拉莫三嗪对慢性致痫大鼠海马细胞凋亡的影响

目的 通过观察拉莫三嗪对戊四氮慢性致痫大鼠海马Bcl-2和Bax表达的影响来探讨其抗凋亡作用. 方法 选取健康成年雄性Wistar大鼠80只,按体重随机分为:正常组;模型组;丙戊酸钠低、中、高剂量组;拉莫三嗪低、中、高剂量组;每组10只.模型组,丙戊酸钠和拉莫三嗪低、中、高剂量组,每日腹腔注射戊四氮35 mg/(kg·d)制作慢性点燃癫痫模型(大约2周).然后腹腔注射戊四氮35 mg/(kg·d),隔日一次;同时丙戊酸钠和拉莫三嗪各剂量组分别给予相应剂量的丙戊酸钠和拉莫三嗪灌胃,每天一次,共3周.然后取海马标本做免疫组化检测Bcl-2和Bax的表达. 结果 模型组Bcl-2和Bax表达显著高于正常组(P<0.001).与模型组比较,丙戊酸钠和拉莫三嗪各剂量组Bcl-2高表达,Bax低表达(P<0.001).其中拉莫三嗪低剂量组与丙戊酸钠低剂量组之间差异没有统计学意义(P>0.05);拉莫三嗪中剂量组与丙戊酸钠中、高剂量组之间差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01). 结论 拉莫三嗪和丙戊酸钠对戊四氮慢性致痫大鼠海马细胞凋亡均具有抑制作用,但拉莫三嗪优于丙戊酸钠.     

拉莫三嗪对癫痫大鼠学习记忆能力及海马组织中Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨拉莫三嗪对戊四氮致癫痫大鼠认知功能及海马组织中Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。方法将健康雄性Sprague-Dawley大鼠100只随机分为正常组、模型组及拉莫三嗪低、中、高剂量组,每组20只。模型组及拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠每天腹腔注射戊四氮35 mg·kg~(-1)进行造模;正常组大鼠腹腔注射同体积生理盐水。造模成功后,正常组大鼠继续每日腹腔注射生理盐水;其余4组大鼠继续腹腔注射戊四氮,在此基础上,拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠分别给予拉莫三嗪20、30、60 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,模型组大鼠给予生理盐水,共2周。用Morris水迷宫实验评价大鼠的认知功能,免疫组织化学方法检测大鼠海马组织中Bax、Bcl-2蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠各时间点逃避潜伏期显著延长(P<0.05);拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠各时间点逃避潜伏期均短于模型组(P<0.05,P<0.01);拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠逃避潜伏期两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。空间探索实验结果显示,模型组大鼠记忆探索正确时间短于正常组(P<0.05);与模型组比较,拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠记忆探索正确时间显著增加(P<0.05);拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠记忆探索正确时间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与正常组比较,模型组大鼠海马组织中Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少(P<0.01);拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马组织中Bax蛋白表达均低于模型组,Bcl-2蛋白表达均高于模型组(P<0.05);拉莫三嗪低、中、高剂量组之间大鼠海马组织中Bax、Bcl-2蛋白表达两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论拉莫三嗪对戊四氮致癫痫大鼠海马神经元有保护作用,并能提高大鼠的学习、记忆和判断能力。     

