补骨脂酚对人A375细胞黑素生成及MAPK信号通路干预作用研究

目的探讨补骨脂酚抑制A375细胞的黑素合成效果及对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的干预作用。方法体外培养A375细胞,经不同浓度的补骨脂酚(100μmol/L、10μmol/L、1μmol/L、10~(-1)μmol/L、10~(-2)μmol/L、10~(-3)μmol/L)干预后,采用MTT法和多巴氧化法检测细胞增殖率和酪氨酸酶(TYR)活性;氢氧化钠裂解法检测黑素含量的变化;RT-PCR法测定酪氨酸酶及相关蛋白(TRP-1、TRP-2)和MAPK通路相关蛋白激酶JNK2、ERK1、ERK2 mRNA的表达量。结果与空白组比较,补骨脂酚(10~(-1)μmol/L、10~(-2)μmol/L、10~(-3)μmol/L)对黑素合成率和TYR活性均明显降低(P0.05,P0.01),补骨脂酚(10~(-1)μmol/L)对TYR、TRP-1、TRP-2、JNK2、ERK1、ERK2的mRNA基因表达量均显著抑制(P0.05,P0.01)。结论补骨脂酚对A375细胞黑素合成及TYR活性有抑制作用,其变化可能是通过下调TYR、TRP-1、TRP-2、JNK2、ERK1、ERK2的mRNA基因表达量来实现的。     

荔枝核总黄酮对大鼠肝星状细胞的增殖抑制作用及对蛋白TGF-β1和a-SMA表达的影响

目的 研究荔枝核总黄酮(TFL)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的增殖抑制作用及其作用机制.方法 MTT法测定TFL对HSC-T6的增殖抑制;吖啶橙染色观察细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期.Western Blot检测细胞中TGF-β1和a-SMA蛋白表达.结果 MTT结果显示,TFL对HSC-T6具有增殖抑制活性(P＜0.05),其半数抑制浓度(IC50)为101.98 mg/ml;吖啶橙染色显示,药物组细胞中出现核浓缩、核碎裂及致密浓染亮绿色凋亡小体.流式细胞仪检测结果显示,对照组细胞G1期细胞比例为(47.68±2.92)％,G2期为(19.58±2.93)％,S期为(32.75±2.09)％;TFL药物处理组细胞G1期细胞数量增加,而G2期细胞显著减少,与对照组比较,P ＜0.05.Western Blot检测结果显示,细胞中TGF-β1和a-SMA蛋白,随药物浓度增加,其表达呈下降趋势,与对照组比较,100 mg/ml及120 mg/ml药物浓度组的TGF-β1和a-SMA蛋白表达明显降低(P＜0.05).结论 TFL在体外对HSC-T6的增殖具有抑制作用,其作用机制可能通过抑制细胞TGF-β1和a-SMA蛋白表达,达到阻滞细胞增殖周期和诱导细胞凋亡.     

白藜芦醇对视网膜母细胞瘤SO-Rb50增殖抑制作用的观察

目的观察白藜芦醇对人视网膜母细胞瘤SO-Rb50细胞增殖的影响,并探讨作用机制。方法体外培养的视网膜母细胞瘤SO-RB50细胞,分别加入6.25、12.5、25、50、100μmol/L白藜芦醇,对照组加入等体积0.5%DMSO,分别孵育24、48 h,MTT方法测定细胞活力,流式细胞术(FCM)测定细胞周期的变化。50μmol/L白藜芦醇孵育48h后,收集细胞,RT-PCR、Western blot分别测定PCNA、Cyclin D、Rb和P16 mRNA和蛋白的表达水平。结果白藜芦醇对视网膜母细胞瘤SO-Rb50增殖具有明显的抑制作用;白藜芦醇处理后,G1期的细胞均显著增加,S期细胞明显减少;50μmol/L白藜芦醇处理48 h显著降低了PCNA和Cyclin D的mRNA和蛋白表达水平,明显提高了Rb和P16mRNA和蛋白表达水平(均P<0.01)。结论白藜芦醇对视网膜母细胞瘤细胞增殖具有明显的抑制作用,其机制可能是下调PCNA和Cyclin D表达、上调Rb和P16表达,进而影响其细胞周期进程,发挥其抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖的作用。     

