新法制备动脉脱细胞基质的实验研究

目的 建立一种新的动脉血管脱细胞基质制备方法.方法 取犬动脉,应用自行设计的胰酶、SDS和反复冻融的多步骤法制备犬动脉脱细胞基质.电镜、病理及力学检测脱细胞效果及力学特性.将猪内皮祖细胞种植于脱细胞基质,构建组织工程血管并移植到骨髓供体猪颈动脉或肺动脉.结果 应用胰酶消化、SDS漂洗及反复冻融处理后,保持了犬动脉的管形,细胞成分完全去除,最大断裂负荷、拉伸长度与自体动脉类似.种植内皮祖细胞后形成完整的内皮细胞层.移植到颈动脉后出现狭窄、堵塞.移植到肺动脉后血管通畅.结论 胰酶、SDS和反复冻融结合制备血管脱细胞基质,能够完全去除细胞成分,保留血管支架结构.     

Experimental studies on precartilaginous stem cells cultured withβ-tricalcium phosphate scaffold in vitro

目的 观察免疫磁珠分选的骨骺干细胞(PSCs)诱导后向软骨特性方向分化并与多孔β-磷酸三钙(β-TCP)材料复合体外培养,探讨其构建组织工程化骺板的可行性.方法 免疫磁珠分选系统分离纯化PSCs体外培养并用免疫细胞化学方法对其进行鉴定,诱导其向软骨细胞特性方向分化,免疫荧光染色及甲苯胺兰染色检测诱导后细胞Ⅱ型胶原及软骨特征基质表达情况.诱导后的PSCs与多孔β-磷酸三钙支架复合培养后扫描电镜观察其粘附增殖及形态学改变.结果 免疫磁珠系统分选的PSCs体外培养增殖迅速,阳性细胞率超过90％,诱导后的PSCsⅡ型胶原免疫荧光染色及甲苯胺兰染色阳性.细胞接种支架后在多孔β-磷酸三钙支架表面生长增殖良好并分泌细胞外基质.结论 免疫磁珠分选系统分离的PSCs经诱导后向软骨细胞功能方向分化,与多孔β-磷酸三钙支架复合有望构建组织工程化骺板.     

布地奈德对慢性支气管哮喘小鼠肺组织HIF-1α和VEGF表达及气道重塑的影响

目的：研究布地奈德对慢性哮喘小鼠缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子(VEGF)表达的调控和对血管生成、气道重塑的影响。方法：30只雌性BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,每组10只。卵清蛋白（OVA）激发试验建立哮喘小鼠模型,治疗组从第28天开始每日在OVA激发前1 h雾化吸入布地奈德100 μg/kg,对照组以PBS代替OVA。苏木精-伊红染色分析气管管壁厚度变化,Masson染色分析肺组织胶原沉积,免疫组织化学染色法检测肺组织血管生成情况,免疫组织化学染色法和Western blot检测HIF-1α、VEGF表达水平。分析气管管壁厚度、血管面积百分比与VEGF、HIF-1α表达的相关性。结果：模型组较对照组气道管壁增厚,肺组织胶原沉积、血管面积、HIF-1α和VEGF表达显著增加;治疗组较模型组气道管壁厚度、肺组织胶原沉积及血管面积减少,HIF-1α和VEGF表达显著下降。气道管壁厚度、血管面积分别与HIF-1α及VEGF表达呈正相关,HIF-1α与VEGF表达亦呈正相关。结论：布地奈德通过抑制HIF-1α、VEGF表达,明显减轻哮喘小鼠肺组织血管生成和气道重塑。     

组织工程学心血管修复材料研究进展

组织工程学心血管修复材料是采用组织工程学原理和技术，在体外设计构建的生物相容性材料，包括补片及人造血管等，是多学科相交叉的前沿领域。本文就近几年来组织工程学心血管修复材料在种子细胞、支架以及应用研究等方面进行综述。     

