两种低温保护剂对皮肤储存后α-辅肌动蛋白表达及活力的影响

目的比较两种不同低温保护剂对皮肤组织α-辅肌动蛋白（α-actinin）低温保存后表达的影响,为寻求皮肤组织低温保护剂的最佳配方提供实验依据。方法新鲜成人皮肤组织分为3组,新鲜对照组和海藻糖-二甲基亚砜（T—D）组、二甲基亚砜-丙二醇（D-P）低温保护剂保存组,-196％液氮冻存7d、14d复温,免疫组织化学染色对各组间皮肤进行比较。同时对各组皮片进行氧耗量测定。结果0．5mol／L海藻糖-二甲基亚砜能够很好保护皮肤组织,α-actinin的表达量与新鲜皮肤组相似。结论海藻糖与二甲基亚砜联合应用对皮肤组织α-actinin的保护作用优于传统组。     

海藻糖对低温储存皮肤β1 integrin及活力的影响

目的:比较海藻糖与传统低温保护剂对皮肤组织β1整合素(β1 integrin)低温保存后表达的影响,揭示海藻糖的低温抗冻机制。方法:新鲜成人皮肤组织分为2组,海藻糖-二甲基亚砜(T-D)、二甲基亚砜-丙二醇(D-P)作为低温保护剂保存,-196℃液氮冻存7 d、14 d复温,设新鲜组为对照组,免疫组织化学染色对各组间皮肤进行比较。RT-PCR方法检查β1 integrin基因表达水平。采用皮肤内琥珀酸脱氢酶的定量测定法(SDH)检测两种低温保护剂组合对皮肤活力影响,并通过透射电镜观察不同低温保护剂对皮肤基底膜变化的影响。结果:结果显示T-D能够很好保护皮肤组织,T-D 7 d组β1 integrin的基因表达量(0.769±0.052)与新鲜皮肤组(0.789±0.082)相似。琥珀酸脱氢酶(18.360±3.060)与新鲜组(20.517±1.976)无明显差异。结论:T-D对基底膜有优势保护作用,海藻糖对β1 integrin的保护作用在海藻糖的低温抗冻机制中发挥重要作用。     

海藻糖对低温储存皮肤β-actin的mRNA转录水平及其蛋白表达的影响

目的:观察新型低温保护剂(cryoprotectant,CPA)海藻糖(trehalose)对皮肤骨架蛋白β-肌动蛋白(β-actin)表达及mRNA转录水平的调节作用,以了解在传统低温保护剂中添加海藻糖后是否优于单纯传统低温保护剂的作用。方法:实验将新鲜成人皮肤分为4组,分别经海藻糖-二甲基亚砜(T-D)、二甲基亚砜-丙二醇(D-P)、二甲基亚砜-去血清角质细胞培养液(D-K)、DMEM作为低温保护剂保存,-196℃液氮冻存7 d、14 d复温,设新鲜皮肤为对照组。采用免疫组织化学染色及W estern b lot方法观察β-actin蛋白表达、采用RT-PCR方法对不同低温保护剂保存后皮肤的β-actin基因水平进行深入的研究。结果:T-D组β-actin蛋白表达及基因转录与新鲜组相似(P>0.05),D-P作用其次,其余两组与新鲜组对比均降低明显(P<0.05)。结论:传统低温保护剂中添加海藻糖后对低温储存皮肤β-actin表达的保护作用优于单纯传统低温保护剂。     

海藻糖对脂肪细胞冻存后存活率的影响

目的：探讨海藻糖作为冻存保护剂对脂肪组织冻存后存活率的影响。方法：抽吸成年女性腹部或大腿脂 肪颗粒,经离心纯化后,分3组：海藻糖组、胎牛血清+10%DMSO组、生理盐水组。于–196 ℃下冻存3个月后,用HE 染色、葡萄糖转移法、肌酸激酶法检测脂肪细胞存活情况。结果：海藻糖组及胎牛血清+10%DMSO组脂肪细胞活性 均高于生理盐水组(P<0.05);海藻糖组与胎牛血清+10%DMSO组脂肪细胞活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论：海 藻糖作为冻存保护剂能明显保持冷冻脂肪细胞活性,脂肪组织冷冻保存3个月后可用于临床移植。     

深低温冻存对SLE患者外周血CD34+ 阳性细胞活性的影响

目的探讨深低温冻存对系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血CD34^＋细胞活性的影响。方法ClinMACS磁性分选系统分选CD34^＋细胞。采用5％二甲基亚砜,6％羟乙基淀粉和4％人血白蛋白作冷冻保护剂,-80℃直接冻存。观察不同时相复温后的细胞台盼兰拒染率、CFU—GM计数以及移植后造血恢复时间。结果SLE患者与正常人脐血CD34^＋细胞冻存后1～90d,细胞活性无明显差异。SLE患者与非自身免疫性疾病患者同样方法冻存造血干细胞,移植后造血恢复特征相似。结论-80℃深低温保存对SLE患者造血干细胞活性无影响。     

