小鼠胎肝和骨髓造血基质细胞对粒系造血祖细胞增殖的影响

本文应用体外液体培养方法建立小鼠胎肝和骨髓造血基质细胞贴壁层,在贴壁细胞层上做粒系造血祖细胞集落(GM-CFU-C)培养,观察胎肝造血基质细胞和骨髓造血基质细胞对粒系造血祖细胞生长的影响。实验结果表明,培养1～2周的胎肝造血基质细胞贴壁层能抑制 GM-CFU-C 的集落生成,此抑制作用可被消炎痛拮抗。随贴壁培养时间的延长,胎肝造血基质细胞贴壁层转而增加 GM-CFU-C 产率。不同培养时间的骨髓造血基质细胞贴壁层均能明显地促进 GM-CFU-C 的生长。文中讨论了造血基质细胞与造血的关系以及两种来源造血基质细胞作用不同的可能原因。     

小鼠多向祖细胞的体外培养

本文介绍小鼠多向祖细胞(CFU-mix)的测定方法,培养体系包括IM-DM,2-ME,转铁蛋白-铁,牛血清白蛋白V,PWM-SCM及EPO。在36.5℃,7%CO_2,饱和湿度下培养10～14天。本文用实验数据表明培养体系中EPO量不能少于0.5U/皿,PWM-SCM占10%为宜,转铁蛋白则应加300μg,植入的骨髓细胞量与CFU-mix集落数有线性正比关系。     

重组人Delta-like-1胞外区促进细胞因子对脐带血造血祖细胞的扩增

目的：Notch信号通路对造血干／祖细胞的增殖分化具有重要调控作用。Delta-like-1(Dll-1)是Notch的配体之一，本研究观察了重组人Dll-1胞外区(hDll-1^ext)对细胞因子扩增脐带血造血祖细胞的促进作用。方法：RT-PCR用于检测Notch-1及其配体在脐带血细胞上的表达情况。利用免疫磁性分离(MACS)的方法分离人脐带血CD34 细胞。在无血清培养体系中，hDll-1^ext分别和不同的细胞因子组合联合培养CD34^ 细胞，通过集落形成实验检测hDLl-1^ext对造血祖细胞的扩增作用。结果：RT-PCR方法检测到脐带血单个核细胞表达Notch-1和它的配体Dll-1,Jagged-1，表明在生理条件下，脐血细胞的增殖分化可能受到Notch信号的调控。hDll-1^ext“能促进细胞因子组合对脐带血HPP-CFC的扩增，其中hDll-1^ext和SCF，IL-3，IL-6联合的扩增作用最强，无血清培养8，12d后，HPP-CFC分别增加为培养前的9．7和43倍。结论：重组hDll-1^ext能促进细胞因子对脐带血原始造血祖细胞的扩增作用。     

褪黑素对照射后小鼠血小板造血的保护作用

目的探讨褪黑素(melatonin,Mel)对照射后小鼠血小板和巨核细胞造血功能的影响。方法18只雌性BALB/c小白鼠随机分为3组正常组(N组),对照组(C组)和Mel组(M组),每组6只。其中N组不接受照射和药物注射,C组和M组小鼠予4Gy的60Coγ射线全身照射,照射后M组每天腹腔注射Mel10mg.kg-1.d-1,连续注射21d,C组注射生理盐水。于照射前及照射后的第7、14和21天采尾血,观察白细胞和血小板计数变化,在第21天采血后取骨髓行巨核细胞集落形成单位(CFU-MK)和骨髓基质细胞集落形成单位(CFU-F)培养。另外观察正常小鼠体外骨髓CFU-MK在不同浓度的Mel(0～500nmol/L)作用下的生长情况。结果M组血小板计数回升明显高于C组(P<0.05),M组的CFU-MK和CFU-F集落生长明显优于C组(P<0.001)。体外小鼠骨髓CFU-MK的生长对Mel有浓度依赖性,Mel浓度为200nmol/L时,CFU-MK集落数目最多,且集落大小和MK成熟度较对照均有明显提高。结论Mel对照射后小鼠骨髓的血小板造血功能有保护作用,Mel可促进骨髓基质细胞和MK增殖分化,从而提升外周血血小板数量。     

