中国部分地区产超广谱-β内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌qnrA基因的检测

目的明确我国部分地区产超广谱-β内酰胺酶（ESBL）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中qnrA基因的存在状况。方法PCR扩增产ESBL菌株，包括263株大肠埃希菌和99株肺炎克雷伯菌的qnrA基因；测序分析其基因序列。琼脂稀释法测定10种抗菌药物对qnrA基因阳性菌株的最低抑菌浓度（MIC）。接合实验和Southern杂交进行基因定位。脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析qnrA基因阳性株的同源性。结果263株大肠埃希菌中有5株检出qnrA基因，占1，9％；99株肺炎克雷伯菌中有8株检出qnrA基因，占8，1％。13株qnrA阳性株中qnrA基因均位于可接合性质粒上。13株菌株同时携带CTX—M基因（1株CTX—M-9、5株CTX—M-14和7株CTX—M-24）。qnrA基因阳性的接合菌与受体菌J53相比，环丙沙星对前者的MIC较后者提高了4～133倍。11株环丙沙星耐药株（MIC≥4mg／L）均存在GyrA亚基的83位氨基酸和（或）87位氨基酸改变，其中8株对环丙沙星高水平耐药株（MIC≥16mg／L）同时存在ParC亚基的80位氨基酸改变。2株MIC分别为4mg／L和2mg／L的菌株GyrA和ParC两亚基均未发生改变。结论肺炎克雷伯菌中qnrA基因的携带率高于大肠埃希菌。qnrA基因单独作用仅导致低水平喹诺酮类耐药，合并gyrA和（或）parC突变导致喹诺酮类高水平耐药。     

临床产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性分析及耐药基因和Ⅰ类整合子的检测

目的了解产超广谱B．内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性及相关耐药基因之间的关系。方法采用K—B琼脂扩散法检测临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对18种抗生素的耐药性,用PCR技术检测相关耐药基因和Ⅰ类整合子并用DNA序列分析确认其所产生基因型。结果检测菌株中ESBLs阳性56株,阳性率为44．4％。所有检测菌株对亚胺培南全部敏感;56株ESBLs阳性的菌株有44株扩增到TEM基因（78．6％）,SHV型阳性的有2株（3．6％）,CTX-M型阳性的有48株（85．7％）,OXA型阳性的有1株（1．79％）,intl1阳性菌株有35株（62．5％）,占未检出PER和VEB型。结论大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs较高,耐药显著,碳青霉烯类抗生素是目前治疗产ESBLs细菌最有效的药物;TEM型和CTX-M型ESBLs为我院临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的主要基因型,携带Ⅰ类整合子基因是导致细菌产ESBLs的重要原因。     

2007～2010年临床分离大肠埃希菌药物敏感性分析

目的了解临床分离大肠埃希菌对抗菌药物的敏感性,为临床治疗提供依据。方法采用微量稀释法测定1 163株临床分离大肠埃希菌的药物敏感性,测定MIC值。结果 1 163株大肠埃希菌,分离自尿液402株(占34.57%),血液228株(占19.60%),痰液197株(占16.94%)。大肠埃希菌对亚胺培南、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦的敏感率分别为98.6%、90.9%和95.3%,对阿莫西林/克拉维酸、头孢西丁、头孢他啶、替卡西林/克拉维酸的敏感率为70%～90%;对氨曲南的敏感率为54.4%,对其他抗菌药物的敏感率在50%以下。结论大肠埃希菌对不同的抗菌药物的敏感性差异较大,治疗时应根据耐药特点及菌种间的耐药性差异选择相应的药物和方案。     

