以反复缺血性脑卒中为突出表现的法布雷病1例报道及家系分析

目的 对一个以反复脑卒中为主要临床表现的法布雷病(Fabry病)家系进行调查,分析其临床特点和基因突变情况.方法 收集该例先证者及其家族成员的临床表现、头颅MRI检查资料.对先证者行皮肤活检,检测α-半乳糖苷酶A(α-galA)的活性.提取先证者及其弟弟、母亲的血液,进行DNA测序.结果 家系中3例患者均出现反复发作脑卒中,伴有肢端疼痛、皮肤血管角质瘤及少汗等表现.影像学均表现为基底节、脑干多发性腔隙病变.皮肤组织电镜下可见血管内皮细胞及周细胞内大量次级溶酶体结构,次级溶酶体内似有指纹结构.先证者α-galA活性明显下降,GLA基因检测发现c.672T＞G,p.N224K半合子突变(男性X染色体纯合突变).结论 Fabry家系以基底节和脑干反复脑卒中为突出临床表现,具有典型的病理学和酶学证据,GLA基因检测发现c.672T＞G,p.N224K半合子突变,该突变未见文献报道.     

转染人血纤溶酶原Kringle 5基因对人胰腺癌PC3细胞的影响

目的　将人血纤溶酶原Kringle 5基因导入人胰腺癌PC3细胞 ,观察其对人胰腺癌PC3细胞系的基因治疗作用。方法　将外源性Kringle 5通过脂质体转染法导入人胰腺癌PC3细胞 ,筛选阳性克隆 ,同时设空质粒组及PC3细胞为对照。采用RT PCR、免疫组织化学、MTT、电镜、流式细胞术等方法 ,鉴定及检测转染前后细胞超微结构、细胞周期及Kringle 5蛋白表达情况 ,并用血管内皮细胞增殖实验及裸鼠接种检测目的胰腺癌细胞株表达的Kringle 5蛋白抑制血管内皮细胞生长的活性及裸鼠移植瘤生长情况。结果　人血纤溶酶原Kringle 5基因及蛋白水平在胰腺癌PC3细胞系均可以稳定表达 ,能抑制ECV30 4血管内皮细胞生长及具有抑制裸鼠移植瘤生长的作用。结论　成功转染人Kringle 5基因的人胰腺癌PC3细胞可稳定表达Kringle 5蛋白 ,且具有抗血管内皮细胞增殖活性的良好作用 ,为进一步进行体内抗血管生成基因治疗奠定了基础。     

法布雷病简介

法布雷（Fabry）病是一种溶酶体贮积症。由于编码a-半乳糖苷酶的基因突变,患者体内缺乏a-半乳糖苷酶,使一些脂质,特别是三已糖基神经酰胺（GL3）无法被代谢,堆积于溶酶体内,导致各种临床症状。     

Fabry病及α-半乳糖苷酶A基因一个新突变的家族患者出现伴有血栓的长基底动脉变异

Fabry病为X连锁溶酶体储积异常,是由于α-半乳糖苷酶缺乏导致N-脂酰鞘氨醇三己糖苷大部分堆积在内皮细胞和平滑肌细胞引起的。椎-基底动脉循环受累所致的脑血管症状,是引起Fabry病发病的主要原因之一。本文报道1匈牙利家族因α-半乳糖苷酶A基因(G LA)新突变引起的Fabry病及该病不同的表现症状。该家族的2例男性患者因血栓致死,诊断为长基底动脉变异。另1女性患者存在椎-基底动脉循环障碍,尸检发现基底动脉重度扩张但无血栓形成。其他3例家庭成员患有基底卒中,M R I显示基底动脉增宽、变长。遗传分析显示α-半乳糖苷酶蛋白氨基酸序列L1…     

2例罕见法布雷病患者应用阿加糖酶α治疗的护理

<正>法布雷病（Fabry）是一种罕见的X连锁遗传溶酶体贮积症，是由于GLA基因突变导致α-半乳糖酶A(α-galacto-sidase A,α-Gal A)的活性降低或完全缺乏，造成代谢底物三己糖酰基鞘执醇（GL-3）及其衍生物脱乙酰基GL-3(Lyso-GL-3)在多脏器贮积，引起多脏器病变甚至引发危及生命的并发症。其临床特点为发作性肢体疼痛和皮肤血管角质瘤，在疾病后期常出现肾脏、心脏等的损害。     

