Protective Effects of Different Concentrations of Edaravone Pretreatment against Glutamate Neurotoxicity to Brain Slices of Neonatal Rat

目的:观察不同浓度的依达拉奉(Eda)预处理对大鼠大脑皮层脑片谷氨酸(Glu)损伤的保护作用.方法:体外离体培养新生大鼠皮层脑片,将脑片随机分成对照组、Glu组、50 μmol/L Eda( Eda 50)组、100 μnol/LEda( Eda100)组;对照组脑片用正常培养基培养,Glu组脑片给予含有1mmol/L Glu培养基作用30 min,Eda两组脑片在Glu损伤前给予不同浓度Eda预处理24h,接着给予含有1mmol/L Glu培养基作用30 min,Glu损伤后24h用2,3,5-三苯基四氮唑(TTC)染色定量分析脑片活性并计算组织损伤百分率,测定脑片乳酸脱氢酶(LDH)释放量及释放率.结果:与对照组相比,Glu组和不同浓度Eda组脑片LDH释放率增高,TIC染色OD490值下降;与Glu组比较,不同浓度Eda组脑片LDH释放率降低,TTC染色的OD490值增高,Eda100组脑片LDH释放率低于Eda50组,TTC染色0D490值高于Eda50组.结论:依达拉奉预处理对Glu损伤后大鼠大脑皮层脑片有剂量依赖性的神经保护作用.     

黄芩苷对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用

目的探讨黄芩苷对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用及其机制.方法建立大鼠离体脑片缺氧缺糖和谷氨酸损伤模型,设立对照组、缺氧缺糖(OGD)或谷氨酸(Glu)组、黄芩苷10mg/L和30mg/L组.通过脑片病理切片、HE染色、TTC染色以及乳酸脱氢酶(LDH)测定,评价不同浓度黄芩苷对脑损伤的保护作用.结果不同浓度黄芩苷(10 mg/L和30mg/L)抑制了脑片缺血缺氧或谷氨酸所致的TTC染色吸光度的降低,减少LDH释放并降低缺血缺氧所致皮层神经细胞的病理性损伤.结论黄芩苷对大鼠脑片缺氧缺糖性损伤具有一定的保护作用,作用机制可能与其抑制了兴奋性氨基酸毒性有关.     

依达拉奉对谷氨酸诱导神经元释放一氧化氮的影响

目的探讨依达拉奉（Edaravone,Eda）对谷氨酸（Glutamate,Glu）诱导皮层神经元释放一氧化氮的影响。方法 SD乳鼠皮层神经元原代培养7d后,分对照组、Glu组（50μM）以及Glu（50μM）＋Eda（100μM）组,分别在加药前、加药6h和24h后取三组培养基以硝酸还原酶法检测NO浓度。结果加药前三组培养基的NO浓度没有显著差异（P〉0.05）,加药6h、24h后,Glu组和Glu＋Eda组NO浓度均显著高于对照组（P〈0.01）,而且Glu组NO浓度显著高于Glu＋Eda组（P〈0.01）。结论依达拉奉能降低谷氨酸诱导皮层神经元释放一氧化氮。     

一种定量评价离体海马脑片缺糖/缺氧损伤的新方法

目的 :建立一种定量评价离体脑片缺糖 /缺氧损伤的简便、快速、灵敏的方法。方法 :离体海马脑片缺糖 /缺氧不同时间后以 2 % 2 ,3,5 -三苯基氯化四氮唑 (TTC)染色 ,用乙醇∶二甲亚砜 (5 0∶ 5 0 )抽提 TTC红色结晶产物 ,分光光度法测定 OD490 值 ,并与 LDH释放率进行比较。结果 :随着缺糖 /缺氧时间的延长 ,TTC染色 (OD490 值 )逐渐下降 ,而 LDH释放率逐渐上升 ,两结果呈负相关 (r=- 0 .933,P<0 .0 1) ,提示脑片缺血性损伤。尼莫地平、地塞米松和氯胺酮可减轻脑片缺血性损伤 ,但 ONO- 10 78无效。结论 :TTC染色法简单易行 ,且客观灵敏 ,可用于离体脑片损伤的评价及药物初筛。     

