葛根总黄酮对神经肽Y诱导血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

[目的]观察葛根总黄酮对神经肽Y(NPY)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。[方法]建立体外培养VSMC 体系,实验分为4组,分别为正常对照组(加无血清的DMEM培养液)、模型组(加NPY条件培养液)、正常+葛根总黄酮组(即正常+中药组,加葛根总黄酮条件培养液)和模型+葛根总黄酮组(即模型+中药组,加NPY条件培养液和葛根总黄酮条件培养液),采用荧光免疫组化定量技术检测各组VSMC中的细胞核增殖抗原(PCNA)、血小板衍生生长因子(PDGF)和原癌基因C-myc表达平均荧光强度。[结果]模型组PCNA、PDGF和C-myc表达明显高于正常对照组(P<0.01); 正常+中药组3项指标均降低,与正常对照组比较具有显著性差异(P<0.01);模型+中药组3项指标比模型组降低(P <0.01)。[结论]葛根总黄酮对正常VSMC增殖有一定抑制作用,对NPY诱导VSMC增殖具有拮抗作用,其治疗心血管疾病的作用可能与后者有关。     

洛沙坦对血管平滑肌细胞增殖的干预作用及C-myc基因表达的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂洛沙坦(losartan)在高血压病血管重塑过程中的作用及作用机制。方法 ① 应用ACAS570共聚激光扫描显微系统,通过荧光免疫组化方法,对洛沙坦作用下体外培养的大鼠血管平滑肌细胞中的核细胞增殖抗原(PCNA)及与增殖相关的C-myc基因表达产物进行定量检测。② 测定洛沙坦作用下的体外培养的大鼠血管平滑肌细胞的增殖活性(MTT)值。结果 洛沙坦作用下血管平滑肌细胞的增殖活性(MTT)降低;实验组和对照组分别为0.2045±0.0013, 0.2239±0.0010(P＜0.05)。PCNA及C-myc的表达都明显降低;实验组和对照组PCNA分别为1 338.56±232.56, 1542.70±200.04(P＜0.01)。C-myc分别为1528.03±125.14,1740.35±205.91(P＜0.01)。结论 洛沙坦通过影响血管平滑肌细胞的增殖活性而参与血管壁结构的改变。     

神经肽Y刺激肾动脉平滑肌热休克蛋白表达及Losartan的干预作用

目的　探讨以HSP70作为神经肽Y (NPY)和losartan间在肾动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖活动相互作用为信号 ,在高血压肾动脉重塑中的作用。方法　应用快速微量MTT比色法和荧光免疫组织化学定量技术 ,观察神经肽Y作用下肾动脉VSMC增殖活动中热休克蛋白 (heatHSP)表达以及Losartan对NPY作用的干预作用。结果　神经肽Y刺激体外培养肾动脉平滑肌细胞的增殖度 (吸光度A值为 0 2 6 2 6± 0 0 0 2 5 )与细胞内因损伤产生的HSP70表达 (A值为 0 2 44 0±0 0 0 13)明显高于对照组 (A值为 0 2 2 3 9± 0 0 0 10 ) (P <0 0 1)。losartan可降低NPY对肾动脉平滑肌细胞的增殖度 (A值 )的刺激作用 ,减少细胞内HSP70的表达。结论　神经肽Y可影响肾动脉平滑肌细胞增殖引起高血压 ,而HSP70表达水平是肾动脉平滑肌细胞增殖的重要信号。     

