，其余2株各有独特的脉冲场凝胶电泳分型；18株对碳青霉烯类敏感的鲍曼不动杆菌之间无同源性依据。结论5株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌有高度同源性，菌株1767极可能是此次医院感染的源头。     

鲍曼不动杆菌耐药表型及碳青霉烯酶OXA基因分析

目的 检测鲍曼不动杆菌耐药表型及碳青霉烯酶OXA基因型.方法 用VITEK32鉴定出174株不动杆菌,用K-B纸片检测抗生素的耐药性,用琼脂稀释法测定抗生素的最小抑菌浓度(MIC),用多重PCR方法测定碳青霉烯酶OXA23类,OXA24类,OXA51类和OXA58类基因.结果 检出鲍曼不动杆菌146株(83.91%),耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌46株(31.50%).鲍曼不动杆菌呈现出多重耐药性,亚胺培南、奈替米星、左氧氟沙星、头孢吡肟和哌拉西林/他唑巴坦的敏感率分别为70.69%,48.85%,44.83%,43.68%,44.83%.亚胺培南的MIC值为16～64μg/ml;耐亚胺培南鲍曼不动杆菌OXA基因主要为OXA23类,检出率为82.61%,且以OXA23/OXA51类基因为主(60.87%),检出OXA23/OXA58类1株,未测得OXA24类.结论 鲍曼不动杆菌呈现出多重耐药性,以OXA23/OXA51型碳青霉烯酶为主.     

耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶的研究

近年来不动杆菌对碳青霉烯酶的耐药性不断增强，并且呈现多药耐药趋势。研究表明，不动杆菌对碳青霉烯的主要耐药机制是产生了质粒或染色体编码的碳青霉烯酶。为了解本地区鲍曼不动杆菌产碳青霉烯酶的类型，进行了研究。     

多重耐药鲍曼不动杆菌<I>gyrA</I>基因突变与环丙沙星耐药关系研究

目的　研究多重耐药鲍曼不动杆菌（MDR-ABA）IgyrA/I基因突变与环丙沙星耐药关系。方法　以鲍曼不动杆菌IgyrA/I基因序列为靶序列，用PCR+DNA测序等方法对62株临床分离株gyrA基因突变进行对比研究。结果　在53株耐环丙沙星MDR-ABA菌中，有52株IgyrA/I基因的83位表现出突变，其突变方式全为TCATTA，导致氨基酸丝氨酸亮氨酸； 8株环丙沙星敏感和1株环丙沙星中介的MDR-ABA菌IgyrA/I基因无突变。结论　临床分离的MDR-ABA菌对环丙沙星耐药的分子机制主要表现为IgyrA/I基因83位氨基酸密码子突变。     

Carba NP法快速检测鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶的研究

目的了解泛耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶表型及酶基因型,为临床合理使用抗生素,监控医院感染提供依据。方法收集117株鲍曼不动杆菌临床分离株进行常规微生物学检测,K-B纸片法筛选多重耐药鲍曼不动杆菌,通过Carba NP试验及改良Hodge试验进行产碳青霉烯酶表型检测,利用PCR对多重耐药不动杆菌耐药基因型进行确证。结果临床分离的117株鲍曼不动杆菌株有64株属多重耐药鲍曼不动杆菌,其中33株碳青霉烯酶阳性,检出碳青霉烯酶OXA-23耐药基因型,未检出IMP、VIM、NDM-1耐药基因。结论 Carba NP法可以快速检测产碳青霉烯酶菌株,且敏感性强,操作简单,有助于提高产碳青霉烯酶菌株检出率,利于监控医院感染。     