依达拉奉对大鼠小胶质细胞缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的 观察依达拉奉对离体培养大鼠小胶质细胞缺血再灌损伤后炎症因子表达的影响,以及Janus激酶2/信号传导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路是否参与依达拉奉的神经保护。 方法 离体培养Sprague-Dawley乳鼠小胶质细胞,将细胞接种于细胞培养板随机分为3组(n_i=20):正常对照组(C组)常规培养;谷氨酸组(Glu组)给予含有1 mmol/L的Glu的培养基孵育30 min建立小胶质细胞缺血再灌损伤模型;依达拉奉组(Eda组)于细胞建立损伤模型后换成含有100 μmol/L的Eda培养基孵育24 h;Glu损伤后24 h通过CCK-8测细胞存活率,Real-Time PCR检测JAK2、STAT3的mRNA水平;用ELASA法测定TNF-α和IL-2的变化;用流式细胞仪测细胞凋亡率。 结果 与C组比较,Glu组细胞存活率降低,JAK2和STAT3的mRNA表达增加,细胞上清液的TNF-α和IL-2浓度增加,细胞凋亡率增加(P＜0.05);与Glu组比较,Eda组细胞存活率增加,JAK2和STAT3的mRNA表达减少,细胞上清液中TNF-α和IL-2浓度降低,细胞凋亡率下降(P＜0.05)。 结论 依达拉奉减少了大鼠小胶质细胞缺血再灌注损伤后TNF-α和IL-2表达,JAK2/STAT3信号通路部分参与了炎症因子的表达。      

丙泊酚对大鼠脑片不同性质损伤的影响

目的　考察丙泊酚对能量代谢障碍、兴奋性氨基酸、氧自由基 3种脑片损伤模型的作用效果。方法　建立大鼠皮层和海马脑片的缺氧缺糖、谷氨酸、过氧化氢损伤模型 ,每个损伤实验又分别设立对照组、损伤组、丙泊酚加损伤组 (浓度为 5、5 0及 10 0 μmol/L) ,每组大鼠 4例。采用新鲜脑片TTC染色比色法 ,测定各组脑片TTC染色的变化 ,比较丙泊酚对不同性质脑损伤作用效果。结果　和对照组比较 ,缺氧缺糖、谷氨酸和过氧化氢明显降低皮层和海马脑片TTC染色吸光度值 (A490 )。和损伤组比较 ,低、中剂量丙泊酚对缺氧缺糖和谷氨酸损伤所致A490 降低无作用 ,大剂量 (10 0 μmol/L)加重脑片TTC染色A490 降低 (P <0 0 1)。 5 μmol/L丙泊酚明显抑制过氧化氢损伤所致皮层和海马脑片TTC染色A490 降低 (P <0 0 1) ,大剂量时该作用消失 (P >0 0 5 )。结论　低剂量 (5 μmol/L)丙泊酚对大鼠皮层和海马脑片过氧化氢损伤具有保护作用 ,对脑片缺氧缺糖和谷氨酸损伤无保护作用 ,大剂量 (10 0 μmol/L)丙泊酚加重大鼠皮层和海马脑片缺氧缺糖和谷氨酸损伤。     

依达拉奉预处理离体乳鼠脑皮质细胞对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨不同浓度依达拉奉预处理离体乳鼠脑皮质细胞对脑缺血-再灌注损伤的保护作用.方法:取出生24 h以内的新生SD乳鼠的脑皮质细胞,体外培养至第7天,随机分为5组:A组(正常对照组);B组(药物损伤组);C1组(50 μmol/L依达拉奉预处理组);C2组(100 μmol/L依达拉奉预处理组);C3组(200 μmol/L依达拉奉预处理组).C1、C2、C3组第7天用依达拉奉预处理,24 h后B、C1、C2、C3组予200 μmol/L谷氨酸损伤0.5 h,所有组换正常培养液继续培养24 h后观察神经细胞存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、细胞凋亡率和HE染色后倒置相差显微镜下细胞形态变化.结果:依达拉奉预处理备组MTT含量不同程度高于损伤组,LDH漏出量和凋亡细胞百分比不同程度低于损伤组,倒置相差显微镜下见预处理组细胞形态受损较药物损伤组轻,3个预处理组以C2、C3组效果明显,但两组差别无统计学意义.结论:采用所测浓度的依达拉奉提前24 h预处理离体幼鼠脑皮质细胞,对脑缺血-再灌注损伤有明显的保护作用.     

