人参皂苷Rg1上调miR-298抑制胰腺癌肿瘤生长

目的 探讨人参皂苷Rg1对胰腺癌的影响及调控机制。方法 采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）检测0、2.5、5、10、20μmol/L人参皂苷Rg1对人胰腺癌细胞PANC-1细胞活力的影响,流式细胞术检测人参皂苷Rg1对PANC-1细胞凋亡的影响,Western blot检测人参皂苷Rg1对PANC-1细胞BCL-2相关X蛋白（BAX）和B淋巴细胞瘤-2蛋白（BCL2）表达的影响,Transwell实验检测人参皂苷Rg1对PANC-1细胞侵袭能力的影响,划痕实验检测人参皂苷Rg1对PANC-1细胞迁移能力的影响,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人参皂苷Rg1对PANC-1细胞miR-298水平的影响;将胰腺癌细胞分为三组：对照组、人参皂苷Rg1组和人参皂苷Rg1+miR-298 inhibitor组,MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测BAX和BCL2蛋白的表达;构建胰腺癌荷瘤小鼠,进行人参皂苷Rg1处理,观察瘤体组织大小和重量变化,Western...     

连环蛋白p120 shRNA重组慢病毒载体构建及鉴定

目的构建连环蛋白p120特异性shRNA重组慢病毒载体,感染胰腺癌PANC-1细胞,鉴定干扰效果。方法针对p120ctn mRNA设计合成3对shRNA序列,连接入酶切线性化的慢病毒载体pGCSIL-GFP,PCR鉴定及测序正确后与构建成功的含p120ctn基因的载体pGC-FU-p120ctn-3FLAG共转染293T细胞,蛋白质印迹分析筛选有效shRNA序列,包装慢病毒,测定病毒滴度。重组慢病毒感染胰腺癌PANC-1细胞,实时定量PCR及蛋白质印迹分析鉴定干扰效果。结果 PCR及测序证实成功构建出p120ctn-shRNA-LV慢病毒载体,病毒滴度达到3×109TU/ml。重组慢病毒感染PANC-1细胞后,实时定量PCR提示PANC-1细胞p120ctn mRNA表达下降82.6%(P0.05),蛋白质印迹分析提示p120ctn蛋白表达较转染前显著下降。结论成功构建出p120ctn基因shRNA慢病毒载体,为进一步研究p120ctn在胰腺癌浸润及转移中的作用奠定了基础。     

连环蛋白p120在人胰腺癌组织中的表达及其意义

目的:了解胰腺癌组织中连环蛋白p120(p120ctn)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达情况,分析它们与胰腺癌临床病理特征及预后的关系.方法:采用免疫组化技术检测53例胰腺癌及癌旁胰腺组织的p120ctn、E-cadherin和CD34表达情况,结合临床资料利用SPSS软件行统计学分析.结果:53例胰腺癌组织...     

miR-431-5p通过调控AKT1抑制胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和促进凋亡研究

目的研究miR-431-5p对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响和潜在的分子机制。方法qRT-PCR检测人正常胰腺上皮细胞hTERT-HPNE和胰腺癌细胞CFPAC-1和PANC-1中miR-431-5p表达水平。转染miR-431-5p模拟物至胰腺癌CFPAC-1细胞中过表达miR-431-5p后,MTT法测定细胞增殖活性,Transwell检测细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测细胞中Cyclin D1、p21、Bax、Bcl-2、E-cadherin、MMP-2和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1（AKT1）蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-431-5p与AKT1的调控关系。结果与hTERT-HPNE细胞相比,胰腺癌细胞PANC-1和CFPAC-1中miR-431-5p表达量降低（P < 0.05）。过表达miR-431-5p后,CFPAC-1细胞活性、迁移和侵袭细胞数降低,凋亡率升高,Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平降低,p21、Bax和E-cadherin蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01）。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-431-5p在CFPAC-1细胞中靶向负调控AKT1表达。同时过表达miR-431-5p和AKT1后,CFPAC-1细胞活性、迁移和侵袭细胞数升高,凋亡率降低,Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平升高,p21、Bax和E-cadherin蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义（P < 0.05）。结论miR-431-5p通过靶向抑制AKT1降低胰腺癌CFPAC-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡,可能是胰腺癌的潜在分子治疗靶点。     