脂质体介导10-23脱氧核酶对人血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :研究针对增殖细胞核抗原 (PCNA)基因特异性的 10 - 2 3脱氧核酶 (DNAzyme)对人血管平滑肌细胞(VSMC)PCNA的表达和细胞增殖的影响。方法 :应用脂质体转染法将不同寡聚核苷酸转入体外培养的人脐动脉VSMC。采用3 H -TdR掺入法观察空白对照组、脂质体组和等摩尔浓度 (1.0 μmol/L)的DNAzyme、反义寡核苷酸 (A SODN)、mDNAzyme在干预 2d后VSMC的DNA合成速率 ;免疫组化检测 1.0 μmol/L的DNAzyme和ASODN转染 2d后对PCNA表达的影响 ;四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法分析不同剂量的DNAzyme(0 .12 5、0 .2 5、0 .5、1.0、2 .0 μmol/L)转染5d后VSMC增殖活性。结果 :1.0 μmol/LDNAzyme和ASODN转染 2d后 ,VSMC的3 H -TdR掺入量均较对照组显著减低 (P <0 .0 5 ) ,DNAzyme较ASODN更显著减低 (P <0 .0 5 ) ;1.0 μmol/LDNAzyme作用 2d后细胞增殖抑制率为 6 4 .5 % ,高于ASODN组 (37.7% )、mDNAzyme组 (11.9% )和脂质体组 (3.3% )。DNAzyme和ASODN处理细胞 2d后 ,PCNA的表达水平 (平均光密度值 )分别为 0 .2 95 6± 0 .0 2 5 1和 0 .3880± 0 .0 92 5 ,明显低于空白对照组 0 .7342± 0 .2 136 (P <0 .0 1)。转染 5d后 ,DNAzyme的作用呈剂量依赖性 ,0 .12 5 μmol/LDNAzyme处理后VSMC的增殖较对照组低 (P <0 .0 5 )。     

高血压大鼠血管平滑肌细胞中细胞外信号调节激酶和c-jun及凋亡相关基因的表达

目的:探讨血管平滑肌细胞(VSMC)在高血压中的作用及其机制。方法:Wis-tar大鼠两肾一夹型高血压模型,采用免疫组织化学方法,观察肾细小动脉平滑肌细胞中ERK-2、c-jun和bax及bcl-6表达。结果:实验期间,高血压大鼠血压从112±18mmHg升高到实验结束时的198±33mmHg;高血压组肾小叶间动脉ERK-2染色阳性率(16.86%)明显高于对照组(P<0.01),入球动脉、小叶间动脉、叶间动脉和弓形动脉VSMC中ERK-2染色阳性率均明显高于对照组(P<0.01);高血压组入球动脉、小叶间动脉和弓形动脉VSMC中c-jun的阳性率明显高于对照组(P<0.01);高血压组肾弓形动脉及叶间动脉VSMC中bax染色阳性率均明显低于对照组(P<0.01);高血压组肾小叶间动脉bcl-6染色阳性率(12.96%)明显高于对照组(P<0.01),入球动脉、小叶间动脉VSMC中bcl-6阳性率均明显高于对照组(P<0.05)。结论:两肾一夹型高血压时,少数肾小动脉血管平滑肌细胞ERK-2过表达,使得转录相关基因c-jun等活化,凋亡基因抑制,最终使VSMC增多导致血管重构。     

三七总皂苷对骨髓间充质干细胞增殖和向心肌样细胞分化的影响

【目的】观察三七总皂苷(PNS)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖和体外诱导其分化为心肌样细胞的作用。【方法】采用骨髓细胞体外培养技术分离大鼠MSCs,以流式细胞仪检测细胞表面标志;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察PNS对MSCs增殖的影响;采用第8代MSCs进行体外心肌细胞诱导分化;采用相差显微镜、免疫组化及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)结果鉴定心肌细胞。【结果】大鼠MSCs细胞表面抗原CD44阳性,CD34阴性;经PNS作用后MSCs增长速度比空白对照组明显加快,体外诱导后细胞形态发生变化,其细胞免疫组化鉴定呈结蛋白(Desmin)、肌钙蛋白(cTnI)阳性;RT-PCR结果显示诱导后细胞转录肌球蛋白重链mRNA水平增加。【结论】PNS能促进大鼠MSCs体外增殖并可诱导MSCs分化为心肌样细胞,这为细胞移植治疗心肌梗死提供了实验依据。     