临床分离广泛耐药鲍曼不动杆菌同源性分析及常见耐药基因检测

目的了解上海市同仁医院临床分离广泛耐药鲍曼不动杆菌的基因同源性及耐药机制,为广泛耐药鲍曼不动杆菌感染的防治提供依据。方法采用肠杆菌科基因间重复序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)对临床分离的28株广泛耐药鲍曼不动杆菌进行分子生物学分型,采用PCR方法检测9种常见β内酰胺酶基因:blaKPC、blaIMP、blaVIM、blaNDM-1、blaOXA-23、blaOXA-24、blaOXA-48、blaOXA-51和blaOXA-58;膜孔蛋白基因CarO;插入序列ISAba1;以及ISAba1-OXA23、ISAba1-OXA58的连锁检测。结果 28株临床分离的广泛耐药鲍曼不动杆菌大多来自危重患者呼吸道标本,ERIC-PCR基因分型提示为同一来源克隆株;所有菌株均携带blaOXA-23、blaOXA-51基因,未检测出B类β内酰胺酶基因,以及blaOXA-24、blaOXA-48、blaOXA-58等基因;膜孔蛋白基因CarO和插入序列ISAba1检测均为阳性,ISAba1-OXA23、ISAba1-OXA58连锁检测均未扩增到预期条带。结论研究期间临床分离广泛耐药鲍曼不动杆菌为同一克隆株,且携带相同耐药基因,提示存在克隆传播。     

呼吸科重症监护病区患者下呼吸道标本多药耐药鲍曼不动杆菌耐药性及同源性分析

目的 分析多药耐药鲍曼不动杆菌(MDR-Aba)的耐药性和同源性.方法 2007年10月至2008年12月该院呼吸科ICU患者下呼吸道标本MDR-Aba 12株,K-B纸片扩散法检测菌株对等14种抗菌药物的敏感性,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株同源性.结果 12株MDR-Aba对头孢菌素类、碳青霉烯类、氨基糖苷类、氟喹喏酮类等抗菌药物耐药性较高;PFGE分型显示11株来源于相同克隆株,另外1株为不同亚型.结论 2007年10月至2008年12月该院呼吸科ICU存在相同克隆株MDR-Aba的流行.     

亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌同源性及碳青霉烯酶研究

目的 明确我院临床分离亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌的耐药性、同源性及碳青霉烯酶基因型。方法 收集我院2003年8月-2004年12月分离的95株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌。琼脂稀释法和E试验法测定15种抗菌药物的MIC值；脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析菌株的同源性；PCR扩增及克隆测序分析碳青霉烯酶基因型；接合试验、质粒抽提及Southern杂交完成亚胺培南耐药基因定位。结果 95株鲍曼不动杆菌对氨苄西林-舒巴坦、头孢哌酮-舒巴坦两个含舒巴坦制剂耐药率分别为67．9％、30．2％，对多黏菌素E耐药率最低，为17％，对其他抗菌药物的耐药率均在90％以上。95株鲍曼不动杆菌分离自10个临床科室，均产OXA-23碳青霉烯酶，PFGE分型共分为6型，以A、B型为主。碱裂解法反复抽提均未得到质粒，多次接合试验未成功。Southern杂交证实A、B克隆的oxa-23耐药基因位于细菌染色体约220kb、200kb大小的ApaI酶切片段上。结论 产OXA-23型碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌已成为我院医院感染的重要病原菌，在我院多个科室播散，且以A、B克隆为主。oxa-23耐药基因位于染色体上。     

多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素耐药状况分析

目的 了解多重耐药鲍曼不动杆菌对临床常用抗生素及新药替加环素的耐药状况.方法 收集2008-2009年浙江省4所教学医院的602株临床分离鲍曼不动杆菌,采用琼脂稀释法检测其对13种临床常用抗生素的敏感性,以及对多黏菌素B和替加环素的敏感性.同时,采用PFGE技术对24株多重耐药鲍曼不动杆菌进行同源性分析,以确定菌株间的亲缘关系.结果 浙江省4家教学医院2008-2009年分离的鲍曼不动杆菌主要来自于呼吸道标本,2009年达到277株(86.0%),血液标本数量从2008年的15株(5.4%)下降到2009年的5株(1.5%),而其他标本无明显变化.鲍曼不动杆菌对临床常用的13种抗生素均有不同程度的耐药,耐药率35.0%～85.0%.与2008年相比,除左氧氟沙星和妥布霉素耐药率分别下降0.9%和9.0%以外,2009年其余抗生素耐药率均有不同程度地上升,头孢曲松和头孢吡肟耐药率增加了近10.0%,对碳青霉烯类抗生素亚胺培南和美罗培南的耐药率分别达到74.2%(239/602)和70.8%(228/602).鲍曼不动杆菌对替加环素显示了很高的耐药率,耐药率达到78.9%(475/602),而多黏菌素B耐药率仅为3.7%(22/602).PFGE分型显示2008-2009年24株鲍曼不动杆菌有6个克隆型,其中A型最常见,占50%.结论 鲍曼不动杆菌对替加环素的耐药加大了院内感染控制的难度,临床应加强控制,防止多重耐药菌的传播.

