乙型肝炎病毒（HBV）相关性肾炎患者肾活检组织中HBVDNA分布…

为探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）相关性肾炎的发病机理，应用地高辛素标记ＨＢＶＤＮＡ探针原位分子杂交（ＩＳＨ）和直接原位聚合酶链反应（Ｓ－ＰＣＲ）技术，对２０例临床诊断为ＨＢＶ相关性肾炎患者肾活检石蜡包埋组织切片检查。在ＩＳＨ中采用ＨＢＶ ＤＮＡ两种探针；用全长段探针；８５％（１７／２０）ＨＢＶＤＮＡ阳性，这１７例阳肾组织切片再用ＨＢＶＤＮＡＳ加Ｃ段探针检测，１４例阳性（８２．３５％）。在ＩＳ－ＰＣＲ中     

肾小球肾炎肾组织中HBV感染的标志

为了解肾组织中ＨＢＶＤＮＡ与ＨＢＶ抗原存在的关系，探讨肾组织中ＨＢＶ抗原的来源及其与病理变化的关系，我们检测２４６例肾炎肾组织中三种ＨＢＶ抗原。发现除肾小球沉积外，肾小管常有阳性表达。肾小管ＨＢｃＡｇ阳性率达２１．５４％，高于肾小球（１０．９８％）。有１８例肾组织经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交检测ＨＢＶＤＮＡ，１５例阳性者中１４例肾组织ＨＢＶ抗原同时阳性，１２例血清感染标志亦阳性。结果提示某些肾炎可能与肾组织感染ＨＢＶ相关，肾组织中出现的ＨＢＶ抗原抗体免疫复合物除来自血循环外，有肾源性──原位形成的可能。     

乙型肝炎病毒感染在肾小球肾炎发病中的作用

为探讨ＨＢＶ感染于肾小球肾炎发病机制中的作用，收集５０例血清ＨＢＶ感染标志阳性或／和肾组织免疫组化证实ＨＢＡｇ阳性肾炎患者的肾穿刺组织，应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交和原位分子杂交观察ＨＢＶＤＮＡ的存在状态和定位。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交阳性率为７３．９％，其中８２％属整合型；原位杂交显示肾小管和肾小球ＨＢＶＤＮＡ的阳性率分别为７２％和５６．５％。其结果提示肾组织本身感染ＨＢＶ，因而考虑沉积于肾小球上的ＨＢＡｇ除源于血循环（肝原）外，尚有原位合成的可能；认为ＨＢＶ相关性肾炎的发病除ＨＢＶ抗原、抗体在肾小球沉积导致的体液免疫损伤机制外，应考虑因肾组织感染ＨＢＶ而导致的细胞免疫机制参与作用。     

用聚合酶链反应检测人肝细胞癌乙型肝炎病毒DNA和丙型肝炎病毒RNA

为研究乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶＤＮＡ）和丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶＤＮＡ）与肝细胞癌的关系，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和巢式ＰＣＲ（ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）分别检测４２例肝肿瘤组织中ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ。结果：１例胆管细胞癌组织ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ均阳性，１例胆管囊腺瘤ＨＢＶＤＮＡ阳性。４０例肝细胞癌组织中，单纯ＨＢＶＤＮＡ阳性１９例，单纯ＨＣＶＲＮＡ阳性３例，二者均阳性１０例。ＨＢＶＤＮＡ阳性率７２．５％，ＨＣＶＲＮＡ阳性率３２．５％。ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ感染与肝癌组织学分型无关；且肝细胞癌中ＨＣＶ感染与ＨＢＶ未见相关。结果提示，我国ＨＢＶ感染仍是引起肝细胞癌的主要原因。但由于肝细胞癌患者中ＨＣＶ的感染率也较高，且有上升趋势，因此ＨＣＶ可能也是肝细胞癌发生的重要原因之一。     