阿魏酸钠对乙醛诱导的肝星状细胞增殖、活化和胶原合成的影响

目的:研究阿魏酸钠(SF)对体外乙醛诱导的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖、活化、胶原合成的影响及其作用机制。方法:体外培养HSC-T6细胞,建立乙醛诱导的HSC-T6增殖模型,设空白组、乙醛组、秋水仙碱组(2.5μmol·L~(-1))及SF组(1,10,25,50,100,200,400μmol·L~(-1)),通过细胞增殖和毒性检测(MTS)比色法检测细胞增殖,筛选合适的SF浓度。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SF(400,200,100μmol·L~(-1))对乙醛诱导的HSC-T6细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测Ⅰ型,Ⅲ型胶原浓度,酸水解法检测羟脯氨酸(Hyp)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测转化生长因子-β_1(TGF-β_1),信号转导蛋白Smad2,Smad3,Smad4,Smad7,基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)基因mRNA表达变化。结果:与空白组比较,200μmol·L~(-1)的乙醛能显著诱导HSC-T6体外增殖(P0.01);与空白组比较,模型组HSC-T6增殖显著增加(P0.01),α-SMA和I型,Ⅲ型胶原和Hyp含量显著增加(P0.01),TGF-β_1,Smad2,Smad3,Smad4,Smad7 mRNA的表达显著上调(P0.01),MMP-1和TIMP-1 mRNA表达显著上调(P0.01)。与模型组比较,400,200,100μmol·L~(-1)浓度的SF能明显抑制乙醛诱导的HSC-T6增殖(P0.05,P0.01),显著降低α-SMA和I型,Ⅲ型胶原和Hyp含量(P0.01),下调TGF-β_1,Smad2,Smad3,Smad4基因mRNA的表达(P0.05,P0.01),上调Smad7基因mRNA表达(P0.01),并明显上调MMP-1 mRNA表达(P0.05,P0.01)和下调TIMP-1 mRNA表达(P0.01)。结论:SF能通过调控TGF-β_1/Smad和MMP-1/TIMP-1信号通路,抑制乙醛诱导的体外HSC-T6细胞的增殖,活化和胶原分泌。     

大黄素对TNF⁃α诱导的类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响

目的探讨大黄素对TNF?α诱导的类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响。方法将人类风湿关节炎成纤维样滑膜HFLS?RA细胞随机分为对照组(未处理)、诱导组(TNF?α处理)、25μmol/L大黄素组(TNF?α和大黄素处理)、50μmol/L大黄素组(TNF?α和大黄素处理)和100μmol/L大黄素组(TNF?α和大黄素处理)。采用MTT法和克隆形成实验检测细胞的存活率和克隆形成率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,RT?PCR检测凋亡相关基因Bcl?2和Bax mRNA的表达,ELISA检测细胞上清液中IL?6和IL?1β水平,Western blot检测细胞中NF?κB信号通路相关蛋白p?IκBα和p?NF?κB p65的表达。结果TNF?α能够使HFLS?RA细胞的存活率、克隆形成率、Bcl?2 mRNA的表达和p?IκBα、p?NF?κB p65蛋白的表达以及细胞上清液中IL?6和IL?1β水平升高(P<0.05),而细胞凋亡率和Bax mRNA表达降低(P<0.05);25、50、100μmol/L大黄素能够呈浓度依赖性抑制TNF?α引起的上述变化(P<0.05)。结论大黄素可能通过抑制NF?κB信号通路的活化抑制类风湿关节炎滑膜细胞增殖和炎症反应。     