人脐静脉内皮细胞的体外培养、鉴定及形态观察

目的 :建立血管内皮细胞培养模型 ,为体外研究血管内皮细胞提供重要的实验手段。方法 :用 0 .2 5%的胰蛋白酶消化、分离人脐静脉内皮细胞 ,种植在培养板中 ,观察其生长情况 ,且用间接酶免法及电镜下进行内皮细胞鉴定。结果 :种植在培养板中的内皮细胞 4h开始贴壁生长 ,48～ 72 h生长最快 ,7～ 1 0 d呈多角形。内皮细胞胞浆中有 VWF相关抗原和电镜下可见胞浆中有W- P小体 ,可确定培养的细胞为血管内皮细胞。结论 :用胰酶灌注脐静脉消化内皮细胞是获得血管内皮细胞的一种好方法 ,获得细胞数量多、成活率高。     

兆科酶和抗αvβ3整合素抗体对牛视网膜血管内皮细胞Bax和Bcl-2基因表达的影响

目的探讨蛇毒制剂兆科酶和抗αvβ3整合素抗体对牛视网膜血管内皮细胞Bax,Bcl-2基因表达的影响.方法以玻连蛋白(Vn)包被培养皿,牛视网膜血管内皮细胞中加入不同浓度的蛇毒制剂兆科酶和抗αvβ3整合素抗体,应用免疫组化法和电镜检测蛇毒制剂兆科酶和抗αvβ3整合素抗体对培养的牛视网膜血管内皮细胞凋亡及凋亡调控基因Bax,Bcl-2表达.结果兆科酶和抗整合素抗体均能导致培养的牛视网膜血管内皮细胞凋亡,呈剂量依赖性促进Bax表达,抑制Bcl-2表达.结论兆科酶和抗整合素抗体通过使Bcl-2/Bax比率下降,从而诱导了牛视网膜血管内皮细胞凋亡.     

重组血管基膜衍生多功能肽抗血管新生活性的研究

目的:观察重组血管基膜衍生多功能肽(rVBMDMP)抗血管新生的活性。方法:采用MTT法检测rVB-MDMP对血管内皮细胞增殖活性的影响,台盼蓝染色细胞计数法测定其对血管内皮细胞生长的影响,内皮管结构形成实验测定其对血管内皮细胞内皮管结构形成能力的影响,PI染色流式细胞分析术检测其对血管内皮细胞凋亡率的影响,吖啶橙染色荧光显微镜观察rVBMDMP作用后细胞凋亡形态学的改变,划痕法测定其对血管内皮细胞迁移能力的影响。结果:MTT法、台盼蓝染色细胞计数法显示rVBMDMP能显著抑制血管内皮细胞增殖和生长,其作用呈剂量和时间依赖性,1.0μmol/L rVBMDMP作用96 h时,血管内皮细胞的活细胞数仅为溶酶对照组的50%。内皮管结构形成实验结果表明,rVBMDMP能显著降低血管内皮细胞的内皮管状结构数目(17.67±3.055与50.33±3.055)。流式细胞术结果显示,rVBMDMP处理后细胞凋亡率呈浓度依赖性增加,其中1.0μmol/L浓度组凋亡率高达14.41%。吖啶橙染色荧光显微镜下观察细胞出现典型凋亡的形态学改变。划痕法显示rVBMDMP对细胞迁移能力无明显影响。结论:rVBMDMP具有显著的抗血管新生活性。     

肝豆状核变性细胞溶酶体内外铜及铜结构蛋白的分布

研究肝豆状核变性的病理机制。以培养的皮肤成纤维细胞为模型，利用电镜Ｘ射线显微分析技术研究ＨＬＤ不同等位基因组成及不同病程患者溶酶体内外铜，硫分布，并进行定量分析。结果：ＨＬＤ早期患者细胞中溶酶体外的铜含量高于溶酶体内，而随病程延长，铜逐渐呈现溶酶体内分布的特点且溶酶体外铜含量和硫含量呈正相关。     