诱导脐血内皮祖细胞分化成内皮细胞的研究

目的探讨诱导脐血来源内皮祖细胞分化为内皮细胞,分析其用作组织工程心血管修复物种子细胞来源的可行性。方法采用6%羟乙基淀粉沉降法和密度梯度离心法联合应用分离脐血单个核细胞,在含有血管内皮生长因子(VEGF)等多种生长因子的培养液中培养扩增,通过形态学(光镜、电镜)、免疫荧光和流式细胞仪等技术对脐血来源内皮祖细胞分化的内皮细胞进行鉴定。结果从新鲜脐血中得到的单个核细胞数(3.4±2.1)×107/mL。贴壁细胞培养分化过程中形态发生改变,从小圆形变成梭形,最后分化成典型成熟内皮细胞的鹅卵石样形态,细胞数量可扩增达107。7 d后免疫荧光检测发现细胞表达内皮细胞特异性标志vWF和VEGFR-2。流式细胞仪分析单个核细胞经诱导分化后细胞表面表达CD133下降,从3.11%±1.05%下降至0.09%±0.02%。透射电镜观察到培养14 d的细胞胞浆中已出现典型的Weibel-Palade小体。结论脐血单个核细胞存在内皮祖细胞,并在体外可诱导分化为内皮细胞,初步具有用作构建组织工程心血管修复物种子细胞的可行性。     

兔骨髓间充质干细胞构建异种组织工程化尿道修复兔尿道缺损

目的 探索兔骨髓间充质干细胞为种子细胞构建异种组织工程化尿道修复兔尿道缺损的可行性.方法 60只兔随机数字法均分为实验组、对照组,实验组用种植有自体骨髓间充质干细胞的脱细胞猪尿道基质修复长约2 cm兔尿道缺损,对照组用脱细胞猪尿道基质修复.两组术后2、4、8、24周切取再造尿道标本,行组织学检查,术后24周行尿动力检查,比较差异.结果 实验组术后再造尿道腔面光滑,可见和正常尿道类似的组织结构.对照组血管和平滑肌形成较少,再造尿道腔面不如实验组光滑.实验组的术后最大尿道压(25±2)cmH2O与术前(24±3)cmH2O比较,差异无统计学意义(P＞0.05),对照组的术后最大尿道压(30±2)cmH2O与术前(24±2)cmH2O比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 以兔骨髓间充质干细胞为种子细胞,脱细胞猪尿道基质为支架,构建组织工程化尿道,移植修复兔尿道缺损,可形成类似于正常尿道的组织结构.     

抑制Notch信号对血管紧张素Ⅱ诱导的肺血管重构的影响

目的：Notch信号对胚胎发育、血管损伤修复、肿瘤生长过程中的血管重构发挥了重要作用,但对肺动脉高压肺血管重构研究很少,本研究旨在探讨抑制Notch信号对血管紧张素Ⅱ（AngII）诱导的肺血管重构的影响。方法：采用AngⅡ持续刺激培养7 d的肺动脉血管条,测定血管管壁厚度及血管壁细胞增殖细胞核抗原（PCNA）和caspase-3阳性率。同时部分血管条还加入γ-分泌酶抑制剂DAPT抑制Notch信号,测定血管条Notch 1~4 受体及其下游转录因子HERP1、HERP2 mRNA水平。结果：AngⅡ持续刺激血管7 d,血管壁厚度增加近50%,伴有血管壁细胞PCNA阳性率升高和caspase-3阳性率降低（P＜0.05）。加入DAPT后,血管条Notch 1~4受体mRNA水平无明显改变,但HERP 1、2 mRNA水平降低（P＜0.05）,管壁厚度、PCNA和caspase-3阳性率的改变程度明显降低（P＜0.05）。结论：抑制Notch信号能抑制AngⅡ诱导的肺血管重构,可能成为肺动脉高压治疗的一个新思路。     

