HPLC测定热毒清片中重楼皂苷含量

目的:采用高效液相色谱法测定热毒清片中重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅱ的含量。方法:色谱条件为ODS色谱柱,流动相乙腈-水(48∶52),检测波长203nm。结果:重楼皂苷I和重楼皂苷Ⅱ两成分均达基线分离,其他成分无干扰,重楼皂苷I进样量在1.88～23.5μg线性关系良好,r=0.9994,重楼皂苷Ⅱ进样量在1.80～22.5μg线性关系良好,r=1.000),平均回收率分别为99.6%,98.6%。结论:该方法简便、准确可靠。     

重楼皂苷对SGC-7901细胞增殖抑制及诱导凋亡的实验研究

目的 研究重楼皂苷对SGC-7901人低分化胃腺癌细胞的作用及影响机制.方法 在体外应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察重楼皂苷对细胞生长的抑制作用;应用Fluo-3/AM 荧光标记技术和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测不同药物浓度处理的SGC-7901人低分化胃腺癌细胞[Ca2+]i 的变化.结果 重楼皂苷可显著抑制肿瘤细胞的增殖作用;重楼皂苷作用24h后能引发SGC-7901细胞[Ca2+]i的明显增加.结论 重楼皂苷可能通过增加细胞内[Ca2+]i诱导细胞凋亡,从而发挥其抗SGC-7901细胞增殖的作用.     

重楼皂苷I通过抑制自噬减轻磷酸三钙磨损颗粒诱导成骨细胞损伤的实验研究

目的观察重楼皂苷I(PPI)对磷酸三钙(TCP)磨损颗粒诱导的成骨细胞损伤的影响,并探讨其调控机制。方法通过消化法从SD大鼠颅骨中获得原代成骨细胞,应用碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定成骨细胞。TCP磨损颗粒(0.1 mg/m L)与成骨细胞共孵育48 h制备成骨细胞损伤模型,实验随机分为对照组、模型组和PPI(30、100μg/m L)组。CCK-8和化学比色法分别测定成骨细胞活力和上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平;实时荧光定量PCR法检测成骨细胞中ALP、I型胶原(Collagen I)和Runt相关转录因子2(RUNX2)m RNA水平;Annexin-V/PI染色经流式细胞术定量分析成骨细胞凋亡情况;应用茜素红S染色观察成骨细胞矿化结节形成;Western blotting法检测成骨细胞中Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3、Atg5、p62和微管相关蛋白1轻链3(LC-3)蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组成骨细胞活性降低,特征蛋白ALP、Collagen I、RUNX2m RNA水平及矿化结节形成显著减少,LDH释放量、细胞凋亡和Bax、cleavedCas...     

HPLC法测定宫血宁分散片中重楼皂苷I的含量

目的:建立宫血宁分散片中重楼皂苷I含量的方法。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法,选用Waters Symmetry ShieldTMRP18柱(200mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-水(41:59);检测波长203nm;流速:lmL/min。结果:楼皂苷I进样量在l.0 231～26.102μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9998,n=6);平均加样回收率为99.80%,RSD为1.48%(n=6)。结论:该方法操作简便,结果稳定可靠,重现性好,为建立宫血宁分散片的质量标准提供了良好的理论依据。     

重楼皂苷类化合物溶血作用研究

目的 通过研究重楼皂苷类化合物的溶血作用,为重楼的进一步开发和利用提供依据.方法 以分离纯化获得重楼总皂苷、偏诺皂苷PHAC-A和薯蓣皂苷PHAC-B为实验材料,经梯度稀释后用常规肉眼观察法和分光光度法测定样品对兔血红细胞的溶血度.结果 当重楼总皂苷和(PHAC-A)在浓度大于等于50 μg·ml-1时、 (PHAC-B)浓度大于等于75 μg·ml-1时溶血率＞5%,3种样品的溶血作用均表现出剂量依存关系.结论 重楼皂苷中主要产生溶血作用的化合物为PHAC-A.重楼皂苷类化合物在特定浓度下不具有溶血作用,将其运用于静脉注射具有一定的可能性.     