拉莫三嗪对癫痫大鼠海马组织中Caspase-3和热休克蛋白70表达的影响

目的探讨不同剂量拉莫三嗪对戊四氮所致癫痫大鼠的行为学、海马组织形态学及Caspase-3和热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法选取清洁级健康6周龄雄性Sprague-Dawley大鼠100只,随机分为正常对照组、模型组和拉莫三嗪低、中、高剂量组,每组20只。正常对照组大鼠腹腔注射生理盐水(3.5 m L·kg-1),其余各组大鼠均腹腔注射戊四氮(35 mg·kg-1)并观察其行为学变化。以连续出现3次Ⅳ级及其以上发作作为点燃标准。全部点燃后,模型组和拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠给予戊四氮35 mg·kg-1每日1次腹腔注射维持点燃,拉莫三嗪低、中、高剂量大鼠组分别给予拉莫三嗪20、30、60 mg·kg-1·d-1灌胃,连续2周。在末次灌胃24 h内,对各组大鼠进行心脏灌注固定取海马组织,采用免疫组织化学法检测海马CA3区Caspase-3和HSP70蛋白表达。结果除正常对照组外,其余各组大鼠均有痫性发作。正常对照组大鼠海马结构完整,其他组大鼠海马神经元体积缩小,与周围组织有脱离,细胞核深染,有核分裂及核溶解,具有凋亡特征,多数细胞质呈空泡状,海马区神经元细胞排列散乱,无层次感,尼氏体减少,部分神经元丢失,细胞密度小。与正常对照组比较,模型组大鼠海马CA3区Caspase-3和HSP70阳性细胞数增多(P<0.01);拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3阳性细胞数均少于模型组,HSP70阳性细胞数均多于模型组(P<0.05);拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3阳性细胞数随着剂量的增加而减少,HSP70阳性细胞数随着剂量的增加而增加,拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3、HSP70阳性细胞数两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组大鼠海马CA3区Caspase-3及HSP70蛋白表达均增加(P<0.05)。拉莫三嗪低、中、高剂量组Caspase-3蛋白表达低于模型组(P<0.05),HSP70蛋白表达高于模型组(P<0.05)。拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3蛋白表达随着剂量的增加而降低,HSP70蛋白表达随着剂量的增加而增加,拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3、HSP70蛋白表达两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论拉莫三嗪对戊四氮所致癫痫大鼠的癫痫发作有保护作用,可以减轻大鼠癫痫发作的严重程度,其机制可能是通过降低海马组织中Caspase-3表达、增加HSP70表达来抑制癫痫过程中的神经元凋亡。     

阿魏酸钠对慢性脑低灌注大鼠认知功能及对磷酸化ERK、CREB和BDNF表达的影响

目的:观察阿魏酸钠对慢性脑低灌注大鼠空间学习记忆能力及对海马细胞外信号调节激酶(ERK 1/2)、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)的磷酸化(p-ERK及p-CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为3组,假手术组(SHAM+NS)、慢性脑低灌注组(2VO+NS)、阿魏酸钠治疗组(2VO+SF)。采用新奇物体识别试验、Morris水迷宫检测3组大鼠的认知;用Western Blot检测3组大鼠海马中的p-ERK、p-CREB、BDNF的表达。结果:通过行为学检测,模型组大鼠识别新物体能力下降,阿魏酸钠可以缓解这种下降趋势(P<0.05)。模型组大鼠Morris水迷宫中逃避潜伏期延长,空间探索时间明显减少;阿魏酸钠治疗组可以缩短大鼠的逃避潜伏期(P<0.05),空间探索时间明显增加(P<0.05)。模型组p-ERK、p-CREB、BDNF的表达较假手术组明显下降(P<0.05,P<0.01,P<0.001),治疗组p-ERK、BDNF的表达较模型组显著升高(P<0.01,P<0.05)。结论:阿魏酸钠能改善慢性脑低灌注大鼠空间学习记忆能力,其作用机制可能与介导了海马中p-ERK、p-CREB、BDNF的表达水平升高有关。     

拉莫三嗪对慢性癫痫大鼠海马PGP、MVP表达及氨基酸含量的影响

目的考察拉莫三嗪对慢性癫痫大鼠海马P糖蛋白(P-glycoprotein protein,PGP)和主穹隆蛋白(major vault protein,MVP)的表达及氨基酸含量的影响。方法 SPF级雄性SD大鼠采用戊四氮制备慢性癫痫大鼠并随机分为模型组、拉莫三嗪低剂量(5 mg/kg)组和拉莫三嗪高剂量(10 mg/kg)组,取健康大鼠为对照组,每组15只,所有组别灌胃给药,模型组和对照组灌胃给予生理盐水,给药体积均为1 mL/100 g。记录所有大鼠治疗前及治疗后的行为学特征及体质量,记录治疗后的癫痫发作时间和脑电波,免疫组化法及Western blot法检测海马中的PGP和MVP表达,由HPLC检测海马中天冬氨酸(aspartate,Asp)、谷氨酸(glutamate,Glu)和甘氨酸(glycine,Gly)含量。结果对照组大鼠活动正常。慢性癫痫模型组大鼠表现为活动减少、咀嚼、节律性点头,头颈上仰、前肢阵挛发作,少数大鼠竖尾或尾拍地面。拉莫三嗪组大鼠由早期的头颈上仰、前肢阵挛发作逐渐过渡到竖毛及嘴和面部肌肉抽搐,少见竖尾或尾拍地的情况。治疗前,与对照组比,模型组及拉莫三嗪组的体质量均明显降低(P0.05),治疗后,与对照组比,模型组体质量、脑电图频率、海马的Gly明显降低(P0.05),癫痫发作时间、脑电图波幅、海马的Asp、Glu、PGP和MVP增高(P0.05),与模型组比,拉莫三嗪组的体质量、脑电图频率、海马的Gly明显升高(P0.05),癫痫发作时间、脑电图波幅、海马的Asp、Glu、PGP和MVP降低(P0.05),且呈拉莫三嗪剂量依赖性趋势。结论拉莫三嗪治疗慢性癫痫与降低海马PGP、MVP蛋白及改善海马氨基酸相关。     