单耐氧氟沙星的结核分枝杆菌耐药机制研究

目的探讨单耐氧氟沙星的结核分枝杆菌中耐药相关基因突变及外排泵基因风坦两种不同耐药机制的作用。方法从国家结核病参比实验室2007年全国耐药基线调查菌株库中挑选单耐氧氟沙星的菌株17株。采用直接测序法检测利福平耐药相关基因删似和gyrB突变情况。提取gyrA和gyrB无突变菌株的RNA后反转录并采用Real—timePCR方法检测20个药物外排泵基因的表达量，对比菌株最低抑菌浓度（MIC）试验结果，筛选可能与氧氟沙星药物外排泵的相关基因，并选用大肠埃希菌为模式生物构建表达载体，检测过表达目的外排泵蛋白的大肠埃希菌对氧氟沙星的耐药程度加以验证。结果在17株单耐氧氟沙星的菌株中，有4株（4／17）检测到gyrA突变，其中包括90位点突变1株及94位点突变3株，上述突变均表现为高浓度耐药，其MIC均不低于4μg/ml。在gyrA和gyrB未突变菌株中，通过real-timePCR检测发现在高浓度耐药的2株菌株中，Rv0933和Rv2938的转录水平显著高于其他低浓度耐药菌株，较对照株H37Rv转录水平高16倍和5倍。在对照组和转入pEASY-E1-Rv2938的大肠埃希菌中MIC均小于0．125μg／ml，而转入pEASY-E1-Rv0933的大肠埃希菌的MIC为2μg／ml。结论本研究结果显示，gyrA耐药决定区基因突变与氧氟沙星高浓度耐药相关，PstB可能是氧氟沙星特异性的药物外排泵基因，其高水平表达与氧氟沙星高浓度耐药相关。     

源自同一患者的二株血和粪便对碳青霉烯类耐药大肠埃希菌

目的 了解对碳青霉烯类抗菌药物耐药大肠埃希菌的耐药机制及与内源性感染的关系.方法 将临床分离的来源于同一患者血培养和粪便培养的大肠埃希菌2株,采用浓度梯度法(E-test)测定亚胺培南、美罗培南的最低抑菌浓度(MIC)值,纸片扩散法测定其他16种抗菌药物的敏感性,等电聚焦电泳(IEF)检测所产生的β-内酰胺酶,PCR及序列分析确定其基因型,接合试验和Southern杂交进行耐药基因定位,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析2株菌株的同源性.结果 亚胺培南、美罗培南对2株大肠埃希菌的MIC值均≥32 mg/L,均产KPC-2(等电点值为6.7)和SHV-12(等电点值为8.2).blaKPC-2基因位于可转移的54 kb质粒上.PFGE显示2株大肠埃希菌为同一克隆株.结论 2株大肠埃希菌的耐药性及染色体DNA酶切图谱均一致,该患者大肠埃希菌败血症极可能是肠道的大肠埃希菌移位引起的内源性感染.     

基层医院大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯杆菌的分布及耐药分析

目的探讨基层医院大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯杆菌的分布和耐药性。方法采用常规方法进行菌株的分离和鉴定,根据美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）相关文件判断结果。结果246株大肠埃希氏菌和152株肺炎克雷伯杆菌对常用抗菌药物产生了不同的耐药性,大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯杆菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLS）率分别为30．8％和18．4％,大肠埃希氏菌对亚胺培南的耐药率为0．4％,对氨苄西林的耐药率为78．0％;而肺炎克雷伯杆菌对亚胺培南的耐药率为0．0％,对氨苄西林的耐药率达96．1％。结论基层医院大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯杆菌耐药性已十分严重,应开展耐药性监测。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的分布及耐药性分析

目的了解医院产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的分布及耐药性特点。方法对我院2004年7月～2006年7月间各类临床标本分离出的大肠埃希菌307株和肺炎克雷伯菌202株，用CLSI／NCCLS推荐的表型确证法检测其ESBLs，采用K-B纸片琼脂扩散法进行药敏试验，分析产ESBLs菌株的分布及耐药性。结果大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLS菌株的检出率分别为38．4％（118／307）和31．7％（64／202），主要分布于尿和痰、咽拭子中，病区主要集中于肺科、神经外科、感染科、泌尿外科、ICU室。产ESBLs菌株对亚胺培南和美罗培南呈高度敏感，对哌托西林／三唑巴坦、头孢哌酮／舒巴坦、头孢西丁耐药率较低，对其他抗菌药物均出现较高耐药。结论产ESBLS的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分布在不同病区的不同标本中，碳青霉烯类抗生素亚胺培南和美罗培南是治疗产ESBLS菌株感染的较佳药物。     

