百令胶囊对哮喘豚鼠骨髓及肺组织CD34+、Eotaxin及CCR3表达的影响

目的:通过观察百令胶囊对支气管哮喘豚鼠骨髓及肺组织中CD34+、Eotaxin及CCR3表达的影响,探讨百令胶囊治疗哮喘的可能机制。方法:健康雄性豚鼠30只随机分成对照组(A组)、哮喘组(B组)及百令胶囊治疗组(C组),每组10只。B、C组以卵白蛋白(OVA)作为抗原腹腔内注射联合雾化吸入复制哮喘模型,末次激发后24 h处死豚鼠,制备豚鼠肺组织病理标本,苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织炎症改变;免疫组化检测CD34+祖细胞、Eotaxin及CCR3在肺组织中的表达。结果:哮喘组肺组织CD34+祖细胞、Eotaxin及CCR3的阳性细胞数明显增加;百令胶囊治疗组肺组织中CD34+祖细胞、Eotaxin及CCR3的表达均有不同程度的减轻,与哮喘组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:百令胶囊可通过下调骨髓及肺组织中CD34+祖细胞、Eotaxin及CCR3的表达水平,发挥其抗气道炎症的作用。     

温阳汤对职业性哮喘模型大鼠CD34+分化的影响

目的研究温阳汤对职业性哮喘模型大鼠CD34~+分化的影响。方法选择健康雄性SD大鼠50只,随机分为模型组、空白组、中药组、西药组、结合组,每组10只,其中西药组及中药组分别予泼尼松混悬液(10mg/kg)、温阳汤(20mg/kg)灌胃;结合组予温阳汤加泼尼松混悬液灌胃;空白组及模型组予生理盐水灌胃。每日1次,共14日。观察模型大鼠一般情况,采用ELISA法检测外周血IL-5、嗜酸细胞活化趋化因子(eotaxin)含量,采用瑞氏-吉姆萨染色计数骨髓悬液嗜酸粒细胞(eosinophils,EOS),采用流式细胞术计数CD34~+、嗜酸性粒细胞趋化因子受体(CC chemokine receptor 3,CCR3~+)。结果与空白组比较,模型组大鼠外周血IL-5、eotaxin表达升高(P0.01),EOS、CD34~+细胞计数及CD34~+/CCR3~+升高(P0.01)。与模型组比较,各给药组IL-5、eotaxin、EOS、CD34~+细胞计数及CD34~+/CCR3~+降低(P0.01)。与西药组比较,结合组EOS细胞计数及CD34~+/CCR3~+降低(P0.01)。与中药组比较,结合组EOS细胞计数降低(P0.01)。结论温阳汤可以降低职业性哮喘大鼠体内炎症因子水平,抑制EOS的趋化、募集,从而减少CD34~+祖细胞向EOS分化。     

三氧化二砷对哮喘豚鼠肺组织中CD34^＋祖细胞、Eotaxin及CCR3表达的影响

目的：观察三氧化二砷对支气管哮喘豚鼠模型肺组织中CD34^＋祖细胞、Eotaxin及CCR3表达的影响,探讨三氧化二砷治疗哮喘的可能机制。方法：健康雄性豚鼠40只随机分成对照组（A组）、哮喘组（B组）、As2O3治疗组（C组）、地塞米松治疗组（D组）,每组10只。B、C及D组以卵白蛋白（OVA）作为抗原腹腔内注射联合雾化吸入复制哮喘模型,末次激发后24h处死豚鼠,制备豚鼠肺组织病理标本,苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织炎症改变;免疫组化检测CD34^＋祖细胞、Eotaxin及CCR3在肺组织中的表达。结果：（1）哮喘组肺组织CD34^＋祖细胞、Eotaxin及CCR3的阳性细胞数明显增加;（2）As2O3治疗组及地塞米松治疗组肺组织中CD34^＋祖细胞、Eotaxin及CCR3的表达相对于哮喘组均有不同程度的减轻,差异均有统计学意义。结论：哮喘豚鼠肺组织中CD34^＋祖细胞、Eotxin及CCR3表达增强。As2O3通过下调肺组织中CD∥祖细胞、Eotaxin及CCR3的表达水平,发挥其抗EOS性气道炎症的作用。     