大鼠蛛网膜下腔出血后海马区磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2表达与细胞自噬的关系

目的 探讨大鼠蛛网膜下腔出血(SA H)后海马区细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)表达与神经细胞自噬的关系. 方法 采用枕大池二次注血法制作SA H大鼠模型,将120只雄性SD大鼠采用数字表法分成假手术组(Sham)、SA H组、U0126(ERK1/2抑制剂)低剂量组及U0126高剂量组.低剂量和高剂量U0126组分别于造模前30 min侧脑室注射U01265和10 g/L.水迷宫行为学测试大鼠的行为学变化;光镜观察海马区神经细胞形态结构;免疫组织化学法和免疫印迹法检测海马区磷酸化 ERK1/2(p-ERK1/2)和自噬标志蛋白(Beclin-1及LC3-Ⅱ)的表达水平. 结果 与Sham组比较,SA H组大鼠在72 h的逃避潜伏期时间明显延长、穿台次数明显减少(P<0.05),各时间点神经元存活比率均明显降低,且SA H组p-ERK1/2,Beclin-1及LC3-Ⅱ表达均增加,于24 h达高峰;与 SA H 组比较,低、高剂量 U0126组大鼠相应时间点的潜伏期明显延长、穿台次数明显减少(P<0.05),各时间点神经元存活比率均明显降低,且p-ERK1/2,Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达及存活神经细胞比率降低(P<0.05);与低剂量U0126组比较,高剂量U0126组的大鼠相应时间点的逃避潜伏期明显延长、穿台次数明显减少(P<0.05),p-ERK1/2及存活神经细胞比率降低(P<0.05),但2组间的Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白比较差别均无统计学意义(P>0.05). 结论 大鼠SA H后海马区p-ERK1/2激活对神经细胞有保护作用,且这种保护作用与神经细胞自噬有关.     

开心散对小鼠抑郁样行为及海马中脑源性神经营养因子的影响

目的 观察开心散对悬尾模型小鼠行为学、脑内单胺类递质及海马中脑源性神经营养因子(BDNF)水平的影响,探究开心散的抗抑郁效果与海马中BDNF含量的相关性.方法 采用小鼠悬尾实验,观察不同剂量开心散对小鼠不动时间的影响;HPLC法测定脑内去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)的含量;蛋白质印迹法检测小鼠海马中cAMP反应元件结合蛋白(CREB)、p-CREB、BDNF的表达;RT-PCR检测海马中BDNF mRNA的表达,Pearson相关性检验确定开心散的抗抑郁作用与海马中BDNF蛋白和mRNA水平的相关性.结果 开心散可缩短悬尾小鼠不动时间(P＜0.05),可增加小鼠脑内单胺类递质(DA、5-HT)和海马中CREB、p-CREB、BDNF的含量(P＜0.05),其抗抑郁作用与海马中BDNF水平呈良好相关性(蛋白质:r＝－0.694,P＜0.01;mRNA:r＝－0.547,P＜0.01).结论 开心散对小鼠的抗抑郁作用与海马BDNF水平呈正相关性,提示开心散可能通过增加海马中BDNF表达发挥抗抑郁作用.     