韧粘素反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的探讨韧粘素 (TN)反义寡核苷酸 (ODN)对培养大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的抑制作用。方法采用细胞计数及快速竞争性逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)等方法 ,观察不同剂量 ( 5、10、2 0 μg/ml)TN反义ODN和正义ODN对体外培养大鼠VSMC的增殖以及TNmRNA表达水平的影响。　结果TN反义ODN可有效抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖 ,作用呈剂量依赖性 (反义组 5、10、2 0 μg/ml剂量细胞计数分别为 10 5/ml× ( 4 .99± 0 .2 1)、( 4 .0 8± 0 .14 )、( 2 .85± 0 .39) ,对照组为 10 5/ml× ( 5 .95± 0 .41) ,(P <0 .0 5 ) ;TN反义ODN亦可下调TNmRNA表达水平 (反义组 0 .32± 0 .0 5 ,对照组为 0 .5 2± 0 .0 8;P <0 .0 1) ;而TN正义ODN则无上述作用。　结论TN反义ODN可能通过下调TNmRNA表达水平而抑制血管平滑肌细胞的增殖。     

支架植入对兔血管平滑肌细胞PCNA和Cyclin E表达及细胞凋亡的影响

【目的】观察支架植入后对血管中膜平滑肌细胞增殖和凋亡的影响,探讨支架植入后再狭窄的发生机制。【方法】将雄性新西兰兔50只随机分为球囊组和支架组,设正常对照。分别于术后第3、7、14、28、56天取材研究①用免疫组化检测血管中膜平滑肌细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）和细胞周期蛋白E（CyclinE）的表达;②用TUNEL染色法测定血管中膜平滑肌细胞的凋亡。【结果】与对照组比较,支架组和球囊组PCNA、CyclinE表达及细胞凋亡均有显著增加。支架组与球囊组比较,①PCNA和CyclinE表达明显增加,术后第7天,支架组和球囊组PCNA阳性率为24.36%±0.55%vs18.74%±1.09%(P<0.01),CyclinE阳性率为22.65%±1.00%vs17.68%±1.10%(P<0.01);②支架组血管中膜平滑肌细胞的凋亡也较球囊组显著增加,最大凋亡率在术后第7天,12.46%±1.13%vs5.54±0.53%(P<0.01);③PCNA和CyclinE的阳性率与平滑肌细胞凋亡阳性率的比值,球囊组大于支架组。【结论】支架组较球囊组导致明显的平滑肌细胞增殖,同时也导致更显著的平滑肌细胞凋亡,使支架植入后再狭窄的程度减轻。     

烟草烟雾刺激通过骨桥蛋白对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨烟草烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖的影响及骨桥蛋白(osteopontin,Opn)在其中的作用。方法体外培养VSMC,用不同浓度CSE刺激,并且设置对照组,采用MTT法检测CSE对大鼠VSMC增殖活性的影响,用免疫细胞化学检测CSE作用后VSMC中骨桥蛋白和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达。结果①MTT结果示2.5%、5%CSE组吸光度(A值)增高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。10%、20%CSE组A值与对照组比较,差异无显著性意义(P0.05)。对照组VSMC中有少量Opn和PCNA蛋白表达。2.5%CSE组Opn和PCNA蛋白表达增加。5%CSE组Opn和PCNA蛋白表达达到高峰,此后逐渐下降。10%、20%CSE组仍高于高于对照组。②Opn抗体可显著抑制5%CSE诱导的MTTA值和Opn、PCNA蛋白表达增加。结论①低浓度CSE(2.5%、5.0%)对大鼠VSMC的增殖逐渐增加,高浓度(10%、20%)时增殖趋势逐渐下降。②CSE可通过增加Opn的表达促进大鼠VSMC的增殖。     

