小儿血清SARS冠状病毒交叉抗体的筛查

目的：在非SARS小儿血清中筛查SARS冠状病毒交叉抗体。方法：用ELISA和RT-PCR方法对无SARS临床表现的住院小儿患者进行SARS冠状病毒RNA及抗SARS冠状病毒多克隆抗体IgG的检测。再对SARS IgG可疑阳性血清利用蛋白芯片方法进行SARS冠状病毒成份蛋白3CL、N、M、S1、S2、S3抗体的分析。结果：在190例非SARS患儿血清中，检出IgG多克隆抗体可疑阳性20例。SARS冠状病毒成分蛋白抗体分析发现N蛋白抗1例，抗M蛋白抗体阳性1例，抗N、M抗体同时阳性1例。结论：在部分非SARS小儿体内可能存在有抗SARS冠状病毒的交叉抗体。     

SARS冠状病毒隐性感染状况研究

目的：了解SARS冠状病毒(SARS—CoV)在密切接触者中的隐性感染状况。方法：采用ELISA法对88例SARS病例密切接触者血清进行SARS冠状病毒特异性抗体检测。结果-88例密切接触者血清中有4例为SARS冠状病毒抗体阳性。结论：SARS冠状病毒存在隐性感染的可能性。     

太原市不同人群SARS血清流行病学调查

目的 分析山西省太原市严重急性呼吸系统综合征(SARS)患者及其密切接触者和社区人群中血清SARS抗体水平。方法 采用ELISA方法检测3组人群的SARS特异性抗体，并进行分析比较。结果 SARS患者、密切接触者和社区健康人群的SARS冠状病毒(SARS-CoV)抗体阳性率分别为52．08％，4．63％和1．88％．3组人群比较差异有统计学意义；3组人群中不同年龄组及性别间抗体阳性率差异无统计学意义。在密切接触者既往各类接触史中，除“接触时有无洗手”与血清SARS-CoV抗体阳性有关外，未发现其它有关因素。结论 太原SARS病例存在过度诊断现象，密切接触和普通人群中可能存在SARS的隐性感染。     

发热患者SARS冠状病毒抗体分析

目的了解临床发热患者中是否存在严重急性呼吸综合征（SARS）冠状病毒（SARS-CoV）隐性感染或亚临床感染。方法对2003年5月～7月，SARS流行期间湖北地区临床发热患者373例血清进行SARS冠状病毒（SARS-CoV）抗体（IgG、IgM、N蛋白抗体）酶联免疫吸附法（ELISA）检测和分子生物学（RT—PCR）检测。结果373例发热患者中，检出冠状病毒抗体阳性者24例，阳性率6．43％（24／373），其中SARSIgG抗体、IgM抗体、N蛋白抗体阳性率分别为0．54％，1．34％和5．09％，但SARS-CoVRT—PCR检测均为阴性。结论临床发热患者可能存在SARS-CoV隐性或亚临床感染，患者体内产生针对SARS-CoV的保护性抗体，应具有免疫力和抵抗力。     

间接免疫荧光法在检测SARS冠状病毒特异性抗体中的应用

目的 利用间接免疫荧光技术(IFA)建立SARS冠状病毒(SARS—CoV)特异性抗体血清学诊断方法。方法 采用组织培养技术，用SARS病人的咽漱液样本，在Vero—E6细胞中培养，分离SARS冠状病毒；用已制备的SARS病毒抗原片与临床确诊为SARS的病人双相血清和正常人对照血清作用，再用荧光标记羊抗人IgM/IgG抗体与之结合，在荧光显微镜下观察荧光图像。结果 通过建立检测SARS冠状病毒特异性抗体的间接免疫荧光方法，在44份SARS临床病例标本中，检出IgG抗体阳性3l份，与临床诊断符合率为70．45％。31份IgG阳性者的急性期血清中IgM检出率为38．70％，IgM最早产生于发病第3天，发病7d以上的6例的IgM抗体均为阳性，滴度在发病12～15d达到高峰(1：80)；恢复期血清中IgG抗体最早产生于发病第8天，滴度在发病15～20d达到高峰(1：320～1：640)。97份正常人的血清标本中IgG抗体阳性率为3．09％，IgM抗体为阴性。结论 利用此方法，证实被SARS冠状病毒感染后，在机体中产生有特异性的IgM／IgG抗体；本方法检测结果与临床诊断符合率较高，可以用于早期临床诊断SARS病毒感染和辅助临床做出鉴别诊断。     