妊娠期铅、镉暴露对新生大鼠海马BDNF及ZnT7蛋白表达的影响

目的 探究妊娠期铅(Pb)、镉(Cd)暴露对新生大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)及锌转移体7(ZnT7)蛋白表达的影响.方法 妊娠SD大鼠分为4组:对照组(NC组,饮用蒸馏水)、Pb组(300 mg/L)、Cd组(10 mg/L)及Pb+Cd组(300 mg/L Pb+10 mg/L Cd),每组3只.采用饮水染毒,干预21 d.采集各组21 d龄新生大鼠的血液及海马组织样本,PE700Z型原子吸收光谱仪测定血液及海马组织Pb、Cd水平;水迷宫实验测定新生大鼠认知能力;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测海马组织中BDNF及ZnT7蛋白水平;Pear-son法分析Pb+Cd组新生大鼠海马组织中BDNF、ZnT7蛋白水平与血液、海马中Pb、Cd水平的相关性.结果 与NC组比较,Pb组、Cd组及Pb+Cd组新生大鼠逃避潜伏期、进入盲端次数、海马组织中ZnT7蛋白水平显著增加,BDNF水平显著降低(P<0.05),其中以Pb+Cd组变化最明显.Pb+Cd组新生大鼠海马组织中BD-NF水平与血液及海马组织Pb、Cd水平均呈负相关(P<0.05),ZnT7蛋白水平与血液及海马组织Pb、Cd水平均呈正相关(P<0.05).结论 妊娠期Pb、Cd暴露可协同降低新生大鼠认知能力,可能与海马BDNF表达降低,ZnT7蛋白表达升高有关.     

白介素-1β对原代培养海马神经元毒性的研究

目的 探讨IL-β对体外培养的海马神经元活性及合成和分泌脑源性神经营养因子(BDNF)的影响.方法 采用SD新生鼠进行海马神经元原代培养.培养7d的细胞以细胞免疫化学法枪测神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达,计算阳性细胞率.实验分IL-β为0ng/ml的正常组和IL-β为5 ng/ml、10ng/ml、20ng/ml 3个实验组,进行海马神经元无血清培养48 h.采用甲基噻唑基四唑(MTT)试验检测细胞活性,ELISA法检测培养上清BDNF的含量.结果 NSE细胞免疫化学鉴定显示阳性细胞达到90%以上;IL-1β降低体外培养的海马神经元活性,各剂量组按浓度在590nm波长处检测OD值为(0.5585±0.2407; 0.4295±0.1401; 0.4191±0.1050),与正常组(0.9462±0.2972)比较,差异具有显著性(分别为P<0.05,P<0.01,P<0.01 ANOVA);IL-1β降低体外培养的海马神经元合成和分泌BDNF水平,各剂量组显著BDNF含量分别是[(8.65±0.71)pg/ml,(8.90±0.35)pg/ml,(7.90±0.35)pg/ml],与正常组(12.40±1.77)pg/ml比较差异具有显著性(均P<0.05 ANOVA).结论 IL-1β可导致体外培养海马原代神经元的损伤,其机制可能与海马神经元合成和分泌BDNF的减少有关.     

助阳开郁方对抑郁症大鼠海马BDNF表达及其胞内信号转导通路的影响

目的:基于海马内环磷酸腺苷(cAMP)-cAMP反应元件结合蛋白(CREB)-脑源性神经营养因子(BDNF)信号转导通路探讨助阳开郁方治疗抑郁症的作用机制。方法:36只雄性大鼠随机分为正常组、模型组、助阳开郁方高、中、低剂量组和氟西汀组,每组6只。除正常组外,其余各组接受慢性不可预知温和应激刺激并孤养28 d。在造模同时正常组和模型组给予生理盐水灌胃,助阳开郁方高、中、低剂量组分别给予助阳开郁方浓缩煎剂(11.7 g/kg、23.4 g/kg、46.8 g/kg)灌胃,氟西汀组灌胃盐酸氟西汀(3.33 mg/kg),造模及药物干预结束后取大鼠海马组织,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定cAMP含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测BDNF、CREB mRNA的表达水平。结果:模型组大鼠海马组织cAMP水平和BDNF、CREB mRNA的表达量明显低于正常组大鼠(P0.05,P0.01);与模型组比较,助阳开郁方高剂量组、氟西汀组大鼠海马cAMP含量明显增高,同时助阳开郁方高剂量组大鼠海马CREB、BDNF mRNA表达水平显著上调(P0.01,P0.05)。结论:抑郁症大鼠海马cAMP-CREB-BDNF通路中信号分子的表达异常,助阳开郁方抗抑郁作用可能与调节海马组织BDNF的表达及其信号转导通路的关键分子的表达与功能有关。     

钙超载对PC12细胞活性及p-CREB表达的影响

目的:探讨氯化钾(KC1)所致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)内钙超载对其细胞活性及磷酸化cAMP反应原件绑定蛋白(p-CREB)表达的影响.方法:将PC12细胞随机分为对照组与干预组,对照组不作任何药物干预,干预组予以KCl 100mmol/L干预10min.用MTT法检测两组细胞活性,应用Western blo...     