HBV感染与IgA肾病肾小管间质病变的关系

目的探讨ＩｇＡ肾病ＨＢＶ感染与肾小管间质病变的关系。方法利用原位分子杂交（ＨＢＶＤＮＡ）、免疫组化（ＨＢＡｇ、ＣＤ３、ＣＤ８）以及ＨＢＶＤＮＡＨＢＡｇ和ＨＢＡｇＣＤ４３双标记技术，对９１例ＩｇＡ肾病肾穿刺标本进行研究。结果肾组织内ＨＢＡｇ阳性率为６９．２％。ＨＢＶＤＮＡ原位杂交阳性率为４２９％。ＨＢＶＤＮＡ阳性的病例，双重标记染色发现ＨＢＶＤＮＡ阳性的肾小管上皮细胞可表达ＨＢｃＡｇ或／和ＨＢｓＡｇ。ＨＢＶ感染标记（ＨＢＶＤＮＡ、ＨＢｃＡｇ、ＨＢｓＡｇ）阳性组ＣＤ３阳性细胞和ＣＤ８阳性细胞数明显高于阴性组（Ｐ＜００１），并可见数量不等的Ｔ淋巴细胞入侵ＨＢｃＡｇ及ＨＢｓＡｇ阳性肾小管管壁或围绕其周围。结论感染ＨＢＶ的肾组织细胞能够表达ＨＢＡｇ，并诱导ＣＤ３阳性细胞和ＣＤ８阳性细胞浸润，从而加重肾小管、间质损害。ＨＢＶ感染对ＩｇＡ肾病的发生发展可能起着重要作用     

应用聚合酶链反应技术检测肝组织中的HBV－DNA

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对４２例肝活切组织石蜡切片中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ进行检测，并与乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）的免疫组织化学及血清学检测进行比较，ＨＢＶ－ＰＣＲ阳性率为７３．８％，高于组织及血清ＨＢｓＡｇ阳性率（分别为５９．５％和５０．０％）。３例病理形态呈肝炎改变，而血清ＨＢｓＡｇ（─）的肝组织中有２例检出ＨＢＶ－ＤＮＡ，提示ＰＣＲ的高度敏感性和准确性。８３．３％的门脉性肝硬变和８７．５％的肝细胞癌组织中ＨＢＶ－ＰＣＲ呈阳性，进一步证实了上述两病与ＨＢＶ的关系密切。我们还发现肝细胞淤胆患者ＨＢＶ感染率较高，ＨＢＶ－ＤＮＡ及组织ＨＢｓＡｇ阳性比例各为６／９和４／８。     

原位PCR技术检测石蜡包埋脑组织中人巨细胞病毒DNA

应用原位聚合酶链反应（ＩＳＰＣＲ）技术检测了２５例尸检畸形胎儿石蜡包埋脑组织中人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ，并与普通ＰＣＲ及原位杂交（ＩＳＨ）进行了比较。ＩＳＰＣＲ、ＰＣＲ及ＩＳＨ检测阳性率分别为４４％，３６％及２０％。与ＩＳＨ相比较，ＩＳＰＣＲ不仅检出阳性率高，而且信号强度增强。研究结果提示，ＩＳ－ＰＣＲ是诊断ＨＣＭＶ感染的快速、敏感、特异的实用方法。     

肝硬变内HBV DNA及其五种抗原的表达及意义

取２２５例人肝硬变活检组织石蜡切片，检测了ＨＢＶＤＮＡ及其５种抗原。分别用免疫组化ＡＢＣ法检测ＨＢｘＡｇ、ｐｒｅ－Ｓ＿１和ｐｒｅ－Ｓ＿２抗原；用ＰＡＰ法检测ＨＢｓＡｇ和ＨＢｃＡｇ；用原位杂交方法检测ＨＢＶＤＮＡ；用免疫组化、原位杂交双标记方法检测ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｓＡｇ、ＨＢｘＡｇ或ＨＢｃＡｇ。结果显示，阳性检出率ＨＢｓＡｇ为７０．０％（１２８／１８３例），ｐｒｅ－Ｓ＿１抗原为６４．４％（８５／１３２例）、ｐｒｅ－Ｓ＿２抗原为６１．４％（８１／１３２例），ＨＢｘＡｇ为７５．３％（１１３／１５０例），ＨＢｃＡｇ为２２．４％（３９／１７４例），ＨＢＶＤＮＡ为６２．４％（５８／９３例）。双标阳性检出率ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｓＡｇ为３７．３％（１９／５１例），ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｘ－Ａｇ为８６．３％（４４／５１例），ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｃＡｇ为３９．２％（２０／５１例）。ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢＶ５种抗原阳性病例中８０％以上均伴有肝细胞不典型增生。这一结果表明，在我国肝硬变的发生发展与ＨＢＶ慢性感染有密切的关系。     

