大鼠脑缺血再灌注损伤后神经干细胞增殖分化和一氧化氮变化及通心络对其的影响

目的探讨大鼠脑缺血再灌注损伤(MCAO)后内源性神经干细胞的增殖分化情况,以及大鼠脑缺血再灌注损伤(MCAO)后血浆一氧化氮(NO)含量变化和通心络对其的影响。方法采用大鼠缺血再灌注损伤(MCAO)模型,检测缺血后3,7,14 d以及21 d NO含量变化,免疫组织化学方法观察缺血后缺血侧室管膜及室管膜下区(SVZ),海马齿状回(SGZ)B rdu阳性细胞数的变化。结果造模后通心络组B rdU阳性细胞荧光强度值明显高于脑缺血再灌注模型组,差异显著(P<0.05)。MCAO血浆NO浓度显著降低(P<0.05),通心络能升高NO浓度。结论大鼠缺血再灌注损伤后可引起其缺血侧SVZ,SGZ区星形胶质细胞及神经细胞反应和增殖;而通心络可显著增加MCAO大鼠神经干细胞增殖分化能力;NO可能起着重要作用。     

通心络超微粉对脑缺血大鼠微血管的影响

目的 观察通心络超微粉对脑缺血大鼠微血管及血流灌注量的影响.方法 将48只健康SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、通心络大剂量组[1.6g/(kg·d)]、通心络中剂量组[0.8g/(kg·d)]、通心络小剂量组[0.4g/(kg·d)]、尼莫地平组[10mg/(kg·d)],每组8只.采用开颅结扎法阻断大鼠一侧大脑中动脉制备局灶性脑缺血大鼠模型,假手术组大鼠只挑开脑膜,不结扎血管.各用药组均在动物苏醒后灌胃,假手术组和模型组给予等体积生理盐水.给药14天后,利用激光扫描共聚焦显微镜观察各组大鼠脑组织微血管形态、直径及血流灌注量.结果 与模型组比较,各用药组大鼠大脑皮层微血管均呈现迂曲不规则形状,其中通心络大剂量组血管明显呈迂曲、不规则,微血管分支数目增多,血管之间靠拢形成连接.模型组缺血侧40％微血管直径在5～6μm之间;通心络大剂量组缺血侧41％微血管直径在2～3μm之间;通心络中剂量组缺血侧40％微血管直径在3～4μm之间;通心络小剂量组缺血侧40％微血管直径在4～5μm之间.与模型组比较,通心络大、中剂量组、尼莫地平组显著促进缺血侧脑组织皮层区微血管血流灌注量增加(P＜0.01).结论 通心络超微粉可促进脑缺血大鼠脑缺血区微血管新生,增加缺血脑组织血流灌注量.     

通心络对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响

目的:研究通心络腹腔注射对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响。方法:大鼠线栓法建立缺血2h再灌注损伤模型,再灌注后1小时、1天和5天断头取脑,TTC测定脑梗塞体积;透射电镜观察海马神经元的凋亡情况;western-blot观察caspase-3表达;RT-PCR测定c-fos基因的表达。结果:通心络腹腔注射可使大鼠脑梗塞体积减小;海马神经元凋亡由中晚期和凋亡小体转为早期凋亡表现,caspase-3,c-fos基因的表达降低。结论:通心络可能通过抑制凋亡反应的作用机制减轻脑缺血再灌注损伤,对缺血脑组织具有保护作用。     

通心络对体外模拟脑缺血再灌注损伤大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用

目的：观察通心络对体外模拟脑缺血再灌注损伤大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用。方法：分离大鼠脑微血管内皮细胞培养鉴定,采用氧糖剥夺法建立模拟体外脑缺血再灌注内皮细胞损伤模型,利用制备的通心络含药血清干预,CCK-8法检测细胞活性;硝酸酶还原法测定细胞上清液NO的含量;Elisa法检测细胞上清液vWF的含量。结果：与正常组比较,模型组细胞OD值明显降低（P〈0．01）,细胞上清液NO和vWF（P〈0．05或P〈0．01）含量明显升高;与模型组比较,10％的通心络含药血清作用24h,细胞OD值明显增高（P〈0．01）,细胞上清液NO含量和vWF含量明显降低（P均〈0．01）。结论：通心络含药血清可能是通过减少NO和vWF分泌保护脑缺血再灌注损伤的脑微血管内皮细胞。     