百令胶囊对哮喘豚鼠骨髓及肺组织CD34＋、Eotaxin及CCR3表达的影响

目的：通过观察百令胶囊对支气管哮喘豚鼠骨髓及肺组织中CD34＋、E0taxin及ccR3表达的影响,探讨百令胶囊治疗哮喘的可能机制。方法：健康雄性豚鼠30只随机分成对照组（A组）、哮喘组（B组）及百令胶囊治疗组（C组）,每组10只。B、C组以卵白蛋白（OVA）作为抗原腹腔内注射联合雾化吸入复制哮喘模型,末次激发后24h处死豚鼠,制备豚鼠肺组织病理标本,苏木精一伊红（HE）染色观察肺组织炎症改变;免疫组化检测CD34＋祖细胞、Eotaxin及CCR3在肺组织中的表达。结果：哮喘组肺组织CD34＋祖细胞、Eotaxin及CCR3的阳性细胞数明显增加;百令胶囊治疗组肺组织中CD34＋祖细胞、Eotaxin及CCR3的表达均有不同程度的减轻,与哮喘组比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论：百令胶囊可通过下调骨髓及肺组织中CD34＋祖细胞、Eotaxin及CCR3的表达水平,发挥其抗气道炎症的作用。     

三氧化二砷对哮喘豚鼠肺组织中CD_(34)~+祖细胞、Eotaxin及CCR3表达的影响

目的:观察三氧化二砷时支气管哮喘豚鼠模型肺组织中CD34+祖细胞、Eotaxin及CCR3表达的影响,探讨三氧化二砷治疗哮喘的可能机制.方法:健康雄性豚鼠40只随机分成对照组(A组)、哮喘组(B组)、As2O3治疗组(C组)、地塞米松治疗组(D组),每组10只.B、C及D组以卵白蛋白(OVA)作为抗原腹腔内注射联合雾化吸入复制哮喘模型,末次激发后24 h处死豚鼠,制备豚鼠肺组织病理标本,苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织炎症改变;免疫组化检测CD34+细胞、Eotaxin及CCR3在肺组织中的表达.结果:(1)哮喘组肺组织CD34+祖细胞、Eotaxin及CCR3的阳性细胞数明显增加;(2)As2O3治疗组及地塞米松治疗组肺组织中CD34+祖细胞、Eotaxin及CCR3的表达相对于哮喘组均有不同程度的减轻,差异均有统计学意义.结论:哮喘豚鼠肺组织中CD34+祖细胞、Eo-taxin及LCCR3表达增强.As2O3通过下调肺组织中CD34+祖细胞、Eotaxin及CCR3的表达水平,发挥其抗EOS性气道炎症的作用.     

温补肾阳汤对哮喘小鼠Eotaxin表达的干预研究

目的:观察温补肾阳汤对哮喘小鼠外周血、肺组织Eotaxin表达的影响,探讨其抑制气道炎症作用。方法:健康雌性BALB/c小鼠50只,随机分为空白对照组、模型组、醋酸泼尼松组、温补肾阳汤组、温补肾阳汤+醋酸泼尼松组,每组10只。卵白蛋白(OVA)致敏及激发造模方法建立动物模型。计数肺泡灌洗液EOS;光镜下观察肺组织病理学改变;ELISA检测外周血Eotaxin表达;免疫组织化学检测肺组织Eotaxin蛋白水平。结果:药物干预组小鼠外周血、肺组织Eotaxin表达较模型组明显降低(P<0.01),肺泡灌洗液EOS计数明显减少(P<0.01),其中温补肾阳汤+醋酸泼尼松组较温补肾阳汤组外周血、肺组织Eotaxin表达及肺泡灌洗液EOS计数均降低(P<0.05),但与醋酸泼尼松组无差异(P>0.05)。结论:温补肾阳汤可能通过降低哮喘小鼠体内Eotaxin水平,减轻炎症细胞在肺组织局部浸润,从而抑制气道炎症。温补肾阳汤与醋酸泼尼松有一定协同作用,可减轻或避免大剂量糖皮质激素引起的不良反应。     