不同人群血清对人SARS冠状病毒和动物SARS样冠状病毒反应性的比较

目的 探讨不同人群血清中人SARS冠状病毒抗体和动物SARS样冠状病毒抗体所表达的意义及其之间关系。方法 应用人SARS冠状病毒和动物SARS样冠状病毒抗原片进行间接免疫荧光(IFA)定性和半定量试验,检测23份一般人群、25份动物市场从业人员和74份SARS病人的SARS冠状病毒IgG抗体阳性(ELISA法检测)血清样本,并进行比较分析。结果 23份一般人群、25份动物市场从业人员和74份SARS病人的血清样本的IFA阳性率分别为73．91％、68．00％和100．00％,在IFA阳性人群中其血清样本既能对人SARS冠状病毒也能对动物SARS样冠状病毒产生反应的分别占100．00％(17／17)、64．71％(11／17)和94．59％(70／74);70．59％(12／17)一般人群和76．47％(13／17)动物从业人员其血清中的动物SARS样冠状病毒抗体水平高于人SARS冠状病毒;而SARS病人血清中的人SARS冠状病毒与动物SARS样冠状病毒抗体水平以两者相同和前者高于后者为多,分别占56．76％(42／74)和33．78％(25／74)。结论 不同人群血清中的人SARS冠状病毒抗体和动物SARS样冠状病毒抗体两者之间均存在着一定的交叉反应现象,从血清学上提示了人SARS冠状病毒与动物SARS样冠状病毒之间存在着很高的同源性;人SARS冠状病毒抗体和动物SARS样冠状病毒抗体两者各自表达的意义是有所不同的,通过间接免疫荧光半定量试验可有助于区别感染者所染病毒的倾向性。     

不同地区人群SARS血清流行病学调查

目的分析严重急性呼吸综合征(Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS)流行期间不同地区人群及SARS临床诊断病例血清特异性抗体(SARS-CoV IgG)变化规律以及健康人群是否存在隐性感染。方法采用酶联免疫方法(ELISA)及间接免疫荧光法(IFA)，对香港、澳门、北京、广州地区1453名健康人及广州和北京地区257例SARS临床诊断病例进行血清SARS—CoV IgG抗体检测，并跟踪检测患者病后不同时间(发病3～270d)血清抗体变化情况。结果4个地区健康人群(包括160名密切接触者)中，用ELISA法检出2例SARS—CoV IgG抗体阳性，阳性者进一步用IFA检测则为阴性；广州地区200名健康体检者同时采用ELISA和IFA检测，结果均为阴性。ELISA和IFA同时检测257例临床诊断病例发病20d后的血清SARS—CoV IgG抗体，2种方法检出的阳性率均为90％。ELISA法跟踪检测257例临床诊断病例发病后3～270d血清IgG抗体，抗体滴度在发病后4～6个月内随时间延长逐渐升高，多数病人抗体在第4～6个月达到高峰，并持续到第8个月，部分病人抗体达高峰后开始下降，但至第9个月仍阳性。结论健康人群中隐性感染率极低，血清SARS—CoV IgG抗体在病程后期有诊断价值，血清特异性抗体可持续9个月以上。     

江门市家禽家畜、野生动物SARS冠状病毒的调查

目的查明江门市区内家禽家畜、野生动物SARS冠状病毒感染状况。方法采集江门市区内6种家禽家畜、1种野生动物的血标本,检测血清SARS冠状病毒IgG抗体。结果共检测家禽家畜、野生动物的血清标本96份,SARS冠状病毒IgG抗体均为阴性。结论未发现江门市区内家禽家畜及蛇存在SARS冠状病毒隐性感染,尚不能认定是导致SARS的主要致病因素。     

广东省不同人群SARS病毒抗体水平调查

目的对不同人群进行SARS-IgG抗体水平检测，分析SARS流行规模和特征，评价暴露的危险性，了解人数中是否存在SARS病毒隐性感染，为寻找SARS病毒传染源提供线索。方法抽取7708份不同人群标本，按临床症状和暴露因素分为临床确诊SARS病人、病人或污染物的接触者、普通健康人群和动物销售人员4类，采用酶联免疫方法(ELISA)进行SARS-IgG抗体检测，用免疫荧光法(IFA)复核，并结合流行病学资料进行分析。结果127例临床确诊SARS病人抗体阳性率为66．9％；密切接触者中女性发病率高于男性；SARS病人或其污染物的密切接触者抗体阳性率为0．88％；动物销售人员为13．4％；野生哺乳动物销售者的抗体阳性率显著高于其他动物销售者，普通健康人群未检出抗体阳性。低年龄健康人群ELISA检测阳性率为2．06％，高于总体水平。结论人群总体抗体水平很低，普通健康人群无SARS冠状病毒抗体，但可能存在某种可与SARS冠状病毒起交叉反应的抗体；有无接触史是影响抗体阳性率的重要因素；密切接触者可能存在隐性感染；野生动物可能是本次SARS的传染源。     