肝癌细胞生物学行为改变涉及p120ctn酪氨酸磷酸化的研究

目的 以表皮生长因子刺激肝癌细胞内p120^ctn酪氨酸磷酸化,观察p120^ctn酪氨酸磷酸化与p120^ctn在细胞内转位及肝癌细胞生物学行为的关系,探讨p120^ctn在肝癌细胞粘附和信号转导中的作用。方法 使用免疫沉淀和免疫印迹法检测表皮生长因子引起的p120^ctn酪氨酸磷酸化改变情况,用间接免疫荧光法观察了表皮生长因子引起的p120^ctn在BEL—7404人肝癌细胞内的分布、转位。用相应的方法检测表皮生长因子促使BEL—7404人肝癌细胞的细胞形态和细胞粘附能力的改变情况。人全长p120^ctn反义核苷酸转染细胞,观察表皮生长因子促使的p120^ctn磷酸化改变情况是否受到明显抑制。结果表皮生长因子可使BEL—7404人肝癌细胞内的p120^ctn酪氨酸发生磷酸化,以表皮生长因子作用20min时最明显;在细胞内转染人全长p120^ctn反义核苷酸后,表皮生长因子对p120^ctn酪氨酸磷酸化的上调作用明显减弱。表皮生长因子刺激下,磷酸化的p120^ctn发生了细胞内转位,表现为p120^ctn细胞膜的表达明显减少,核表达增加;同时β—连环蛋白也发生相似的改变;表皮生长因子刺激下,BEL—7404人肝癌细胞的粘附能力明显下降;细胞形态变为细长和不规则,伪足增多。结论 在表皮生长因子刺激下BEL—7404中p120^ctn酪氨酸磷酸化增加,p120^ctn发生从细胞膜到核内的转位,并同表皮生长因子引起的细胞形态和细胞粘附能力的改变密切相关。结果 提示p120^ctn酪氨酸磷酸化与p120^ctn在细胞内的转位和细胞的生物学行为密切相关。     

siRNA下调Ezrin表达对人胰腺癌PANC-1细胞增殖和运动能力的影响

目的:探讨Ezrin蛋白在胰腺癌细胞生长和运动转移过程中的作用。方法:体外培养人胰腺癌PANC-1细胞,针对Ezrin基因设计小干扰RNA(siRNA),并通过脂质体转染入细胞,运用MTT法、流式细胞仪、划痕愈合实验、扫描电镜和Transwell实验方法,观察siRNA下调人胰腺癌PANC-1细胞Ezrin表达后,肿瘤细胞增殖、细胞周期、伪足形成、侵袭和迁移能力的改变。结果:Western印迹分析结果显示,Ezrin siRNA对Ezrin蛋白表达水平有显著的下调作用。下调Ezrin蛋白表达后,PANC-1细胞增殖明显被抑制,G2/M期细胞显著降低;细胞伪足形成显著减少,细胞的运动侵袭能力下降。结论:Ezrin在胰腺癌细胞恶性增殖和运动转移过程中具有重要作用,可能成为抑制胰腺癌侵袭转移的靶点。     

黄芩素对人胰腺癌PANC-1细胞增殖和运动能力的影响

目的:探讨黄芩素对人胰腺癌PANC-1细胞增殖、运动能力的影响及其机制。方法:体外培养人胰腺癌PANC-1细胞,运用MTT法、划痕愈合实验(Wound healing assay)、扫描电镜和Transwell实验等方法,观察黄芩素对人胰腺癌PANC-1细胞增殖、伪足形成、侵袭和迁移能力的影响,并运用Western印迹分析、RT-PCR检测黄芩素干预后肿瘤细胞Ezrin蛋白、磷酸化Ezrin蛋白及Ezrin mRNA表达的变化。结果:黄芩素呈时间和剂量依赖性抑制PANC-1细胞增殖,使肿瘤细胞伪足形成显著减少,细胞的运动侵袭能力下降。Western印迹分析和RT-PCR结果显示,黄芩素明显下调Ezrin-mRNA和Ezrin蛋白表达及其磷酸化活化。结论:黄芩素抑制肿瘤细胞恶性增殖及运动侵袭能力,可能与其抑制肿瘤细胞Ezrin表达及活化有关。     

