蓝萼甲素研究进展

蓝萼甲素（GLA）是由唇形科香茶菜属植物香茶菜Rabdosia japonica（Burm.f）Haravar glaucocalyx（Maxim.）Hara中分离提取出的二萜化合物,是香茶菜中的主要活性成分。近年来,对此种二萜类化合物抑制肿瘤、抗病毒抑菌,对心血管系统保护及抗癌活性的研究,已经成为当代天然药物化学的研究热点之一。     

HPLC法同时测定胃复春片中蓝萼甲素、蓝萼乙素、蓝萼丁素

目的建立HPLC法同时测定胃复春片(红参、香茶菜、枳壳)中蓝萼甲素、蓝萼乙素、蓝萼丁素成分定量方法。方法胃复春片甲醇提取物采用kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-甲醇(B)-水(C),梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长232 nm。结果蓝萼甲素、蓝萼乙素及蓝萼丁素分别在48.68～2 434 ng,32.96～1 648 ng,30.56～1 528 ng,范围呈现良好的线性关系,r均为1.000 0;平均加样回收率在98.3%～100.7%之间;蓝萼甲素、蓝萼乙素、蓝萼丁素的重复性试验RSD均小于2%。结论本方法可靠稳定,可以很好地用于胃复春片中蓝萼甲素、蓝萼乙素以及蓝萼丁素的定量测定。     

蓝萼甲素对血管内皮细胞的保护作用

目的:探讨蓝萼甲素对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用。方法:0.1 mmol/L过氧化氢(H2O2)作用于人脐静脉内皮细胞株,实验分为空白对照组、氧化损伤模型组、阿司匹林对照组和蓝萼甲素低、中、高剂量组。RT-PCR检测内皮细胞ET-1、iNOS、eNOS的表达。结果:与模型组比较,蓝萼甲素低、中、高剂量组均能升高细胞增殖率,蓝萼甲素中、高剂量组ET-1和iNOS表达明显减少,eNOS表达明显增多。结论:蓝萼甲素能够明显改善H2O2对内皮细胞的损伤,可能是通过降低ET-1而减少血管的收缩;降低iNOS表达而减少内皮细胞的损伤,达到保护内皮细胞的作用。     

大孔吸附树脂富集纯化大黄总蒽醌的工艺研究

目的：筛选纯化大黄总蒽醌的最佳树脂，确定树脂纯化大黄总蒽醌的工艺参数。方法：以大黄中总蒽醌含量为指标，研究大孔吸附树脂富集、纯化大黄总蒽醌的吸附性能和洗脱参数。结果：X-5型树脂对大黄总蒽醌有良好的吸附性能。洗脱剂为60％乙醇，用量为6倍量树脂柱体积，大黄总蒽醌富集于60％乙醇洗脱液部分，且除杂质效果好。结论：通过X-5型大孔吸附树脂富集、纯化后，大黄总蒽醌的洗脱率在90％以上。总蒽醌的含量提高到35．4％。说明采用本法富集、纯化大黄总蒽醌是可行的。     

大孔吸附树脂纯化黄芪总皂苷的工艺优化研究

目的研究黄芪总皂苷的大孔吸附树脂分离纯化工艺,为黄芪总皂苷的工业化生产提供参考。方法以黄芪总皂苷的收率、质量分数为考察指标,用静态及动态吸附实验筛选3种大孔吸附树脂;从样品溶液的上柱浓度、吸附速率、洗脱液浓度、洗脱速率及洗脱终点5个方面对纯化工艺进行优化;同时考察了碱液及稀醇液对黄芪总皂苷收得率的影响。结果以D101大孔吸附树脂吸附黄芪总皂苷,以0.05 g/mL的样品溶液上柱,以3 BV/h为吸附速率进行吸附,以0.1%NaOH溶液及20%乙醇溶液洗脱杂质,以80%乙醇、2 BV/h洗脱黄芪总皂苷部位,黄芪总皂苷的收率和质量分数达到较满意效果。     

大孔吸附树脂富集纯化黄芩总黄酮的工艺研究

目的：筛选纯化黄芩总黄酮的最佳树脂，确定树脂纯化黄芩总黄酮的工艺参数。方法：以黄芩中总黄酮含量为指标，对3种不同型号大孔吸附树脂进行筛选，确定了吸附分离黄芩总黄酮的最佳树脂，并通过单因素考察确定了该树脂分离、纯化黄芩总黄酮的工艺奈件。结果：AB-8型树脂对黄芩总黄酮有良好的吸附分离性能，其吸附分离黄芩总黄酮的工艺条件为：上样浓度0，04g生药／mL，最大上样量为树脂的8倍体积，洗脱剂为80％乙醇，洗脱剂用量为7倍量树脂柱体积。结论：AB-8型树脂在所确定的工艺奈件下，纯化黄芩总黄酮效果良好，黄芩总黄酮含量可达90％以上。     