疏风通络方调控哮喘小鼠Eotaxin/CCR3通路相关因子的实验研究

[目的] 探索疏风通络方对哮喘小鼠肺组织嗜酸性粒细胞趋化因子（Eotaxin）、CC趋化因子受体3（CCR3）基因表达及含量影响。[方法] 70只小鼠随机分为空白对照组、哮喘模型组、疏风通络方低剂量组、疏风通络方中剂量组、疏风通络方高剂量组、CCR3受体拮抗剂（SB328437）组、丝裂原活化蛋白激酶抑制剂（SB203580）组、丝裂原活化细胞外信号调节激酶抑制剂（PD98059）组、磷酸肌醇3-激酶抑制剂（LY294002）组、Ca蛋白拮抗剂（PTX）组,每组7只,除空白对照组外的9组小鼠均应用卵清蛋白致敏/激发的方法建立哮喘模型,哮喘模型组给予生理盐水灌胃,疏风通络方组分别给予低、中、高剂量的疏风通络方灌胃,其余各组给予生理盐水灌胃加腹腔注射相应拮抗剂0.2 mL,连续给药4 d后眼球放血处死小鼠,以聚合酶链式反应（RT-PCR）法测定肺组织Eotaxin-1（CCL11） mRNA、Eotaxin-2（CCL24） mRNA、CCR3 mRNA的表达,以免疫组化法测定肺组织CCR3含量,以酶联免疫吸附法（ELISA）测定肺组织CCL11、CCL24含量。[结果] 1）与哮喘模型组比较,各中药组和SB328437组CCL11基因表达均有所降低。2）与哮喘模型组比较,疏风通络方低、中剂量组、SB328437组CCR3含量及基因表达均下降。3）各中药组和拮抗剂组分别与哮喘模型组比较,疏风通络方中剂量组CCL11与CCL24含量均下降,SB328437组CCL11含量明显下降,CCL24含量下降。[结论] 疏风通络方具有降低哮喘模型小鼠肺组织中EOS趋化因子CCL11及其受体CCR3基因表达水平、减少哮喘模型小鼠肺组织Eotaxin及CCR3含量的作用,其抑制作用与SB328437类似。     

补肾化痰活血中药对再生障碍性贫血小鼠骨髓CD_(34)~+和细胞因子表达的影响

目的:观察和比较补肾化痰活血中药对再生障碍性贫血小鼠骨髓造血生长因子SCF mRNA、GM-CSF mRNA表达和骨髓CD34+的影响。方法:建立再障小鼠模型,各组小鼠分别胃饲生理盐水、补肾化痰活血中药、康力龙和再障生血片,连续喂养14天后,采集骨髓进行单个核细胞培养,应用流式细胞术检测骨髓CD3+4抗原水平;应用RT-PCR方法检测SCFmRNA、GM-CSF mRNA表达水平。结果:①模型组骨髓CD3+4抗原检测结果显著低于正常对照组,治疗后各组小鼠骨髓CD3+4抗原水平明显提高,差异有显著性。②模型组骨髓造血生长因子SCF mRNA、GM-CSF mRNA表达水平均低于正常对照组,治疗后各组小鼠骨髓造血生长因子表达水平均明显提高,差异均有显著性。结论:补肾化痰活血方可能通过增强再障小鼠骨髓造血生长因子GM-CSFmRNA、SCFmRNA表达水平,刺激造血细胞分化成熟,达到调控骨髓造血的目的。     

祛风止痉散治疗支气管哮喘的细胞免疫机制及相关因素分析

目的探讨祛风止痉散治疗中度支气管哮喘的细胞免疫学机制及其相关因素。方法 112例支气管哮喘患者随机分为治疗组50例和对照组62例。治疗组给予祛风止痉散联合西药激素治疗,对照组使用西药激素治疗。治疗12个月后,评价2组治疗效果、肺功能以及CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的表达情况及之间的关系。结果治疗组显效率、肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积(FEV1)、FEV1占FVC的比例均高于对照组(P均<0.05);治疗组CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+表达均高于对照组(P均<0.05),而对照组CD8+表达高于治疗组(P<0.05);治疗效果与CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+表达呈正相关(P<0.05),与CD8+表达呈负相关(P<0.05)。FVC与CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+表达呈正相关(P均<0.05);FEV1与CD3+、CD4+表达呈正相关(P均<0.05);呼气峰流速(PEF)与CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+表达呈正相关(P均<0.05)。结论祛风止痉散治疗哮喘可能是通过提高外周血中CD3+、CD4+的含量,以及降低CD8+的含量而起到治疗及改善肺功能的作用。     