伏立诺他抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖及其血管生成拟态的相关研究

目的 研究伏立诺他(SAHA)对人胰腺癌PANC-1细胞体外增殖、迁移及其细胞凋亡的影响，观察SAHA对胰腺癌PANC-1细胞主导的血管生成拟态的作用以及对PANC-1细胞中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)表达水平的影响。 方法 倒置显微镜下观察不同浓度的SAHA对PANC-1细胞增殖的作用。MTT比色法检测SAHA对PANC-1细胞的毒性作用。行细胞划痕试验观察SAHA对PANC-1细胞迁移的作用。流式细胞仪分析SAHA对胰腺癌PANC-1细胞凋亡的影响。利用细胞三维培养技术观察经SAHA诱导24 h后的胰腺癌PANC-1细胞体外类血管结构形成情况。Western blotting技术检测SAHA处理后的胰腺癌PANC-1细胞中MMP-2的表达水平。 结果 SAHA能显著抑制人胰腺癌PANC-1细胞的生长，且呈明显的剂量依赖性关系。与对照组相比，SAHA组均能抑制PANC-1细胞迁移(均P＜0.01)。SAHA可诱导人胰腺癌PANC-1细胞发生细胞凋亡。体外三维培养显示，SAHA组较对照组均能抑制PANC-1细胞主导的血管生成拟态(均P＜0.05)。随着SAHA浓度的递增，PANC-1细胞中MMP-2的表达水平呈现下降趋势(P＜0.05)。 结论 组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA能有效抑制人胰腺癌PANC-1细胞体外增殖、迁移并诱导其发生细胞凋亡，SAHA下调MMP-2的表达可能是SAHA抗胰腺癌血管生成拟态的机制之一。      

E-cadherin和P120ctn在子宫颈癌发生发展中的意义思义

目的探讨E—cadherin和P120ctn在子宫颈癌中的表达及在其发生发展中的意义。方法采用免疫组化方法检测子宫颈癌组织中E—cadherin和P120ctn的表达情况,以正常子宫颈黏膜及子宫颈上皮内瘤变（CIN）黏膜作为对照。结果E—cadherin和P120ctn在子宫颈癌中的表达下调率高于二者在正常子宫颈黏膜及CIN黏膜中的表达下凋率;E—cadherin和P120ctn在伴有淋巴结转移的子宫颈癌中的表达下凋率高于二者在不伴有淋巴结转移的子宫颈癌中的表达下调率：E—cadherin和P120ctn在浸及深肌层的子宫颈癌中表达下调率高于二者在未浸及深肌层的子宫颈癌中的表达下调率。结论E—cadherin和P120ctn表达下调和子宫颈癌发生有关：E—cadherin和P120ctn表达下调促进子宫颈癌的侵袭与转移。     

下调RbAp48表达可抑制人宫颈癌MS751细胞株的迁移侵袭能力

目的探讨下调RbAp48表达对人宫颈癌细胞迁移侵袭的影响及其作用机制。方法siRNA下调RbAp48表达,以划痕实
验、Transwell 小室检测下调RbAp48 表达后对人宫颈癌细胞株MS751 迁移侵袭的影响,Western bolt 检测Vimentin、
N-cadherin、E-cadherin 、Snail、Twist、MMP-2、TIMP-2蛋白的表达。结果下调RbAp48表达后MS751细胞的迁移和侵袭数均
明显减少（P<0.01）;其间质细胞表型蛋白Vimentin、N-cadherin、MMP-2 表达明显受到抑制;上皮细胞表型蛋白E-cadherin、
TIMP-2表达明显升高,显示MS751细胞的上皮-间充质样变（EMT）受到抑制。Snail、Twist表达水平也发生显著下调。结论下
调RbAp48 表达能有效抑制宫颈癌MS751 细胞株的上皮-间充质样变,降低细胞的迁移侵袭能力;其作用机制与降低Snail、
Twist的表达有关。
     