大黄素对兔主动脉平滑肌细胞CatK,CatDmRNA表达的影响

目的:探讨大黄素对兔主动脉平滑肌细胞(CCC-SMC-1)组织中蛋白酶K(Cat K),组织蛋白酶D(Cat D)mRNA表达的影响。方法:以2×104/m L密度接种细胞,实验分5个实验组,大黄素0.01,0.05,0.1,0.15,0.2,0.25 mmol·L-1组,对照组为培养基空白组,培养24 h,每组设5个复孔。MTT法观察大黄素对兔主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用,PCR法检测大黄素对兔主动脉平滑肌细胞Cat K,Cat D mRNA的表达。结果:MTT法显示大黄素在0.05~0.25 mmol·L-1浓度对CCCSMC-1细胞增殖有抑制作用,作用24 h后的半数抑制浓度(IC50)为0.10 mmol·L-1,且IC50随作用时间的延长显著前移。PCR法显示,不同浓度的大黄素作用于兔主动脉平滑肌细胞24 h后,与正常组细胞相比,Cat K,Cat D mRNA表达上调(P0.05)。结论:大黄素能抑制CCC-SMC-1细胞的增殖,其机制可能与上调Cat K,Cat D mRNA表达有关。     

委陵菜酸对大鼠肝星状细胞的抑制作用及其机制分析

目的:研究委陵菜酸(tormentic acid,TA)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)活化增殖及转化生长因子-β(TGF-β)/Smads信号通路的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。方法:采用细胞活性毒性检测法(CCK-8)观察TA(0,50,60,70,80,90,100μmol·L-1)作用于HSC-T6细胞24 h时的增殖情况,计算半数抑制率(IC50)并筛选出最适浓度。取对数生长期的HSC-T6细胞,分为正常组,刺激组,TA高、中、低剂量(40,20,10μmol·L-1)组。利用姬姆萨染色液检测TA对细胞集落形成;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化;免疫组化法检测Ⅲ型胶原蛋白(Col-Ⅲ)的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Smad4,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。结果:TA能够抑制HSC-T6细胞的增殖,呈剂量依赖性,IC50为81.71μmol·L-1;与正常组比较,TA呈剂量依赖性地抑制HSC-T6细胞集落的生成,同时,TA能明显地促进细胞凋亡和将细胞阻滞在G2期(P0.05,P0.01);此外,还能降低Col-Ⅲ,α-SMA,Smad4蛋白表达(P0.05)。结论:委陵菜酸对肝星状细胞有明显的抑制作用,其机制可能与促进细胞凋亡、阻滞细胞周期,以及与阻断TGF-β/Smads通路有关。     

藏药波棱瓜子总木脂素对大鼠肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的通过研究藏药波棱瓜子总木脂素(TLHPS)对大鼠肝星状HSC-T6细胞的增殖抑制作用及诱导其凋亡的作用,进一步探讨TLHPS抗肝纤维化的作用机制。方法实验分为对照组,TLHPS 10、20、30、40μg/mL组,阳性药秋水仙碱0.1μg/mL组。用加入各组药物的培养基分别培养HSC-T6细胞24、48、72 h,采用CCK8法检测各组细胞24、48、72 h的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期,Western blotting法检测凋亡蛋白Bcl-2、Bax、核转录因子-κB(NF-κB)的表达水平。结果与对照组相比,TLHPS 10、20、30、40μg/mL组对HSC-T6细胞24、48、72 h时的增殖抑制率明显增高(P0.01),且各组HSC-T6细胞早期凋亡率与晚期凋亡率明显升高(P0.05,0.01),G0/G1期细胞数明显增多(P0.01),G2/M期细胞数无明显差异(P0.05),S期细胞数明显减少(P0.01)。Western blotting结果显示,与对照组相比,TLHPS10、20、30、40μg/mL组Bcl-2蛋白表达明显降低(P0.05,0.01),TLHPS 40μg/mL组Bax蛋白表达明显升高(P0.01),TLHPS 20、30、40μg/mL组NF-κB表达明显降低(P0.01)。结论 TLHPS抗肝纤维化的作用机制可能是通过降低Bcl-2、NF-κB的表达抑制肝星状细胞增殖并诱导其凋亡。     

