地西他滨对恶性黑色素瘤细胞A375增殖、凋亡及侵袭的影响

目的:研究甲基化抑制剂地西他滨对人恶性黑色素瘤细胞A375增殖、凋亡及侵袭的影响。方法:采用不同浓度的地西他滨对A375细胞进行干预,用MTT实验检测地西他滨对细胞增殖的影响,用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化,划痕愈合实验及Transwell小室实验观察细胞体外迁徙侵袭能力的改变。结果:与对照组相比,地西他滨组A375细胞的增殖活性受到明显抑制,凋亡比例显著增加,体外迁移和侵袭能力减弱,差异有统计学意义(P0.05),地西他滨对A375细胞周期的影响则无显著差异(P0.05)。结论:地西他滨能抑制恶性黑色素瘤A375细胞的增殖,其抗肿瘤效应有可能成为恶性黑色素瘤治疗的新途径。     

重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin-dNK对黑色素瘤细胞A-375增殖和凋亡的影响研究

目的构建重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin-dNK,探讨其对黑色素瘤A-375细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同病毒感染复数(MOI)感染黑色素瘤细胞A-375及人正常皮肤细胞HFF;以MTT法检测细胞增殖情况;并以流式细胞术检测细胞凋亡情况,同时设空白对照组。结果重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin-dNK转染后在黑色素瘤细胞A-375中呈特异表达,在人正常皮肤细胞HFF中无表达。黑色素瘤细胞A-375的增殖随MOI增加而逐渐受到抑制,HFF细胞的增殖无明显变化。慢病毒治疗组A-375细胞凋亡明显优于对照组,而对HFF细胞无明显作用。结论重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin-dNK可靶向促进黑色素瘤细胞A-375的细胞凋亡,并抑制其增殖。     

柚皮苷促进成骨细胞分化并有效改善卵巢切除所致的骨质疏松

目的 评价柚皮苷对成骨细胞增殖与分化的作用,并采用大鼠骨质疏松模型评价柚皮苷的治疗效果.方法 采用不同浓度的柚皮苷处理大鼠骨髓基质细胞,观察其增殖、分化与功能的改变.采用低、中、高三种不同剂量的柚皮苷作为治疗组,磷酸缓冲液(PBS)作为对照组,对卵巢摘除诱发骨质疏松的大鼠灌胃2个月.应用骨质疏松大鼠右侧股骨的X线照片和显微CT扫描测量骨矿密度以及骨体积分数,使用骨质疏松大鼠左侧胫骨的病理切片检测组间骨小梁厚度和骨小梁间隙的变化.结果 体外研究表明柚皮苷可有效增加骨髓基质细胞的增殖和成骨分化,浓度为10 μg/ml时对骨钙素的表达具有最显著的作用.骨髓基质细胞对柚皮苷的治疗呈现一种延迟反应模式.柚皮苷并有效逆转了卵巢切除导致的骨质疏松,增加了骨密度、骨容量和骨小梁厚度.300 mg/kg(中剂量)是具有满意治疗效果的最优剂量.结论 柚皮苷促进骨髓基质细胞的分化与增殖,增加骨钙素的表达,它能有效逆转卵巢切除大鼠的骨质疏松过程.本研究表明柚皮苷是治疗骨质疏松的潜在有效药物.     

半枝莲总黄酮提取物对乳腺癌细胞及甲状旁腺相关蛋白的抑制

目的 :探讨半枝莲总黄酮类提取物对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法 :体外培养乳腺癌MDA-MB-231细胞株,提取并鉴定半枝莲总黄酮提取物,配制不同浓度提取物作用于细胞,分别以MTT比色法、细胞划痕实验、transwell实验检测其对MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,用实时定量PCR检测甲状旁腺相关蛋白(PTHr P)m RNA的表达变化。结果:与对照组相比,半枝莲总黄酮类提取物40~200μg/m L共5组作用于MDA-MB-231细胞24 h时,细胞增殖抑制率分别为(11.7±5.7)%、(25.1±4.1)%、(40.1±4.0)%、(44.7±4.0)%、(45.1±2.9)%;细胞迁移抑制率分别为(8.9±1.8)%、(20.4±2.7)%、(21.8±2.4)%、(29.3±4.0)%、(51.7±6.3)%;细胞侵袭抑制率分别为(31.4±0.3)%、(36.5±0.7)%、(57.8±0.8)%、(59.8±1.1)%、(80.7±1.4)%;PTHr P m RNA相对表达水平分别为81.8%、61.8%、46.5%、35.1%、22.2%。结论:半枝莲总黄酮类提取物可能通过下调PTHr P m RNA的表达,抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭能力。     

