乙型肝炎病毒前S2蛋白结合蛋白基因的筛选

目的 筛选并克隆人肝细胞中与乙型肝炎病毒前S2蛋白（HBVPreS2)相互作用的蛋白质基因。方法 用聚合酶链反应（PCR）技术扩增HBVPreS2基因，连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒，转化酵母细胞AH109并在其内表达，然后与转化了人肝cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合，在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落，PCR从中扩增出目的片段并测序，进行生物信息学分析。结果 成功克隆出HBVPreS2基因并在酵母细胞中表达，配合后选出既能在4缺（SD/-Trp-Leu-SAde-His)培养基又能在铺有X-α-半乳糖（X-α-gal)的4缺培养基上生长并变成蓝色的真阳性菌落26个，其中含金属硫蛋白A2基因的菌落有12个，细胞色素C氧化酶Ⅱ有1个，细胞色素P450IVF亚基2个，细胞色素C氧化酶Ⅳ亚基同功酶1有2个，人血白蛋白3个，Na^ -K^ ATP的β1亚基1个，前清蛋白2个，植物血凝素半乳糖苷结合亚基1个，未知基因2个，结论 成功克隆出HBVPreS2蛋白的结合蛋白，为进一步研究HBVPreS2的作用提供了新线索。     

乙型肝炎病毒前S2基因酵母表达载体的构建及表达

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）前S2蛋白的功能。方法：以质粒pCP10 (含有HBV ayw亚型全长序列)为模板，多聚酶链反应（PCR）扩增HBV前S2基因，克隆到pGEM-T载休整 ，测序鉴定、酶切后回收，与酵母表达质粒pGBKT7连接。将重组载体转化酵母细胞AH109，提取酵母蛋白质，进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western免疫印迹分析。结果：成功构建HBV前S2基因酵母表达载体，Western免疫印迹显示HBV前S2蛋白在酵母细胞中表达，表达产物在胞内存在，分子量24kD左右。结论：HBV前S2蛋白在酵母细胞中表达成功。     

乙型肝炎病毒前S2抗原与其病毒标志物的关系

乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)的前Ｓ2 抗原与病毒的感染性和活动性复制有密切关系 ,可作为判断ＨＢＶ感染者是否有病毒活动性和传染性的标志。我们对前Ｓ2 抗原与ＨＢＶＤＮＡ及其他ＨＢＶ标志物 (ＨＢＶＭ )之间关系作了检测 ,现报道如下。临床资料一、检测对象我院 1999年 12月至 2     

乙型肝炎病毒前S2与α-干扰素融合基因的构建

乙型肝炎病毒前S2(HBV PreS2)基因编码蛋白含55个氨基酸残基,具有聚合人血清白蛋白受体(pHSA-R)活性,是HBV感染嗜肝性的重要机制之一,并在诱导机体产生保护性免疫应答中起重要作用。α-干扰素(IFN-α)是一种多功能免疫调节因子,可诱导机体产生抗病毒蛋白。将上述两种基因融合表达有可能显著增强小分子前S2蛋白的免疫原性     

乙型肝炎病毒前S／S基因变异及临床意义

乙型肝炎病毒前Ｓ／Ｓ基因变异及临床意义王国棠，田庚善近年来，随着聚合酶链反应（ＰＣＲ）及ＤＮＡ序列分析技术的发展，发现乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染所致的多种临床表现不仅与宿主的免疫反应有关，而且与病毒自身的基因变异关系密切。ＨＢＶ变异率每年约为２／１０...     

乙肝病毒前S2蛋白的临床研究

新近发现HBV的S区由S、前S_1和前S_2三个基因组成。前S_2蛋白(PreS_2)上具有与人血清多聚白蛋白(PHSA)结合能力和良     

乙型肝炎病毒前C区基因突变的研究进展

本文综述了乙型肝炎病毒前Ｃ区基因突变的研究进展。前Ｃ区某些部位，特别是第１８９６位核到的终止突变，使ＨＢＶ失去分泌ＨＢｅＡｇ的能力，但不影响其复制与传染，前Ｃ区突变的发生除与ＨＢＶ前基因组逆转不过程中缺乏校验酶而发生碱基错配有关外，主要与宿主的免疫压力有关，前Ｃ区的突变常伴有其它基因特点是Ｃ基因的突变，共同影响突变株的生物学特性及宿主的临床转归，使某些突变株与重症肝炎的发生及干扰素的疗效关系密切，     