96株大肠埃希菌耐药性及其产ESBLs、AmpC酶菌株基因型检测

目的 了解大肠埃希菌耐药现状及其及产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和AmpCβ-内酰胺酶（AmpC酶）菌株基因型,以指导临床医师合理使用抗菌药物。方法自本院尿路感染患者标本中分离大肠埃希菌96株,采用确证试验和改良三维试验检测其ESBLs、AmpC酶表达情况,用K-B法测定其对亚胺培南等16种抗菌药物的敏感性,用PCR法检测TEM、SHV、PER、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX—M-3群、DHA和ACT-1基因型分布情况,用接合转移试验了解耐药基因转移方式。结果96株大肠埃希菌单产ESBLs30株,同时产ESBLs和AmpC酶4株,单产AmpC酶2株;产ESBLs大肠埃希菌对氨苄西林、头孢唑啉、头孢呋辛、头孢噻肟四种抗生素耐药率达到100％,而对左氧氟沙星、复方新诺明和呋喃妥因的耐药率亦〉80％,对亚胺培南和美罗培南均敏感;ESBLs基因型以CTX—M和TEM型为主,AmpC酶基因为DHA型,两酶能通过接合转移方式将质粒携带的耐药性传递至受体菌。结论大肠埃希菌所致感染对碳青霉烯类药物较为敏感;临床应及时了解本地区产ESBLs、AmpC酶大肠埃希菌的耐药表型和基因型,以指导临床合理使用抗生素、延缓细菌耐药性产生、控制耐药菌株播散和流行。     

多药耐药大肠埃希菌老年患者分离株抗菌制剂11种外排泵基因研究

目的了解多药耐药大肠埃希菌中外排泵基因的存在情况。方法微量稀释法检测耐药菌株的药敏结果,采用聚合酶链反应（PCR）扩增法,检测11种抗菌制剂外排泵基因：emrB、emrD、emrE、mdfA、sugE、mdtI、tehA、oqxA、qacE△1、qacEs、mr-2等11种抗菌制剂外排泵基因,扩增产物纯化后基因测序。结果大肠埃希菌对阿米卡星耐药率为60%,对复方新诺明耐药率为95%,对第三代头孢菌素耐药率为100%（均为产ESBLs菌株）,外排泵基因检出率分别为emrB 95.0%、emrD 75.0%e、mrE 50.0%、mdfA 80.0%、sugE 70.0%、mdtI 80.0%、qacE△1 80.0%、tehA 80.0%、oqxA 15.0%,qacE、smr-2基因均未检测到,最少者检出1种基因,最多1株检出9种基因。结论本组分离的大肠埃希菌对β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、磺胺类、氯霉素等抗菌药物呈多重耐药,可能与细菌携带多种抗菌制剂（包括灭菌剂、消毒剂、抗菌药物等）外排泵基因相关。     