黄芩苷体外对人肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的 探讨黄岑苷对人肺腺癌A549细胞株增殖影响的分子机制.方法 体外培养人肺腺癌细胞株A549,加入0.000、0.625、1.250、2.500、5.000、10.000 mg/L黄芩苷,分别孵育24、48、72 h,噻唑蓝(MTT)法检测药物对A549细胞的抑制率;1.22 mg/L黄芩苷孵育A549细胞24 h后,收集细胞,逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)测定增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白 1(Cyclin D1) 、p21 mRNA的表达水平;Western blot法检测PCNA、Cyclin D1、p21蛋白表达水平.结果 MTT结果显示黄芩苷对人肺腺癌A549细胞株增殖具有明显的抑制作用.1.22 mg/L黄芩苷作用细胞24 h后,与对照组(0.68±0.16、0.48±0.05、0.27±0.06)比较,PCNA mRNA表达(0.22±0.03)、Cvclin D1 mRNA表达(0.08±0.02)显著下降(P＜0.01),p21 mRNA表达(0.47±0.07)显著升高(P＜0 01) 与对照组(1.75±0.05,1.59 ±0.24,0.59±0.02)比较,黄芩苷组PCNA蛋白表达(0.34±0.02)、Cvclin D1蛋白表达(0.50±0.02)显著下降(P＜0.01),p21蛋白表达(1.39±0.05)显著升高(P＜0.01).结论 黄芩苷可通过下调PCNA、Cyclin D1表达,上调p21表达,发挥其抑制A549肺腺癌细胞增殖的作用.     

橄榄苦苷对破骨细胞增殖影响的实验研究

目的探讨橄榄苦苷不同药物浓度及不同作用时间对破骨细胞增殖的影响。方法破骨细胞的制备,采用sRANKL与M-CSF诱导小鼠单核细胞RAW264.7细胞获得破骨细胞。设置实验组:4组分别加入400μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL橄榄苦苷,另设空白对照组。运用抗酒石酸酸性磷酸酶染液试剂盒进行破骨细胞TRAP染色鉴定,并采用Cell Counting Kit法(CCK法)检测应用不同浓度橄榄苦苷及不同作用时间抑制破骨细胞增殖的情况。结果与空白对照组比较,400μg/mL、200μg/mL、100μg/mL橄榄苦苷对破骨细胞的增殖均具有明显抑制作用。当药物作用时间为24 h及72 h时,400μg/mL橄榄苦苷对破骨细胞增殖的抑制作用最强,当药物作用时间为48 h时,200μg/mL橄榄苦苷对破骨细胞增殖的抑制作用最强,差异有统计学意义(P0.05);50μg/mL橄榄苦苷对破骨细胞的增殖无明显抑制作用,差异不具有统计学意义(P0.05)。结论橄榄苦苷可能通过破坏破骨细胞细胞膜的完整性抑制破骨细胞的增殖。     

白藜芦醇对胰腺癌细胞的抑制作用

目的检测白藜芦醇(resveratrol,Res)体外单独及联合化疗药物对胰腺癌MIAPaCa-2细胞的抑制作用。方法在体外培养条件下观察Res,5-氟脲嘧啶(5-flurouracil,5-FU)和吉西他滨(Gemcitabine,Gem)分别对胰腺癌MIAPaCa-2细胞增殖的影响,然后根据以上抑制结果,选择对MIAPaCa-2细胞抑制率在15%～30%的5-FU或Gem药物浓度,再与不同浓度的Res联合用药。在联合药物处理MIAPaCa-2细胞48 h后,同样用噻唑蓝(methyl thia-zolyl tetrazolium,MTT)法检测联合用药,检测其对细胞增殖的抑制作用。结果Res,5-FU及Gem体外单独用药均能显著抑制MIAPaCa-2细胞的生长增殖,Res联合384.4μmol/L 5-FU或5.0μmol/L Gem后,对MIAPaCa-2细胞增殖的抑制作用显著提高,与单独用药组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论体外Res能显著抑制人胰腺癌MIAPaCa-2细胞的增殖,Res联合5-FU或Gem能显著提高对MIAPaCa-2细胞增殖的抑制作用。     