套叠式（Nested）PCR检测乳汁中HBV－DNA

本文应用Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ技术，检测了５２例血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性（ＰＣＲ检测）产妇和１５例血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性（ＰＣＲ检测）产妇乳汁中的ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果表明：５２例阳性产妇乳汁中ＨＢＶ－ＤＮＡ经第一次扩增后，１２例ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性。经第二次扩增后，４０例阳性（阳性率７６．９％）；１５例阴性产妇乳汁中ＨＢＶ－ＤＮＡ经两次扩增后均为阴性。作者认为，Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ技术是检测血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性产妇乳汁是否排泌ＨＢＶ的简便、灵敏、特异的方法。乳汁中含有ＨＢＶ应停止哺乳。     

PCR鉴定HBsAg阴性肝炎HBV DNA感染的意义

ＰＣＲ鉴定ＨＢｓＡｇ阴性肝炎ＨＢＶＤＮＡ感染的意义１李伟１王学春１张金池２刁玉贞收集ＨＢｓＡｇ阴性ＨＢｃＡｂ阳性的慢性肝炎病人血清３０例及恢复期急性乙型肝炎病人血清１００例（共计１３０例），利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ＨＢＶＤＮＡ。ＰＣＲ方法及步骤...     

血清HBV标志物阴性肾炎肾组织中HBV-DNA的原位杂交检测

目的 对血清HBV标志物阴性肾炎患者肾组织进行HBV—DNA的检测，为临床诊疗提供理论依据。方法 应用原位杂交（ISH）技术检测37份血清HBVAg阴性和18份血清HBVAg阳性的肾炎患者肾活检石蜡包埋组织切片中的HBV—DNA。结果 在血清HBVAg阳性的18例标本中HBV-DNA的检出率为88．9％（16／18），血清HBVAg阴性37例中检测出HBV—DNA5例（13．5％）。原位杂交显示两组检出的HBV-DNA均以肾小管上皮细胞质分布为主，与组织中HBVAg阳性颗粒的分布基本一致。结论 血清HBVAg阴性的HBV相关性肾炎临床上并非少见，应给予足够的关注。HBV—DNA在肾组织中的检出，表明HBV在HBV相关性肾炎的发病机理中有着重要作用。     

IgA肾病肾组织内乙型肝炎病毒感染的发病机制研究

目的：探讨乙型肝炎病毒感染致IgA肾病肾损伤的发病机制。方法： 随机选取48例IgA肾病肾穿刺组织，参照Meadow病变分级标准分为Ⅰ-Ⅴ级5个实验组，应用Envision免疫组织化学方法检测各级肾组织内HBsAg和HBcAg；同时用直接IS-PCR技术检测其中18例IgA肾病肾组织内HBV DNA。结果： 48例IgA肾病肾组织内HBcAg和HBsAg总的阳性检出率分别为75.00%(36/48)和43.75%(21/48)；18例IgA肾病肾组织内HBV DNA阳性检出率为61.11%(11/18)；3者均表现为肾小管阳性检出率高于肾小球(P＜0.05)，但各级之间，HBcAg、HBsAg和HBV DNA检出率均无显著差异(P＞0.05)。结论： HBV参与了IgA肾病的发生，其导致肾组织损伤的机制可能主要是由细胞免疫或一系列细胞因子介导，并非病毒直接所致；肾小管上皮细胞可能是HBV感染的靶对象。     

HBV DNA及HBV抗原在血清HBV标志物阴性肝炎肝组织中表达的研究

目的 研究HBV DNA及HBV抗原在血清HBV标志阴性的肝炎肝组织中的表达。方法 对45例HBV血清标志阴性阴性肝炎患者，进行肝组织HBV DNA的原位杂交及免疫组织化学染色检测。结果 原位杂交表明，HBV DNA阳性者7例，（阳性率15．56％），阳性信号主要存在于肝细胞的胞核中，少数位于胞浆内；免疫组化染色表明，HBsAg及HBcAg均呈阴性。结论 血清HBV标志阴性的肝炎肝组织中可检出HBV DNA，有利于提高对HBV感染的诊断。     

Detection of human papillomavirus on Papanicolaou-stained cervical smears using indirect in situ polymerase chain reaction hybridization