Abstract：

Objective To investigate the resistance of Acinetobacter baumannii to clinical common antibiotics and new drug tigecycline. Methods Six hundred and two Acinetobacter baumannii isolates were collected from 2008 to 2009 in four teaching hospitals in Zhejiang province. Agar dilution method was used to detect the resistance of 13 clinical commom antibiotics, polymyxin B and tigecycline. Homology analysis of 24 multi-drug resistant Acinetobacter baumannii strains was used to investigate the relationship of each strain with the method of pulsed field gel electrophoresis. Results From 2008 to 2009, the Acinetobacter baumannii isolates of four teaching hospitals in Zhejiang province were mainly isolated from respiratory specimens with the number of 277 (86.0%) strains in 2009, the number of blood samples decreased from 15 (5.4%) strains in 2008 to 5 ( 1.5% ) strains in 2009, and there were no obvious change in other specimens. Acinetobacter baumannii strains were resistant to 13 clinical common antibiotics at different degree, fluctuated from 35.0% to 85.0%. Compared with the resistance in 2008, levofloxacin and tobramyxin decreased 0. 9% and 9.0% in 2009, respectively. However, the resistance of other antibiotics increased at different degree, the resistance of ceftriaxone and cefepime increased about 10.0%, and the resistance of imipenem and meropenem increased to 74.2% (239/602) and 70.8% (228/602) in 2009,respectively. Acinetobacter baumannii showed high resistance to tigecycline with the percent of 78.9% (475/602), while it was only 3.7% (22/602) for polymyxin B. There were six cloning types among the 24 Acinetobacter baumannii isolates, and the most common type was type A with the percent of 50%.Conclusions The resistance of tigecycline makes the situation of nosocomial infectious more serious. It is necessary to control the transmission of multi-drug resistant Acinetobacter baumannii immediately.     

多重耐药肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶的检测和分析

目的研究多重耐药肺炎克雷伯菌临床分离株的碳青霉烯酶的流行情况。方法收集该院从2007年1月至2012年12月临床分离的151株多重耐药肺炎克雷伯菌,并对其药敏结果进行归纳整理,用碳青霉烯酶表型试验进行检测,再用聚合酶链反应(PCR)检测已知的碳青霉烯酶基因,并对扩增产物进行DNA测序,确定其基因型。结果在151株多重耐药肺炎克雷伯菌中,通过改良Hodge试验筛选出12株可能产碳青霉烯酶的菌株,其中有1株的金属酶试验为阳性,该12株菌经PCR扩增及测序确定产碳青霉烯酶菌株有5株,金属酶阳性株为IMP-4型金属酶,另外4株产碳青霉烯酶菌株为KPC-2型。结论近年来该院多重耐药肺炎克雷伯菌出现了产碳青霉烯酶菌株,临床应根据药敏结果合理选用碳青霉烯类药物,以减少耐药菌株的产生。     

多重耐药鲍氏不动杆菌的碳青霉烯酶耐药基因的检测

目的了解多重耐药鲍氏不动杆菌的碳青霉烯酶耐药基因的分布情况。方法收集80株多重耐药鲍氏不动杆菌,采用聚合酶链反应（PCR）检测多重耐药鲍氏不动杆菌的碳青霉烯酶耐药基因OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58、SIM、IMP、VIM、GIM、SPM。结果 80株多重耐药鲍氏不动杆菌检出耐药基因OXA-23[49（61.3%）]、OXA-51[73（91.3%）]、OXA-58[7（8.8%）]、OXA-24[1（1.3%）]、IMP[17（21.3%）]及VIM[2（2.5%）],未检测出GIM、SIM、SPM基因。结论 IMP、OXA、VIM是多重耐药鲍氏不动杆菌携带的主要基因类型。