TNF-α联合奥沙利铂对胃癌细胞SGC-7901抑制作用的研究

目的:探讨TNF-α联合奥沙利铂对人胃癌细胞株SGC-7901生长抑制、凋亡的影响及其作用机制。方法:应用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度的TNF-α、奥沙利铂及两者联合应用对SGC-7901细胞抑制率;采用Hoechst检测SGC-7901细胞凋亡情况。结果:浓度为20、40、80和160μg/mL的奥沙利铂对SGC-7901的细胞生长抑制率为(29.11±0.63)%、(41.05±0.97)%、(47.69±1.03)%和(56.26±0.93)%,均可抑制细胞增殖(P<0.01);浓度为25 mg/L的TNF-α对SGC-7901细胞的生长抑制率为(2.39±0.65)%,抑制作用不明显,浓度为50、100、150 mg/L的TNF-α对SGC-7901细胞的生长抑制率为(4.51±0.86)%、(4.63±0.53)%和(4.75±1.05)%,可抑制细胞增殖(P<0.05);奥沙利铂(20μg/mL)与25、50、100和150 mg/L的TNF-α联合应用时对SGC-7901的细胞生长抑制率为(36.34±0.76)%、(45.51±0.83)%、(51.47±0.67)%和(58.78±0.97)%,与单用TNF-α(100mg/L)或奥沙利铂(20μg/mL)比较,细胞生长抑制率增加(P<0.01);Hoechst检测结果显示,单独应用100 mg/L TNF-α、单独应用20μg/mL奥沙利铂及两者联合应用均有细胞凋亡现象,且联合用药组细胞凋亡率增高(P<0.01)。结论:TNF-α可增强奥沙利铂对人SGC-7901细胞的促凋亡作用,其机制可能为TNF-α、奥沙利铂分别激活不同的Caspase,并级联和放大有关凋亡信号,因而对细胞凋亡产生了协同作用。     

内质网应激蛋白ATF4调控STAT3信号通路促进黑色素瘤细胞生长及转移的研究

目的:探索内质网应激蛋白ATF4在黑色素瘤发生发展中的作用和机制。方法:运用荧光定量PCR技术分析对比黑色素瘤细胞系和黑色素细胞系内ATF4表达的差异,运用CCK-8染色以及Brd U染色检测细胞生长及增殖能力,运用Tranwell技术检测细胞转移能力,运用免疫印迹技术检测细胞内STAT3磷酸化水平。结果:ATF4 m RNA在黑色素瘤细胞中的表达水平显著高于黑色素细胞,显示肿瘤细胞中含有更高水平的ATF4 m RNA;在A375细胞中过表达ATF4后,细胞生长增殖速率提高,转移能力增强,而降低内源ATF4后,MM200细胞的增殖速度和转移能力都出现明显降低。同时,A375细胞内ATF4含量的增加也引起了细胞内STAT3磷酸化水平以及细胞内IL-6表达的显著升高。结论:内质网应激蛋白ATF4在黑色素瘤的发生发展中具有重要的调控作用,细胞内ATF4可能是参与调控了IL-6-STAT3信号通路,从而促进黑色素瘤细胞增殖和迁移。     