重楼总皂苷对人鼻咽癌细胞CNE-2Z周期及凋亡的影响

目的:探讨重楼总皂苷对CNE-2Z人鼻咽癌细胞周期和细胞凋亡的影响。方法:采用MTT法检测重楼总皂苷对CNE-2Z人鼻咽癌细胞的增殖抑制作用;Hoechst-PI双染、流式细胞仪观察重楼总皂苷对CNE-2Z细胞周期及凋亡的影响。结果:重楼总皂苷能抑制CNE-2Z细胞的增殖,其作用呈明显的时间和剂量依赖性;Hoechst-PI双染显示细胞凋亡特征;重楼总皂苷使CNE-2Z细胞被阻滞在S期;60、90、120μg/mL重楼总皂苷分别作用CNE-2Z细胞24 h后,其凋亡率分别为5.5%±0.22%、7.7%±0.51%、15.5%±0.62%。结论:重楼总皂苷可抑制CNE-2Z细胞的增殖,阻滞细胞于S期,从而诱导细胞凋亡。     

华重楼皂苷类成分的动态分布规律对药材质量的影响

目的研究华重楼皂苷类成分及药材生物量积累速度的时间、空间分布规律(随植株生长年限、采挖季节的变化规律及在不同部位的积累特征),明确最佳种植年限、采收季节、入药部位。方法建立了基于高效液相色谱法-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)同时测定华重楼6种皂苷(重楼皂苷I、II、VI、VII、V、H)量的方法以检测皂苷量的变化;采用烘干法测定药材折干率以指示生物量积累速度。结果华重楼根茎折干率同生长年限呈正相关,8年生最高;随着采收月份呈波浪式,6月和1月为波峰;总皂苷构成以重楼皂苷VII、H为主,总皂苷量随着生长年限呈"V"字型,2年和8年为顶点;随着采收季节呈波浪式,3月和11月为波峰;植株不同部位的总皂苷分布差异明显,茎叶总皂苷量根茎尖段总皂苷量根茎中段总皂苷量≈根茎尾段总皂苷量,其中重楼皂苷VII的分布从茎叶向根茎尾端呈明显下降趋势,而重楼皂苷H则呈显著上升趋势。结论生长年限、采收季节、植株部位对华重楼皂苷的累积有明显影响,人工栽培华重楼最佳种植年限为8年、最佳采收季节为11月;仅采用根茎尾段入药会降低商品药材质量;重楼皂苷VII可能同华重楼的萌芽和茎叶生长有关;茎叶可作为获取重楼皂苷的重要资源,对于扩大药源,提高资源利用效率有重要意义。     

内生真菌生物转化提高滇重楼皂苷含量及抗肿瘤作用研究

目的 研究内生真菌Fusarium-C39生物转化提高滇重楼药材皂苷类化学成分的含量,并增强重楼对癌细胞增殖的抑制作用,初步探讨主要甾体皂苷的生物转化机制。方法 将内生真菌Fusarium-C39分别与滇重楼药材固体发酵和与重楼总皂苷提取物液体发酵,比较发酵前后重楼总皂苷和重楼皂苷I、II、VII的含量变化及对肝癌HepG2细胞、肺癌A549细胞和结肠癌HT-29细胞增殖抑制作用的差异;采用UPLC/Q-TOF-MS技术研究发酵前后重楼皂苷类化学成分的变化,并结合甾体皂苷生物合成途径推测内生真菌Fusarium-C39生物转化提高重楼皂苷含量的机制。结果 与滇重楼药材相比较,发酵物中的重楼总皂苷、重楼皂苷I、II和VII的含量显著提高,对3种癌细胞增殖的抑制作用显著增强;人参皂苷Th、pseudoproto-Pb和parisyunnanoside B为Fusarium-C39菌株生物转化提高重楼皂苷I、II和VII含量的主要前体物质,它们在Fusarium-C39菌株的作用下发生了C26糖基水解和环化反应,分别生成了重楼皂苷I、II和VII。结论 内生真菌Fusarium-C39可生物...     