S100A4 siRNA Inhibits Human Pancreatic Cancer Cell Invasion In Vitro

ObjectivePancreatic cancer is one of the most deadly cancers, which is characterized by its high metastatic potential. S100A4 is a major prometastatic protein involved in tumor invasion and metastasis which precise role in pancreatic cancer has not been fully investigated. We knocked down the S100A4 gene in the Bxpc-3 pancreatic cancer cell line via RNA interference to study the changes in cell behavior.MethodsReal-time polymerase chain reaction and western blotting were used to detect mRNA and protein expression levels of S100A4, matrix metalloproteinase (MMP)-2, E-cadherin and thrombospondin (TSP)-1. Transwell chambers were used to detect the migration and invasion abilities; a cell adhesion assay was used to detect adhesion ability; colony forming efficiency was used to detect cell proliferation; flow cytometry was used to detect apoptosis.ResultsS100A4 mRNA expression was reduced to 17% after transfection with S100A4-siRNA, and protein expression had a similar trend. mRNA and protein expression of MMP-2 was reduced and that of E-cadherin and TSP-1 was elevated, indicating that S100A4 affects their expression. S100A4-silenced cells exhibited a marked decrease in migration and invasiveness and increased adhesion, whereas overall proliferation and apoptosis were not overtly altered.ConclusionS100A4 and its downstream factors play important roles in pancreatic cancer invasion, and silencing A100A4 can significantly contain the invasiveness of pancreatic cancer.     

E-cadherin／p120ctn与肿瘤关系的研究进展

上皮-钙粘蛋白（E-cadherin）是一类介导上皮细胞-细胞间粘附作用的钙依赖性跨膜糖蛋白。它与细胞内链蛋白（catenin）的家族成员α-catenin、β-catenin、γ-catenin以及p120ctn结合构成粘蛋白-链蛋白复合体（cadherin catenin complex,CCC）,维持着上皮细胞间粘附力和正常上皮组织结构完整性和极性,在肿瘤演进过程中扮演着重要的角色。E-cadherin／p120ctn在恶性肿瘤中表达异常,提示其在恶性肿瘤的发生、发展、浸润、转移中具有一定的作用。     

芒果甙对连环蛋白P120磷酸化及肝癌细胞生物学行为的影响

目的：探讨P120^ctn磷酸化与肝癌细胞恶性行为的关系,以及黄酮类化合物芒果甙对P120^ctn磷酸化和肝癌细胞生物学行为的影响。方法：用EGF刺激法使人肝癌细胞P120^ctn发生酪氨酸磷酸化并以免疫沉淀和免疫印迹法进行鉴定分析,同时观察芒果甙对细胞的干预作用。结果：肝癌细胞经EGF刺激后,P120^ctn发生酪氨酸磷酸化。细胞黏附能力降低而迁移能力增强。而经芒果甙处理后,在一定程度上能使这些恶性表现得到逆转。表现为P120““酪氨酸磷酸化程度较轻;细胞恶性形态有所改善。伪足减少。结论：P120^ctn在肝癌细胞黏附和恶性行为中起重要作用。酪氨酸磷酸化后的P120^ctn与细胞恶性行为的增强有关;结果进一步提示芒果甙对P120^ctn酪氨酸磷酸化有抑制作用。     