外源性脑源性神经营养因子通过抑制tau蛋白磷酸化减少细胞凋亡

目的 观察外源性脑源性神经营养因子(BDNF)对tau蛋白过磷酸化及神经元凋亡的影响,探讨其可能的作用机制.方法 将培养的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)分为正常对照组；冈田酸(OA)组:浓度为40 nmo/L的OA处理24 h；BDNF组:OA处理24 h后加入浓度为50 ng/mL的BDNF处理15 min;LY294002组:OA处理24 h后加入BDNF(50 ng/mL)及LY294002(40 nmol/L)共同处理15 min；K252a组:OA处理24 h后加入BDNF(50 ng/mL)及K252a (40 nmol/L)共同处理15 min.通过MTT检测细胞存活率、流式细胞仪检测细胞凋亡率、Western blot检测Ser199/202、pSer199/202及bcl-2表达.结果 MTT 实验显示OA组、LY294002组及K252a组细胞存活率较正常对照组及BDNF组明显减低(P＜0.01)；BDNF组与正常对照组无明显差异(P＞0.05).流式细胞仪检测显示OA组、LY294002组及K252a组细胞凋亡率较正常对照组及BDNF组明显增加(P＜0.01)；BDNF组与正常对照组之间无统计学差异(P＞0.05).Western blot显示OA组、LY294002组及K252a组pSer199/202表达较正常对照组及BDNF组明显增多(P＜0.01),Ser199/202及bcl-2表达较对照组及BDNF组明显减少(P＜0.01),BDNF组与正常对照组比较无统计学差异(P＞0.05).结论 外源性BDNF可通过抑制tau蛋白磷酸化减少细胞凋亡.     

尼麦角林对缺血性脑卒中后认知障碍及血清脑源性神经营养因子、神经生长因子和神经元特异性烯醇化酶的影响

目的探讨尼麦角林对缺血性脑卒中后认知障碍及血清脑源性神经营养因子(BDNF),神经生长因子(NGF)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平的影响。方法选取缺血性脑卒中后认知障碍患者212例为观察对象,随机分为观察组患者107例和对照组患者105例,观察组给予常规治疗+尼麦角林治疗,对照组给予常规治疗+尼麦角林安慰剂治疗,分别于治疗前、治疗后12周行MMSE,ADL评分,并于治疗前和治疗12周后检测两组患者血清BDNF,NGF和NSE水平并进行比较。结果观察组患者治疗12周后,临床症状较治疗前比较差异具有统计学意义(P0.05),对照组患者治疗12周后,与治疗前比较差异具有统计学意义(P0.05);观察组在治疗12周后MMSE和ADL评分方面明显优于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。临床疗效方面比较,治疗12周后观察组有效率为97.1%,明显优于对照组的88.6%(P0.05),且观察组患者的总有效率和显效率高于对照组(P0.05)。结论尼麦角林可显著改善缺血性脑卒中伴认知障碍患者的临床症状,并可调控血清BDNF,NGF和NSE水平。     