重楼皂苷Ⅰ对膀胱癌细胞凋亡的影响

目的:研究重楼提取物单体重楼皂苷Ⅰ对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:体外培养膀胱尿路上皮细胞癌BIU-87细胞株,采用MTT法检测重楼皂苷Ⅰ对BIU-87细胞增殖的影响,计算半抑制率(IC50);采用流式细胞术检测重楼皂苷Ⅰ干预后BIU-87细胞凋亡的情况,透射电镜观察细胞超微结构的变化;采用实时定量PCR分析凋亡相关基因Bcl-2的变化,采用Western blot检测蛋白的表达变化。结果:重楼皂苷Ⅰ对BIU-87细胞的增殖有明显的抑制作用,24,48,72 h的IC50为9.71,5.91,4.68μmol·L-1。重楼皂苷Ⅰ对BIU-87细胞生长的抑制作用表现出时间和浓度依赖性。此外重楼皂苷Ⅰ干预以后,BIU-87细胞的凋亡率与对照组相比有显著性差异。实时定量PCR及Western blot的检测可见到凋亡相关基因Bcl-2的表达显著降低。结论:这些体外实验结果表明,重楼皂苷Ⅰ对膀胱癌有潜在的抗癌作用,下调Bcl-2基因的表达是其诱导膀胱癌细胞凋亡的作用机制之一。     

重楼皂苷Ⅰ、Ⅵ及总皂苷镇痛抗炎作用研究

目的:探讨重楼皂苷Ⅰ、Ⅵ及总皂苷镇痛抗炎作用。方法:采用小鼠热板法实验,小鼠醋酸扭体实验,二甲苯引起的小鼠耳肿胀炎症实验,角叉菜胶引起的小鼠足肿胀炎症实验。结果:重楼皂苷Ⅰ小、中、大剂量组给药后60、90 min能提高小组痛阈值,与空白对照组比较,有统计学意义(P0.05,P0.01);重楼皂苷Ⅵ小、中、大剂量分别于给药后90、60、30 min提高小组痛阈值,与空白对照组比较,有统计学意义(P0.05,P0.01);总皂苷大剂量给药后90 min能提高小组痛阈值,与空白对照组比较,有显著性差异(P0.05)。重楼皂苷Ⅰ、Ⅵ中和大剂量组的镇痛抑制率分别为28.16%、28.57%、25.71%、31.84%,和空白对照组相比,有统计学意义(P0.05)。重楼皂苷Ⅰ大剂量组、总皂苷中和大剂量组均能使小鼠耳廓肿胀度明显降低,抑制率分别为25.82%、30.22%、47.80%,其差异具有统计学意义(P0.01,P0.05)。重楼皂苷Ⅵ能减轻二甲苯所致小鼠耳肿胀,作用不明显。重楼皂苷Ⅰ大剂量组、总皂苷中和大剂量组均能使小鼠耳廓肿胀度明显降低,抑制率分别为20.30%、27.82%、44.47%,其差异具有统计学意义(P0.01,P0.05)。重楼皂苷Ⅵ抗炎作用不明显。重楼皂苷Ⅰ大剂量组、总皂苷中和大剂量组能提高小鼠血清中SOD活力,和空白对照比相比,其差异具有统计学意义(P0.01,P0.05)。重楼皂苷Ⅰ大剂量组、总皂苷中和大剂量组能降低小鼠血清中MDA、PGE_2的含量,和空白对照比相比,其差异具有统计学意义(P0.05)。结论:重楼皂苷Ⅰ和Ⅵ具有较好的镇痛作用,重楼皂苷Ⅰ、Ⅵ比总皂苷作用强、起效快;重楼皂苷Ⅰ和总皂苷具有较好的抗炎作用,皂苷Ⅵ抗炎作用不明显。     

