辛伐他汀对人牙周膜成纤维细胞增殖和成骨分化的影响

目的:评价辛伐他汀对人牙周膜成纤维细胞增殖和成骨分化的影响。方法:采用组织块法进行人牙周膜成纤维细胞的分离培养。在培养液中加入不同浓度的辛伐他汀,分为对照组(0 mol/L)和5个实验组(10-8、10-7、10-6、10-5和10-4mol/L),检测各组细胞增殖能力和碱性磷酸酶活性。通过矿化结节茜素红染色和RT-PCR,评价辛伐他汀对细胞成骨能力和成骨相关基因表达的影响。结果:辛伐他汀浓度为10-7mol/L时,细胞增殖能力显著提高(P﹤0.05)。辛伐他汀浓度为10-8、10-7、10-6和10-5mol/L时,细胞碱性磷酸酶活性均有显著增强(P﹤0.05),其中,10-7mol/L组增强作用最明显。茜素红染色显示,10-7mol/L辛伐他汀能促进细胞矿化结节形成;RT-PCR结果表明,辛伐他汀促进细胞碱性磷酸酶和骨形成蛋白-2基因表达呈时间依赖性增高。结论:10-7mol/L的辛伐他汀不仅有利于人牙周膜成纤维细胞增殖,而且促进其成骨分化和相关基因的表达。     

辛伐他汀对人牙周膜细胞成骨活性的影响

目的研究辛伐他汀对人牙周膜细胞成骨活性的影响。方法将第3代人牙周膜细胞在条件矿化培养液中诱导培养,同时加入不同浓度的辛伐他汀,将其分为A组（0 mol/L）、B组（1×10-9 mol/L）、C组（1×10-8 mol/L）、D组（1×10-7 mol/L）、E组（1×10-6 mol/L）,分别检测碱性磷酸酶活性、骨桥蛋白（OPN）表达,并对矿化结节进行计数。结果辛伐他汀各浓度组（1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6 mol/L）均能促进人牙周膜细胞的成骨分化和矿化,其中1×10-8、1×10-7、1×10-6 mol/L与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）,1×10-7 mol/L的辛伐他汀组促进成骨活性的作用最明显。结论适宜浓度的辛伐他汀可以有效促进人牙周膜细胞的成骨活性。     

辛伐他汀对大鼠成骨细胞增殖和分化功能的实验研究

目的 :研究辛伐他汀对大鼠成骨细胞增殖和分化功能的影响 ,探讨其刺激成骨的作用机制。方法 :体外培养4周龄大鼠骨髓基质细胞 ,在条件培养液诱导下 ,分化为成骨细胞。以不同浓度辛伐他汀 (0.062μmol/l ,0.125μmol/l,0.25μmol/l ,0.5μmol/l,1.0μmol/l)作用于成骨细胞 ,用MTT法测定细胞增殖情况 ;PNPP法测定细胞碱性磷酸酶 (ALP)活性 ;检测培养液中羟脯氨酸 (Hpro)含量反映细胞I型胶原的分泌情况 ;通过矿化结节计数反映细胞的矿化能力。结果 :辛伐他汀抑制细胞增殖 ,在10 -7mol/l浓度组与对照组比较有统计学意义 (P<0.05) ;各浓度组的ALP活性均增加 ,以0.5μmol/l对酶活性的影响最显著 (P<0.05) ;羟脯氨酸含量增加 ,以10-7mol/l浓度组与对照组比较有统计学意义 (P<0.05) ;辛伐他汀显著提高细胞的矿化能力 ,0.5μmol/l浓度作用最显著 ( +43.2 %,P<0.05)。结论 :辛伐他汀抑制细胞增殖 ,促进细胞ALP活性增加 ,I型胶原分泌增强 ,提高成骨细胞的矿化能力     

辛伐他汀对大鼠骨髓基质细胞分化和矿化功能的影响

目的:研究辛伐他汀对大鼠骨髓基质细胞分化和矿化功能的影响,探讨其刺激成骨及防治骨质疏松症的机制.方法:体外培养4周龄大鼠骨髓基质细胞,以不同浓度辛伐他汀(10-9mol/l,10-8mol/l,10-7mol/l,10-6mol/1)作用,观察细胞生长情况和形态变化,测定细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,Ⅰ型胶原的分泌和矿化能力.结果:辛伐他汀各浓度组的ALP活性均增加,以10-7mol/l浓度作用最显著(P＜0.05);辛伐他汀10-8mol/l和10-7mol/l浓度明显促进Ⅰ型胶原的分泌;辛伐他汀显著提高细胞的矿化能力,以10-7mol/l浓度作用最显著( 44.5%,P＜0.05).结论:辛伐他汀促进骨髓基质细胞的分化,提高其矿化能力,有助于骨质疏松症的防治.     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响