乙型肝炎病毒前S2蛋白研究若干进展

前 S?_2蛋白是乙型肝炎病毒(HBV)基因上的前 S_2区所编码的一种病毒外壳蛋白,与 HBV 的感染和复制有密切关系。本文介绍了前 S_2蛋白的分子生物学特性及其与 HBV 复制的关系,并评价了前 S_2抗原及其抗体的测定对乙型肝炎早期诊断、了解病情和判断预后等方面的临床价值     

乙型肝炎病毒前C区基因突变的研究进展

本文综述了乙型肝炎病毒(HBV)前C区基因突变的研究进展。前C区某些部位,特别是第1896位核苷酸的终止突变,使HBV失去分泌HBeAg的能力,但不影响其复制与传染。前C区突变的发生除与HBV前基因组逆转录过程中缺乏校验酶而发生碱基错配有关外,主要与宿主的免疫压力有关。前C区的突变常伴有其它基因特别是C基因的突变,共同影响突变株的生物学特性及宿主的临床转归,使某些突变株与重症肝炎的发生及干扰素的疗效关系密切,在母婴传播及肝移植中具有特殊意义。     

乙型肝炎病毒前C区、C启动子区、前S2区基因突变与慢性肝病的相关性

近年研究发现，乙型肝炎病毒（HBV）前C区nt1896位G→A、C启动子区（CP）nt1762、nt1764双突变、以及前S区基因突变与慢性肝炎患者病情活动和慢性化、疾病严重程度有一定关系。为此，我们分别检测无症状HBV携带者、慢性乙型肝炎患者、肝硬化患者血清HBV DNA基因序列，对前C、CP、前S2区域的突变情况与HBV不同感染状态的关系作一探讨。     

Adenovirus-expressed preS2 antibody inhibits hepatitis B virus infection and hepatic carcinogenesis

AIM: To investigate the inhibitory effect of hepatitis B virus (HBV) preS2 antibody (preS2Ab) against HBV infection and HBV-associated hepatic carcinogenesis.METHODS: An adenoviral vector carrying the full-length light and heavy chains of the HBV preS2Ab gene, Ad315-preS2Ab, was constructed. Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and Western blotting analyses were used to determine the preS2Ab expression levels in vitro. Immunofluorescent techniques were used to examine the binding affinity between the expressed HBV preS2Ab and HBV-positive liver cells. ELISAs were also used to determine hepatitis B surface antigen (HBsAg) levels to assess the inhibitory effect of the preS2Ab against HBV infection in L02 cells. The inhibitory effect of preS2Ab against hepatic carcinogenesis was studied with diethylnitrosamine (DEN)-induced hepatocellular carcinomas (HCCs) in HBV transgenic mice.RESULTS: The expression of HBV preS2Ab increased with increases in the multiplicity of infection (MOI) of Ad315-preS2Ab in L02 cells, with 350.87 ± 17.37 μg/L of preS2Ab when the MOI was 100 plaque forming units (pfu)/cell. The expressed preS2Abs could recognize liver cells from HBV transgenic mice. ELISA results showed that L02 cells expressing preS2Ab produced less HBsAg after treatment with the serum of HBV patients than parental L02 cells expressing no preS2Ab. HBV transgenic mice treated with Ad315-preS2Ab had fewer and smaller cancerous nodes after induction with DEN than mice treated with a blank Ad315 vector or untreated mice. Additionally, the administration of Ad315-preS2Ab could alleviate hepatic cirrhosis and decrease the serum levels of alanine transaminase and aspartate transaminase.CONCLUSION: Adenovirus-mediated HBV preS2Ab expression could inhibit HBV infection in L02 cells, and then inhibit DEN-induced hepatocellular carcinogenesis and protect hepatic function in HBV transgenic mice.     