银杏叶提取物对脑缺血再灌注大鼠海马一氧化氮产生的影响

目的:观察银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract)对脑缺血再灌注大鼠海马一氧化氮(NO)产生的影响。方法:大鼠脑缺血采用四血管阻断法,选择性NO测定电极检测NO的浓度。实验分为生理盐水组和银杏叶提取物组。结果:银杏叶提取物没有影响大鼠的血压和海马的血流量,显著地减少了缺血再灌流时海马内NO的产生(P<0.001)。结论:银杏叶提取物可能通过抑制一氧化氮的产生(NO)而起到神经保护作用。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后神经干细胞增殖分化和雌二醇变化及通心络对其影响

探讨大鼠脑缺血再灌注损伤(MCAO)后内源性神经干细胞的增殖分化情况,以及大鼠脑缺血再灌注损伤(MCAO)后血浆雌二醇(E2)含量变化和通心络对其影响。方法:采用大鼠缺血再灌注损伤(MCAO)模型,应用放免方法观察缺血后3天、7天、14天以及21天E2含量变化,免疫组织化学方法观察缺血后缺血侧室管膜及室管膜下区(SVZ)、海马齿状回(SGZ)BrdU阳性细胞数的变化。结果:造模后通心络组BrdU阳性细胞荧光强度值明显高于脑缺血再灌注模型组,差异显著(P<0.05);MCAO血浆E2浓度显著降低(P<0.05),通心络能升高E2浓度。结论:大鼠缺血再灌注损伤后可引起其缺血侧SVZ、SGZ区星形胶质细胞及神经细胞反应和增殖;而通心络可显著增加MCAO大鼠神经干细胞增殖分化能力,E2可能起着重要作用。     

通心络对缺血再灌注损伤大鼠脑组织细胞因子EPO mRNA变化的影响

目的 探讨促红细胞生成素(EPO) mRNA在缺血/再灌注损伤大鼠脑组织的表达情况以及通心络对EPO mRNA的影响.方法 采用大鼠缺血/再灌注损伤(MCAO)模型并予通心络灌胃,应用逆转录集合酶链式反应(RT-PCR)检测缺血再灌注损伤后3、5、7、14 d神经干细胞增殖分化相关细胞因子EPOmRNA的变化.结果 缺血再灌注模型组EPOmRNA在不同时间段均有表达,EPOmRNA从造模后第3天表达增强,第5天表达最高;给予通心络处理后,第3天开始,缺血侧EPO mRNA表达增强,第5、7、14天PCR表达灰度值均高于模型组.结论 大鼠脑缺血再灌注后,缺血区脑组织细胞因子EPO mRNA表达增强,通心络可强化其反应,进而可能诱导神经干细胞增殖和分化.     

通心络对冠心病患者血浆内皮素及一氧化氮的影响

目的 观察冠心病病人口服通心络治疗后血脂质浓度变化、血浆内皮素（ＥＴ）和一氧化氮（ＮＯ）浓度变化。方法 治疗组口服通心络,每日３次,每次４片,对照组则仅用消心痛治疗。均３０日为１个疗程。结果 治疗组的甘油三酯（ＴＧ）、低密度脂蛋白胆固醇（ＬＤＬ－Ｃ）、总胆固醇（ＴＣ）及血浆ＥＴ浓度均较治疗前明显降低（Ｐ〈０．０１）,而血浆ＮＯ浓度均较治疗前有明显升高（Ｐ〈０．０１）,与对照组比较亦有显著性差异（Ｐ     

缺血再灌注损伤大鼠脑组织细胞因子EGF mRNA的变化及通心络对其影响

目的:探讨表皮生长因子(EGF)mRNA在缺血/再灌注损伤大鼠脑组织的表达情况及通心络对其影响。方法:采用大鼠缺血/再灌注损伤(MCAO)模型并予通心络灌胃,应用逆转录集合酶链式反应(RT-PCR)检测缺血再灌注损伤后5、7、14、21、30天神经干细胞增殖分化相关细胞因子EGF mRNA的变化。结果:缺血再灌注模型组EGF mRNA在不同时间段均有表达,EGF mRNA在造模后第3天开始表达增强,第5天表达最高;给予通心络处理后第3天缺血侧EGF mRNA开始表达增强,第5、7、14、21、30天时PCR表达均高于缺血对照组。结论:大鼠脑缺血再灌注后缺血区脑组织细胞因子EGF mRNA表达增强,通心络可强化其反应,进而可能诱导神经干细胞增殖和分化。     