SARS实验室诊断技术

SARS的实验室诊断技术分为常规的临床检验、病原学诊断和血清学诊断。临床检验是SARS诊断的辅助手段，血清学诊断和病原学诊断为临床提供早期或确诊SARS的依据。血清学诊断是检测SARS感染后病人血清中抗SARS冠状病毒抗体反应的情况，病原学诊断是检测SARS病人体内感染病毒的情况。目前应用于检测SARS抗体的血清学方法主要有间接免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验、中和试验、胶体金技术和斑点酶免疫技术等；用于检测SARS的病原学方法主要有组织培养技术分离SARS冠状病毒、分子生物学技术检测SARS冠状病毒核酸、电镜和间接免疫荧光技术检测病人组织或细胞培养物中的病毒等。     

三种不同原理的间接酶联免疫吸附试验方法在严重急性呼吸道综合征诊断中的比较研究

目的比较不同原理的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法在严重急性呼吸道综合征(Severeacuterespirato-rysyndrome,SARS)诊断中的应用,以便研制开发更先进的诊断试剂,应对可能发生的SARS再次流行。方法对山西省疾病预防控制中心(CDC)送检的正常成年人血清标本44份,首都医科大学附属宣武医院住院SARS患者血清标本62份,宁夏回族自治区CDC送检SARS患者及疑似患者血清28份,分别采用三种不同原理的间接ELISA试剂进行抗体检测:①美国CDC采用全病毒灭活抗原包被,检测血清IgA、IgM、IgG抗体的试剂;②国内某公司采用全病毒灭活抗原包被,检测血清IgG及IgM抗体试剂;③基因工程表达并纯化刺突蛋白(spikeprotein,S蛋白)和核衣壳蛋白(nucleocapsidprotein,N蛋白)抗原包被,检测血清中IgM及IgG抗体的试剂。结果通过比较研究显示:试剂①与试剂③的特异性较高,3种试剂的敏感性有较高的一致性。结论由于全病毒裂解抽提液作包被抗原其生产过程存在生物安全隐患,要求条件高,所以基因工程表达并纯化的蛋白来制备SARS冠状病毒抗体检测试剂有自身的优越性。由于N蛋白具有较强的免疫原性,在各毒株之间的变异又很小,因此以体外基因重组N蛋白代替全病毒裂解液蛋白,是SARS抗体检测试剂的发展方向。     

Human metapneumovirus-associated atypical pneumonia and SARS

Acute pneumonia developed in a previously healthy man during the outbreak of severe acute respiratory syndrome (SARS) in southern China in March 2003. Antibiotic treatment was ineffective, and he died 8 days after illness onset. Human metapneumovirus was isolated from lung tissue. No other pathogen was found. Other etiologic agents should thus be sought in apparent SARS cases when coronavirus infection cannot be confirmed.     

一起SARS爆发的血清流行病学调查

目的 探讨SARS密切接触者的隐性感染和SARS患者血清中特异性抗体的消长情况。方法 采用中和试验法、间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫粘连法对北京一起SARS爆发案例中与重症SARS患者无防护密切接触的未发病者和续发SARS病例进行血清SARS特异性IgG抗体检测,采血时间为发病后或接触后24周左右。结果 共采集到32份血清,其中未发病密切接触者的血清19份,SARS康复期患者血清13份。三种方法检测结果:57份次未发病密切接触者的血清标本SARS-CoV抗体检测,结果均为阴性;39份次SARS康复期患者血清标本SARS-CoV抗体检测,38份次结果为阳性,1份次(用免疫粘连法检测)结果为阴性。病后24周左右的中和抗体效价为1:43(1:16～1:203)。结论 研究中未发现SARS密切接触者存在隐性感染;SARS患者病后24周左右血清IgG抗体仍维持在较高水平。     