氧化低密度脂蛋白致血管平滑肌细胞损伤和阿司匹林的干预

目的 :探讨阿司匹林 (aspirin)对氧化低密度脂蛋白 (oxLDL)致血管平滑肌细胞 (VSMC)损伤的保护作用及其机制。方法 :硝酸酶还原法测定VSMC培养液中一氧化氮 (NO)水平 ;MTT比色法测VSMC增殖活度 ;比色底物法检测VSMC培养液中的组织纤溶酶原激活剂 (t PA)和纤溶酶原激活剂抑制剂 1(PAI 1)的活性。结果 :5 0mg·L- 1 的oxLDL作用 2 4h可使VSMC培养液NO水平由 (82 .0 4± 7.89) μmol·L- 1 降低到 (4 8.11± 6 .4 3) μmol·L- 1 ,并明显刺激VSMC增殖 ,使其增殖活度 (MTT OD值 )明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ;同时培养液中PAI 1活性显著升高 ,t PA活性显著降低。治疗剂量 (3,6mmol·L- 1 )Aspirin可显著提高VSMC培养液中NO水平 ,明显抑制oxLDL对VSMC增殖的刺激作用 ,并显著降低培养液中PAI 1活性 ,升高t PA活性。结论 :Aspirin能抑制oxLDL刺激的VSMC增殖 ,逆转oxLDL致VSMC损伤     

鬼臼毒素衍生物ZM对人骨肉瘤细胞HOS增殖及PCNA基因表达的影响

【目的】研究鬼臼毒素衍生物ZM对HOS细胞增殖及PCNA表达影响。【方法】培养HOS细胞,实验随机分为正常对照组、鬼臼毒素衍生物ZM组和阳性对照组。用MTT法检测鬼臼毒素衍生物ZM对HOS细胞的生长抑制作用,DNA Ladder凝胶电泳法分析鬼臼毒素衍生物ZM的诱导凋亡作用,RT-PCR检测PCNA基因的表达。【结果】与正常对照组相比,鬼臼毒素衍生物ZM能明显抑制HOS细胞的生长,且与浓度、时间呈依赖性,其IC50(48 h)为(1.32±0.3)μmol/L;鬼臼毒素衍生物ZM处理HOS细胞后,DNA凝胶电泳结果显示呈明显的梯状条带,RT-PCR结果显示PCNA表达显著下调。【结论】鬼臼毒素衍生物ZM对人骨肉瘤细胞HOS有明显的生长抑制作用,该作用可能与诱导凋亡和PCNA基因的表达下调有关。     

氯沙坦对动脉粥样硬化早期家兔血管增生及MAPK表达的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂氯沙坦对加速性动脉粥样硬化(AS)早期家兔血管增生及MAPK蛋白表达的影响.方法采用组织学和免疫细胞化学方法评价加速性AS早期家兔血管组织学、PCNA及MAPK蛋白表达的改变.结果 AS组血管内膜与中膜厚度比值、内膜PCNA阳性细胞数及MAPK蛋白表达平均光密度积分值均显著增加,氯沙坦干预组内膜与中膜厚度比值较AS组显著下降,PCNA阳性细胞数明显减少,血管壁MAPK蛋白表达水平明显下降(P值均<0.001).结论氯沙坦干预可抑制血管增生时MAPK蛋白表达,减轻加速性AS病变血管内膜增生,从而可能在防治AS过程中起重要作用.     

氯沙坦和卡托普利对实验性大鼠腹主动脉瘤形成的影响

目的研究氯沙坦和卡托普利对腹主动脉瘤(AAA)形成的抑制作用。方法雄性Wistar大鼠30只,体质量250～300 g,随机分为对照组、氯沙坦组和卡托普利组,每组10只,以腔内猪胰弹力蛋白酶灌注法复制AAA动物模型,术后分别给予生理盐水、氯沙坦及卡托普利灌胃,观察各组AAA形成情况,并用HE染色及VVG染色检测主动脉壁内炎症浸润及中膜弹力纤维破坏情况,用免疫组织化学染色检测主动脉壁内MMP-2和MMP-9的表达情况。结果对照组均形成AAA;而氯沙坦组和卡托普利组均未形成AAA,与对照组相比,氯沙坦组和卡托普利组腹主动脉壁增厚不明显,中膜弹力纤维层及平滑肌细胞保存较好,炎症细胞浸润明显减少,主动脉壁内MMP-2和MMP-9的表达均较对照组明显减少;而氯沙坦组和卡托普利组之间差异无统计学意义。结论氯沙坦和卡托普利能抑制弹力蛋白酶灌注的大鼠主动脉壁的炎症反应和主动脉壁的MMP的表达,最终抑制弹力蛋白酶灌注大鼠AAA的形成。为证实血管紧张素Ⅱ在AAA发病机制中的作用和小AAA的药物治疗提供了理论基础。     