﹣80°C冰箱长期冻存外周血造血干细胞研究

目的对外周血造血干细胞活性在深低温（-80℃）下保存3年的效果进行评价。方法对30例经MCS＋血细胞分离机采集所得的外周血造血干细胞加入细胞冻存保护剂分别予以-196℃液氮冻存和-80℃冰箱深低温冻存,并检测和比较冻存前后单个核细胞（mononuclear cells,MNC）、CD34＋细胞的计数及细胞回收率,细胞活性。结果 -80℃冰箱冻存组MNC、CD34＋细胞冻存3年与冻存前比较差异均无统计学意义冻存3年后MNC回收率与冻存1年后比较差异无统计学意义。3年后-80℃冰箱冻存组干细胞与-196℃液氮冻存组比较,差异无统计学意义。结论 -80℃冰箱深低温保存法快速、简便、安全、费用低廉,可有效用于外周血造血干细胞长期保存。     

一种伊氏锥虫低温冷冻保种新方法研究

目的：探索一种简便易行的伊氏锥虫（Trypanosoma evansi）低温冷冻保种新方法.方法：感染伊氏锥虫小鼠的肝和脾组织分别冻存于-20 ℃和-80 ℃低温冰箱7、10、60 d,观察复苏后伊氏锥虫的形态、活力及对小鼠的感染力.结果：伊氏锥虫在-20 ℃和-80 ℃温度下冻存7、10、60 d后,光镜下形态与新鲜组织内虫体一致.随着冻存时间延长虫体活力稍有下降.肝、脾组织-20 ℃或-80 ℃冻存60 d后虫体活力分别为74.47%,74.43%和74.62%,74.96%,差异无统计学意义（P〉0.05）.经-20 ℃和-80 ℃冷藏保存7、10 d后接种,小鼠虫血症出现时间均为5 d,保存60 d者为7 d.两种温度,不同时间保存虫体复苏后对小鼠感染成功率和致死率均为100%.结论：不加保护剂直接冷冻受染小鼠肝或脾组织保存伊氏锥虫,不失为一种经济、便捷的保种方法.     

成年大鼠神经干细胞的冷冻复苏及生物学特性观察

目的 建立成年大鼠神经干细胞冷冻复苏方法，观察冻存复苏后神经干细胞的活力及生物学特性。方法 采用10％BSA 8％DMSO做冷冻保护剂，于液氮中冻存；采用细胞培养和免疫细胞化学方法观察冻存复苏后细胞的活力、形态、分化能力及特异性抗原表达。结果 不同的冻存时间、细胞代数对冻存后细胞的存活率没有明显影响；冻存复苏的神经干细胞不仅有较高的存活率，而且仍保持其原有的生物学特性。结论 成年大鼠神经干细胞的冻存并不影响其活力及原有的生物学特性。     

复方壳多糖组织工程皮肤活力测定的研究

目的介绍一种快捷、简便、灵敏和准确的测定组织工程皮肤活力的方法。方法采用SYTO 13和溴化乙锭(ethid-ium bromide,EB)2种荧光核酸染色剂对冻存后组织工程皮肤进行染色,通过流式细胞计数仪及荧光显微镜下观察等方法计算活细胞。结果4℃条件下,组织工程皮肤冻存7d后表皮活力值为未冻存时的62.46%;冻存7d后真皮活力值为未冻存时的54.21%。结论SYTO/EB双重核酸染色法是测定组织工程皮肤活力的既简便又准确的方法。     

二甲基亚砜联合羟乙基淀粉的非程控降温法低温冻存脐血来源不成熟树突状细胞的实验研究

目的：联合使用二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）和羟乙基淀粉（hydroxyethyl starch,HES）作为冷冻保护剂并使用非程控降温冷冻技术,研究脐血来源的不成熟树突状细胞低温冻存前后所表现的生物特性,为不成熟树突状细胞的临床应用提供保存方法.方法：GM-CSF（granulocyte-macrophage clonoy-stimulatingfactor）和IL-4（interleukin-4）体外诱导单个核细胞产生不成熟树突状细胞,5%DMSO＋6%HES作为保护剂,-80℃冰箱降温,-196℃保存,37～40℃水浴复温,检测方法：台盼蓝拒染回收率,观察细胞形态,鉴定免疫表型,进行混合淋巴细胞反应,观察其诱导未致敏T淋巴细胞增殖情况.结果：冻存不成熟树突状细胞的台盼蓝拒染回收率为88.6%,其细胞形态,免疫表型及刺激未致敏T淋巴细胞的能力与新鲜DC相比无显著性差异.结论：冻存不成熟树突状细胞具有DC的显著特征,其细胞免疫表型和细胞功能实验上仍然保持了不成熟特征,联合使用二甲基亚砜和羟乙基淀粉作为冷冻保护剂对不成熟树突状细胞有良好的保护作用.     