小汤山医院医护人员免疫功能评价

目的　观察解放军小汤山 SARS传染病医院一线医护人员与 SARS患者密切接触后免疫功能受到影响的情况。方法　应用 EL ISA方法 ,对随机抽取的 397名解放军小汤山 SARS传染病医院一线医护人员血清标本 ,进行抗 SARS- Co V抗体 Ig G、Ig M阴阳性测定 ,并对其中 98人应用流式细胞测定技术分析淋巴细胞亚群。结果抗 SARS抗体 Ig G阳性 2例 ,阳性率 0 .5 % ,Ig M全部阴性 ;NK细胞、B细胞、CD4 + 、CD8+ 、CD3+ 及 CD4 + / CD8+ 比值与正常人参考值 ,差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论　与 SARS患者的密切接触对一线医护人员的免疫功能无负面影响 ,并表明解放军小汤山医院对医护人员所采取的防护措施是非常有效的。     

Preparation and characterization of SARS in-house reference antiserum

A reference antiserum for SARS is in urgent need in the development of SARS vaccine and other serological test of SARS research. Convalescent serum was collected from clinical confirmed patient. ELISA, Western-blotting and neutralization assay detected specific antibody against SARS coronavirus. This antiserum was prepared as in-house reference antiserum, freeze-dried and sealed in ampoules. The potency of this reference antiserum is defined to be 52.7 U after extensive calibration. Further, collaborative studies for the evaluation of this serum are needed in order to satisfy the requirements for international reference antiserum.     

间接免疫荧光抗体试验在传染性非典型肺炎诊断中的应用

目的：评价应用间接免疫荧光抗体试验(IFA)在传染性非典型肺炎[严重急性呼吸综合征(SARS)]诊断中的可靠性，探讨SARS患者发病后血清抗体在体内的产生规律。方法：采用IFA方法检测不同发病时间的临床确诊SARS病例、疑似病例和其他人群的血清SARS病毒抗体，同时对每一个研究对象采用调查表进行一般情况调查。结果：在发病10天内，SARS患者血清IgG阳性率为55.1％，IgM阳性率为16．3％；发病10天后SARS患者IgG阳性率达89．8％，IgM阳性率达65．3％；发病25天以后SARS患者IgG、IgM阳性率均为90．9％。对发病时间与抗体阳性率采用趋势x^2检验，结果：显示SARS患者血清IgG、IgM抗体阳性率随着发病时间而上升(IgG趋势检验x^2＝16．376，P＝0．00005；IgM趋势检验x^2＝28．736，P＝0．000 00)。IFA法用于检测SARS患者发病10天后血清抗体，结果：显示灵敏度、特异度及与临床诊断的符合率均在90％以上。结论：IFA法适于SARS发病10天后作为实验室辅助诊断方法。     

A SARS DNA vaccine induces neutralizing antibody and cellular immune responses in healthy adults in a Phase I clinical trial

BACKGROUND: The severe acute respiratory syndrome (SARS) virus is a member of the Coronaviridae (CoV) family that first appeared in the Guangdong Province of China in 2002 and was recognized as an emerging infectious disease in March 2003. Over 8000 cases and 900 deaths occurred during the epidemic. We report the safety and immunogenicity of a SARS DNA vaccine in a Phase I human study. METHODS: A single-plasmid DNA vaccine encoding the Spike (S) glycoprotein was evaluated in 10 healthy adults. Nine subjects completed the 3 dose vaccination schedule and were evaluated for vaccine safety and immune responses. Immune response was assessed by intracellular cytokine staining (ICS), ELISpot, ELISA, and neutralization assays. RESULTS: The vaccine was well tolerated. SARS-CoV-specific antibody was detected by ELISA in 8 of 10 subjects and neutralizing antibody was detected in all subjects who received 3 doses of vaccine. SARS-CoV-specific CD4+ T-cell responses were detected in all vaccinees, and CD8+ T-cell responses in approximately 20% of individuals. CONCLUSIONS: The VRC SARS DNA vaccine was well tolerated and produced cellular immune responses and neutralizing antibody in healthy adults.     

Longitudinally profiling neutralizing antibody response to SARS coronavirus with pseudotypes

The severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus (SARS-CoV) spike protein (S) is a major target for neutralizing antibodies. Retroviral SARS-CoV S pseudotypes have been constructed and used to develop an in vitro microneutralization assay that is both sensitive and specific for SARS-CoV neutralizing antibodies. Neutralization titers measured by this assay are highly correlated to those measured by an assay using replication-competent SARS-CoV. No cross-neutralization occurred with human sera known to contain antibodies to coronavirus strains OC43 and 229E. The pseudotype assay was used to profile neutralizing antibody responses against SARS-CoV S in sequential serum samples taken from 41 confirmed SARS patients during the 2003 outbreak in Hong Kong and shows long-lasting immunity in most recovered patients. The pseudotype assay does not require handling live SARS virus; it is a useful tool to determine neutralizing titers during natural infection and the preclinical evaluation of candidate vaccines.