脐血与成人外周血,骨髓中造血干／祖细胞数量汲增殖比较

应用免疫磁珠分离法及甲基纤维素体外集落培养法分别观赏了脐血、成人外周血及骨骨右ＣＤ３４＾＋细胞数疸和ＣＦＵ－Ｍｉｘ、ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｅ及ＢＦＵ－Ｅ集落形成情况，并进行了比较研究，结果显示脐血造血干／祖细胞数量及增殖能力明显高于成人外周血和骨髓，脐血中ＣＤ３４＾＋细胞数分别是成人外周血和骨髓的２０￣４０倍和４￣５倍，脐血外周血的４倍和３倍，而与骨髓基本相当。     

造血干细胞研究进展

造血系统是体内高度活跃和高度新陈代谢系统 ,造血干细胞的基本特征是具有自我维持和自我更新 ,即干细胞通过不对称性的有丝分裂 ,在不断产生大量祖细胞的同时 ,使自己不增殖也不分化 ,而造血祖细胞进一步的增殖与分化是补充和维持人体外周血细胞的基础。由造血干细胞到祖细胞再到外周血细胞的这种分化调节过程相当复杂 ,依赖于各种造血生长因子、造血基质细胞、细胞外基质等多种因素的相互作用与平衡 ,并涉及细胞的增殖分化、发育成熟、迁移定居、衰老凋亡和癌变等生命科学中的许多基本问题 ,这也是基础研究的主要热点。1　造血干细胞的表…     

小鼠骨髓基质细胞移植对急性辐射造血损伤的影响

目的：探讨小鼠骨髓基质细胞（marrow stromal cell,MSC）同种异体移植对接受全身大剂量辐射小鼠造血修复的影响。方法：在体外对小鼠骨髓基质细胞进行培养、扩增,并将第三代细胞通过尾静脉移植到同种接受全身大剂量射线照射的小鼠,测定移植后不同时期小鼠外周血白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血小板（PLT）、血红蛋白（HGB）值,观测各组脾集落形成单位（colony forming unit,CFU-S）,探讨同种异体骨髓基质细胞移植对急性辐射造血损伤修复的影响。结果：经骨髓基质细胞移植的小鼠,其WBC、RBC、PLT、HGB在移植后15-20 d较对照组明显增高（WBC、PLT、HGB：P〈0.01;RBC：P〈0.05）,移植组CFU-S明显高于对照组（P〈0.01）。结论：同种异体小鼠骨髓基质细胞移植,能促进小鼠造血干细胞在脾脏定居,增强造血干细胞形成集落的能力,并能显著提高外周血细胞数量,促进损伤后早期造血功能重建。     

白细胞介素－11基因治疗促进放射损伤小鼠造血恢复的实验研究

白细胞介素－１１（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１１，ＩＬ－１１）是一种新的造血生长因子，体内、外实验结果显示ＩＬ－１１具有显著的造血促进作用，它能作用于早期的造血干细胞及祖细胞，促进其增殖和分化。为了探讨ＩＬ－１１基因治疗放射损伤后造血恢复的促进作用，我们构建了含人ＩＬ－１１ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体，并转染小鼠成纤维细胞系ＮＩＨ－３Ｔ３，经筛选获得３株高表达ＩＬ－１１的转染细胞亚克隆，用高表达ＩＬ－１１的转染细胞作为载体细胞，进行了ＩＬ－１１基因治疗对放射损伤小鼠造血系统影响的实验研究。结果表明ＩＬ－１１基因治疗能明显缩短亚致死量放射损伤小鼠白细胞降低的时间，促进外周血白细胞、血小板和红细胞压积的恢复。提示ＩＬ－１１基因治疗对放射损伤造成的造血功能低下具有潜在的应用价值。     