目的：探讨淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响,为淫羊藿苷在治疗牙周病方面的应用提供一定依据。方法：体外培养人牙周膜细胞,矿化诱导条件下将第3代细胞与10～0.001mg/L,6个浓度的淫羊藿苷作用,通过噻唑蓝（MTT）比色法、ALP活性测定及BSP表达水平,反应其对人牙周膜细胞增殖及分化的影响。结果：作用24h,各药物浓度均能促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用48h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用72h,0.1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）,10mg/L组抑制人牙周膜增殖（P〈0.05）;作用72h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜碱性磷酸酶（ALP）活性（P〈0.05）;作用72h,0.1～0.001mg/L组的BSP表达水平较对照组显著增加（P〈0.05）。结论：淫羊藿苷在一定浓度范围内可促进人牙周膜细胞增殖及骨向分化。     

氯化锂对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响

目的:探讨Wnt/β-catenin通路激活剂—氯化锂(lithium chloride,LiCl)对体外培养的人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)增殖和成骨分化的影响。方法:低密度多克隆法分离培养人PDLSCs,分别与不同浓度的LiCl(5、10、20、40 mmol/L)共同培养。分别检测各组细胞的增殖情况、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、钙化结节形成量以及Col-1、OCN、Runx-2等成骨相关基因的表达水平。结果:LiCl无促细胞增殖作用,且高浓度LiCl能明显抑制细胞的增殖。浓度为5 mmol/L的LiCl可促进hP-DLSCs成骨性分化,表现为提高细胞的ALP活性、促进钙化结节的形成、上调Col-1、OCN、Runx-2的mRNA表达水平,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05)。而高浓度(≥10 mmol/L)LiCl则对成骨分化具有抑制作用。结论:终浓度为5 mmol/L的LiCl可明显促进hPDLSCs的成骨分化。     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响

体外培养人牙周膜细胞,矿化诱导条件下将第3代细胞与10～0.001mg/L,6个浓度的淫羊藿苷作用,通过噻唑蓝(MTT)比色法、ALP活性测定及BSP表达水平,反应其对人牙周膜细胞增殖及分化的影响。结果:作用24h,各药物浓度均能促进人牙周膜细胞增殖(P<0.05)。作用48h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖(P<0.05)。作用72h,0.1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖(P<0.     

视黄酸对人牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞碱性磷酸酶活性和组织非特异性碱性磷酸酶基因表达的影响

视黄酸(RA)能促进多种细胞的生长和分化。体外实验证实,RA可以促进成骨细胞和成纤维细胞的组织非特异性碱性磷酸酶(TNSALP)基因表达和ALP活性。本实验目的在于确定RA对牙龈成纤维细胞(GF)和人牙周膜细胞(HPDL)的ALP活性和编码TNSALP的mRNA表达的作用。 材料和方法 取因正畸而拔除的健康前磨牙的根中1/3牙周膜组织,以组织块培养法获得HPDL细胞系,GF细胞系来源于牙周手术切除的健康龈组织,取5～7代细胞用于下述实验。两种细胞分别用10~(-7)mol/L,10~(-6)mol/L,10~(-5)mol/L 3种浓度的RA处理并培养0～7d,相差显微镜观察细胞形态变化;细胞以上述3种浓度     

高浓度唑来膦酸对人牙周膜干细胞凋亡及成骨分化影响的实验研究

目的：研究高浓度唑来膦酸对体外分离的健康人牙周膜干细胞增殖、凋亡和成骨分化的影响。方法：体外分离培养健康人牙周膜干细胞,用不同浓度的唑来膦酸（5μmol/L、10 μmol/L）处理,不加药组为空白对照。 以 CCK8 检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞凋亡,ALP、茜素红染色及半定量分析检测细胞体外成骨分化,荧光定量PCR检测成?标志物I型胶原(COL1A1)和骨钙素（OCN）基因的表达,免疫荧光检测 OCN和 COL1A1 蛋白的表达。结果： 唑来膦酸可呈计量依赖性抑制人牙周膜干细胞增殖;唑来膦酸用药组细胞的凋亡率显著?于对照组,且随着药物浓度的增加,凋亡百分比逐渐上升;ALP和茜素红染?结果表示唑来膦酸用药组细胞的体外成骨分化能力较对照组显著下降;荧光定量PCR和免疫荧光结果提示,药物处理后OCN和 COL1A1的基因表达和蛋白表达均降低。结论：高浓度唑来膦酸显著抑制人牙周膜干细胞的增殖及体内外成骨分化,并诱导其凋亡。     