木犀草素对人卵巢癌SKOV3细胞增殖与凋亡的影响

目的观察木犀草素(Luteolin)对人卵巢癌SKOV3细胞增殖与凋亡的影响,并通过转录组学探讨其分子机制。方法体外培养人卵巢癌细胞,设立空白对照组、Luteolin组(10、20、40μmol·L^-1),给予药物干预48 h。CCK-8法检测细胞增殖抑制率;EdU实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率;Hochest33342染色观察细胞的形态学变化;转录组测序分析空白对照组与40μmol·L^-1Luteolin组干预48 h的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs);根据转录组测序结果,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中CDKN1A、CDC20、GADD45A、ATF4、DDIT3、HSPA1A、HSPA2、HSPA8、HSPB1 mRNA的表达。结果与空白对照组比较,Luteolin组细胞增殖抑制率均显著升高(P<0.05),呈明显的浓度依赖性;Luteolin组EdU阳性细胞率均显著降低(P<0.05);Luteolin组G0/G1期细胞比例均显著降低(P<0.05),S期细胞比例均显著升高(P<0.05),呈明显的浓度依赖性;Luteolin组细胞凋亡率均显著升高(P<0.05),呈明显的浓度依赖性;Luteolin组Hochest33342染色存在细胞凋亡现象;通过转录组测序分析,筛选获得1476个DEGs,挖掘到包括CDKN1A、CDC20、GADD45A、ATF4、DDIT3、HSPA1A、HSPA2、HSPA8、HSPB1调控细胞增殖与凋亡的DEGs;与空白对照组比较,Luteolin组的CDKN1A、GADD45A、ATF4、DDIT3 mRNA表达水平上调(P<0.05),CDC20、HSPA1A、HSPA2、HSPA8、HSPB1 mRNA表达水平下调(P<0.05)。结论 Luteolin可抑制SKOV3细胞的增殖及诱导其凋亡,其机制可能涉及CDKN1A、CDC20、GADD45A、ATF4、DDIT3、HSPA1A、HSPA2、HSPA8、HSPB1多基因的调控。     

人参皂苷Rg3联合顺铂对荷卵巢癌裸鼠移植瘤模型作用研究

目的：观察人参皂苷Rg3联合顺铂对荷高转移人卵巢癌细胞系HO-8910PM转移瘤裸鼠的抑制作用。方法：移植瘤裸鼠随机分成6组：荷瘤空白对照组（A组）;不同Rg3浓度药物组：2.5 mg/kg（B组）、5 mg/kg（C组）和10 mg/kg Rg3（D组）;Rg3和顺铂联用组（E组）;顺铂阳性对照组（F组）。分别从裸鼠体重、转移瘤体积变化及相对肿瘤增殖率、淋巴细胞转化实验和NK细胞活性检测观察各组情况。结果：给药6天后,F组裸鼠体重呈显著下降（P〈0.05）,E组体重呈极显著下降（P〈0.01）。E组给药6天后,荷瘤裸鼠的瘤体积显著下降,作用明显强于Rg3 C组和F组。D组12天后与A组比较瘤体积显著下降。Rg3 5 mg/kg腹腔注射给药对小鼠脾细胞NK活性有显著的增强作用（P〈0.05）。各剂量Rg3腹腔注射给药对LPS诱导的小鼠B淋巴细胞增殖能力无显著影响（P〉0.05）。结论：人参皂苷Rg3联合顺铂作用于荷卵巢癌裸鼠比两者单独用药具有更强的抑制肿瘤的作用。一定浓度的Rg3能刺激荷瘤裸鼠NK细胞的活性,提高机体免疫功能。卵巢癌应用化疗的同时联合应用Rg3可能会增效解毒、保护机体免疫功能的作用。     