通心络胶囊对脑缺血再灌注损伤小鼠的保护作用及作用机制

目的:研究通心络胶囊对脑缺血再灌注损伤的保护作用,并通过网络药理学探讨通心络胶囊治疗脑缺血的作用机制。方法:C57BL/6小鼠采用改良线栓法制作小鼠中动脉闭塞(MCAO)模型,分为假手术组、模型组、通心络低、中、高剂量组(1,2,4 g·kg^-1,灌胃给药)、阿司匹林组(2.055 g·L^-1,腹腔注射),于小鼠脑缺血再灌注24,48,72 h参照Longa评分法对小鼠进行神经功能评分,苏木素-伊红(HE)染色法观察脑组织病理学变化情况,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定小鼠脑梗死面积。首先从BATMAN-TCM数据库中筛选通心络胶囊化学成分并分析作用靶点,然后分析靶点富集的信号通路,之后构建中药-活性成分-靶点网络,最后预测通心络胶囊治疗脑缺血的多维药理作用机制。结果:Longa评分法,HE染色和TTC染色法都提示通心络胶囊可改善脑缺血再灌注小鼠的脑损伤,并且通心络胶囊对脑损伤的改善程度随着通心络胶囊剂量升高而逐渐升高。在通心络胶囊所含12味中药中筛选得到132个有效活性成分及环磷酸腺苷(cAMP)依赖性蛋白激酶催化亚基(PRKACA),腺苷酸环化酶1(ADCY1),丝氨酸/苏氨酸激酶1(Akt1),多巴胺受体D2(DRD2),Discs大同源物4(DLG4)等240个交集靶点。基因本体(GO)富集于阳离子通道活性、离子门控通道活性、门控通道活性、神经递质受体活性、离子通道活性等。京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集于cAMP信号通路,钙信号通路,神经活性配体-受体相互作用,环磷酸鸟苷(cGMP)/蛋白激酶G(PKG)信号通路、多巴胺能突触信号通路。结论:通心络胶囊可减轻脑缺血再灌注小鼠的脑损伤,其通过多靶点、多环节实现脑保护作用;网络药理学揭示了通心络胶囊治疗脑缺血的有效成分、靶点及通路,为通心络胶囊治疗脑缺血的作用机制提供理论支持。     

缺血再灌注损伤大鼠脑组织细胞因子VEGF mRNA的变化及通心络对其的影响

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）mRNA在大鼠缺血/再灌注损伤（MCAO）脑组织的表达情况及通心络对其的影响。方法采用MCAO模型并予通心络灌胃,应用反转录集合酶链式反应（RT-PCR）检测缺血再灌注损伤后5d、7d、14d、21d、30d神经干细胞增殖分化相关细胞因子VEGF mRNA的变化。结果缺血再灌注模型组VEGF mRNA在不同时间段均有表达,VEGF mRNA在造模后第3天开始表达增强,第5天表达最高;给予通心络处理后第3天缺血侧VEGF mRNA开始表达增强,5d、7d、14d、21d、30d时PCR表达灰度值均高于缺血对照组。结论缺血/再灌注损伤大鼠脑组织细胞因子VEGF mRNA表达增强,通心络胶囊可强化此反应,进而可能诱导神经干细胞增殖。     

竹节参总皂苷对脑缺血再灌注模型海马组织一氧化氮合酶的影响

目的观察竹节参总皂苷(total rhizoma panacis japonica saponins,tRPJS)对反复脑缺血再灌注小鼠及局灶性脑缺血再灌注大鼠海马组织一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响,探讨药物抗脑缺血损伤的作用机制。方法插线法阻塞大脑中动脉(MCAO)制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,采用反复夹闭双侧颈总动脉的方法造成小鼠脑缺血再灌注模型,研究tRPJS对这两种脑缺血再灌注损伤模型海马组织NOS、iNOS的影响。结果tRPJS能显著降低脑缺血再灌注损伤小鼠和局灶性脑缺血大鼠海马组织NOS、iNOS的含量(P<0.05)。结论tRPJS抗脑缺血损伤与降低海马组织NOS、iNOS的活性有关。     