人参皂苷Rd抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖机制研究

目的:体外研究人参皂苷Rd(GS-Rd)抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖机制。方法:采用MTT法检测GS-Rd对U251细胞增殖情况的影响;采用流式细胞仪观察GS-Rd对U251细胞周期及凋亡影响;通过实时荧光定量PCR检测GS-Rd对U251细胞相关凋亡基因表达的影响。结果:1)GS-Rd在浓度为20~80μmol/L范围内对U251细胞均有一定的抑制作用,并且抑制强度随药物浓度的增加而增大,呈剂量依赖性;2)GS-Rd各剂量组均可诱导U251细胞凋亡。细胞周期分析显示随着给药浓度增加,越多的U251细胞被阻滞在G1/G0期,使进入S和G2/M期的细胞减少;3)与空白对照组相比,GS-Rd各剂量组Bcl-2 mRNA表达显著降低(P0.05),同时Caspase-3 mRNA表达显著提高(P0.05)。结论:人参皂苷Rd能抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖,同时能诱导细胞凋亡,其抑瘤机制可能与下调Bcl-2 mRNA表达和上调Caspase-3 mRNA表达有关。     

芍药苷对髓核细胞增殖的影响

目的探讨芍药苷对髓核细胞增殖的影响。方法分离培养7周龄雄性SD大鼠髓核细胞加入不同浓度(0、0.5、1、2、5、8、10、15、20、25μmol/L)芍药苷后,MTT、BrdU法检测细胞活力和增殖,qRT-PCR检测c-fos、p27 mRNA表达,Western blot检测c-fos、p27蛋白表达。结果终浓度8～20μmol/L的芍药苷显著上调细胞活力和增殖(P0.05,P0.01),呈剂量依赖性。8μmol/L芍药苷显著抑制c-fos、p27 mRNA和蛋白表达(P0.05,P0.01)。c-fos过表达显著阻止芍药苷对p27的抑制作用和对细胞增殖的促进作用(P0.01)。8μmol/L芍药苷处理24 h后,c-fos过表达和p27敲低显著促进细胞增殖(P0.01)。结论 8μmol/L芍药苷可通过抑制c-fos、p27的表达来促进髓核细胞增殖。     

草苁蓉乙醇提取物对大鼠肝星状细胞体外增殖与凋亡的影响

目的:探讨草苁蓉乙醇提取物对体外培养的大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)生长抑制及诱导凋亡的影响.方法:选用大鼠HSC-T6进行体外培养,用MTT法测定0.25,0.5,0.75,1.0 g·L-1草苁蓉乙醇提取物作用12,24,36,48 h后对细胞增殖的抑制作用;应用Annexin V与碘化丙啶(PI)双染色荧光显微镜及透射电镜技术观察药物作用后细胞形态学改变;应用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率的变化.结果:①MTT实验表明草苁蓉乙醇提取物能抑制HSC-伪细胞增殖,并显出量效和时效关系.0.75 g·L-1草苁蓉刺激12,24,36,48 h对HSC-T6增殖的抑制率分别为(44.58 ±1.42)％,(51.56±1.34)％,(63.83±0.99)％,(74.77±3.40)％(P＜0.05).②荧光显微镜及透射电镜观察发现草苁蓉乙醇提取物作用于HSC -T6细胞后呈现出典型的细胞凋亡形态学改变,细胞表面微绒毛消失,细胞体积变小,细胞质浓缩,核染色质边集、细胞核固缩、核碎裂、出泡等.③草苁蓉处理后HSC-T6被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率上升,且表现出明显量效关系.0.75 g·L-1草苁蓉乙醇提取物改变HSC-T6周期分布,使G0/G1期细胞由(50.33±0.80)％增至(61.46±1.07)％,表现出G0/G1期阻滞;同时诱导HSC-T6凋亡,凋亡率由(1.44±0.43)％增至(14.20±0.98)％(P＜0.05).结论:草苁蓉乙醇提取物可明显抑制HSC-T6细胞增殖,其作用可能与诱导细胞凋亡,并使细胞周期阻滞于G0/G1期有关.     