补肾活血方对慢性特发性血小板减少性紫癜小鼠血小板功能的影响

目的:观察补肾活血方对血小板活化和聚集相关糖蛋白表达的影响,探讨该方是否能够通过改善血小板功能进而治疗慢性特发性血小板减少性紫癜(CITP)。方法:将60只小鼠随机分为正常对照组、CITP模型组、醋酸泼尼松组和补肾活血方组。通过被动免疫造模法成功建立CITP小鼠模型,然后分别用0.9%生理盐水、醋酸泼尼松和补肾活血方干预14 d,采用全自动动物血液分析仪检测小鼠外周血血小板数量和凝血时间;采用流式细胞仪检测各组小鼠血小板活化和聚集相关糖蛋白(CD41、CD61、CD62p、PAC-1)的表达。结果:与正常对照组比较,CITP模型组血小板显著下降、凝血时间显著延长。醋酸泼尼松、补肾活血方干预14 d后,与CITP模型组比较,其血小板显著增加,凝血时间显著下降;其糖蛋白CD41、CD61、CD62p和PAC-1的荧光强度和阳性率显著下降。结论:补肾活血方能在一定程度上有效增加血小板数量和降低凝血时间,并且能够通过改变血小板糖蛋白的表达进而改善血小板的功能,减轻患者的出血。     

电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠骨髓及外周血CD34~+内皮祖细胞的影响

目的:观察电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠骨髓及外周血CD 34+内皮祖细胞(EPCs)数量、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)表达的影响,探讨电针动员骨髓CD 34+EPCs入血,促进脑缺血修复的机制。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组。采用线栓法制备局灶脑缺血/再灌注大鼠模型,局灶脑缺血2h后将各组分为再灌注12、24、48h3个时间点,每个时间点12只大鼠。取大鼠"百会"穴及左侧"四关"穴("合谷"/"太冲")为电针穴位,刺激时间30min,每日1次。采用神经行为学评分法评价大鼠神经功能缺损情况,流式细胞术检测骨髓及外周血CD 34+EPCs数量,Western blot法检测骨髓p-AKT蛋白的表达。结果:模型组再灌注后各时间点均有不同程度的神经功能缺损,电针可明显改善大鼠再灌注后48h神经功能评分(P0.05)。与假手术组比较,模型组各时间点骨髓及外周血CD 34+EPCs数量及骨髓p-AKT蛋白的表达明显增多(P0.01,P0.05);与模型组比较,电针组再灌注后各时间点外周血CD 34+EPCs数量及骨髓p-AKT蛋白的表达亦明显增多(P0.05,P0.01),同时电针组再灌注后12、24h骨髓CD 34+EPCs数量相对模型组明显上调(P0.05,P0.01)。结论:电针可上调局灶脑缺血/再灌注大鼠骨髓及外周血CD 34+EPCs数量,促进骨髓CD 34+EPCs动员入血,其作用可能与电针进一步激活骨髓磷脂酰肌醇-3-激酶/AKT通路相关。     

川芎嗪对免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓细胞CD34抗原表达的影响

目的：探讨川芎嗪对免疫再生障碍性贫血（再障）小鼠骨髓细胞ＣＤ３４抗原分子表达的影响。方法：建立免疫介导的再障小鼠模型，６．０Ｇｙ＾６０Ｃｏγ－射线照射和尾静脉输注淋巴细胞造成小鼠再障。分为正常组、再障组（对照组）、川芎嗪组，除正常组外均胃饲川芎嗪注射液４ｍｇ／次，１天２次，第１０天用流式细胞仪检测各组小鼠骨髓细胞膜上ＣＤ３４抗原表达量。结果：川芎嗪ＣＤ３４抗原表达量的荧光强度（７７．６±．６．５）     