Stabilization of hog cholera virus by dimethyl sulfoxide.

The stability of hog cholera virus through five freeze-thaw cycles in the presence and absence of dimethyl sulfoxide was studied. In the absence of dimethyl sulfoxide the hog cholera virus titer was reduced 52% to 91% following successive freezing and thawing cycles. However, when dimethyl sulfoxide was added to the viral suspension the virus titer appeared to remain the same after the same number of freezing and thawing cycles.     

海藻糖/二甲基亚砜对冷冻保存鼠皮Ca^2＋-Mg^2＋-ATPase的活性保护

目的：探讨海藻糖/二甲基亚砜对冷冻保存皮Ca^2＋-Mg^2＋-ATPase活性的保护作用。方法：采用Reinila方法测定冷冻保存皮Ca^2＋-Mg^2＋-ATPase活性。结果：显示鼠皮Ca^2＋-Mg^2＋-ATPase活性随海藻糖冷冻保护液浸泡时间的延长逐渐升高,在30 min时达到最高,然后逐渐下降,至50 min以后下降到60%,低于无冷冻液浸泡组。结论：海藻糖冷冻保护液浸泡30、40 min对鼠皮Ca^2＋-Mg^2＋-ATPase活性具有保护作用。     

Thermal Shock Resistance of Skin Tissue

Understanding the mechanisms of skin behavior under thermal shock is crucial for medical treatments. However, no reasonable criteria are available for the maximum thermal loadings that skin tissue can survive. To address this, in this paper we analyzed thermal and neural behaviors of skin tissue exposed to thermal loadings by introducing the thermal shock resistance (a parameter widely used for engineering materials) of skin for the first time. Skin thermal shock resistance was analyzed according to two distinct criteria: (1) maximum local temperature at epidermis-dermis (ED) interface defined as the thermal threshold of skin thermal pain; (2) maximum thermal damage at ED interface defined as the first degree burn where irreversible skin damage occurs. Numerical simulation was performed and the results show that the thermal shock resistance of skin tissue depends on the Biot number (which characterizes the features of thermal shock). These results indicate that skin thermal shock resistance can be used as an efficient tool to predict thermal damage (e.g., burn) and the corresponding pain level induced by noxious thermal loadings (e.g., clinical thermal treatments).     

The effect of dimethyl sulfoxide on activation of the major immediate early promoter of human cytomegalovirus

Ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ（ＨＣＭＶ）ｉｓｈｉｇｈｌｙｐｒｅｖａｌｅｎｔｉｎｔｈｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．Ｉｍｍｕｎｏｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅｄｐａｔｉｅｎｔｓ（ｓｕｃｈａｓＡＩＤＳｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄａｌｏｇｒａｆｔｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ）...     

大面积皮肤软组织挫裂伤反鼓取皮筛状移植的临床疗效

目的探讨反鼓取皮筛状移植治疗大面积皮肤软组织挫裂伤的临床效果。方法将13例大面积皮肤软组织挫裂伤患者的皮肤组织瓣用鼓式取皮机反鼓切取制成筛状中厚自体皮,立即封闭创面,观察术后恢复情况并进行随访。结果13例患者中11例Ⅰ期愈合,1例有少量点状皮肤坏死,换药2周后愈合,1例少量补充(0.5%)植皮愈合。移植皮肤质地2～3个月后柔软,功能基本恢复。结论大面积皮肤软组织挫裂伤的皮瓣反鼓取皮筛状移植操作相对方便,省时省力,节省皮源,成活率高,功能与外形恢复较满意。     

一种大鼠烫伤后皮肤移植模型的建立

目的建立一个模拟临床深Ⅱ度烧伤后3种不同厚度皮肤移植的动物模型。方法在每只大鼠背部制作两处相当于体表面积(TBSA)1%的深Ⅱ度烫伤,每一处切痂后随机行刃厚、中厚、全厚三种厚度自体皮肤中的一种移植,每组皮片5个标本, 移植后采用3种方法固定皮片,组织学观察、测量三种厚度皮片的厚度,观察皮片的成活率、自身皮源是否充足、固定方法的有效性及移植皮片可取材的次数。结果刃厚、中厚、全厚皮片厚度分别为(0.60±0.04),(0.95±0.06),(1.25±0.06)mm,组间有显著差别(P<0.05),组织学观察与人的相对应的三种皮片间差别类似,成活率分别为0.98±0.02,0.97±0.02,0.97±0.01,组间无显著差别(P>0.05);自体皮肤移植所需皮源充足,皮片移植固定方法有效,可以满足多于5次以上的取材。结论这一模型能够模拟临床深Ⅱ度烧伤后外科手术治疗过程,操作简便、结果稳定。     