成骨生长肽对体外人牙髓细胞增殖和矿化作用的影响

目的 观察成骨生长肽(OGP)对体外人牙髓细胞增殖和矿化作用的影响.方法 酶消化组织块法体外培养人牙髓细胞(hDPCs),倒置相差显微镜观察hDPCs的形态.CCK-8、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测筛选最佳浓度OGP;最佳浓度组、对照组、单纯矿化液组和含最佳浓度的矿化液组做茜素红、Von Kossa染色和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测.结果 酶消化组织块法可以良好的体外培养hDPCs;OGP浓度在10-7 ～ 10-11 mol/L均能促进hDPCs增殖和ALP活性:促增殖最佳浓度为10-10 mol/L,随时间延长,与10-9 mol/L浓度组间差异无统计学意义;OGP浓度为10-9 mol/L时能显著增强ALP活性.茜素红和Von Kossa染色观察第14、21天,四组均有钙化结节形成,联合组结节最大,数量最多;RT-PCR结果显示第7、14、21天,联合组的Ⅰ型胶原、牙本质涎磷蛋白(DSPP)和骨钙素(OCN)的mRNA表达量均高于其他各组(P ＜ 0.01).结论 OGP能促进体外hDPCs的增殖和分化,结合两者最优浓度为10-9 mol/L;茜素红和Von Kossa染色可以观察钙化结节形成过程;OGP联合矿化诱导液可以显著提高体外hDPCs的矿化.     

Simvastatin promotes cell metabolism, proliferation, and osteoblastic differentiation in human periodontal ligament cells

BACKGROUND: Simvastatin is one of the cholesterol lowering drugs. Recent studies demonstrated that it has a bone stimulatory effect. Periodontal ligament (PDL) cells are believed to play an important role in periodontal regeneration; that is, they may differentiate into specific cells which make cementum, bone, and attachment apparatus. It would be of interest whether simvastatin has a positive effect on PDL cells. Therefore, effects of simvastatin on cell proliferation and osteoblastic differentiation in PDL cells were analyzed. METHODS: Human PDL cells were cultured in monolayer with simvastatin for 24 and 72 hours and cell metabolism and proliferation were determined. To analyze osteoblastic differentiation, human PDL cells were cultured in organoid culture for 7, 14, and 21 days and alkaline phosphatase (ALP) activity, osteopontin (OPN), bone morphogenetic protein (BMP) -2, osteocalcin (OCN), and calcium contents were measured. They were co-treated by simvastatin and mevalonate. RESULTS: Simvastatin enhanced cell proliferation and metabolism dose-dependently after 24 hours. Simvastatin also stimulated ALP activity of human PDL cells dose-dependently, and maximum effect was obtained at the concentration of 10(8) M. In time dependent analysis, 10(8) M simvastatin stimulated ALP activity and osteopontin content after 7 days and calcium contents after 21 days. BMP-2 and OCN contents were not detected. Moreover this statin-enhanced ALP activity was abolished by mevalonate. CONCLUSION: These results suggest that at low concentration, simvastatin exhibits positive effect on proliferation and osteoblastic differentiation of human PDL cells, and these effects may be caused by the inhibition of the mevalonate pathway.     