先心病婴幼儿骨髓间充质干细胞向心肌样细胞诱导分化的实验研究

目的探讨先心病婴幼儿骨髓间充质干细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）向心肌样细胞诱导分化的可行性，为心肌组织工程提供新的种子细胞的来源。方法无菌条件下抽取先天性心脏病婴幼儿胸骨骨髓3～5ml，经密度梯度离心（Percoll分离液，T为1．073），接种获得BM～SCs，常规培养。流式细胞仪检测细胞表面抗原。将已传2代的细胞应用5-氮杂胞苷（5-Azacytidine，5Aza）诱导24h，更换为完全培养基（LG-DMEM）后继续培养，2周后行免疫细胞化学及透射电镜行超微结构检查。结果先心病婴幼儿BMSCs基本上为梭型成纤维细胞样形态，表面标记为CD29、CD44、CD71、CD90表达阳性，CD3、CD14、CD34、CD45、HLA-DR不表达。BMSCs经5-Aza诱导2周后α-actin，Desmin，cTnI，Cx-43免疫细胞化学染色阳性，透射电镜示诱导后的细胞有明显的肌丝，单个细胞核呈椭圆形，位于细胞的中央。结论先心病婴幼儿骨髓阃充质干细胞可在体外经5-Aza诱导分化为心肌样细胞，有望成为应用自体细胞体外构建工程化心肌重要的种子细胞。     

新生儿低氧性肺动脉高压的发病机制研究

新生儿低氧性肺动脉高压较为常见且病死率较高.其发病机制与肺动脉内皮功能障碍和(或)平滑肌细胞表型改变、功能障碍有关.急性缺氧时,肺动脉内皮一氧化氮合酶下调,一氧化氮合成减少,平滑肌细胞对一氧化氮的敏感性下降;内皮素生成增加,内皮素a受体基因表达增加,平滑肌表面分布密度增加;一氧化氮-内皮素-1轴失衡,使出生后肺动脉舒张过程受损,血管紧张度增高.低氧查影响新生儿血管平滑肌细胞表型转变为合成表型优势,与低氧发牛时机密切相关;缺氧状态持续影响了氧敏感基因转录因子的活性,进一步导致肺动脉平滑肌细胞增殖肥大,血管壁结构重建,加重肺动脉高压.内皮与平滑肌细胞之间也通过相互作用影响各自功能.因此,了解其发生机制,对探讨新生儿肺动脉高压的治疗措施有重要意义.     

脓毒症早期骨髓血管内皮系统改变的初步研究

目的拟通过动物实验阐明脓毒症早期骨髓血管内皮系统在组织、细胞层面以及转录水平发生的变化。方法通过盲肠结扎穿刺(cecal ligation and puncture,CLP)建立小鼠脓毒症模型,利用HE染色、组织免疫荧光、流式细胞分析以及实时荧光定量PCR等技术分析骨髓血管结构、通透性、血管内皮细胞相对比例和血管内皮细胞活化基因mRNA表达情况。结果骨髓血管系统在脓毒症早期发生一系列适应性改变。组织学分析表明,骨髓血管结构发生明显重塑,CLP组小鼠骨髓血窦平均密度为(410.43±72.63)个/mm²,较假手术组(294.43±68.94)个/mm²明显增加(P<0.01);管腔面积占比为(43.46±3.21)%,显著高于假手术组[(30.28±4.44)%,P<0.001];CLP组小鼠骨髓组织中伊文思蓝含量为(0.42±0.12)ng/mg组织,显著高于假手术组[(0.24±0.09)ng/mg组织,P<0.05],提示血管通透性升高。流式细胞分析结果表明,CLP组小鼠骨髓内皮细胞呈现增殖状态,Ki67⁺内皮细胞比例升高[(1.91±0.65)%比(5.06±1.10)%,P<0.01];转录水平分析表明,与血管内皮细胞活化有关的部分基因mRNA水平上调。结论早期脓毒症改变了骨髓血管和血管内皮细胞的结构与功能,对骨髓微环境产生了较为显著的影响。     