断血流皂苷的大孔吸附树脂纯化工艺研究

目的初步筛选对断血流皂苷具有选择性的大孔树脂并建立树脂法分离纯化断血流皂苷的工艺方法。方法以断血流总皂苷、断血流皂苷A的吸附量、解吸率为指标,分别对D101等11种大孔吸附树脂进行静态考察,筛选出4种树脂并以断血流皂苷A纯度为指标对洗脱剂浓度进行考察。结果断血流皂苷的最佳吸附树脂为中极性的DM301,分别以50%及80%乙醇进行洗脱,80%乙醇洗脱部分断血流皂苷A质量分数可达到6.24%。结论 DM301是富集断血流皂苷A的合适树脂。     

桑叶总黄酮的大孔树脂纯化工艺

目的:选择8种大孔吸附树脂分别对桑叶总黄酮进行静态与动态的吸附与解吸,筛选纯化桑叶总黄酮的最佳树脂。方法:研究影响分离的各种因素如流速、上柱浓度、pH和洗脱剂等优化分离工艺。结果:研究结果表明:AB-8树脂宜于桑叶总黄酮的提纯,最佳工艺为:流速为2BV/h,上样桑叶总黄酮水溶液浓度为0.613mg/mL,pH值为4,乙醇为洗脱剂,洗脱浓度为70,树脂每使用3次进行一次再生。结论:经AB-8树脂吸附分离后,黄酮含量提高1倍以上。     

益智总黄酮大孔吸附树脂纯化工艺研究

目的研究优化大孔吸附树脂纯化益智总黄酮的最佳工艺。方法以吸附率和解吸率为指标,利用静态吸附试验对15种大孔吸附树脂进行筛选,并通过与动态吸附相结合的方法,优选树脂的最佳分离纯化条件。结果 HP20大孔吸附树脂宜于FAOF的提纯,最佳纯化工艺为上样液黄酮质量浓度为1.518 mg/mL,上样体积流量为1.0 mL/min,上样量为50 mL,洗脱溶剂为30%乙醇,洗脱体积流量为1.0 mL/min,洗脱体积为6 BV,纯化后黄酮量高达51.68%。结论 HP20大孔吸附树脂能有效分离纯化益智中的总黄酮。     

蓝萼香茶菜不同部位蓝萼甲素的含量测定及采收期考察

目的：考察蓝萼香茶菜不同部位蓝萼甲素的含量及最适采收期。方法：采用反相高效液相色谱法,色谱柱为岛津C180DS,流动相为甲醇-水（60：40）,流速为0．9mL·min-1,柱温为25℃,于波长234nm条件下对样品中蓝萼甲素的含量进行测定。结果：以叶中蓝萼甲素含量最高,且7、8月份采集的叶中蓝萼甲素含量较高。结论：蓝萼香茶菜应在夏季采收,并以叶入药为宜。     

金银花叶中绿原酸的大孔吸附树脂纯化工艺研究

目的: 建立金银花叶中绿原酸的含量测定方法,考察不同型号的大孔吸附树脂对金银花叶中绿原酸的提取纯化效果,为金银花药材的综合开发利用提供参考。 方法: 采用高效液相色谱法测定指标成分。采用静态吸附法和动态吸附法,考察大孔树脂的吸附、洗脱附性能和纯化效果。 结果: 绿原酸在2.376 8~60.476 9 μg与峰面积呈良好线性关系,平均加样回收率96.82%,RSD 1.83%。HPD450大孔吸附树脂纯化效果较好,优化条件为:柱径比3∶ 1,药液质量浓度0.5~1.0 g ·mL^-1、吸附速度0.5 BV ·h^-1、树脂吸附量生药0.3 g ·g^-1、洗脱溶媒30%乙醇、洗脱速度2 B V ·h^-1,洗脱溶媒用量2 BV。 结论: HPD450大孔树脂对绿原酸纯化效果较好,工艺稳定可行,可用于工业化生产。     