大鼠纹状体脑片多巴胺和谷氨酸的相互作用及其对乳酸脱氢酶释放的影响

目的　研究多巴胺 (DA)、谷氨酸 (Glu)及其受体拮抗剂对大鼠纹状体脑片乳酸脱氢酶 (LDH)释放的影响 ,以探讨DA和Glu相互作用及其机制。方法　以大鼠纹状体脑片孵育作为体外研究模型 ,用比色法测定LDH的活性。结果　DA和Glu均能增加纹状体脑片LDH的释放 ,且呈剂量依赖性 ,在较低浓度 ( 10 μmol·L-1)时 ,两者对LDH的释放有协同作用。MK - 80 1(NMDA受体拮抗剂 )可拮抗DA诱导的LDH的释放 ;DAD2 受体拮抗剂spiperone ,而不是D1受体拮抗剂SCH2 3 3 90 ,也能显著降低Glu对LDH释放的影响。结论　DA和Glu均对纹状体产生细胞毒性 ,这种作用至少部分是通过受体介导的 ,DA和Glu的相互作用对纹状体神经元的损伤有重要影响     

不同浓度臭氧对大鼠离体脑片氧糖剥夺及再灌注损伤模型的保护作用

目的 探讨不同浓度臭氧对大鼠离体脑片氧糖剥夺及再灌注损伤模型的保护作用.方法 制备SD大鼠脑片,室温下保存在人工脑脊液(ACSF)中,根据实验分组情况选择性经过下列程序:恢复期60 min、平衡期30 min、氧糖剥夺(OGD)期30 min及再灌注期90 min.对照组(CTRL)不经过OGD期;模型组不施加臭氧干预(OGD/R);实验组于再灌注期分别给予10,20,30,40,50 μg/mL的臭氧,并且根据ACSF中是否含有人血白蛋白(HSA)分成2个亚组.再灌注期结束后分别测定各组ACSF中谷氨酸(Glu)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量.结果 OGD 30 min后给予90 min的再灌注,模型组与对照组比较Glu和LDH释放增加(P＜0.01).不同浓度的臭氧在不同程度上拮抗了Glu和LDH的释放,其中40 μg/mL的臭氧效应最明显,低浓度(10～30μg/mL)或高浓度(50 μg/mL)臭氧组与OGD/R组比较效应不明显(P＞0.05);在含有HAS组与不合HAS组比较,给予臭氧(40μg/mL)干预能明显减少Glu和LDH的释放(P＜0.05).结论 40 μg/mL臭氧气体对大鼠离体脑缺血再灌注损伤模型中的神经细胞具有保护作用,并且HSA能增强臭氧的保护作用.     

人参炔醇对大鼠脑片不同类型损伤的影响

目的评价人参炔醇对代谢障碍、兴奋性氨基酸、氧自由基三种脑片损伤模型的作用.方法通过大鼠皮质和海马脑片孵育技术,建立缺氧缺糖、谷氨酸和过氧化氢三类损伤模型,采用新鲜脑片TTC染色酶标仪比色法,定量考察人参炔醇对不同类损伤的保护作用.结果与对照组相比,缺氧缺糖、谷氨酸和过氧化氢均能明显降低皮质和海马脑片TTC染色OD490值,2~4μmol/L人参炔醇可显著减轻缺氧缺糖及过氧化氢所致的脑片组织损伤(P<0.01),对谷氨酸所致损伤无作用. 3μmol/L cAMP阻断剂RpcAMPS可显著减弱4μmol/L人参炔醇对缺氧缺糖和过氧化氢所致损伤的保护作用.结论人参炔醇能够保护大鼠脑片对缺氧缺糖和过氧化氢所致损伤作用,但对谷氨酸所致损伤无保护作用,其保护活性可能与提高神经细胞内cAMP含量有关.     