泄殖腔畸形动物模型制作及其病理特征

目的 用乙烯硫脲诱发妊娠大白鼠产生泄殖腔畸形动物模型,观察其肛周肌肉病理改变。     

Evidence for Early Vessel Involvement in the Dysfunctional Myocardium of Takayasu's Arteritis

A 15-year-old girl presented with persistent fevers, night sweats, leukocytosis, an elevated erythrocyte sedimentation rate, and a 13-pound weight loss over 2 months. Duplex Doppler scans, computed tomographic scan, and magnetic resonance imaging studies were suggestive of Takayasu's arteritis. Left ventricular dysfunction occurred during the episode of active disease, and an endomyocardial biopsy demonstrated increased HLA-DR (human leukocyte antigen-DR) on the endothelium and evidence of immune complex deposition in the walls of small vessels. One year later, after treatment with corticosteroids and resolution of clinical symptoms, repeat endomyocardial biopsy revealed focal interstitial fibrosis and persistent immune complex deposition. These results indicate that the inflammatory, vasculitic process affecting the large vessels in Takayasu's arteritis may also involve the endomyocardium and its small vessels resulting in ventricular dysfunction.     

不同日龄胎鼠肺血管基膜特点研究

目的　研究不同日龄胎鼠肺血管基膜IV型胶原及层黏连蛋白的发育情况 ,以探讨早产鼠易发生肺出血的原因。方法　分别用免疫组化法及原位杂交法检测日龄 17、18、19、2 1d胎鼠肺血管基膜IV型胶原、层黏连蛋白蛋白水平及mRNA水平的差异。结果　① 17d胎鼠肺血管基膜IV型胶原及层黏连蛋白阳性产物的平均面积明显小于 2 1d胎鼠 ;② 17d胎鼠肺血管内皮细胞中IV型胶原mRNA和层黏连蛋白mRNA的表达明显弱于 2 1d胎鼠。结论　早产胎鼠肺血管基膜IV型胶原及层黏连蛋白的发育明显不成熟 ,且IV型胶原和层黏连蛋白在蛋白水平的表达受mRNA的调控。这种发育不成熟是早产胎鼠易发生肺出血的原因之一     

抽动秽语综合征动物模型研究进展

抽动秽语综合征（TS）是儿童期多见的一种病因不明的神经精神障碍,可以通过建立TS动物模型探讨其病因、发病机制和新的治疗手段。目前常用的TS动物模型有药理学模型、免疫学模型、特定的神经回路发育缺陷动物模型及感觉运动门控缺失动物模型等,这些模型均达到了一定程度的表现效度、结构效度和预测效度,从不同方面反映了TS的可能发病机制。     

青春期前大鼠精索血管高位离断后睾丸的形态学改变

目的 观察青春期前SD鼠精索血管高位离断后对青春发育前期、青春发育期、性成熟期睾丸形态结构的影响。方法 日龄为30d（青春发育前期）SD大鼠麻醉后，分别行左侧腹腔内精索血管离断术（手术组）、左侧腹腔内精索血管游离术（对照组），术后将每大组大鼠再分成3组（手术组每组12只；对照组每组5只），分别在术后d3（手术后急性期）、d30（青春发育期）、d56（性发育成熟期）获取睾丸进行组织形态学研究。结果 青春期前SD鼠精索血管高位离断后，手术侧睾丸在急性期（d3）出现缺血受损改变；青春发育期（d30）出现萎缩改变；性发育成熟期（d56）发生完全萎缩，附睾管内精子消失。结论 青春期前SD鼠精索血管高位离断术可引起急性期手术侧睾丸缺血，影响青春发育期手术侧睾丸发育。该手术引起性发育成熟期后手术侧睾丸完全萎缩，生精功能丧失。