河豚肝脏提取物多肽A的抗瘤活性实验

目的 :了解河豚肝脏提取物多肽A、B、C的抗瘤活性。方法 :体外细胞毒试验是用噻唑蓝 (MTT)法。体内抗瘤试验是用小鼠肿瘤模型S 180肉瘤。结果 :多肽A在 12 5～ 10 0 0mg·L-1浓度下 ,对人鼻咽癌细胞 (CNE2 )、人肝癌细胞 (Bel 74 0 2 )、人肺腺癌细胞 (GLC 82 )和人白血病细胞 (K 5 6 2 )的半数抑制浓度分别为 341.5 5、6 0 7.96、5 2 0 .82mg·L-1和 833.13mg·L-1;而对人胚肾上皮细胞 (HK 2 93)、人脐血管内皮细胞 (EVC 4 0 3)和人体肝细胞 (ChangLiver)的IC50 分别为 6 2 6 .2 2、5 74 13、4 93.4mg·L-1。而多肽B、C对上述细胞的生长均无作用。体内抗瘤试验表明 ,多肽A用 6 0～ 180mg·(kg·d) -1,ipqd× 10d ,对小鼠肿瘤S 180肉瘤的抑制率为 4 2 .0 %～ 4 5 .2 % ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :河豚肝脏提取物多肽A在体内、体外试验有一定的抗瘤活性 ,但其抗瘤作用与剂量无相关性 ,对人癌细胞和人体正常细胞无明显的选择性     

一氧化氮合酶在急性环孢素A肾中毒中的变化及意义

目的　探讨大鼠急性环孢素 A(Cs A)肾中毒时一氧化氮合酶 (NOS)的变化及其意义。方法　健康雄性 SD大鼠4 8只随机分为 4组 :Gl为对照组 ;G2组以 Cs A 5 0 mg· kg- 1 灌胃 ;G3组以 Cs A5 0 m g· kg- 1 L -精氨酸 (L - arg,3 0 0 m g·kg- 1 )灌胃 ;G4组以 Cs A5 0 mg· kg- 1 L-硝基精氨酸甲基酯 (L- NAME,5 mg· kg- 1 )灌胃。结果　实验至第 7天末 ,G4组肾组织匀浆 NOS活性明显降低 ,G1、G2、G3组间 NOS活性差异无统计学意义 ;G2组有明显肾中毒表现 ,G3组肾损害较 G2、G4组减轻 ;G3组尿内 NO- 2 /NO- 3 明显增加 ,G4组尿内 NO- 2 /NO- 3 的排出减少 ,P<0 .0 5。光镜检查发现 G2组近曲小管上皮细胞空泡变性 ,上皮细胞胞浆脱落 ,尤以皮髓交界处较为明显 ,肾小管管周细胞浸润 ,血管充血。 G4组 Cs A肾损害加重 ,G3组Cs A肾病理改变减轻。结论　大剂量 Cs A体内应用对大鼠肾 NOS活性可能无抑制效应 ,L - arg对 Cs A所致肾毒性有拮抗作用 ,小剂量 L- NAME对 Cs A肾毒性有协同促进效应     

Angiostatin kringle(1-3)体外诱导人脐静脉内皮细胞凋亡

目的　探讨 angiostatin kringle (1- 3) [简称 AK(1-3) ]抑制血管内皮细胞增殖的作用机制 .方法　以加入重组人 AK(1- 3)蛋白 (30 0 nmol· L- 1 )的含 10 0 m L· L- 1小牛血清 DMEM培养基培养人脐静脉内皮细胞 ECV30 4,72 h后 ,采用透射电镜、流式细胞术细胞周期分析和核 DNA琼脂糖凝胶 (15 g· L- 1 )电泳检测重组 AK(1- 3)蛋白作用后血管内皮细胞的凋亡情况 .结果　实验组 ECV30 4细胞检测到了典型的凋亡 .透射电镜下可见细胞核染色质浓缩、边集、核碎裂及胞质浓缩等凋亡细胞典型的形态学改变 ;流式细胞术周期分析显示在 G1期峰前存在一个凋亡峰 (2 0 .6 % ) ;核琼脂糖凝胶(DNA15 g· L- 1 )电泳呈梯状 .对照组 ECV30 4细胞表现正常 .结论　重组人 AK(1- 3)蛋白诱导了血管内皮细胞的凋亡 ,这是其抑制血管内皮细胞增殖的机制之一     