三七提取物抗谷氨酸损伤PC12细胞的活性筛选及成分分析

目的 研究三七提取物抗谷氨酸损伤PC12细胞的活性筛选,并分析活性部位的化学成分.方法 以谷氨酸损伤PC12细胞为模型,实验分为对照组、模型组、石油醚提取物和超临界CO2萃取物组(6.25、12.50、25、50、100、200 μg/mL).采用MTT比色法对三七石油醚提取和超临界CO2萃取部位进行活性筛选,并利用气质联用技术(GC-MS)对三七石油醚提取物和超临界CO2萃取物进行化学成分鉴定分析.结果 与对照组比较,25 mmol/L谷氨酸作用PC12细胞24 h,细胞生长抑制率接近50%.不同浓度石油醚提取物组与模型组的细胞存活率差异有统计学意义(P<0.05),25、50、100 μg/mL石油醚提取物组间的细胞存活率差异有统计学意义(P<0.05).不同浓度超临界CO2萃取物组与模型组的细胞存活率差异有统计学意义(P<0.05),25、50、100 μg/mL超临界CO2萃取物组间的细胞存活率差异有统计学意义(P<0.05).50、100 μg/mL超临界CO2萃取物组与石油醚提取物组的细胞存活率差异有统计学意义(P<0.05).经GC-MS技术分析得出,超临界CO2萃取物中主要的脂溶性成分人参炔醇含量(13.09%)高于石油醚提取物(4.10%).结论 石油醚提取物与超临CO2萃取物对PC12细胞均有保护作用,但超临界CO2萃取物具有较好的细胞保护作用.     

脑源性神经营养因子预先给药对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响

目的探讨不同剂量的脑源性神经营养因子（BDNF）预先给药对大鼠局灶性脑缺血再灌注（I/R）后神经细胞凋亡的影响。方法用大鼠大脑中动脉线栓法（MCAO）建立局灶性脑缺血再灌注模型,BDNF采用侧脑室注射法给药。将30只雄性Wistar大鼠,随机分为5组：正常对照组（C组）、缺血再灌注组（I/R组）、BDNF预先给药低剂量组（L组）、中剂量组（M）、高剂量组（H）;除C组外,其余各组分别行脑缺血1 h再灌注72 h后处死取脑皮层标本待检。采用TUNEL法观察大鼠脑缺血再灌注后脑皮层神经细胞凋亡的变化。结果与I/R组比较,BDNF预先给药各组神经细胞凋亡指数均明显减少（P〈0.01）;在BDNF预先给药各组中,以预先给药高剂量组的神经细胞凋亡指数最小（P〈0.01）。结论不同剂量的BDNF预先给药均能明显减轻脑I/R后神经细胞凋亡,具有不同程度的脑保护作用。且随BDNF预先给药剂量的增加细胞凋亡数量进一步减少。     

超顺磁性氧化铁-短发夹 RNA 双功能分子探针体外转染卵巢癌细胞的最佳浓度

目的：采用不同质量浓度的超顺磁性氧化铁 短发夹RNA(superparamagnetic iron oxide-short hairpin RNA,SPIO-ShRNA)分子探针转染卵巢癌SKOV3细胞,观察细胞形态,检测细胞的生物学行为,寻找最佳的转染浓度。方法：将铁浓度分别为5、15、30、45、75、100 mg/L的探针转染SKOV3细胞后,采用荧光倒置显微镜观察探针进入细胞情况,普鲁士蓝染色及透射电镜观察细胞形态及细胞内铁颗粒,原子吸收光谱仪法测定细胞内铁含量,cell counting kit 8(CCK-8）检测细胞活性,流式细胞术观察细胞凋亡,Western blot检测细胞内表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）蛋白的表达,磁共振成像（magnetic resonance imaging,MRI）检测细胞内信号强度变化。结果：在5~30 mg/L铁浓度范围内,细胞摄取量随探针铁质量浓度增加而增大,当探针铁浓度为45 mg/L时,进入细胞达到饱和,标记率接近100%;细胞活性随探针质量浓度的增加而降低,各实验组细胞活性分别为94.626%±1.050%、93.373%±1.180%、91.700%±3.122%、75.100%±4.362%、72.983%±3.233%、71.010%±2.910%,5、15、30 mg/L组细胞活性未见明显下降,差异无统计学意义（P=0.475,P=0.226,P=0.068）;≥45 mg/L细胞活性明显下降(P<0.001); 探针浓度≥45 mg/L时,探针对SKOV3细胞EGFR蛋白表达抑制率明显增加,45 mg/L组蛋白表达率为68.905%±3.510%,与5、15、30 mg/L组相比差异具有统计学意义（P<0.001,P=0.001,P=0.003,P均<0. 01）;MRI显示随着探针质量浓度增加,细胞信号强度逐渐降低,45 mg/L组细胞信号强度为165.55±4.92, 信号强度明显降低,45 mg/L组与空白组（相同体积的磷酸盐缓冲液）、正常细胞组（未标记的卵巢癌SKOV3细胞）、5、15、30 mg/L各组信号强度相比,差异均有统计学意义（P均<0.001）。结论：当SPIO ShRNA分子探针铁浓度为45 mg/L时,可有效转染并特异性抑制卵巢癌SKOV3细胞的表达,能被MRI所检测,初步证实具有诊断与治疗的双重作用。     