2019—2020年酒泉市致泻大肠埃希氏菌分子分型和耐药性分析

目的 了解2019—2020年甘肃省酒泉市腹泻病例粪便标本中致泻大肠埃希氏菌（DEC）的耐药情况、毒力基因型别以及时间、人群分布情况和分子分型特征,为DEC监测、暴发预警以及耐药抗生素规避使用提供依据。方法 收集2019—2020年酒泉市哨点医院送检的腹泻患者粪便标本,分离疑似致泻大肠埃希氏菌株,采用多重PCR和毛细管凝胶电泳相结合的方法进行毒力基因分型、MIC微量肉汤稀释法药敏试验及PFGE脉冲场凝胶电泳分子分型试验。结果腹泻患者粪便标本219份,检出致泻大肠埃希氏菌27株、检出率12.33%,其中肠聚集性埃希氏菌20株、占74.07%,肠致病性埃希氏菌4株、占14.81%,肠产毒性埃希氏菌3株、占11.11%;以夏季发病为主、占74.08%;人群普遍易感,以19岁～组和0岁～组人群为主,分别占44.44%和29.63%;对氨苄西林和四环素耐药分别占84.19%和74.07%,对萘啶酸、头孢唑啉和复方磺胺耐药分别占66.67%,66.67%和62.96%;27株致泻性大肠埃希氏菌分为27个型别。结论 酒泉市腹泻患者中致泻大肠埃希氏菌PFGE指纹图谱表现出多态性,感染型别以EAEC为主...     

Investigation of plasmid-mediated quinolone resistance among isolates obtained in a Turkish intensive care unit

The aim of this study was to search for three plasmid-encoded, quinolone-resistant determinants: qnrA, qnrB, and qnrS. Thus, 460 Gram-negative strains belonging to 11 different genera (clinical, 347; non-clinical, i.e., from a rectal swab, 113), of which 40% were ciprofloxacin-resistant, were recovered from patients in an intensive care unit at the Istanbul Medical Faculty, Turkey, in the years 2000 and 2006. PCR with primers specific for qnrA, qnrB, and qnrS genes and primers specific for a series of ESBL genes were used. One qnrB1 and two qnrS1 genes were identified in three ESBL-positive isolates, whereas no qnrA-positive strain was found. The qnrB1 determinant was identified in a ciprofloxacin-susceptible Enterobacter cloacae isolate that expressed CTX-M-15 beta-lactamase. Two qnrS1-determinants were found in two ciprofloxacin-susceptible E. cloacae isolates that were clonally related, but that had been isolated from different patients; both of these isolates expressed the same ESBL, CTX-M-3. This study detected the first plasmid-mediated quinolone-resistance determinants qnrB1 and qnrS1, among clinical strains obtained from patients in Turkey.     

Prevalence of plasmid-mediated quinolone resistance in Escherichia coli isolates in Wenzhou, Southern China, 2002-2008

A total of 514 consecutive clinical Escherichia coli isolates, irrespective of resistance background, were collected in the period 2002-2008 in Wenzhou, southern China, to investigate the prevalence of plasmid-mediated quinolone resistance (PMQR). The dominant PMQR gene was aac(6')-Ib-cr, followed by qnr, whereas qepA was absent. A total of 253 (49.2%) of these isolates were aac(6')-Ib-positive. Subsequently, 134 of these isolates were sequenced and 42 (31.3%) found to harbor aac(6')-Ib-cr, 18 to harbor new aac(6')-Ib mutants, and 74 to harbor wild-type aac(6')-Ib. The genes qnrA, qnrB, and qnrS were found in 2 (0.4%), 6 (1.2%), and 14 (2.7%) of 514 isolates, respectively, with 2 isolates co-harboring qnrB and qnrS genes. Sequencing allowed us to identify qnrA1, qnrB4, qnrB6, and qnrS1 in 20 qnr-positive isolates, with qnrS1 being the most prevalent allele. The genes qnrC and qnrD were not found in any isolates. Interestingly, 35% of qnr-positive isolates and 16.7% of aac(6')-Ib-cr-positive isolates were susceptible to ciprofloxacin. PMQR genes are therefore present in both quinolone-resistant and -susceptible isolates and can also be transferred by conjugation experiments, thus suggesting a likely future increase in quinolone resistance.     