维生素E对内皮细胞诱发血管平滑肌细胞凋亡的抑制作用

目的：研究维生素E对脂质过氧化损伤的内皮细胞（EC）诱发的血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡是否具有抑制作用。方法：以氢过氧化枯烯为诱发剂引发培养的血管EC的脂质过氧化反应,将制备的内皮细胞条件培养液（EC－CM）作为实验因素作用于培养的VSMC。彩和透射电子显微镜,免疫组织化学等方法观察维生素E对内皮细胞条件培养液诱发的血管平滑肌细胞凋亡的影响。结果：电镜可见VSMC凋亡小体。免疫组织化学结果显示,VSMC的P53蛋白表达增加,bcl-2蛋白表达下调。加维生素E组电镜改变轻微,p53,bcl-2异常表达减轻,结果：维生素E对脂质过氧化损伤的内皮细胞诱发的血管平滑肌细胞凋亡具有抑制作用。,     

透明质酸酶和透明质酸对血管内皮细胞增殖及CD44表达的影响

目的 :探讨透明质酸酶 (HAase)和透明质酸 (HA)对血管内皮细胞增殖的影响和可能机制 ,寻找促血管新生的新途径。 方法 :采用牛主动脉内皮细胞 (BAEC)离体培养模型 ,分别经 HAase或 HA刺激 ,用 MTT法观察 BAEC增殖率的变化 ;经流式细胞术 (FCM)测定细胞周期和细胞表面粘附分子 CD44的表达。 结果 :HAase(5 0μg/ ml)作用后细胞增殖率 (% )为5 0 .10± 1.2 3(P<0 .0 1) ,使细胞周期中 S期和 G2 / M期细胞比例增加 12 .8% ,CD44的表达细胞数和表达量增加 ;而高浓度HA (10 0μg/ m l)则抑制 BAEC的增殖和 CD44的表达。 结论 :HAase可降解细胞外基质中具有抗血管新生作用的 HA,促进内皮细胞的增殖 ,有可能提高促血管生长因子治疗心肌缺血的局部疗效     

光学蛋白质芯片技术检测细胞培养上清液中Tie-2的研究

目的探讨经与乳腺癌细胞系MCF-7共培养内皮细胞中血管新生相关受体Tie-2的基因表达变化，并以光学蛋白质芯片技术证实该共培养上清液中可溶性Tie-2蛋白质分子的实际产物。方法采用光镜、电镜和免疫组化实验验证内皮细胞，以免疫磁珠CD133分离内皮细胞，自建的Z-MCF-7-EC培养基进行正常内皮细胞与乳腺癌细胞系MCF-7共培养，RT-PCR对内皮细胞中Tie-2进行基因表达分析，以光学蛋白质芯片检测共培养上清液中可溶性Tie-2。结果与乳腺癌细胞系MCF-7共培养后的内皮细胞的Tie-2基因表达值为Tie-2／132m值（0．55±0．21），明显高于同期培养的正常对照内皮细胞Tie-2／β2m值（0．23±0．12），P〈0．05，共培养上清液中可溶性Tie-2含量（灰度值）为（88．55±6．77），明显高于正常对照内皮细胞上清液Tie-2含量（灰度值）为（75．17±9．51），P〈0．01。结论证实肿瘤对血管内皮细胞的作用不仅通过自身分；必的Ang-2发挥促血管新生作用，还同时通过对内皮细胞的作用使其Ang-2受体Tie-2蛋白表达增加发挥促血管新生作用；无需被检物预处理和无需标记的光学蛋白质芯片技术，可用于细胞培养上清液中蛋白质标记物的直接检测。     