PCNA、Caspase-3和Bcl-2在不同类型IgA肾病中的表达及意义

目的观察增殖细胞核抗原（PCNA）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）和B细胞淋巴瘤／白血病-2（Bcl-2）在不同病理学类型IgA肾病（IgAN）中的表达,并探讨其意义及与患者肾功能临床指标之间的关系。方法采用免疫组化法测定54例IgAN患者肾组织PCNA、Caspase-3和Bct-2的水平,收集患者血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、24h尿蛋白定量的临床检测结果。结果（1）IgA肾病患者肾组织中PCNA的表达从低到高依次为Ⅰ级（0．09±0．03）、Ⅱ级（0．12±0．02）、Ⅴ级（0．13±0．01）、Ⅲ级（0．28±0．08）、Ⅳ级（0．54±0．03）,其中Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ级间均有统计学意义（均P〈0．01）;Caspase-3与Bcl-2的表达随级别增加而逐渐增高：Caspase一3的表达依次为Ⅰ级（0．08±0．01）、Ⅱ级（0．11±0．02）、Ⅲ级（0．13±0．08）、Ⅳ级（0．20-±0．01）、V级（0．35±0．01）,其中Ⅰ级与其他各级间比较差异均有统计学意义（均P〈0．01）。Bcl-2的表达依次为Ⅰ级（0．09±0．02）、Ⅱ级（0．11±0．01）、Ⅲ级（0．15±0．01）、Ⅳ级（0．29±0．01）、V级（0．32±0．01）．其中Ⅰ、Ⅱ级与Ⅲ～Ⅴ级间均有统计学意义（均P〈0．01）。三种蛋白Ⅲ、Ⅳ级的表达为PCNA〉Bcl-2〉Caspase-3,Ⅴ级的表达为Caspase-3〉-2〉PCNA,差异均有统计学意义（P〈0．01）。（2）Scr、BUN、24h尿蛋白定量从Ⅰ级到Ⅴ级均逐渐增高,Scr的水平依次为65．08±14．11、81．53±21．71、133．86±69．36、147．56±52．69、280．03±137．81,其在Ⅴ级的水平与其他各组间比较均有统计学意义（P〈0．01）;BUN的水平依次为4．77±1．39、6．16±2．48、6．97-±3．60、9．44±2．80、13．30±6．32,其Ⅴ级水平与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级间比较均有统计学意义（P〈0．01）;24h尿蛋白定量的水平依次为0．84±0．33、2．50±1．08、3．35±0．82、3．54±0．77、4．66±1．42,其Ⅰ级的水平与其他各级间及Ⅴ级与Ⅱ、Ⅲ级间均有统计学意义（P〈0．01）。（3）PCNA、Caspase-3和Bel-2的表达与Scr、BUN、24h尿蛋白定量均呈正相关（P〈0．01）,PCNA的表达与Caspase-3呈正相关（P〈0．05）。结论PCNA、Caspase-3和Bel-2随着IgANⅠ～Ⅴ级表达水平逐渐增加,提示IgAN病程进展及肾功能的损伤可能与细胞凋亡增殖失衡有关。     