失重下柚皮苷作用于T细胞干预的成骨细胞增殖分化研究

摘要：目的 探讨在模拟微重力情况下，柚皮苷作用于T淋巴细胞-成骨细胞共培养体系后，成骨细胞的增殖分化情况及其机制。方法 提取SD乳鼠成骨细胞，在微重力环境下，与大鼠T淋巴细胞体外共培养。分为干预组与对照组。干预组加入中药物质柚皮苷干预液，对照组加入同体积不含血清的培养基。通过CCK-8检测成骨细胞增殖情况、ALP活性检测盒检测ALP活性、Western Blot 测定蛋白PCNA表达观察细胞增殖情况，测定细胞外调节蛋白激酶ERK表达，研究其机制通路。结果 干预组的ALP活性高于对照组，PCNA蛋白表达增高，ERK蛋白表达增高，且具有统计学意义( P＜0. 05)。结论 在微重力下柚皮苷促进了T细胞干预下的成骨细胞增殖分化，其作用机制可能是通过激活ERK通路来实现的。     

存活素反义寡脱氧核苷酸对人恶性黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 了解存活素反义寡脱氧核苷酸(ASODN)对人恶性黑色素瘤细胞(hMMC)增殖和凋亡的影响.方法 取对数生长期hMMC株A375,按随机数字表法分为对照组(不转染)、正义链组(转染600 nmol/L存活素正义寡脱氧核苷酸)、错义链组(转染600 nmol/L存活素错义寡脱氧核苷酸)、脂质体组(仅用脂质体处理)、反义链组(转染存活素ASODN,根据转染物浓度再分为200、400、600 nmol/L 3个亚组),倒置荧光显微镜下观察转染效果.采用噻唑蓝法测定细胞存活情况并计算细胞增殖抑制率,双变量流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期,蛋白质印迹法检测存活素蛋白的表达,激酶法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的活性.对数据进行方差分析.结果 (1)正义链组、错义链组、反义链600 nmol/L组细胞转染率均大于80%.(2)反义链200、400、600nmol/L组转染后24 h细胞增殖抑制率[(10.30±0.56)%、(16.69±0.58)%、(24.67±0.67)%]较正义链组[(5.23±0.25)%]、错义链组[(5.09±0.13)%]、脂质体组[(4.70±0.45)%]显著增加(F=746.91,P值均小于0.05),且随转染时间延长,增殖抑制率增加明显.(3)反义链200、400、600nmol/L组转染后24 h细胞凋亡率分别为(13.5±1.9)%、(20.1±1.5)%、(32.1±2.9)%,显著高于对照组、正义链组、错义链组、脂质体组的(6.5±0.6)%、(5.6±0.7)%、(6.4±1.0)%、(6.5±1.3)%(F=139.9,P值均小于0.05),细胞被阻滞在G2/M期.(4)与对照组比较,反义链各浓度组存活素蛋白表达量减少,caspase-3活性明显增高(F=63.1,P值均小于0.05);正义链组、错义链组、脂质体组caspase-3活性与对照组比较,差异无统计学意义(F=0.512,P值均大于0.05).结论 存活素ASODN能够呈浓度-时间依赖性抑制hMMC株A375增殖,诱导G2/M期阻滞,促进其凋亡.     

ThD下调Hep-G2细胞骨桥蛋白的表达对其侵袭转移能力的影响研究

目的了解ThD对体外肝癌细胞侵袭转移以及骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法应用细胞常规培养方法培养人肝癌细胞株Hep-G2,CCK-8法检测不同药物浓度及不同作用时间下ThD对肝癌细胞增殖的影响,细胞划痕试验验证ThD对肝癌细胞侵袭转移的能力的影响。用免疫细胞化学的方法检测用药组和对照组肝癌细胞中OPN的表达情况,Western blot法检测不同药物浓度及作用时间下肝癌细胞中OPN表达量。结果与对照组相比在作用24、48、72 h,ThD400μg/ml用药组对细胞生长均有抑制作用(P0.01),并且抑制率和作用时间呈正相关。ThD用药组细胞迁移率在作用24、48、72 h后同对照组相比,P值均0.05,差异有统计学意义。用药组同对照组免疫细胞化学染色积分为1.728±0.051、2.328±0.245,t值为-5.354,P0.01。ThD用药组对细胞OPN表达有抑制作用,与对照组相比在作用24、48、72 h时,P值均0.01,并且抑制率和作用时间呈正相关。结论 ThD对Hep-G2细胞的增殖、迁移及OPN的表达产生抑制作用,并且作用效果同药物浓度及作用时间呈正相关。     