Epidemiology of plasmid-mediated quinolone resistance in salmonella enterica serovar typhimurium isolates from food-producing animals in Japan

A total of 225 isolates of Salmonella enterica serovar Typhimurium from food-producing animals collected between 2003 and 2007 were examined for the prevalence of plasmid-mediated quinolone resistance (PMQR) determinants, namely qnrA, qnrB, qnrC, qnrD, qnrS, qepA and aac(6')Ib-cr, in Japan. Two isolates (0.8%) of S. Typhimurium DT104 from different dairy cows on a single farm in 2006 and 2007 were found to have qnrS1 on a plasmid of approximately 9.6-kbp. None of the S. Typhimurium isolates had qnrA, qnrB, qnrC, qnrD, qepA and acc(6')-Ib-cr. Currently in Japan, the prevalence of the PMQR genes among S. Typhimurium isolates from food animals may remain low or restricted. The PFGE profile of two S. Typhimurium DT104 isolates without qnrS1 on the farm in 2005 had an identical PFGE profile to those of two S. Typhimurium DT104 isolates with qnrS1. The PFGE analysis suggested that the already existing S. Typhimurium DT104 on the farm fortuitously acquired the qnrS1 plasmid.     

qnrA prevalence in extended-spectrum beta-lactamase-positive Enterobacteriaceae isolates from Turkey

Quinolone resistance mostly originates from chromosomal mutations. In recent years, however, plasmid-mediated quinolone resistance has been reported in several parts of the world. Plasmid-borne qnrA, qnrB, or qnrS genes are responsible for this kind of resistance. Little is known about the diversity, type, and species range of the qnr genes in Turkey. We screened qnrA, qnrB, and qnrS genes in quinolone-resistant blood culture isolates collected from six different medical centers in Turkey which produced extended-spectrum beta-lactamases (ESBLs). A total of 78 ESBL-positive isolates were enrolled in this study. Of these, 37 (47.4%) were nalidixic-acid resistant or intermediate. qnrA was found on large plasmids isolated from five (6.4%) of the Nal(I/R) isolates. In three of these, the same plasmid also carried bla(CTX-M). Four of the qnrA-positive isolates were Klebsiella pneumoniae from Dokuz Eylul University Hospital, Izmir, and the fifth isolate was Escherichia coli from Istanbul University Hospital. Two of the isolates from Izmir were found by enterobacterial repetitive interegenic consensus sequence-PCR to be clonally related. This is the first report on the qnrA prevalence among ESBL-positive blood culture isolates collected from different regions in Turkey. According to our results, plasmid-mediated resistance is a potential problem for the spread of quinolone resistance, and this mechanism could be emerging strongly among the ESBL-positive Enterobacteriaceae in Turkey.     

磺胺类药物对结核分枝杆菌的体外抑菌作用及与其他抗结核药物相互作用的研究

目的 评价磺胺甲噁唑（sulfamethoxazole,SMX）和甲氧苄啶（trimethoprim,TMP）对结核分枝杆菌的体外抑菌作用,并探讨SMX与其他抗结核药物的体外相互作用。 方法 采用微孔板Alamar blue法测定TMP联合SMX对121株结核分枝杆菌临床株的最低抑菌浓度(MIC)。同时采用分层整群抽样设计方法,抽取18株结核分枝杆菌临床分离株观察SMX在与利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇、卡那霉素、氧氟沙星、利福布丁联用时MIC值的影响,以H37Rv为对照,通过计算分级抑菌浓度指数（FICI）,观察SMX与其他抗结核药物之间是否存在协同作用。采用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,MDR菌株、非MDR菌株、敏感菌株间MIC的比较采用非参数秩和检验,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果90.08%(109/121)的结核分枝杆菌临床分离株可以被MIC为1/19（TMP∶SMX）μg/ml的复合制剂抑制生长, 5株菌株的“TMP∶SMX＝1∶19”的MIC为2/38 μg/ml,仅有7株“TMP∶SMX＝1∶19”的MIC≥2/38μg/ml,包括敏感株5株,MDR菌株2株。“TMP∶SMX＝1∶19”对敏感株、MDR菌株及非MDR菌株MIC间的差异没有统计学意义（χ²=0.111,P=0.946)。对于H37Rv,SMX与其他抗结核药联合用药后,除了利福布丁表现出协同作用（FICI为0.281）外,其余药物均表现为无关作用。对18株临床分离株,SMX与其他抗结核药联合用药后,77.78%（14/18）表现为与利福布丁协同,FICI范围为0.205～1.063。 结论TMP联合SMX有较好的抗结核分枝杆菌活性,并且这种活性与细菌对其他药物是否耐药无关;SMX与其他常用抗结核药的相互作用主要表现为无关。     