桔梗皂苷D抑制人结肠癌SW620细胞增殖及其机制的研究

 目的 研究桔梗皂苷D对人结肠癌SW620细胞增殖的影响及作用机制。方法 采用人结肠癌细胞株SW620细胞,分别以四甲基偶氮唑蓝法观察桔梗皂苷D对细胞增殖的抑制作用,以流式细胞术检测桔梗皂苷D对细胞周期分布和凋亡的影响, 蛋白质免疫印迹法检测桔梗皂苷D对细胞周期蛋白和凋亡蛋白表达的影响。结果 与空白对照组比较,桔梗皂苷D呈剂量依赖地抑制人结肠癌SW620细胞的生长;15、20 μmol·L^-1桔梗皂苷D作用细胞24 h后,显著增加G₀/G₁期细胞比例,分别为(72.83±5.26)%和(76.82±5.83)%(P<0.05,空白对照组(56.78±4.92)%,周期蛋白cyclinD1、c-myc、CDK6表达明显下调;10、15、20 μmol·L^-1桔梗皂苷D作用细胞48 h后,明显增加细胞凋亡率,分别为（19.5±5.1）%、（35.8±5.3）%和（43.8±4.0）%(P<0.05,空白对照组（8.93±5.72）%,相关蛋白pro-caspase3、PARP表达下降。结论 桔梗皂苷D通过调控周期蛋白cyclinD1、c-myc、CDK6的表达,将细胞阻滞于G₁期,进而诱导细胞凋亡,抑制人结肠癌细胞SW620的增殖。     

表没食子儿茶素没食子酸酯测定及其对胃癌细胞增殖的抑制作用研究

目的 分析表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在绿茶提取物中的含量,探讨EGCG对人胃癌细胞BGC823增殖和凋亡的影响,为阐明EGCG抗肿瘤作用机制提供实验基础.方法 反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定绿茶提取物中EGCG的含量.MTT法检测EGCG对体外培养的人胃癌细胞BGC823增殖的影响;DNA ladder法检测EGCG处理各组DNA梯度的变化.所有数据均采用SPSS12.0进行统计分析,均数比较采用t-test.结果 通过绘制标准曲线确定绿茶提取物中EGCG 的含量为9%.MTT法检测结果显示EGCG能够呈现剂量(5×10~(-3),1×10~(-2),2×10~(-2),4×10~(-2))g/L依赖性地抑制人胃癌细胞BGC823的增殖;DNA ladder法显示EGCG处理组细胞DNA呈现梯状条带,而对照组则没有这种带纹.结论 绿茶提取物中EGCG的含量为9%;EGCG能够通过诱导细胞凋亡而抑制人胃癌细胞BGC823的生长和增殖.     

羟基喜树碱对A549人肺腺癌细胞增殖的影响

目的观察羟基喜树碱对体外A549人肺腺癌细胞增殖的影响。方法采用细胞培养及MTT比色法检测羟基喜树碱对体外A549人肺腺癌细胞的抑制作用。结果低浓度羟基喜树碱作用24h对A549人肺腺癌细胞没有明显影响,当药物浓度达到50μg/mL时,抑制作用明显增强,抑制率达44.17%,药物浓度达到100μg/mL时抑制率达50.28%;随着药物作用时间的延长,抑制更明显,100μg/mL药物组作用48h抑制率达70.98%。结论羟基喜树碱具有抑制A549人肺腺癌细胞增殖的作用,抑制作用具有明显的浓度和时间依赖性。     