蓝萼甲素诱导K562细胞毒作用机制的初步研究

目的:探讨活性氧(reactive oxygen species,ROS)在蓝萼甲素(glaucocalyxin A,GLA)诱导的人慢性粒细胞白血病K562细胞毒性中的作用。方法:GLA(0.313,0.625,1.250,2.500,5.000,10.000 mg.L-1)处理K562细胞12,24,48 h后,噻唑蓝(MTT)法观察细胞毒作用;流式细胞术检测GLA(2.5,5.0,10.0 mg.L-1)对K562细胞周期的阻滞作用;流式细胞术检测5.0 mg.L-1 GLA作用后K562中的ROS变化;利用MTT法检测抗氧化剂氮乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对GLA诱导下K562细胞毒作用的影响;流式细胞术检测NAC对GLA诱导下K562细胞周期的影响。结果:GLA对K562细胞的生长抑制呈明显的剂量和时间依赖关系,12,24,48 h的IC50分别为6.168,2.968,1.086 mg.L-1;GLA对K562细胞周期的阻滞作用主要发生在G0/G1期;5.0 mg.L-1 GLA作用K562细胞2 h后ROS较空白组上升1.3倍;NAC对GLA细胞毒作用有明显的抑制作用,且随NAC浓度上升,抑制作用增强;NAC能减弱GLA对K562的细胞周期阻滞作用。结论:GLA对K562细胞具有细胞毒及细胞周期阻滞作用,且这些作用与ROS有关。     

高效液相色谱法测定蓝萼香茶菜叶中蓝萼甲素的含量

用HPLC测定蓝萼香茶菜叶中蓝萼甲素的含量,色谱柱Shim-pack CLC-ODS,流动相甲醇-水(70:20),测得蓝萼甲素含量为1.03%。     

大孔吸附树脂纯化甜菊糖苷的工艺研究

目的 筛选出对甜菊糖苷纯化性能较好的大孔吸附树脂,优化树脂吸附、解吸工艺.方法 采用静、动态吸附、解吸的方法对5种树脂进行筛选;对吸附液pH值、吸附流量、树脂用量、解吸剂流量及用量等工艺参数进行优化,并考察工艺稳定性.结果 所选大孔树脂中,HPD-T01树脂对甜菊糖苷的纯化效果较好,其纯化甜菊糖苷的最优工艺条件为甜叶菊提取物与干树脂质量比为1∶1,上柱液质量浓度为提取物10 g/L时,pH值为7,吸附流量为0.1 BV/min;以70％乙醇为解吸剂,用量为4 BV,解吸流量为0.04 BV/min.结论 HPD-T01树脂对甜菊糖苷纯化效果最佳,操作工艺简单,具有工业化生产应用价值.     

大孔树脂纯化红花中羟基红花黄色素A的产业化探索

目的:优选D101大孔树脂纯化红花中羟基红花黄色素A的工业化放大工艺.方法:采用HPLC测定羟基红花黄色素A含量,通过单因素试验考察上样液pH、洗脱剂体积分数和用量、药材-树脂质量比对纯化工艺的影响,通过中试及工业化生产验证优选的纯化工艺.结果:优选的纯化工艺条件为上样液pH 4.0,药材-树脂质量比1∶6,加4 BV水以3 BVh-1·的流速洗脱除杂,用5％乙醇6 BV以3 BV·h-1的流速洗脱,收集洗脱液.结论:该工艺简单可行、分离效果好,适用于羟基红花黄色素A的大生产.     

AB-8大孔吸附树脂纯化双黄连中金银花、连翘提取物工艺

目的:优化AB-8大孔吸附树脂纯化双黄连中金银花、连翘提取物的工艺.方法:以提取物中总酚、总黄酮的含量为考察指标,从树脂径高比、吸附浓度、吸附流速、洗脱剂浓度等方面对大孔吸附树脂纯化工艺进行优化.结果:最佳纯化工艺为金银花、连翘提取物,加蒸馏水稀释成1.5 g·mL-1(生药量),树脂柱径高比1∶10,最大吸附量与树脂体积比为1∶3.3,水洗3倍树脂体积,4BV 70％乙醇洗脱.结论:AB-8大孔吸附树脂纯化金银花、连翘提取物的最佳工艺稳定可行.     

大枣多糖的纯化工艺研究

目的:考察大孔吸附树脂对大枣多糖的纯化条件。方法:通过吸附-解吸试验,筛选出最佳树脂(AB-8)。结果:该树脂纯化大枣多糖的最佳参数为在上样量30 mL,室温20℃,洗脱流速2.0 mL/min时大枣多糖纯化可以获得较高的纯化率。结论:该工艺稳定、合理,可为工业化生产提供依据。     

远志总皂苷大孔吸附树脂纯化工艺研究

目的:优选远志总皂苷大孔树脂纯化工艺。方法:在以细叶远志皂苷的纯度为指标,考察多种型号大孔树脂纯化远志总皂苷的吸附及洗脱条件。结果:HPD-100型大孔吸附树脂为最佳纯化远志总皂苷的大孔树脂。最佳纯化工艺为上样液细叶远志皂苷的质量浓度为0.5 g/ml,以蒸馏水3 BV、30%乙醇、70%乙醇各4 BV以1 BV/h速度依次洗脱,收集70%乙醇洗脱部位。结论:该法工艺可较好地纯化远志总皂苷且稳定可行,为新药研发提供了一定的依据。