OBJECTIVE: Polymerase chain reaction (PCR) and indirect in situ hybridization were combined to detect human papillomavirus (HPV) DNA on Papanicolaou (PAP)-stained cervical smears. To our knowledge, this is the first report of an experiment using indirect in situ PCR (IS-PCR) on PAP-stained cervical smears. DESIGN: We collected native cell specimens from cervicovaginal lavage of 162 patients with squamous intraepithelial lesions. Solution-phase PCR (SP-PCR) was performed as the reference method in the detection of HPV DNA. Indirect IS-PCR was carried out for the same patients to detect the HPV DNA types 6/11 and 16/18 after the PAP-stained smears had been decolorized. Low-risk and high-risk HPV DNA types were also detected by both SP-PCR and indirect IS-PCR. RESULTS: In the evaluation by indirect IS-PCR, 48 of 81 PAP-stained cell smears of low-grade squamous intraepithelial lesions were positive for HPV DNA, as compared to 40 positive cell smears determined by indirect SP-PCR (sensitivity of indirect IS-PCR compared to SP-PCR, 98.1%). Forty-two of 42 high-grade squamous intraepithelial lesion samples were positive for HPV DNA, as determined by both methods (sensitivity of IS-PCR, 100%). Cell lines investigated in this study as positive or negative controls for HPV DNA were confirmed by indirect IS-PCR and SP-PCR. CONCLUSIONS: Our data show that in comparison to SP-PCR, indirect IS-PCR is a highly sensitive method to detect HPV DNA in cell smears from the uterine cervix. The advantages of indirect IS-PCR are (a) low numbers of cells needed, (b) the possibility of using PAP-stained specimens, and (c) cytologic details of smears can be preserved.     

A clinical evaluation of a new method for HBV DNA quantitation in patients with chronic hepatitis B

Selection of HBsAg-positive patients for antiviral therapy requires an estimation of disease activity and viral replication. Serum transaminases and histological analysis are commonly used to assess disease activity, and viral replication is assessed by serological testing of HBeAg and serum hepatitis B virus (HBV) DNA. Dot blot hybridisation may be insufficiently sensitive to corroborate low-grade replication in patients with active hepatitis, and polymerase chain reaction (PCR) may be testing too sensitive for this role. Theoretically an assay of intermediate sensitivity is therefore required. Our aim was to evaluate whether the branched chain DNA (bDNA) assay would fulfil this function. Seventy-one HBsAg-positive patients were tested for HBV DNA by the bDNA assay; 64 were also tested by dot blot hybridisation and, when appropriate, also by PCR. Thirty-seven (52%) patients were positive for HBV DNA by the bDNA assay. HBV DNA was detected in the majority (21/28; 75%) of HBeAg-positive patients but also in 14 of 36 (39%) anti-HBe-positive patients. HBV DNA was detected by the bDNA assay in 20 of 48 (42%) patients negative for HBV DNA by dot blot hybridisation assay. All patients positive for HBV DNA by dot blot hybridisation were also positive by the bDNA assay. Sixteen of twenty-five (64%) patients negative for HBV DNA by the bDNA assay were positive for HBV DNA by PCR. The bDNA assay is a sensitive and reliable method for the detection of HBV DNA. As nucleoside analogue therapy becomes more widely available, the assay should provide a useful tool for the selection for and monitoring of patients on antiviral therapy. © 1996 Wiley-Liss, Inc.     

丙型肝炎患者肾小球病变的观察

为了明确丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染与肾脏疾病的关系，采用免疫组化技术和抗－ＨＣＶＮＳ３和抗－ＨＣＶＮＳ５单克隆抗体，检测了２１例丙肝患尸解肾组织中的ＨＣＡｇ，结果１３例阳性（６１．９％），其中１１例为膜增殖性肾炎（ＭＰＧＮ），１例为系膜增殖性肾炎（ＭｓＰＧＮ），１例肾组织大致正常。８例ＨＣＡｇ检测阴性，其中膜性肾病（ＭＮ）１例，膜增殖性肾炎２例，毛细血管内增殖性肾炎１例，余４例肾组织未见明显异常。与乙型肝炎对照组（３３．０％）相比，丙肝患者肾脏病变更为多见，形态多样，以ＭＰＧＮ为主。同时对丙肝患者有肾脏病变者的临床资料进行了分析，病人可表现为高血压，蛋白尿，血尿及早期血清尿素氮（ＢＵＮ）增高，因此认为同乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染后相同，也存在着丙肝相关性肾炎