利福平和利福布汀对结核分枝杆菌交叉耐药率的初步探讨

目的通过对结核分枝杆菌MIC的测定,初步探讨利福平和利福布汀两药间的交叉耐药率。方法利用Alarmar Blue法(Alamar blue susceptibility test,MABA)检测116株结核分枝杆菌临床分离株对利福平和利福布汀的体外MIC。结果 36株利福平敏感株均对利福布汀敏感;80株利福平耐药株中有58株对利福布汀也同时耐药(对利福布汀的MIC>0.5 ug/ml),利福平与利福布汀间的交叉耐药率为72.5%(58/80);同时对利福平和利福布汀耐药的菌株对两种药物的耐药程度呈现正相关。结论利福布汀较利福平有更好的体外抗菌活性。对于利福平耐药而利福布汀敏感的患者仍可选择利福布汀作为联合化疗的有效药物之一。     

临床分离志贺菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测

目的 了解临床分离志贺菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的种类、分布以及对抗菌药物的耐药性。方法 PCR法检测137株志贺菌的qnr、aac(6′)- Ib-cr和qepA基因,对阳性扩增产物进行测序分析并对阳性菌株做接合试验,采用琼脂倍比稀释法测定志贺菌、受体菌和接合子对喹诺酮类及其他抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)。PCR...     

福氏志贺菌中质粒介导喹诺酮类耐药qnr基因的检测

目的 了解福氏志贺菌中qnr基因的分布.方法 采用PCR法检测26株福氏志贺菌的qnr基因并对阳性扩增产物进行测序分析,采用琼脂稀释法测定qnr基因阳性菌株对多种抗菌药物的敏感性,采用随机引物PCR法(ERIC-PCR)进行qnr基因阳性菌株同源性检测.结果 26株福氏志贺菌中,qnrAl、qnrS1和qnrS2基因的阳性率分别为30.8%、11.5%和3.8%;qnr基因阳性菌株对氯霉素、奈啶酸耐药.对诺氟沙星、哌拉西林耐药或中介;部分菌株对头孢唑啉、阿米卡星、第二、三代头孢菌素耐药.ERIC-PCR电泳图谱型显示.2株qnrAl基因阳性菌株属于同一谱型.结论 福氏志贺菌中存在qnr基因阳性菌株,部分菌株间存在克隆传播现象,临床应加强检测和监测.     

运用PCR方法检测解脲脲原体生物群在临床实际应用的探讨

目的探讨用聚合酶链反应（PCR）检测解脲脲原体（Uu）生物群，在临床实际运用的可行性与必要性。方法采用微量肉汤稀释法测定uu体外抗菌药物敏感性，并以多条带抗原（MB—Ag）基因为靶位，设计分群引物，对uu菌株进行生物分群检测。结果124株uu临床菌株中，男性parvo生物群占36-84％（14／38），T960生物群占63．16％（24／38），未检测到两群混合的情况；女性parvo生物群占74．41％（64／86），T960生物群占23．26％（20／86），两群都检测到的占1．62％（2／86）。Uu两大生物群对四环素、多西环素、洛美沙星的耐药率无显著性差异（P值分别为0．1558、1．0000、0．3801），但对红霉素，阿齐霉素耐药率存在显著性差异（P值分别为0．0008和〈0．0001）。结论建议临床工作中运用PCR方法检测Uu生物群，便于指导临床治疗。