3-溴丙酮酸对胰腺癌细胞的抑制作用

目的:观察3溴丙酮酸(3-Br PA)对Mia Pa Ca-2胰腺癌细胞的生长调节作用,并初步探讨其作用机制。方法:用不同浓度的3-Br PA处理胰腺癌细胞,采用蛋白印迹法检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和己糖激酶Ⅱ(HK-Ⅱ)的表达水平,用葡萄糖、乳酸检测试剂盒检测癌细胞葡萄糖消耗和乳酸生成的速率,MTT法测定细胞增殖速率。结果:与对照组相比,10μmol/L3-Br PA不影响HIF-1α和HK-Ⅱ的蛋白表达,而25、50、100μmol/L的3-Br PA则能抑制HIF-1α和HK-Ⅱ的蛋白表达(P0.05),对HIF-1α的抑制率分别为(16.49±2.23)%、(35.18±4.76)%、(68.74±5.65)%,对HK-Ⅱ的抑制率分别为(19.18±4.13)%、(45.07±5.12)%、(59.82±4.75)%。在所用的最高浓度(100μmol/L)3-Br PA显著降低癌细胞的葡萄糖消耗和乳酸生成(P0.05)。3-Br PA能抑制胰腺癌细胞的增殖,10、25、50、100μmol/L处理的各组细胞增殖抑制率分别为(2.99±1.37)%、(8.72±3.92)%、(16.34±6.49)%和(56.11±17.22)%,50μmol/L与100μmol/L 3-Br PA造成的抑制有统计学意义(P0.01)。结论:3-Br PA对Mia Pa Ca-2胰腺癌细胞生长和葡萄糖代谢有抑制作用,其机制可能是通过抑制HIF-1α和HK-Ⅱ的表达得以实现。     

熊果酸纳米脂质体微粒对小鼠黑色素瘤细胞生长的抑制作用及其机制

目的探讨熊果酸纳米脂质体微粒(UA-PL-NP)对体外培养的黑色素瘤细胞生长的抑制作用及其机制。方法体外培养小鼠黑色素瘤细胞(B16),采用噻唑蓝(MTT)比色法观察熊果酸纳米脂质体微粒对其增殖活性的影响,Western blot法观察其对基质金属蛋白酶(MMP)-9表达的影响,同时采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。实验中采用顺铂作为阳性对照。结果MTT检测熊果酸纳米脂质体微粒对B16细胞增殖有明显抑制作用,并呈浓度和时间依赖性,UA-PL-NP作用24hIC50值为7.68 mg/L,顺铂作用24 h IC50值为9.33 mg/L;流式检测UA-PL-NP浓度为7.68 mg/L,作用24 h后B16鼠黑色素瘤细胞的凋亡率为(53.20±7.13)%;浓度9.33 mg/L顺铂作用24 h的凋亡率为(36.10±5.85)%;阴性对照组24 h凋亡率为(7.87±2.31)%;Westerm blot检测对照组MMP-9蛋白含量是UA-PL-NP组3.106倍,是顺铂组的2.022倍;顺铂组MMP-9蛋白含量是UA- PL-NP组的1.537倍。结论熊果酸纳米脂质体微粒能促进瘤细胞的凋亡从而抑制B16鼠黑色素瘤细胞的增殖,并降低MMP-9蛋白的表达,具有抑制肿瘤侵袭和转移的作用。     