中风膏抗脑缺血再灌注损伤的实验研究

目的:观察中风膏对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。方法:采用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型。实验分为假手术组、模型组、中风膏小剂量、大剂量组,分组给药7天后造模,观察中风膏对大鼠脑缺血再灌注后神经功能缺损评分、脑梗死体积、脑组织结构及神经元形态的影响。结果:各组出现了不同程度的神经功能缺损症状,与模型组比较,再灌注24小时后给药组可明显改善大鼠神经缺损症状(P0.05);再灌注24小时后给药组梗死体积小于模型组(P0.05);脑缺血再灌注24小时后模型组缺血侧皮质区组织结构及细胞形态失常,而给药组脑组织结构及神经元形态受损程度较轻。结论:中风膏对大鼠脑缺血再灌注损伤有神经保护作用。     

脑平康颗粒对短暂脑缺血后大鼠学习记忆能力的影响

目的:观察脑平康颗粒对短暂脑缺血后大鼠学习与记忆能力的影响。方法:将Wistar大鼠随机分成6组:对照组、短暂脑缺血模型组、脑平康颗粒高、中、低剂量组(12,6,3 g.kg-1)和多奈派齐(5 mg.kg-1)。ig给药,每日1次。采用两侧颈总动脉夹闭加放血性低血压法制作大鼠短暂性全脑缺血模型,利用Morris水迷宫法和避暗法观察脑平康颗粒对短暂脑缺血后大鼠学习与记忆能力的影响,并检测海马乙酰胆碱酯酶(AchE)活性。结果:Morris水迷宫实验,脑平康颗粒显著抑制短暂脑缺血大鼠逃避潜伏期、显著延长撤台后大鼠在目标象限的时间(P<0.05);避暗实验,脑平康颗粒显著抑制短暂脑缺血大鼠潜伏期(P<0.05)且与镇痛作用无关;脑平康颗粒显著抑制海马AchE活性(P<0.05)。结论:脑平康颗粒对短暂脑缺血后大鼠学习与记忆能力有明显改善作用,其作用机制可能与海马胆碱的代谢有关。     

芪棱汤对大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的:研究芪棱汤对脑缺血再灌注后,"缺血半暗带"神经元细胞凋亡的影响.方法:采用线栓加环扎法模型,运用TUNEL法,在脑缺血再灌注后不同时间点检测凋亡细胞数目的变化.结果:在再灌注各时间段,补阳还五汤及芪棱汤均能减少缺血半暗带神经元细胞的凋亡(P＜0.05),而芪棱汤的效果优于补阳还五汤(P＜0.05).结论:芪棱汤可以减少脑缺血再灌注损伤后细胞的凋亡,从而达到脑保护的作用.     

电针对局灶性脑缺血大鼠脑组织NO及NOS的影响

目的　研究电针对局灶性脑缺血后脑组织 N O含量及 3种亚型 N OS表达的影响。方法　采用改良大脑中动脉线栓法造成大鼠局灶性脑缺血模型 ,电针百会、大椎 ,应用硝酸还原酶法测定 NO含量及免疫组织化学技术检测脑组织 3种亚型NOS(n NOS、i NOS、e NOS)的表达 ,观察局灶性脑缺血后 3种亚型 NOS表达。结果　督脉电针能减少局灶性脑缺血后脑组织中 NO含量 (13.12± 3.15μm ol/L ) ,与缺血组比较 P <0 .0 1;督脉电针组缺血侧脑组织 i N OS、n N OS表达 (13.0 1± 1.32 ,32 .12± 1.5 6)显著低于缺血组 (P<0 .0 1) ,e NOS表达 (2 9.2 1± 3.0 1)显著高于缺血组 (P<0 .0 1)。结论　督脉电针能上调e N OS表达 ,同时下调局灶性脑缺血所致 n NOS、i NOS的异常表达 ,从而减少总 NO的生成量 ,降低缺血引起的毒性作用 ,对脑组织具有一定的保护作用