蛋白酶体抑制剂对中脑脑片的毒性作用及其机制研究

目的:观察蛋白酶体抑制剂对体外培养的大鼠中脑脑片黑质多巴胺(DA)能神经元的早期毒性作用,利用这种新型的组织模型探讨蛋白酶体功能异常在帕金森(PD)发病中的作用。方法:制备Wistar大鼠体外中脑黑质脑片的长期培养体系,加入蛋白酶体抑制剂lactacystin(0.1,0.5,1.0,5.0μmol/L)作用24 h后,测定培养基中乳酸脱氢酶(LDH)活力水平观察脑片活力。TH免疫组化观察黑质细胞变性缺失,α-synuclein免疫组化观察α-synuclein的表达,TUNEL法检测多巴胺能神经元凋亡。结果:经0.1,0.5,1.0和5.0μmol/L浓度的lactacystin作用24 h后,脑片黑质部位TH阳性神经元数量减少,α-synu-clein表达率增加,凋亡检测显示,5.0μmol/L的lactacystin组部分黑质细胞出现TUNEL染色阳性。结论:蛋白酶体抑制剂lactacystin对脑片中DA能神经元具有毒性作用,能诱导黑质细胞凋亡,其作用具有浓度依赖性。蛋白酶体功能缺陷在帕金森病发病机制中可能发挥重要作用。     

百日咳菌液对大鼠培养脑切片兴奋性氨基酸释放的影响

目的：了解百日咳菌液对培养的大鼠脑切片兴奋性氨基酸（ＥＡＡｓ）释放的影响及１１双氢－５Ｈ－二苯（ａ,ｂ）－环庚烯亚胺（ＭＫ－８０１）对脑切片有无保护作用,方法：ＳＤ大鼠随机分成正常脑切片培养组（ＮＣ组）１０％百日咳菌液脑切片培养组（ＰＢＣ组）和ＭＫ－８０１预处理后１０％百日咳菌液脑切片培养组（ＭＰＢＣ组）及乳酸脱相色谱法测脑切片培养上清液中的ＥＡＡｓ释放量,结果：ＰＢＣ组的谷氨酸（Ｇｌｕ）门冬氨酸     

盐酸戊乙奎醚对大鼠缺氧缺糖／复氧复糖海马脑片凋亡相关因子表达的影响

目的研究盐酸戊乙奎醚（penehyclidine hydrochloride,PHC）对大鼠缺氧缺糖／复氧复糖海马脑片的保护作用及机制。方法采用大鼠海马脑片缺氧缺糖／复氧复糖模型;分为正常组、缺氧缺糖／复氧复糖（H／R）组、PHC 2μmol／L（PHC2组）、PHC 10μmol／L（PHC10组）、PHC 50μmol／L（PHC 50组）、Sco 50 μmoL／L（Sco50组）,测量各组LDH释放率,免疫组织化学法测定各组海马CA1区Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达。结果PHC各组LDH释放率均较H／R组下降,以PHC50组效果最好（P〈0．01）。PHC50组Bcl-2阳性细胞的表达和Bcl-2／Bax比值均较H／R组升高,Bax和Caspase-3阳性细胞表达均较H／R组降低（P〈0．01）。Sco50组Bcl-2阳性细胞的表达和Bcl-2／Bax比值也较H／R组升高,Bax和Caspase-3阳性细胞表达均较H／R组降低（P〈0．01）。结论PHC可能通过减少LDH释放和Caspase-3、Bax的表达,增加Bcl-2的表达减轻大鼠缺氧缺糖／复氧复糖海马脑片的损伤。     

黄芪甲苷和三七总皂苷中主要有效成分抗PC12细胞氧化损伤的配伍研究

目的 探索黄芪甲苷和三七总皂苷中主要有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1抗CoCl2 诱导的PC12细胞氧化损伤的有效配伍剂量.方法 采用CoCl2诱导PC12细胞氧化损伤模型,以细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率为指标,研究4种有效成分对PC12细胞氧化损伤的有效机制浓度.在此基础上按Us*(85)均匀设计实验,确定4种有效成分的有效配伍剂量.结果 4种有效成分都能抑制CoCl2诱导的PC12细胞LDH的漏出,与损伤组相比差异有统计学意义(P＜0.05).且随着药物浓度的增加,对LDH漏出率的抑制作用增强.黄芪甲苷和人参皂苷Rb1在50 μmol/L,人参皂苷Rg1和三七皂苷R1在100 mol/L浓度时LDH漏出抑制率约为80％.U8*(85)均匀设计实验多元逐步回归分析得:4种有效成分的8个不同浓度配伍都能抑制CoCl2诱导的PC12细胞LDH的释放,与损伤组相比差异有统计学意义(P＜0.05).人参皂苷Rg150 μmol/L、黄芪甲苷0.781 25 μmogL、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1各1.562 5μ.mol/L配伍时抗PC12细胞氧化损伤的效应最强.结论 人参皂苷Rg1 50 μmol/L、黄芪甲苷0.78125 μmol/L、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1各1.562 5μmol/L配伍组方为抗PC12细胞氧化损伤的有效配伍剂量.     