加味四逆散药物血清对HSC-T6增殖的影响

目的: 观察加味四逆散含药血清对瘦素刺激肝星状细胞增殖的影响,探讨其抗肝纤维化的机制。方法: SD大鼠30只,随机分为3组:正常血清组、秋水仙碱对照组、加味四逆散组(37.5 g ·kg^-1),每组均10只,将正常血清组大鼠每只按10 mL ·kg^-1给予生理盐水ig,1次/日;秋水仙碱对照组大鼠每只按0.2 mg ·kg^-1给予秋水仙碱ig,1次/日;加味四逆散组给予加味四逆散药液10 mL ·kg^-1ig,1次/日。以上各组均连续ig 7 d,制备各药物含药血清,并将药物血清用培养基配制成5%,10%,20%,40% 4个浓度;培养肝星状细胞,取对数生长期细胞,使用噻唑蓝(MTT)比色法检测药物血清对100 mg ·L^-1的瘦素刺激肝星状细胞-T6(HSC-T6)增殖的影响。结果: 加味四逆散药物血清对瘦素刺激的肝星状细胞增殖有抑制作用(P<0.05或P<0.01), 在5%~40%的血清浓度范围内,抑制作用呈剂量依赖性关系;秋水仙碱对照组亦能抑制HSC-T6细胞的增殖(P<0.05),但在10%~40%的血清浓度范围内加味四逆散组对HSC-T6增殖的抑制率显著高于秋水仙碱对照组(P<0.05)。结论: 加味四逆散药物血清具有抑制瘦素刺激HSC-T6增殖的作用。     

大蒜素逆转人乳腺癌MCF-7细胞顺铂耐药性的研究

[目的]探索大蒜素对人乳腺癌MCF-7细胞顺铂耐药性的逆转作用及调控机制.[方法]以对数生长期人乳腺癌耐顺铂MCF-7/DDP细胞为受试细胞,设空白对照组(DMSO)、大蒜素(20μg/mL)单药组、顺铂(6μg/mL)单药组、联合组(大蒜素20μg/mL+顺铂6μg/mL).药物干预48 h后,噻唑蓝(MTT)染色法...     

小檗碱对胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨小檗碱对胃癌细胞系SGC7901的抑制作用及相关机制。方法:采用MTT的方法观察不同浓度小檗碱对SGC7901细胞的24h和48h抑制率,并计算24h和48h的50%抑制浓度(IC50)值;采用流式细胞技术检测不同浓度小檗碱作用48h后胃癌细胞系SGC7901凋亡的发生率和细胞周期的变化。结果:小檗碱对胃癌细胞SGC7901生长的抑制作用呈现出时间和剂量依赖性。24h和48h IC50分别为74.16、36.84μmol/L。1μmol/L至120μmol/L浓度梯度的小檗碱干预48h后,SGC7901凋亡率发生率逐渐增加。其中5、10、25、50、75、120μmol/L与对照组比较有统计学差异(P0.05),120μmol/L时凋亡发生率达到35.43%;5、25、75μmol/L浓度的小檗碱作用后,SGC7901胃癌细胞G0/G1期细胞比例较对照组明显升高(P0.05),而S期细胞比例则随浓度增加呈现出下降趋势,其中25、75μmol/L浓度组与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05),对G2/M期细胞,各组比例变化无明显差别。结论:小檗碱对胃癌细胞系SGC7901具有时间和浓度依赖性的抑制作用,抑制作用与阻滞细胞周期于G0/G1期,抑制DNA合成和诱导凋亡有关。     