核桃楸提取物抑制人卵巢癌细胞HO-8910PM增殖的实验研究

目的研究中药核桃楸提取物对人卵巢癌细胞HO-8910PM增殖能力的影响。方法采用层流分离法提取出核桃楸6种有效成分,分别以10^-8 mg/mL、10^-7 mg/mL、10^-6 mg/mL、10^-5 mg/mL浓度作用于卵巢癌细胞HO-8910PM,并设立空白对照组,以噻唑蓝比色法和形态学观察法检测核桃楸提取物对癌细胞生长的抑制作用。结果核桃楸提取物的6种有效成分结构鉴定分别为a-羟基-四氢萘醌(Y1)、胡桃醌(Y2)、4,8-二羟基萘酚-1-0-β-D-[6′-0-(3″,5″-二甲氧基-4″-羟基苯甲酰基)]葡萄糖苷(Y3)、4,8-二羟基萘酚-β-D-(6′-乙酰氧基葡萄糖苷)(Y4)、4,8-二羟基萘酚-β-D-葡萄糖苷(Y5)、4,5,8-二羟基-ɑ-四氢萘醌-5-0-β-D-[6′-0-(4″-羟基-3″,5″-二甲氧基苯甲酰基)]葡萄糖苷(Y6)。Y1、Y3、Y6这3种药物随着药物浓度的增高和作用时间的延长,对HO-8910PM细胞增殖的抑制率也相应增高,并且Y1、Y3的浓度依赖性明显,Y6的时间依赖性明显且在短时间低浓度组(10^-8 mg/mL)表现出了明显的肿瘤抑制作用;其他药物无规律变化。电镜下观察各药物组HO-8910 PM细胞随着药物浓度的增高和作用时间的延长,细胞出现程序性死亡。结论核桃楸提取物的6种有效成分中,有3种能够抑制人卵巢癌细胞HO-8910PM的增殖,且抑制作用存在剂量、时间依赖性。     

大黄素对体外人肺腺癌细胞增殖抑制作用的影响

目的探讨大黄素对人肺腺癌Anip973细胞(简称肺癌细胞)作用的机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和生长曲线测定比较不同浓度的大黄素在不同作用时间内对体外培养的肺癌细胞增殖的影响,同时应用流式细胞术检测细胞凋亡率,并对此进行电镜分析。结果在一定范围内,大黄素的浓度越大、作用时间越长对肿瘤细胞生长的抑制作用越强,凋亡率也越高,60μmol／L大黄素处理肺癌细胞72h后增殖抑制率达90％。结论大黄素可明显抑制肺癌细胞的增殖,其抑制作用具有时效和量效关系。     

紫龙金对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖及凋亡的影响

目的观察复方中药紫龙金对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖的抑制作用及对其凋亡的诱导作用,探讨紫龙金治疗乳腺癌的作用机制。方法依据培养液紫龙金浓度的差异,实验共设4组:(1)对照组:不加紫龙金干预的1640培养液;(2)紫龙金低浓度组:1.5 mg生药/mL紫龙金培养液;(3)紫龙金中浓度组:3 mg生药/mL紫龙金培养液;(4)紫龙金高浓度组:6 mg生药/mL紫龙金培养液。采用细胞计数法绘制生长曲线及四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度紫龙金对MCF-7细胞增殖能力的影响,并应用流式细胞术、Hoechst 33342核染色法及DNA梯度形成法测定紫龙金诱导凋亡的作用。结果(1)与对照组比较,紫龙金各剂量组的细胞计数在各时间点(24、48、72、96、120、144 h)明显减少,其差异均有统计学意义(P0.05);紫龙金各剂量组间的生长抑制率差异除低、中浓度组间在24、72 h无统计学意义外(P0.05),各剂量组间两两比较在不同时间点(24、48、72、96、120、144 h),其差异均有统计学意义(P0.05)。紫龙金对MCF-7细胞的增殖抑制作用呈时间依赖性和剂量依赖性;(2)紫龙金使细胞阻滞在G_0/G_1期;(3)中、高浓度紫龙金诱导MCF-7细胞凋亡,并形成DNA ladder。结论紫龙金能抑制人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖,并诱导细胞凋亡,从而起到抗肿瘤的作用。     

大黄素对人高转移卵巢癌细胞中癌相关基因表达的影响

目的探讨大黄素对人高转移卵巢癌抗肿瘤的可能作用机制。方法应用肿瘤基因芯片检测大黄素(40μmol/L)对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞中癌相关基因表达的影响,并且实时定量PCR和Western blotting进行验证。结果共筛选出表达差异基因69个,其中33个基因表达水平上调,36个基因表达水平下调,涉及细胞凋亡、细胞周期、细胞生长与分化、细胞运动、信号转导、基因转录和细胞代谢等7大类相关基因。结论基因芯片结果提示大黄素抗肿瘤作用可能与转化生长因子-β(TGF-β)信号转导通路密切相关。