ART1基因沉默对小鼠结肠癌CT26细胞黏附和运动能力的影响

 目的   探讨单腺苷二磷酸核糖基化转移酶-1［mono(ADP ribosyl)transferase-1,ART1］基因沉默对小鼠结肠癌CT26细胞黏附、运动和侵袭能力的影响及其机制。方法   以携带ART1-shRNA的慢病毒感染小鼠结肠癌CT26细胞。将细胞分为实验组(感染ART1-shRNA慢病毒的CT26细胞),NC-shRNA对照组［感染阴性对照慢病毒(negative-control-shRNA,NC-shRNA) CT26细胞］及未处理组(未经处理的CT26细胞);RT-PCR 检测CT26细胞ART1 mRNA 表达变化,Western blot检测ART1、RhoA、integrinβ1蛋白表达的变化;用细胞基质黏附、运动和侵袭实验观察ART1-shRNA对CT26细胞基质黏附、运动和侵袭能力的影响。结果  获得稳定沉默ART1基因的CT26细胞株;RT PCR和Western blot结果均显示,实验组ART1 mRNA和ART1蛋白表达显著低于对照组(P<0.01);Western blot结果显示实验组RhoA、integrinβ1表达均显著低于对照组(P<0.01);实验组细胞黏附、运动、侵袭抑制率分别为70.72%,52.20%和60.00%。结论  单腺苷二磷酸核糖基化转移酶-1 (ART1)基因沉默可降低CT26细胞的黏附、运动、侵袭能力,该作用可能与ART1沉默后下调RhoA和integrin β1活性有关。     

长链非编码RNA MALAT1促进皮肤鳞癌的发生和发展

目的探索长链非编码RNA MALAT1在皮肤鳞癌发生发展中的作用,为皮肤鳞癌的临床治疗提供基础理论依据。方法 收集55例皮肤鳞癌样本和10例正常皮肤组织样本,采用qRT-PCR与原位杂交方法检测MALAT1在皮肤鳞癌组织和正常组织 中的表达情况。在皮肤鳞癌细胞株A431中,采用siRNAs（siNC, siMALAT1-1, siMALAT1-2）和Lipofectamine2000进行细胞转 染来敲减基因,采用Transwell实验,细胞划痕实验,CCK增殖实验检测皮肤鳞癌细胞的迁移侵袭能力,运动能力和增殖能力。 采用qRT-PCR方法检测A431中MALAT1与上皮间质转化（EMT）样转化相关因子（E-cadherin, Vimentin, β-catenin）的变化;明 确其关系。结果相比正常组织,皮肤鳞癌组织的不同分化水平上（高分化,中分化,低分化）,MALAT1 的表达率均升高（P< 0.001）。在皮肤鳞癌细胞A431 中,转染MALAT1 siRNAs 下调其表达后,与对照相比,其增殖能力（P<0.001）,迁移能力（P< 0.01）,侵袭能力（P<0.01）,细胞划痕运动能力均下降（P<0.01）。且EMT相关因子中上皮表型标志物E-cadherin,β-catenin的表 达升高（P<0.01）,间质表型分子vimentin 表达降低（P<0.01）。结论长链非编码RNA MALAT1在皮肤鳞癌的发生发展中起促 进作用,可以为皮肤鳞癌的临床治疗提供基础理论依据。     