参麦注射液对慢性再生障碍性贫血患者血清肿瘤坏死因子及骨髓CD34+细胞凋亡的影响

目的:探讨参麦注射液治疗慢性再生障碍性贫血(chronic aplastic anemia,CAA)的疗效及其作用机制。方法:将65例CAA患者随机分为治疗组和对照组,治疗组采用参麦注射液配合西药常规治疗,对照组单用西药治疗,治疗后进行疗效评价,并分别于治疗前后检测患者血清肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)水平,以及采用免疫磁珠分离系统(MACS)分离纯化骨髓CD₃₄⁺细胞,用DNA末端原位标记(TUNEL)技术分析骨髓CD₃₄⁺细胞原位凋亡状况。结果:治疗组总有效率为63.6%,对照组总有效率为40.6%,治疗组疗效明显优于对照组(P<0.01);治疗前,CAA患者血清TNF-α浓度、骨髓CD₃₄⁺细胞凋亡率均明显高于健康对照组(P<0.01),治疗后,治疗组血清TNF-α浓度明显降低(P<0.01),骨髓CD₃₄⁺细胞凋亡率减低(P<0.05),与对照组相比均有显著差异(P<0.05)。结论:参麦注射液治疗CAA疗效确切,其机制可能为降低CAA患者血清TNE-α浓度,减少骨髓CD₃₄⁺细胞凋亡。     

养心通脉有效部位方动员骨髓间充质干细胞归巢大鼠梗死心肌的实验研究

目的:观察养心通脉有效部位方(apr-YTF)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)归巢梗死心肌的影响。方法:将急性心肌梗死大鼠模型随机分成apr-YTF注射液、rhG-CSF注射液和PBS缓冲液3组,测量各组大鼠干预后在体心功能、心室肌瘢痕面积、瘢痕毛细血管数、心肌CD34+细胞、Brdu与cTn I双染阳性细胞数、Ⅷ因子、VEGF、bFGF、Flk-1、外周血CD34+细胞数,分析组间差异。结果:①与PBS组比较,apr-YTF组和rhG-CSF组的LVSP、LVEDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax均有显著改善,心室肌瘢痕面积显著减小,心室肌毛细血管数、心肌边缘区和外周血液CD34+染色阳性细胞数、心肌梗死边缘区中Brdu与cTn I双染阳性细胞数及Ⅷ因子、Flk-1、VEGF、bFGF的表达均显著增加(P0.01,P0.05);②与rhG-CSF组比较,apr-YTF组的LVSP显著升高,心肌组织CD34+染色阳性细胞数、心肌梗死边缘区中Brdu与cTn I双染阳性细胞数均显著增高(P0.01)。结论:apr-YTF能促使BMSCs动员入血、定向归巢并转化为心肌细胞,且优于rhG-CSF。     

双黄升白颗粒剂对白细胞减少症模型小鼠造血细胞作用的研究

目的:探讨双黄升白颗粒剂升高白细胞作用及其作用机制。方法:采用Se-137放射源照射ICR小鼠,造成白细胞减少症动物模型,对模型动物给予双黄升白颗粒剂大、中、小剂量(分别为9.2,4.6,2.3 g.kg^-1.d^-1)灌胃,并设正常对照组,模型对照组,阳性对照利可君组。对小鼠外周血象,骨髓有核细胞(BMNC),脾结节(CFU-S)计数,胸腺指数(TI),脾脏指数(SI),骨髓细胞增殖,体外培养小鼠粒单系集落形成单位(CFU-GM),骨髓CD34+细胞比例,骨髓造血微环境等进行检测。结果:双黄升白颗粒可明显升高模型小鼠的白细胞(WBC);双黄升白颗粒可升高模型小鼠的BMNC计数并促进其骨髓细胞增殖;双黄升白颗粒升高模型小鼠CFU-S计数,提高CFU-GM产率,提高骨髓CD34+细胞比例,对造血干/祖细胞增殖具促进作用;双黄升白颗粒具有保护模型小鼠骨髓造血微环境作用;双黄升白颗粒升高模型动物SI,具有一定的免疫增强作用。结论:双黄升白颗粒剂具有明显升高白细胞作用,其作用机制与促进造血细胞增殖及保护骨髓造血微环境有关。