长期应用小剂量氨茶碱对稳定期慢性阻塞性肺疾病患者、动物外周血、骨髓粒细胞增殖的影响

目的探讨长期应用小剂量氨茶碱（Aminophyllin,AP）对稳定期慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD）患者、动物骨髓、外周血粒细胞增殖的影响。方法 （1）应用前瞻、随机分组、对照及自身对照的方法,将1252例稳定期COPD患者（Ⅱ～Ⅲ级）分为治疗组（常规治疗＋茶碱缓释片0.4g/d）和对照组（常规治疗）。治疗开始后每间隔15d复查1次血常规,对治疗前后的指标进行自身前后比较。（2）25只实验用羊采用自身对照法,在应用AP 3mg/（kg.d）后,对治疗前后的各项指标进行自身前后比较。结果 （1）长期应用小剂量AP,对稳定期COPD患者的外周血粒细胞增殖无影响（P〉0.05）;（2）长期应用小剂量AP可使动物的骨髓嗜酸性粒细胞增生活跃（P〈0.05）;（3）长期应用小剂量AP对动物的骨髓、外周血粒细胞增生无影响（P〈0.05）。结论长期应用小剂量AP可使骨髓嗜酸性粒细胞增生活跃以提高机体抗炎及调节免疫能力,而对骨髓血红系统及外周血粒细胞增殖无影响。     

胃癌患者术后早期肠内营养与肠外营养疗效比较

【目的】研究肠内营养对胃癌患者术后胃肠功能恢复的影响。【方法】胃癌患者76例,随机分为肠内营养组(EN)和肠外营养组(PN),每组38例。术后均给予营养支持7 d。观察两组腹胀、腹泻、恶心、呕吐、排便等情况,以及血清的白蛋白、血红蛋白、前白蛋白、AST、ALT、肌酐水平变化。【结果】PN组的平均肛门排气时间为5.8 d,EN组的平均肛门排气时间为4.1 d,两组差异有统计学意义(P<0.05)。PN组平均排便时间为4.6 d,EN组平均排便时间为3.2 d,两组差异有统计学意义(P<0.05)。术后第4天时,两组的白蛋白、血红蛋白、前白蛋白较术前1 d明显下降,PN组和EZ组之间差异无统计学意义(P>0.05)。EN组术后第4~8天白蛋白、血红蛋白、前白蛋白上升幅度明显高于PN组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。术后第8天,两组ALT和肌酐差异无统计学意义(P>0.05),AST差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】胃癌患者术后早期肠内营养安全可行,能够早期恢复肠道功能,优于肠外营养。     

αSMA、MMP-13及VEGF在应用口服枸杞多糖预防动脉粥样硬化家兔动脉中的表达及临床意义

目的探讨αSMA、MMP-13及VEGF在应用枸杞多糖治疗动脉粥样硬化家兔动脉中的表达及临床意义。方法将24只雄性新西兰白兔随机分成3组:空白对照组、模型组、预防组,每组8只。空白对照组喂饲普通饲料,模型组喂饲含2%胆固醇的饲料,预防组喂饲含2%胆固醇的饲料,并在每天早晨饲料中按体重加入枸杞多糖(LBP)20mg/kg。第16周末空气栓塞处死所有动物并观察主动脉形态学变化及应用免疫组织化学染色进行指标的检测及分析。结果与空白对照组相比,模型组全部形成动脉粥样硬化模型,预防组也形成了动脉粥样硬化,但是斑块厚度明显低于模型组。通过免疫组织化学染色发现:预防组与模型组比较,主动脉斑块厚度和斑块内平滑肌细胞明显减少;血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达降低,预防组与模型组相比,VEGF的阳性表达率显著减小(P<0.05);MMP-13(Matrix metalloproteinase 13)的表达降低,预防组与模型组相比,MMP-13的阳性表达率显著减小(P<0.05)。结论 1.口服枸杞多糖能明显抑制高脂血症所诱发的VSMC增殖,促进已经增殖的VSMC凋亡;2.枸杞多糖能够降低动脉斑块内MMP-13和VEGF的表达,从而抑制动脉粥样硬化的发生与发展;3.口服枸杞多糖能有效预防高脂饲料诱发的家兔主动脉AS斑块的形成。