多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶在前列腺癌LNCaP细胞株中的表达及意义

目的 探讨多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[Poly(ADP-ribose)polymease,PARP]对雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞株增殖和凋亡的影响. 方法 将LNCaP细胞株分组培养并应用PARP抑制剂5-氨基异喹啉酮(5-AIQ)处理,蛋白印迹法检测LNCaP细胞内PARP表达的变化,四甲基偶氮唑盐法检测PARP表达抑制后对LNCaP细胞增殖的影响及其时间效应和剂量效应的关系,流式细胞仪检测5-AIQ对LNCaP细胞凋亡的影响. 结果 与空白组相比,浓度为500及1000μmol/L的5-AIQ处理48 h后LNCaP细胞内PARP的表达分别降低至65.3％和22.4％,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).PARP表达抑制后,LNCaP细胞增殖也受到明显抑制.随着药物浓度依次增加,细胞增殖抑制率逐渐增加,处理24 h后细胞增殖抑制率从(2.85±2.03)％升至(41.23±5.42)％,处理48 h后细胞增殖抑制率从(19.80±4.34)％升至(55.67±1.47)％,处理72 h后细胞增殖抑制率从( 25.67±0.63)％升至(65.81 ±1.62)％,组间抑制率差异均有统计学意义(P＜0.05);同样,当药物浓度维持不变时,随着作用时间延长,细胞增殖抑制率也明显升高,细胞增殖的抑制作用与5 - AIQ剂量增加和作用时间延长呈正相关关系.浓度为500及1000 μmol/L的5-AIQ处理48 h所诱导的LNCaP细胞的早期、晚期和总凋亡率分别为23.6％、4.6％、28.2％和31.8％、6.3％、38.1％,与空白组相比差异均有统计学意义(P＜0.05),且随着剂量增加,诱导细胞凋亡的作用增强.结论 抑制PARP的表达可以明显抑制LNCaP细胞增殖,并诱导LNCaP细胞的凋亡.PARP有望成为前列腺癌治疗的一个新靶点.     

18β-甘草次酸抑制肝癌细胞生长的实验研究

目的:探讨18β-甘草次酸(GA)对肝癌细胞生长的影响。方法:用不同浓度的GA或阿霉素(ADM)处理肝癌细胞(Hepa1-6)及正常肝细胞(AML-12)不同时间后,分析细胞的抑制情况及半数抑制浓度(IC_(50));根据IC_(50),选择合适浓度的GA处理Hepa1-6细胞一定时间后,检测细胞的凋亡情况。结果:低浓度GA对两种细胞增殖均无明显影响,当GA浓度8μg/m L时,对两种细胞的增殖均有明显的抑制作用,且抑制作用随药物浓度升高、作用时间延长而增加;ADM所有浓度对两种细胞的增殖均有抑制作用,且抑制作用随浓度升高而增加,但随时间延长而减弱。GA对Hepa1-6细胞的IC_(50)低于对AML-12细胞的IC_(50),当药物作用48 h时,GA对两种细胞的IC_(50)的差值最大,而ADM对Hepa1-6细胞的IC_(50)在任何时间都高于对AML-12细胞的IC_(50);选择25μg/m L的GA处理Hepa1-6细胞48 h(该条件下,Hepa1-6细胞的增殖抑制率为50%,而AML-12细胞的增殖抑制率为3.8%),Hepa1-6细胞的明显增加,且主要是早期凋亡(P0.05)。结论:GA能够抑制肝癌的生长,其机制可能与诱导肝癌细胞凋亡有关;在治疗肝癌方面,GA可能较ADM更为安全,毒副作用更小。     

miR-135通过打靶PRKD3对黑色素瘤细胞增殖和迁移的作用

目的探讨miR-135通过打靶PRKD3对黑色素瘤细胞增殖和迁移的作用。方法通过MTT实验检测miR-135对黑色素瘤细胞增殖的作用,Transwell实验检测miR-135对黑色素瘤细胞迁移能力的作用。采用miRDB软件对miR-135的靶向蛋白进行预测分析,通过荧光素酶报告基因实验验证黑色素瘤细胞中miR-135对PRKD3的靶向作用。通过Western Blot检测miR-135对黑色素瘤细胞中PRKD3、CDK4/6和MMP2表达水平的影响。结果 miR-135能够抑制黑色素瘤细胞的增殖,当miR-135过表达后,黑色素瘤细胞的迁移能力受到抑制。miRDB软件预测分析发现,miR-135可以与PRKD3靶向作用;荧光素酶的基因实验证实,miR-135能够直接作用于PRKD3。Western Blot实验结果显示,miR-135过表达后黑色素瘤细胞中PRKD3、CDK4/6和MMP2的表达受到抑制。结论 miR-135能够通过打靶PRKD3来抑制黑色素瘤细胞的增殖和迁移能力。     