rhM-CSF扩增的基质细胞联合造血干/祖细胞输注对小鼠造血重建作用的初步观察

增殖期造血细胞是机体中对辐射最敏感的细胞。各种急、慢性放射病 ,都直接或间接地与造血功能的改变 ,包括因造血功能衰竭所引起的出血和感染有关 ,造血干 祖细胞移植是改善急性放射损伤所致造血功能障碍的主要方法之一。骨髓基质细胞是组成骨髓造血微环境的主要细胞成份 ,由其产生的多种细胞因子对造血细胞归巢、增殖和分化产生关键的作用。有研究报道[1 ,2 ] 基质细胞与骨髓造血干 祖细胞(ＨＳＣ)联合回输可加快骨髓造血重建 ,但由于基质细胞来源困难 ,限制了该方法的应用。笔者应用ｒｈＭ ＣＳＦ体外有效地扩增小鼠骨髓来源基质细胞 ,继…     

真皮多能干细胞促进大鼠急性放射损伤造血恢复的研究

目的 观察真皮多能干细胞移植对大鼠急性放射损伤后造血恢复的作用。方法 分离新生大鼠真皮多能干细胞体外培养至第10代用于研究，观察干细胞层体外对正常大鼠骨髓粒-巨噬系祖细胞和红系祖细胞集落生长的影响；进一步将真皮多能干细胞经尾静脉输入5Gyγ射线全身照射的大鼠体内，检测移植后骨髓有核细胞、粒-巨噬系祖细胞集落CFU—GM、红系祖细胞集落CFU—E和外周血白细胞数量、血红蛋白含量等指标的恢复情况，观察4周后动物的存活率。结果 真皮多能干细胞层体外可促进正常大鼠CFU—GM和CFU—E集落的生长；全身输入干细胞促进了5Gyγ射线全身照射动物的外周血白细胞和骨髓有核细胞、CFU-GM和CFU—E集落数的恢复。实验组动物4周后的存活率也明显高于对照组。结论 真皮多能干细胞具有一定支持造血的功能，可促进急性放射损伤大鼠的造血恢复，为造血损伤相关疾病的干细胞治疗提供新的细胞来源途径。     

造血干细胞动员剂硫酸葡聚糖的制备毒性及与含硫量的关系

报道了一种含硫量较低的硫酸葡聚糖（ＤＳ）的合成方法，并详细地研究了ＤＳ不同含硫量与过敏反应的关系，初步找到了一个可供人体静脉注射用的ＤＳ含硫量的范围。ＤＳ的分子量在１０ｋＤａ以下，这个范围分别为１０．６％－１１．８％（以分子量为５ｋＤａ的进口葡聚糖为原料）和１２．０％－１３．０％（以分子量为４ｋＤａ的国产葡聚糖为原料）。初步探讨了影响小鼠外周血白细胞变化和豚鼠过敏反应的某些因素，为ＤＳ作为造血干细胞动员剂用于临床展现了良好的前景．     

小鼠辐射损伤某些特点的探讨

通过观察输注同系骨髓细胞和使用不同种类的药物对受照射小鼠活存率及某些指标的影响,探讨了骨髓型急性放射病的某些早期病理过程。实验结果表明,急性放射病早期除存在造血损伤这一基本病理过程外,还存在某些损伤加重因素,如微循环障碍,能量代谢障碍和细胞膜损伤等。作者认为,实验治疗研究必须与某些重要病理过程的研究和药理学研究相结合。     

极重度骨髓型急性放射病犬造血恢复的实验观察

3.27～4.19Gy照射所致的重度骨髓型急性放射病犬,经恰当的综台治疗后可以治活,其造血功能可以恢复。同样,部分5.5～7.0Gy照射所致的极重变骨髓型急性放射病犬,也可治活,其造血功能 仍有恢复的可能性。     

造血干细胞动员剂硫酸葡聚糖的临床前及人体试用研究

为了阐明临床应用造血干细胞动员剂硫酸葡聚糖(DS)的可能性,用不同动物进行了动员效果、LD_(50)过敏实验和正常人体试用研究。结果表明,给狗静脉注射分子量为10kDa的DS后,血中MNC和CFU-GM呈时相性变化,1h开始增加,5h达到高峰值;LD_(50)为1128.6mg/kg(雄性小鼠)和1369.4mg/kg(雌性小鼠),两者之间无显著差异;分子量为10kDa的DS过敏反应为阴性结果,15kDa的DS为阳性结果;34例正常人体试用,DS可使血中CFU-GM、BFU-E和CFU-GEMM,分别增加到给药前的8倍、10.5倍和12倍,有效、安全剂量约为15～20mg/kg。分子量为10kDa的DS人体试用研究属国内外首次报道。     