唑来膦酸对兔成骨细胞分化及骨保护素分泌的影响

目的 探讨不同浓度的唑来膦酸对成骨细胞分化的影响及其对骨保护素(osteoprotegerin,OPG)分泌的促进作用,以期为唑来膦酸的进一步局部应用提供理论依据.方法 利用组织块培养法进行成骨细胞原代及传代培养.原代培养3d后对细胞爬片行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色,原代培养18 d后将细胞爬片用钙结节染色并鉴定;将唑来膦酸加入含传代第3代成骨细胞悬液的培养液中使其终浓度为0(对照组)、10-5、10-6、10-7、10-8及10-9 mol/L(5个实验组),收集细胞上清液进行ALP检测,用放射免疫测定法测定骨钙素的含量;培养3 d后收集细胞,结合蛋白质印迹法测定细胞分泌的OPG.结果 成骨细胞ALP染色阳性,钙结节茜素红染色呈橘红色钙化结节,唑来膦酸浓度为10-6、10-7、10-8及10-9 mol/L的实验组可促进骨钙素含量增加[分别为(2.80±0.51)、(3.20±0.33)、(4.70±0.35)、(3.40±0.36)μg/L]、ALP活性增强[分别为(5.91±0.35)、(7.62±0.33)、(10.00±0.38)、(8.91±0.29)U/L]、OPG表达升高[分别为(526 955.7±64 068.9)、(661 447.9±75 223.4)、(753 083.3±70 300.0)、(655 184.1±63 401.1)],与对照组[骨钙素含量为(2.40±0.35)μg/L、ALP活性为(4.28±0.36)U/L、OPG表达为(64 713.7±28 715.6)]相比差异均有统计学意义(P＜0.01),并在10-8mol/L组达峰值.结论 唑来膦酸可以提高成骨细胞活性,促进OPG分泌.     

淫羊藿苷对犬骨髓间充质干细胞增殖、成骨和成脂分化的影响

目的:研究淫羊藿苷对犬骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖和成骨、成脂分化的影响。方法:将淫羊藿苷配制成终浓度为1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4 mol/L的溶液,以0 mol/L组为空白对照组,分别用于体外培养犬BMSCs。CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,碱性磷酸酶试剂盒检测碱性磷酸酶活性。然后实验分为淫羊藿苷组和对照组,分别在含或不含成骨、成脂诱导液条件下,行成骨、成脂诱导分化实验,通过茜素红和油红O染色检测各组钙沉积和脂质形成面积。结果:发现淫羊藿苷1×10-6 mol/L组促进犬BMSCs增殖,而1×10-4mol/L组抑制增殖。碱性磷酸酶活性与淫羊藿苷浓度呈剂量依赖性关系。不含成骨、成脂诱导液条件下,各组均几乎未见明显钙沉积和脂质形成;含成骨、成脂诱导液条件下,淫羊藿苷组(1×10-6 mol/L)钙沉积面积高于对照组,脂质形成面积低于对照组。结论:淫羊藿苷能促进犬BMSCs增殖和成骨分化,并抑制其成脂分化。     

柚皮苷对犬骨髓基质细胞体外增殖及成骨分化的影响

目的:研究犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells, BMSCs)在柚皮苷诱导下定向成骨及成骨分化能力。方法:抽取犬骨髓,贴壁法体外培养,流式细胞仪鉴定,加入不同浓度柚皮苷(1×10-5、1×10-6、1×10-7、1×10-8、1×10-9 mol/L)诱导,以CCK-8检测药物毒性,定量检测碱性磷酸酶、von Kossa检测钙结节形成。采用SPSS20.0软件包对数据进行统计学分析。结果:经流式细胞仪检测,CD34、CD45低表达、CD90高表达分别为0.126%、0.075%和95.4%;柚皮苷浓度在10-6、10-7 mol/L时,能明显促进细胞增殖;经柚皮苷诱导后,碱性磷酸酶含量显著提高,其中,浓度为10-6 mol/L时,ALP相对值最高(P<0.05);von Kossa钙结节检测呈阳性。结论:犬骨髓基质细胞在柚皮苷诱导下能分化为成骨细胞。柚皮苷浓度为10-6 mol/L时,能明显促进骨髓基质细胞的增殖及分化。     

川续断皂苷Ⅵ对小鼠成肌细胞成骨分化的影响

目的 探讨川续断皂苷Ⅵ对小鼠成肌细胞成骨分化的作用及影响.方法 配制浓度为1×10-8～1×10-3 mol/L的川续断皂苷Ⅵ药物溶液,用细胞计数试剂盒8检测其对小鼠成肌细胞的细胞毒性和增殖能力.然后用碱性磷酸酶活性分析确定促进其成骨分化的最佳浓度.最后采用免疫印迹分析、实时定量PCR和茜素红染色观察成骨分化效果.结果...     