葛根总黄酮联合三氧化二砷体外诱导NB4-R1细胞凋亡的实验研究

目的:探讨葛根总黄酮联合三氧化二砷(As2O3)对维甲酸耐药细胞株NB4-R1增殖及凋亡的影响。方法:采用葛根总黄酮(0、10、30、50μg/mL)联合As2O3(1μmol/L)处理NB4-R1细胞24、48、72 h,MTT法检测细胞增殖抑制率;光学显微镜及荧光显微镜观察细胞形态改变;流式细胞仪检测细胞周期变化;FITC-AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡率,蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白表达。结果:(1)一定浓度葛根总黄酮对NB4-R1细胞生长有抑制效应,呈剂量和时间依赖性,相同条件下,葛根总黄酮联合1μmol/L As2O3对NB-R1细胞抗增殖作用强于单用葛根总黄酮,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)FITC-Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡结果发现葛根总黄酮(0、10、30、50μg/mL)及葛根总黄酮联合1μmol/L As2O3处理NB4-R1细胞48 h后,早期凋亡率呈浓度依赖,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)瑞氏染色,在光镜下观察到葛根总黄酮和葛根总黄酮+As2O3联用组呈现不同程度的细胞凋亡形态学特征,且联用组较单药组明显。(4)流式细胞术检测细胞周期变化发现葛根总黄酮和葛根总黄酮+As2O3联用可影响细胞进程,表现为S期细胞增多,葛根总黄酮+As2O3联用组比各单用葛根总黄酮组Sub-G1增加更为明显。(5)Western blottimg结果显示葛根总黄酮可上调NB4-R1细胞中JNK表达,下调ERK1/2表达。结论:低浓度葛根总黄酮体外对维甲酸耐药细胞株NB4-R1细胞具有增殖抑制作用,呈时间-浓度依赖性,与1μmol/L As2O3具有协同作用;其诱导凋亡作用机制可能为阻滞NB4-R1细胞周期进程,激活JNK途径,下调ERK通路。     

丹红软肝胶囊药物血清对肝星状细胞增殖的干预作用

目的观察丹红软肝胶囊含药血清对肝星状细胞(HSC)增殖及分泌的相关细胞因子的干预作用。方法 15只SD大鼠按随机数字法分为3组,即丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组和正常对照组,各5只,通过灌胃制备丹红软肝胶囊及复方鳖甲软肝片药物血清。将HSC-6细胞分为3组,分别加入含丹红软肝胶囊、复方鳖甲软肝片药物血清及正常小鼠血清的培养基,培养24 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测HSC的增殖率,收集培养上清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Ⅰ型胶原及转化生长因子β1(TGF-β1)的含量。结果丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组吸光度(OD)值均低于正常血清对照组(P<0.01);丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组HSC细胞增殖的抑制率比较差异无统计学意义(P>0.05)。丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组培养上清中Ⅰ型胶原、TGF-β1的含量与正常血清对照组比较均降低(P<0.01);丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组培养上清中Ⅰ型胶原、TGF-β1的含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论丹红软肝胶囊可抑制活化的HSC产生TGF-β1,并对HSC分泌胶原产生抑制作用,进而抑制HSC的增殖,这可能是其抗纤维化作用机制之一。     

大黄素对人结肠癌HT-29细胞体外增殖的抑制作用

目的观察大黄素对人结肠癌细胞株HT-29体外增殖的抑制作用。方法取对数生长期的HT-29细胞,按每孔5×103个细胞接种于96孔板,贴壁24 h后换液,分为对照组和实验组(分别含有12.5μM、25μM、50μM、100μM大黄素),共5组。每组均设6个复孔,于37°C、5%CO2孵箱中分别培养24 h、48 h和72 h。采用MTT比色法检测细胞活力;倒置显微镜显像观察细胞数量变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布;分光光度法检测Caspase-3酶蛋白活性。结果①MTT比色法显示,处理24 h时,与对照组比较,大黄素50μM、100μM组细胞抑制率差异有统计学意义(P<0.05),而大黄素12.5μM、25μM组抑制率差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,处理48 h及72 h后大黄素12.5μM、25μM、50μM、100μM组的细胞抑制率差异有统计学意义(P<0.05);大黄素各浓度组处理48 h及72 h后的抑制率与同浓度组处理24 h比较,抑制率升高,差异有统计学意义(P<0.05);大黄素各浓度组处理72 h后的抑制率与同浓度组处理48 h比较抑制率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。②倒置显微镜观测显示,对照组多为类圆形成团生长,经各浓度大黄素处理后,细胞体积缩小、间隙变大,细胞数减少。③流式细胞仪检测显示,对照组G2/M期细胞比率明显高于大黄素各浓度组,差异有统计学意义(P<0.05);对照组G0/G1期细胞比率明显高于大黄素25μM、50μM、100μM浓度组,差异有统计学意义(P<0.05);对照组与12.5μM大黄素组G0/G1期细胞比率差异无统计学意义(P>0.05);对照组S期细胞比率明显低于大黄素各浓度组,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,大黄素12.5μM、25μM、50μM、100μM组HT-29细胞凋亡率增加,差异有统计学意义(P<0.05)。④与对照组比较,大黄素各浓度组Caspase-3酶蛋白活性显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论大黄素抑制人结肠癌细胞株HT-29体外增殖,其作用呈浓度、时间依赖性;大黄素能够阻滞HT-29细胞周期,并激活Caspase-3诱导细胞凋亡。     

伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞的增殖及细胞周期的影响

目的研究伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞的增殖及细胞周期的影响。方法通过MTT法比较在31.25μmol/L、62.50μmol/L、125μmol/L、250μmol/L、500μmol/L、1000μmol/L共6个浓度的伪士的宁培养24小时、48小时、72小时后对HT-29细胞增殖的抑制作用;通过显微镜细胞观察法检测细胞生长状态;利用流式细胞术检测250μmol/L伪士的宁对HT-29细胞周期的影响。结果伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞有一定的抑制作用,其抑制作用与浓度和作用时间呈正相关,1000μmol/L培养72小时作用最显著,抑制率为97.47%;随着伪士的宁浓度增加,作用时间增大,HT-29细胞密度逐渐变小,局部可见固缩细胞或死亡细胞。伪士的宁(250μmol/L)作用于HT-29细胞后,与空白组相比,G1期细胞数量明显增加,S期细胞数量不变,G2期细胞数量减少,差异有统计学意义(P<0.05),表明伪士的宁可诱使HT-29细胞在G1期发生阻滞,诱导细胞凋亡。结论伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞增殖具有显著抑制作用,且其作用呈现时间依赖和剂量依赖关系,其抑制作用机制可能与阻滞细胞周期有关。     

氯化钙拮抗马兜铃酸肾毒性的体外观察

目的:研究分泌性磷脂酶A2(secretory phospholipase A2,sPLA2)激活剂氯化钙能否减轻马兜铃酸(aristolochic acid AA)对人肾小管细胞(human kidney cell HKC)的损伤。方法:以体外培养的HKC为研究对象,观察CaCl2对AA肾毒性的影响。检测指标包括MTT490nm处OD值和流式细胞议测定的细胞周期。实验分为正常对照组、单用AA组和合用AA和CaCl2组,结果:(1)AA表现出剂量相关和时间相关的肾毒性。40mg/L AA组细胞490nm处OD值明显下降,联用600μmol/L CaCl2,490nm处OD值有所上升(0.631±0.123 vs 0.492±0.076,P0.05)。(2)AA可将HKC阻滞在S期和G2/M期。联用600μmol/L CaCl2,促进S期细胞进入G2/M期,逆转S期阻滞。结论:CaCl2可在一定程度上减轻马兜铃酸肾毒性,逆转细胞的增殖受抑状况。     

芹黄素通过PI3K/Akt通路抑制肾癌786-0细胞增殖研究

目的:探讨芹黄素对肾癌细胞的作用及其潜在机制。方法:利用中药系统药理学技术平台(TCMSP)寻找芹黄素潜在的作用靶点;利用注释可视化数据库(DAVID)分析潜在靶点的通路富集情况。用不同浓度的芩黄素干预人肾癌786-0细胞,利用CCK8法检测芹黄素对人肾癌786-0细胞增殖的作用;流式细胞术检测芹黄素对786-0细胞周期的影响;Western blot法检测细胞中蛋白激酶B (Akt)、磷酸化蛋白激酶B (p-Akt)蛋白的表达;利用人肾癌786-0细胞构建的实体瘤裸鼠模型验证芹黄素对肿瘤的作用。结果:共筛选出82个芹黄素的潜在靶点。通路富集分析结果显示符合条件的通路有102条,绝大部分通路与肿瘤密切相关,其中包括肾癌、细胞周期及磷脂酰肌醇激酶(PI3K)/Akt通路等。用不同浓度的芩黄素干预786-0细胞后,与0μmol/L组比较,10μmol/L组、20μmol/L组、40μmol/L组细胞增殖抑制率升高(P<0.05,P<0.01);20μmol/L组和40μmol/L组G1期细胞比例及p-Akt蛋白下降(P<0.05),G2期细胞比例升高(P<0.05)...