胃癌单克隆抗体GL—013对应抗原的免疫电镜分布观察

运用酶标免疫电镜技术,对16例不同类型胃癌进行了胃癌单克隆抗体GL-013对应之抗原的超微结构水平分布观察。证实了GL-013抗原在胃癌细胞及癌旁“正常”粘膜分布的差异,首次提出该抗原可能是一种可溶性胃癌相关抗原,可做为胃癌研究及血清学诊断的免疫指标之一。     

庆大霉素的肾毒性与溶酶体病变

用雄性杂种灰兔每天一次肌肉注射硫酸庆大霉素150mg/kg,每天杀检3只共7天。电镜下可见近端肾小管上皮细胞的细胞器肿胀、变性,溶酶体增多伴有髓样小体形成,乃至细胞崩解坏死,肾小球上皮细胞和内皮细胞也有类似病变。主要由于庆大霉素沉积于溶酶体内,使磷脂酶受到抑制造成,为继发性溶酶体贮积病。     

日光性角化病中苏木素着色的巨大透明角质颗粒:采用抗Ted-H-1抗体和抗兜甲蛋白抗体进行免疫组化比较(英文)

背景:作者先前的研究表明,传染性软疣中苏木素着色的巨大透明角质颗粒(KH G)对抗Ted-H-1单克隆抗体(m Ab)有反应,但对抗中间丝相关蛋白m Ab或抗兜甲蛋白多克隆抗体(pA b)无反应。该发现提示Ted-H-1抗原性蛋白是KH G中的一种苏木素着色蛋白。目的:阐明日光性角化病———另一种含有巨大KH G的疾病———中KH G的主要蛋白质成分。方法:采用抗中间丝相关蛋白m Ab、抗Ted-H-1m Ab和抗兜甲蛋白pAb进行酶标免疫组化研究。用抗Ted-H-1m Ab和抗兜甲蛋白pAb进行免疫荧光双重染色和免疫电镜分析。结果:抗中间丝相关蛋白m Ab、抗Ted-H-1m …     

Cyclin G1与p53基因在血管瘤组织中的表达及关系

目的 探讨Cyclin G1与p53基因在血管瘤发生、发展及退化过程中的表达状况及关系.方法 采用免疫组织化学方法 (S-P法)检测人皮肤血管瘤增生期、退化期及正常皮肤组织中Cyclin G1和p53基因的表达水平,并结合第Ⅷ因子相关抗原的免疫组织化学染色证实表达CyclinG1和p53的细胞是血管内皮细胞.利用计算机图像分析技术测量不同时期血管瘤组织和正常皮肤组织Cyclin G1和p53表达的平均光密度和平均阳性面积.结果 增生期血管瘤内皮细胞Cyclin G1和p53表达水平高于退化期,差异有显著性(P＜0.001),退化期血管瘤内皮细胞Cyclin G1和p53表达水平与正常皮肤组织相比,差异无显著性(P＞0.05).结论 Cyclin G1和p53通过促进血管内皮生成在血管瘤的形成过程中起了重要作用.     

人胃粘膜细胞器标志酶电镜细胞化学研究

应用电镜酶细胞化学方法对15例人体正常胃粘膜细胞碱性磷酸酶(AlP)、酸性磷酸酶(AcP)、葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)、焦磷酸硫胺素酶(TPPase)及细胞色素氧化酶(CCO)进行了超微结构水平的研究,并与光镜结果进行了对比观察。发现正常胃粘膜上皮细胞无AlP反应;AcP仅见于主细胞的胞溶酶体及分泌溶酶体内;TPPase定位于胃粘膜表面上皮细胞及主细胞高尔基体反面第1～3层膜囊、GERL及少数内质网中;G6Pase和CCO见于所有胃粘膜上皮细胞内,但G6Pase反应以主细胞显著,CCO反应以壁细胞显著,与其细胞功能相一致。作者认为电镜酶细胞化学研究能更真实地反映出细胞的功能活动和代谢状态。