内皮素促人牙周膜成纤维细胞生长作用的体外研究

目的:探讨不同浓度内皮素-1(ET-1)对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblastcells,HPLFs)增殖和分化的影响,为进一步探讨正畸牙齿移动的生物学机制奠定基础。方法:采用HPLFs体外培养技术和四唑盐(MTT)显色分光光度法及生化检测法观察ET-1对人牙周膜成纤维细胞增殖和分化的影响。结果:与对照组相比,10-8mol/L组ET-1对HPLFs具有显著的促增殖作用(P<0.01),10-6mol/L组ET-1对HPLFs的增殖具有明显的抑制作用(P<0.01)。ET-1对HPLFs的分化没有影响。结论:ET-1为促HPLFs生长因子,但是对细胞分化不产生影响,可能在正畸过程中牙周组织的改建中发挥作用。     

浓缩生长因子与1,25二羟基维生素D3对骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化的影响

目的:研究浓缩生长因子(concentrated growth factor,CGF)及其与1,25二羟基维生素D3(1,25(OH)_2VD_3)联合应用时,对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及成骨分化的影响。方法:全骨髓培养法提取、分离SD大鼠股骨BMSCs,分别采用6种不同培养液而分为6组。使用SD大鼠血液在Medifuge离心机中制备CGF,并收集CGF浓缩液。实验A、B、C组,分别为采用含5%、10%和20%浓度CGF的L-DMEM培养液组,单独使用1,25(OH)_2VD_3(10~(-10)mol/L)的为D组。B组与D组混合为E组。F组为空白对照组。采用上述6组培养基孵育BMSCs 7 d。采用CCK-8实验评价大鼠BMSCs在不同条件下的生长增殖情况;ALP活性染色实验检测各组ALP的生成,实时定量PCR检测成骨分化标志物基因OCN、Col-1和Runx2共3种成骨分化标志物基因的表达情况。结果:5%和10%的CGF浓缩液能促进大鼠BMSCs增殖,且10%浓度优于5%浓度。而20%CGF和1,25(OH)_2VD_3(10~(-10)mol/L)都抑制了大鼠BMSCs的增殖。1,25(OH)_2VD_3(10~(-10)mol/L)与CGF(10%)浓缩液联合应用时,细胞增殖介于两者之间。A、B、C组ALP活性及OCN、Col-1和Runx2的mRNA表达均受到了抑制。D组和E组均促进了大鼠BMSCs的ALP活性,并提高了OCN、Col-1和Runx2的mRNA表达水平。结论:CGF浓缩液(10%)与1,25(OH)_2VD_3(10~(-10)mol/L)的联合应用,可促进大鼠BMSCs的增殖,并对其成骨分化具有促进作用。     

川续断皂苷Ⅵ对人颌骨骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的 探讨川续断皂苷Ⅵ(asperosaponinⅥ,ASAⅥ)对人颌骨骨髓间充质干细胞(human jaw bone marrow mesenchymal stem cells,hjBMSCs)成骨分化的影响。方法 流式鉴定提取的hjBMSCs表面的特异性抗原;CCK8检测1×10^-4、1×10^-5、1×10^-6、1×10^-7、1×10^-8 mol/L的ASAⅥ药物溶液对hjBMSCs增殖的影响;用BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色、茜素红染色(alizarin red stain,ARS)及免疫印迹分析(western-blot,WB)验证ASAⅥ促进hjBMSCs成骨分化作用的同时,确定ASAⅥ促进hjBMSCs成骨分化合适浓度。用实时定量荧光PCR(real-time quantitative PCR,RT-PCR)进一步探索,在mRNA水平,ASAⅥ对hjBMSCs成骨分化的影响。结果 实验结果表明,1×10^-4 mol/L的ASAⅥ对hjBMSCs有明显的毒性作用(P<0.01),1×10^-8～1×10^-5 mol／L对细胞增殖无明显毒性作用。与对照组相比,1×10^-5 mol／L、1×10^-6 mol／L ASAⅥ组的碱性磷酸酯酶、钙结节沉淀、成骨分化特异性蛋白表达量均明显升高。与对照组相比,1×10^-5 mol／L、1×10^-6 mol／L组的Runx2、OCN和COL-Ⅰ在mRNA水平的表达均明显上升(P<0.01),且前者略显优势。结论 1×10^-5、1×10^-6 mol／L的ASAⅥ均能较好促进hjBMSCs成骨分化,且1×10^-5 mol／L略显优势。