乙型肝炎病毒前S1结合蛋白的筛选和鉴定

目的利用酵母双杂合体系筛选HBV前S1结合蛋白,进一步探讨前S1蛋白在HBV感染中的作用。方法PCR扩增HBV前S1基因序列,根据酵母双杂合体系构建饵质粒pAS2-1- preS1,并测定序列;饵质粒转化入酵母菌AH109,Western印迹法证实前S1-BD融合蛋白在酵母细胞中的正确表达。pAS2-1-preS1及正常成人肝细胞cDNA文库共转化酵母细胞,通过选择性培养及β-半乳糖苷酶活性测定筛选阳性菌落,分离实验排除假阳性克隆,扩增阳性克隆的目的基因并测定序列,查询其同源序列,行交合实验进一步证实目的蛋白同前S1蛋白在酵母细胞中能否特异性结合。结果成功构建pAS2-1-preS1饵质粒,Western印迹法证实转化饵质粒的酵母细胞能正确表达前S1- BD融合蛋白,pAS2-1-preS1及正常成人肝细胞cDNA文库共转化酵母细胞后,选择性培养出101个菌落,经β-半乳糖苷酶活性测定及分离实验后筛选出1个阳性克隆,其cDNA插入片段与丝裂原活化蛋白激酶-胞外信号调节蛋白激酶(MAPK-ERK)激酶1(MEK1)基因高度同源。交合实验证实MEK1同前S1蛋白在酵母细胞中可特异性结合。结论酵母双杂合体系证实MEK1可能是一个前S1结合蛋白。     

献血员隐匿性乙型肝炎病毒感染的分子流行病学

目的 了解献血员中隐匿性HBV感染的发生率,从S基因变异角度探讨隐匿性HBV感染可能的分子机制.方法 收集经血站筛查HBsAg阴性的合格献血员血浆594份,ELISA法检测HBV血清学标志物,套式PCR检测血清HBV DNA.对筛查出的隐匿性HBV感染者再次用雅培试剂定量检测HBV血清学标志物,并对其S区进行测序,发现可能与HBV隐匿性感染有关的变异位点.随机收集11例HBsAg阳性的HBV感染者作为阳性对照,对其S区进行测序,比较其与隐匿性HBV感染之间的关系.结果 在594例献血员中有15例为隐匿性HBV感染,隐匿性HBV感染的发生率为2.5％.未发现HBV血清学标志物检测结果与隐匿性HBV感染有相关性.15例隐匿性HBV感染者中有10例进行了S区测序,结果HBV均有不同程度的变异,其中3例在“a”决定簇内出现氨基酸突变,分别为1126T(1例)、T140I(2例).与隐匿性HBV感染者相比,阳性对照在“a”决定簇内仅出现了1例T131N变异.结论 常规检测HBsAg阴性的献血员中存在隐匿性HBV感染,且这些病毒可能存在变异.     

乙型肝炎病毒S基因变异、基因型与宫内感染免疫失败的关系

目的 探讨HBV S基因变异、基因型与宫内感染免疫失败的关系.方法选择东南大学附属南京第二医院出生的35例宫内感染免疫失败的幼儿及其母亲,实时荧光定量PCR法检测血清HBV DNA含量;并扩增其HBV S基因序列,测序并通过DNASTAR软件与基因库标准序列比对.结果幼儿及其母亲HBV DNA定量检测结果均＞1×106拷贝/mL;幼儿及母亲HBV S基因核苷酸变异率分别为11.4%和17.1%;母婴序列同源性＞99.3%;35对母婴中,23对HBV基因型为C型,血清型为adr亚型,12对为B型,血清型为adw亚型,母婴基因型相同.结论 HBV S基因是否变异可能不是高病毒血症患者宫内感染免疫失败的主要因素;基因分型并不能预测和评价新生儿是否发生宫内感染和免疫失败.     

经母婴传播获得乙型肝炎病毒(HBV)感染儿童及其母亲体内HBV前S/S基因变异特点研究

目的 通过对经母婴传播获得HBV感染的子女及其母亲慢性携带者体内HBV前S／S序列研究,了解不同程度病毒血症下,来源相同HBV变异特点。方法根据HBV病毒血症高低分为3组,每组5对母子。应用T-A克隆技术构建重组质粒pGEM-前S／S、双酶切鉴定并分析。结果 每对母子HBV亚型相同,各组5对母子中4对为B／adw2、1对为C／adrq 亚型。每组中B／adw2亚型HBV分析显示：高病毒血症组间或低病毒血症组间HBV前S／S基因变异数目及位点差异均无显著性,低病毒血症病人变异数目及位点明显高于高病毒血症病人。两低病毒血症组的13／16个克隆存在较多位点变异,每个克隆86—94个;11／13克隆的86个、2／13克隆的90个核苷酸变异相同,分别引起37、38个氨基酸改变、大多位于免疫表位内或附近;这两个变异序列有62个核苷酸变异位点相同、可致28个氨基酸变异。变异与年龄无关。结论 HBV变异可能与感染的时间长短无关;抗-HBe阳性的低病毒血症病人体内HBV前S／S出现较多的变异,其变异是有规律的,可能与病毒逃避免疫攻击有关。     