白藜芦醇对体外培养的大鼠皮层神经元谷氨酸神经毒性的干预作用

目的：研究白藜芦醇（Res）对体外培养皮层神经元的影响;探索谷氨酸对皮层神经元的损伤作用及Res对抗谷氨酸损伤的机制.方法：体外培养新生大鼠大脑皮层神经元,实验组加入20μmol/L的Res,在不同时间点观察Res对培养的皮层神经元的作用,应用MTT法检测神经元存活率作为反应指标;通过在培养基中加入谷氨酸造成皮层神经元兴奋毒性损伤模型,加入最适剂量的Res,观察Res对上述损伤的作用;通过培养细胞形态学观察、MTT法测定存活细胞数及Bax免疫细胞化学染色检测指标来反映谷氨酸对神经元的损伤作用,同时观察Res对抗损伤的机制.结果：20μmol/LRes对体外培养的皮层神经元的存活率无明显影响;谷氨酸对皮层神经元产生强烈的兴奋毒性,导致大量神经元死亡,MTT结果表明神经元存活率明显下降;免疫组化染色表明谷氨酸可诱导神经元大量表达Bax,促进神经元凋亡;Res可对抗谷氨酸损伤而保护神经元,它可减轻谷氨酸的神经元兴奋毒性,提高神经元的存活率,同时抑制谷氨酸引发的Bax表达上调.结论：适宜剂量的Res对体外培养的皮层神经元无毒副作用,对神经元的存活率无影响,Res可以通过调节Bax的表达对抗谷氨酸兴奋毒性而保护神经元.     

西松烷二萜化合物促进PC12细胞增殖及拮抗谷氨酸损伤的作用

目的：观察从软珊瑚（Sinularia flexibilis）中分离得到的西松烷二萜类化合物对PC12细胞增殖及其拮抗谷氨酸兴奋性神经毒损伤的作用,并初步探讨其作用机制。 方法：采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测西松烷二萜类化合物（化合物1、2、3）对PC12细胞增殖活力的影响。用谷氨酸诱导PC12细胞损伤模型,以MTT法检测化合物1、2、3对谷氨酸损伤PC12细胞的保护作用;利用激光共聚焦显微镜检测化合物1对谷氨酸诱导损伤的PC12细胞内钙离子浓度的影响。 结果：2、10和50 μmol/L化合物1给药72 h后可使正常PC12细胞光度密（optical density, OD）值显著升高（P＜0.05,P＜0.01）。谷氨酸损伤24 h后,0.4、2、50 μmol/L化合物1组,0.4、2、100 μmol/L化合物2组以及2 μmol/L化合物3组OD值较模型组显著升高（P＜0.01,P＜0.05）;48 h后,各剂量化合物1组OD值达到正常组和阳性对照组水平,显著高于模型组（P＜0.01,P＜0.05）,但未见明显的剂量依赖性。与模型组相比,0.4、2、50 μmol/L化合物1可显著降低谷氨酸损伤PC12细胞内钙离子浓度（P＜0.05,P＜0.01）,与阳性对照组作用相当,但未见明显的剂量依赖性。 结论：从软珊瑚中分离得到的西松烷二萜化合物1可显著增强PC12细胞增殖活力,化合物1、2、3可促进谷氨酸损伤PC12细胞的恢复,具有明显的促进神经细胞增殖、拮抗谷氨酸兴奋性神经毒损伤的作用,其中新化合物——化合物1作用相对最强,其神经细胞保护作用的可能机制为降低谷氨酸损伤PC12细胞内钙离子浓度,减轻钙超载。