染料木黄酮对去势抵抗性前列腺癌VCaP细胞增殖的影响

目的:研究染料木黄酮(GDN)对去势抵抗性前列腺癌细胞VCa P增殖的抑制作用及可能机制。方法:以不同浓度(0、12.5、25、50、100、200μmol/L)的GEN处理去势抵抗性前列腺癌细胞VCaP,分别在24、48、72 h以CCK-8法测定细胞增殖;以流式细胞术检测细胞周期;以免疫荧光法检测Ki-67表达水平;以Western印迹法检测Cyclin D1、PCNA、P53及PSA表达水平。结果:12.5、25、50、100、200μmol/L GEN作用于VCaP细胞72 h后,对VCaP细胞的抑制率分别为(25.38±0.02)%、(31.14±0.29)%、(45.27±0.03)%、(52.19±0.05)%与(68.21±0.19)%,与对照组[(10.08±0.02)%]相比差异有统计学意义(P0.05)。流式细胞术显示GEN可导致VCa P细胞G2/M期阻滞(P0.05)。免疫细胞化学法检测显示GEN能够抑制细胞中Ki-67的表达。Western印迹显示去势抵抗性前列腺癌细胞内PSA、Cyclin D1、PCNA随着GEN浓度的增加逐渐下调,P53随着GEN浓度的增加逐渐上调(P0.05)。结论:GEN能够抑制体外培养的去势抵抗性前列腺癌细胞VCaP增殖,其作用机制可能与阻滞细胞周期并伴随相关周期蛋白表达的改变有关。     

柚皮苷抑制骨关节炎软骨细胞凋亡实验研究

目的研究柚皮苷在炎症环境下对人骨关节炎（OA）软骨细胞凋亡的影响和可能的作用机制。方法采用不同浓度（0、0．1、1、10、100 mg／L）柚皮苷对 OA 软骨细胞进行预处理2 h 后,加入或不加入炎症因子混合液（白细胞介素-1β5 ng／ml 和肿瘤坏死因子-α20 ng／ml）共作用24 h。首先检测柚皮苷对炎症环境下软骨细胞活性和凋亡的影响,然后检测软骨细胞在柚皮苷作用下的一氧化氮（NO）水平及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（caspase）-3、caspase-8活性变化情况。结果柚皮苷预处理后软骨细胞在炎症因子刺激下发生凋亡显著减轻,且其抑制细胞凋亡作用具有浓度依赖性。进一步分子生物学检测显示,柚皮苷对 NO 生成及激活的 caspase 信号转导通路具有明显抑制作用。结论柚皮苷能有效抑制人 OA 软骨细胞凋亡,其作用机制可能是柚皮苷阻断了 NO 产生并抑制了下游的 caspase 信号通路,有望应用于 OA 治疗新药的研发。     

宝藿苷Ⅰ诱导子宫内膜癌线粒体依赖性凋亡的机制研究

目的探索宝藿苷Ⅰ(baohuoside I, BI)对子宫内膜癌Ishikawa细胞的诱导凋亡作用及其相关的分子机制。方法以0 μM及0 h未处理均作为空白对照组, BI处理(3、10、20、30、40 μM及3、6、12和24 h)后作为实验组;宝藿苷Ⅰ对Ishikawa细胞的增殖抑制作用通过CCK-8实验检测;宝藿苷Ⅰ对Ishikawa细胞的诱导凋亡作用和线粒体膜电位变通过Flow cytometry检测;通过蛋白免疫印迹实验检测细胞凋亡和信号通路相关蛋白。结果 CCK-8实验表明宝藿苷Ⅰ能以浓度梯度(3、10、20、30、40 μM)有效抑制Ishikawa细胞的增殖(存活率分别为89.56±0.96、74.69±1.21、60.28±1.09、43.51±2.17), 且对正常细胞的毒副作用低于5-FU。流式细胞术结果显示宝藿苷Ⅰ能通过降低线粒体膜电位水平, 有效诱导Ishikawa细胞凋亡, 各组凋亡细胞比例为(9.92±0.77)%、(14.01±0.83)%、(17.05±1.41)%、(28.21±1.73)%和(44.55±3.11)%。Western blot实验结...