一种新的HBeAg阴性慢性乙型肝炎病毒变异机制

目的 检测HBV核心启动子区(CP)基因变异方式.方法 自HBV慢性感染患者血清中提取HBV DNA,扩增CP区域序列,克隆入pMD19 T载体,选择阳性克隆进行DNA测序,与已知HBV基因相应序列比较患者体内HBV基因变异位点以及变异形式.结果 自21例患者中共挑选74个克隆测序,54个克隆中病毒基因序列CP区发生大段缺失突变,长度达234个核苷酸,另有1个克隆发生245个核苷酸缺失突变.缺失突变区域包括CP区、HBeAg起始密码子和直接重复序列(DR)Ⅰ区,命名为CP缺失突变,发生CP缺失突变的病毒株同时存在A1585T替换突变,这两个部位的突变具有联动特征.结论 观察到一种导致HBeAg阴性慢性乙型肝炎的新方式,即CP、HBeAg起始密码子缺失突变,并提出一种简明的CP缺失检测方式.     

未经治疗的慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒耐药变异、基因型和血清型研究

目的 研究未经核苷(酸)类似物(NA)治疗的慢性乙型肝炎患者HBV耐药变异、基因型、基因亚型和血清型特点.方法 从北京大学附属医院收集97例未经NA治疗的慢性乙型肝炎患者血清,用半巢式聚合酶链反应-直接测序法获得HBV全长逆转录酶区序列,用生物信息学技术筛查该区内11个经典耐药变异位点并鉴定基因型、基因亚型和血清型.用统计分析软件SPSS11.0进行t检验和χ~2检验. 结果 HBV在11个经典耐药变异位点上均为野生型氨基酸;B基因型和C基因型分别占36.1%(35/97)和63.9%(62/97),前者均属B2亚型,后者C2亚型占91.9%(57/62),C1亚型占6.5%(4/62),1例未能分出亚型.已知出生地的患者中,71.9%(23/32) B基因型感染者出生于我国南方地区,81.6%(40/49) C基因型感染者出生于北方地区,基因型地域分布特点明显,χ~2=23.19,P<0.01.血清型为adr者占60.8%(59/97),与C基因型相关;为adw者占38.1%(37/97),与B基因型相关,χ~2=87.83,P<0.01.结论 未经NA治疗的慢性乙型肝炎患者体内野毒株为优势株,其基因型、基因亚型和血清型与患者出生地有关.     

中国贵州地区乙型肝炎病毒前S基因变异的研究

目的研究HBV前S基因变异与基因型及疾病类型的关系。方法建立聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测HBV前S2起始码变异的方法;用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析HBV前S区缺失变异;用直接测序验证方法的准确性。用S基因聚合酶链反应-限制性片段长度多态性确定HBV基因型。检测160份HBV感染者血清,并结合基因型、疾病类型分析。结果160份标本中B基因型81份,C基因型79份。C基因型前S2起始码变异的检出率为43.04%,高于B型的1.23%(P<0.05)。前S区缺失变异在C基因型中的检出率也高于B型(36.71%与19.75%,P<0.05)。前S2起始码变异在HCC、LC组的检出率分别为50.00%、39.47%,明显高于慢性肝炎组的8.00%、慢性无症状乙型肝炎表面抗原携带者组的0(P值均<0.05)。前S区缺失变异检出率在HCC、LC组分别为53.13%和42.11%,也高于慢性肝炎组的18.00%及慢性无症状乙型肝炎表面抗原携带者组的7.50%(P值均<0.05)。经多因素Logistic回归分析,C基因型和严重肝病是影响前S基因变异的重要因素(OR分别为6.26、11.99,P值均<0.01)。测序结果与酶切,聚丙烯酰胺凝胶电泳结果一致。结论与B基因型相比,C型HBV感染者更易发生前S2起始码、前S区缺失变异;前S基因变异与肝病进展及预后相关。