沉默YAP1可抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力

目的探究沉默Yes 相关蛋白1（YAP1）对鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法采用实时荧光定量PCR和 Western blot方法检测YAP1在鼻咽癌细胞系中的表达水平;在鼻咽癌细胞S26和S18中转染3条合成的小干扰RNA：si-NC, si- YAP1#1和si-YAP1#2,以转染阴性对照si-NC的细胞作为对照组,转染si-YAP1#1和si-YAP1#2的细胞作为实验组,实时荧光定 量PCR和Western blot检测转染后的干扰效率;通过细胞计数、平板克隆形成等方法评估转染si-YAP1#1和si-YAP1#2后的实验 组和转染si-NC的对照组对鼻咽癌细胞增殖能力的影响;用划痕和Transwell 方法分析各组细胞迁移与侵袭能力的变化; Western blot检测各组细胞中c-myc、上皮性钙黏蛋白（E-cadherin）、神经性钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）等与细 胞增殖和上皮间质转化相关蛋白的表达变化。结果YAP1在鼻咽癌细胞系中高表达;与阴性对照组相比,转染si-YAP1#1和si- YAP1#2的实验组细胞中YAP1的mRNA及蛋白水平均显著降低（P<0.05）;生长计数、平板克隆、划痕及Transwell等实验结果 均显示转染si-YAP1#1和si-YAP1#2的实验组细胞的生长和克隆能力、划痕愈合能力及侵袭能力较阴性对照组细胞明显下降 （P<0.01）;且相较阴性对照组,实验组细胞中c-myc、N-cadherin和Vimentin等蛋白的表达水平降低,E-cadherin的表达量增加。 结论YAP1在鼻咽癌细胞系中高表达,在鼻咽癌细胞中利用siRNA靶向敲低YAP1的表达后可以抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移 及侵袭能力,提示YAP1可以作为一个潜在的鼻咽癌临床治疗干预靶点。     

Re-expression of cell adhesion molecule inhibits growth and induces apoptosis of human pancreatic cancer cell line PANC-1

This study examined the expression of cell adhesion molecule 1 (CADM1) in pancreatic cancer and the possible mechanism.The expression of CADM1 was detected by immunohistochemistry in tissues of pancrea...     

长链非编码RNA MALAT-1基因的敲除抑制人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞的增殖和迁移

目的探讨敲除长链非编码RNA MALAT-1基因对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞的影响。方法使用实时聚合酶链反应（RTPCR） 以永生化鼻咽上皮（NPE）细胞株NP-69作为参照检测FaDu、Hep-2和鼻咽癌CNE-2Z细胞MALAT1的表达,使用shmalat1 慢病毒转染Hep-2细胞,RT-PCR检测其MALAT1的表达。增殖速率分析,MTT法明确MALAT-1对细胞增殖的影响。流式细 胞术分析细胞周期和细胞凋亡。采用Transwell 小室检测Hep-2 细胞的迁移。最后使用Matrigel 侵袭实验评估shmalat1 和 shCtrl慢病毒转染的Hep-2细胞的侵袭能力。结果使用qPCR检测FaDu、Hep-2和鼻咽癌CNE-2Z细胞MALAT1的表达,结果 发现与NP-69细胞相比,FaDu、Hep-2和鼻咽癌CNE-2Z细胞MALAT1的表达显著增加。敲除MALAT1明显抑制Hep-2细胞增 殖。与MOCK和shCtrl 细胞相比,MALAT1-shRNA 慢病毒转染细胞S期细胞数量显著增加（P<0.01）。此外,细胞在G2/M期 的百分比下降（P<0.01）。下调MALAT1时,Hep-2细胞的侵袭和迁移都受到抑制。结论MALAT1在喉鳞状细胞癌高表达。敲 除长链非编码RNA MALAT-1基因对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移起抑制作用。     

长链非编码RNA MALAT1对胰腺癌细胞系PANC-1转移的影响

目的:探讨长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1（MALAT1）在胰腺癌细胞系中的表达及其对PANC-1转移的影响。方法:应用荧光定量PCR检测4种胰腺癌细胞系中MALAT1的表达水平,通过siRNA下调PANC-1的MALAT1水平,应用贴壁、离壁实验和Transwell迁移、侵袭实验观察PANC-1的贴壁、离壁、迁移和侵袭能力,应用Western blotting检测PANC-1的Vimentin、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平。结果:4种胰腺癌细胞系中MALAT1差异性表达,PANC-1细胞系中表达最高。下调MALAT1的表达后,PANC-1的Vimentin、MMP-2和MMP-9的蛋白水平显著下降（P<0.01）,贴壁、离壁、迁移、侵袭能力均显著减弱（P<0.01）。结论:下调MALAT1通过降低Vimentin、MMP-2和MMP-9的表达可减弱胰腺癌细胞系PANC-1的转移能力。