尿酸在氧化应激状态下对人脐静脉内皮细胞的影响

目的 探讨不同浓度尿酸(UA)、作用不同时间及其在氧化应激状态下对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的影响.方法 体外细胞培养,用不同浓度UA(0 mg/d L、4 mg/d L、8 mg/d L、12 mg/d L)、过氧化氢(H2O2)(0.5 mmol/L)及不同浓度UA+H2O2刺激HUVEC.分别于24 h、48 h后观察HUVEC的细胞形态,采用MTT法检测HUVEC的增殖情况,用ELISA方法检测培养液中一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)的浓度.结果实验发现4 mg/d L UA组HUVEC 24 h、48 h后活力较对照组差异无统计学意义(P>0.05);8 mg/d L、16mg/d L组24 h后HUVEC活力较对照组差异无统计学意义(P>0.05),48 h后8 mg/d L、16 mg/d L组HUVEC活力较对照组显著降低(P<0.05).H2O2组HUVEC活力较对照组有显著降低(P<0.05);各种浓度UA加H2O2组HUVEC 24 h后较单纯H2O2组活力强,而48 h后8 mg/d L加H2O2、16 mg/d L加H2O2组较单纯H2O2组活力差异无统计学意义(P>0.05).ELISA法检测发现48 h后16 mg/d L UA组较对照组细胞合成NO减少,分泌ET-1增多(P<0.05).8 mg/d L加H2O2、16 mg/d L加H2O2组与单纯H2O2组相比,24 h后细胞合成NO增多,分泌ET-1减少(P<0.05);而48 h后16 mg/d L加H2O2组与单纯H2O2组相比,细胞合成NO减少,分泌ET-1增多(P<0.05).结论 尿酸对HUVEC的作用不仅与浓度有关,与作用时间也有关系.急性升高的尿酸对HUVEC还有保护作用,而高浓度的尿酸长时间对HUVEC有损伤作用,而氧化应激可能加重尿酸对HUVEC的损伤作用.     

BDNF基因转染神经干细胞移植脑损伤大鼠移植细胞存活率和Trkβ、Erk1/2、Ras及Trx的表达

目的：探讨脑源性神经营养因子基因修饰神经干细胞（ BDNF／NSCs）移植大鼠创伤性脑损伤（ TBI）模型后,对移植细胞存活数量的影响及其机制。方法采用Feeney法制备TBI模型,于造模后72 h,随机分为两组：BDNFN／SCs 移植组及NSCs移植组,将3μL（1×108／mL）BDNF／NSCs或NSCs直接移植于脑损伤区。分别于移植后1、2、3和4周取脑组织,冻存或制备冰冻切片。在荧光显微镜下计数移植细胞存活数量,并采用免疫组织化学技术检测p－Erk1／2、Ras蛋白的表达;通过RT－PCR技术检测脑损伤区及周围组织中Trx、Trkβ基因的表达。结果 BDNF／NSCs组和NSCs 组细胞存活数随移植时间延长而减少,在移植后的不同时间点,BD-NF／NSCs组移植细胞存活率均明显高于NSCs 组（P＜0．05）;BDNF／NSCs组在移植后不同时间点移植细胞的p－Erk1／2、Ras蛋白表达强度均明显高于NSCs组（P＜0．05）;与NSCs组比较,BDNF／NSCs组损伤灶及周围脑组织中Trx、Trkβ基因的表达水平均明显增强（ P＜0．05）。结论 BDNF基因转染NSCs移植大鼠TBI后,能够明显提高移植细胞的存活率,上调Trkβ、p－Erk1／2、Ras及Trx的表达。 BDNF与其受体Trkβ结合后,可能通过Ras／Raf／Erk途径激活其下游的Trx基因从而激活细胞的抗氧化作用,进而减少移植细胞的氧化损伤,提高移植细胞在脑组织损伤区的存活率。