再生障碍性贫血发病机制的探讨

本文对26例再障的发病机制分别用GM-CFU、CFU-F及BFU-E培养方法进行了研究.发现在发病机制上多因素同时存在的复合型明显多于一个因素的单纯型;有干细胞缺损的病例最多,微环境缺陷者亦不少见;有细胞抑制的两例,其抑制可能来自单核巨噬细胞.在CFU-F减低组中循环免疫复合物(CIC)升高的病例不比CFU-F正常组中CIC升高的病例明显增多,未能说明CIC升高和造血微环境缺陷有关.在干细胞缺损型的再障中,同时存在两种祖细胞的异常(GM-CFU;BFU-E),提示其缺陷乃发生在多向造血祖细胞水平或其以上的水平.最后还对现用的4组分型法在再障发病机制研究中的作用进行了评价,并提出进一步研究的意见.     

两例急性放射病患者血液学改变的特点

本文对两例急性放射病患者的血液学变化进行了观察。两例受照剂量“亮”为3.5 Gy,“燕”为2.6Gy。根据WBC总数的变化,参考血小板计数及早期淋巴细胞绝对值,并与其它放射性事故比较,认为“亮”属中度或中度偏重骨髓型急性放射病;“燕”届中度或中度偏轻骨髓型急性放射病,与临床经过及物理剂量相符。两例均在骨髓涂片的巨核细胞内见到其它血细胞,对这种现象作了初步讨论,对其临床意义尚需进一步观察阐明。     

干细胞在放射医学研究中的进展

电离辐射作用于机体后,可致机体发生急性放射病。辐射损伤的远后效应之一是白血病,含有干细胞的骨髓细胞移植是目前挽救急性放射病病人生命的惟一有效的治疗方法。近年来随着干细胞研究的突破性进展,其多向分化潜能及干细胞相互转化可能为辐射损伤病人提供新的干细胞来源;同时随着辐射防护剂研究的深入,促进了损伤后干细胞的恢复。     

造血干细胞的竞争性分化在照后白细胞减少中的作用

LACA小鼠经5 Gyγ线全身照射后l～4天腹腔注射经分离,洗涤和浓集的红细胞(供血鼠预先照射8.5Gyγ线)。其血红蛋白含量上升到正常对照的140.4%。照后20天骨髓CFU-E含量比照射对照组低4倍。虽然其红系造血受到明显抑制,但其骨髓CFU-S,CFU-GM及外周血粒细胞数分别比照射对照组高28、80.3和97.6‰。结果表明,小鼠受照后,存在造血干细胞的竞争性分化,向红系统分化占优势。多血通过反馈机制改变了干细胞的分化方向,使之多向粒系统分化.从而增加了外周血粒细胞数置。本文报告的结果表明照后造血干细胞的竞争性分化及向红系分化占优势是外周血白细胞数量减少的原因之一。     

照射骨髓基质细胞对辐射损伤小鼠造血重建的影响

采用辐照方法将骨髓基质细胞(BMSC)预先强化,再经体外培养、富集后与骨髓细胞(BMC)一起经尾静脉输注给全身致死剂量照射的小鼠。采用股骨BMC计数,CFU-GM和CFU-S测定及股骨切片组织学观察等方法研究了这种细胞对辐射损伤小鼠造血重建的影响。结果表明输入的BMSC对辐射损伤小鼠造血重建具有促进作用。进一步研究表明,这种细胞对辐射损伤小鼠造血重建的促进作用不是由于其中含有造血干细胞(HSC)所致,而是通过其经血循环迁徒至造血组织后对同时输入BMC中的HSC增殖和向粒系分化发挥支持和刺激作用来实现的。