低位小腿带蒂皮瓣修复前足软组织缺损

［摘要］目的　观察应用低位小腿带蒂皮瓣瓣修复前足皮肤软组织缺损的疗效．方法　应用低位腓肠神经营养动脉皮瓣与外踝上穿支皮瓣修复足部远端皮肤软组织缺损16例．结果　所有病例皮瓣均成活,腓肠神经营养动脉皮瓣有２例出现小部分皮缘坏死,二期行坏死组织清创及换药愈合．随访16例,随访3～16个月,2例轻度肿胀,1例返院行皮瓣修薄术;14例步行走如常,2例微跛,与患者前足损伤部分组织缺损有关．采用皮瓣修复前足部损伤,可以最大限度地挽救肢体功能,减少病残率．结论　低旋转点带蒂皮瓣是一种手术简单易行,能以较小的供瓣区代价、美观有效的修复前足部皮肤软组织缺损的手术方法．     

大鼠皮脸移植后ICAM—1和LFA—1与排异反应的关系

目的 探讨细胞粘附分子和皮肤移植后排异反应之间的关系。方法 用HE及免疫组化方法观察20例大鼠Ⅲ度烫伤异体－自体皮肤混合移植和15例同种大鼠大张异体皮肤移植组织在移植后4－5，7，14，21和28d时细胞粘附分子ICAM－1和LFA－1的表达情况。结果 大鼠Ⅲ度烫伤后异体－自体皮肤混合移植组织中LFA－1^ 淋巴细胞和ICAM－1^ 细胞的表达均低于同种大张异体皮肤移植组织，与排异程度相一致，分别在移植后7和14d时差异显著（P＜0.05）。结论 ICAM－1／LFA－1不是主要促使皮肤混合移植排异反应中T细胞活化的共刺激信号，但ICAM－1^ 细胞和LFA－1^ 淋巴细胞在介导同种大张异体皮移植排异反应中起主要作用。     

冷冻预处理温度对胎兔许旺细胞免疫原性的影响

目的探讨不同维持温度冷冻预处理超深低温保存对胎兔许旺细胞免疫原性的影响。方法设未冷冻处理细胞为对照组,实验组细胞设计冷冻维持温度为-30℃,-35℃,-40℃,-45℃,-50℃,-55℃,-60℃,-65℃,-70℃,10%二甲基亚砜（DMSO）为低温保护剂,对胎兔许旺细胞进行冷冻预处理,液氮中保存48h,复温,培养48h后培养液中加入IFN-γ（100U/ml）继续培养72h,流式细胞仪检测许旺细胞MHC-Ⅱ分子的表达率。结果流式细胞仪检测显示各实验组-30℃至-70℃许旺细胞MHC-Ⅱ分子的表达率依次分别是：7.59±0.91,10.43±0.90,14.35±0.73,16.80±0.73,15.41±0.71,14.50±0.73,10.92±0.89,8.36±0.68和5.26±0.76,对照组为35.98±1.06,统计学显示实验组MHC-Ⅱ表达率和对照组之间有显著性差异（P〈0.01）。结论不同维持温度冷冻预处理超深低温保存能降低胎兔许旺细胞的免疫原性。     

羽调音乐对大学生恐惧情绪的缓解作用

目的 探讨羽调音乐对恐惧情绪的缓解作用.方法 招募72名大学生通过观看恐怖影片片断诱发恐惧情绪,后听音乐或休息,分别比较两者的生理指标、主观体验指标间的差异.结果 当被试产生恐惧情绪后,与安静休息相比[分别为(0.96±1.64)1/Ω,(0.85±1.73)min-1,(4.48±43.54)μV,(-5±15.37)min-1],听羽调音乐引起皮肤电阻、呼吸频率、肌电、心率[分别为(2.04±2.22)1/Ω,(0.09±1.79)min-1,(8.47±26.24) μV,(1.57±20.88)min-1]更大的下降,差异有显著性 ( P <0.01,P <0.01,P <0.01,P <0.05).当被试产生恐惧情绪后,与安静休息相比[分别为(-0.37±2.71)μV,(0.13±1.16)℃],听羽调音乐引起血容波幅、指温[分别为(-0.53±3.8)μV,(-0.02±0.87)℃]更大的上升,差异无显著性( P ＞0.05,P ＞0.05).结论 听羽调音乐相比安静休息更能促进恐惧情绪的恢复,降低交感神经系统的兴奋性,提高副交感神经的功能,且提升个体愉快和平静等正性情绪体验和认知.