蛋白酶激活受体在免疫炎症性疾病中的研究进展

蛋白酶激活受体(protease activated receptors, PARs)是G蛋白偶联受体的一个亚家族,最早发现其与血栓形成、组织止血、癌症相关,随着研究的深入,发现PARs在感染、免疫炎症性疾病、纤维化疾病中发挥重要作用。目前已发现PARs有4种亚型,分别为PAR1~4,研究较多的为PAR1和PAR2,现就PAR1、PAR2在免疫炎症性疾病中的作用作一概述。     

蛋白酶激活受体-2激动剂在应激性溃疡中的作用

目的:探讨大鼠蛋白酶激活受体-2在应激性溃疡中的作用.方法:建立大鼠水浸束缚应激模型,肉眼计算胃黏膜溃疡指数(UI);取动脉血和胃液做血气分析计算胃黏膜内pH值(pHi);应用分光光度计检测胃黏膜氨基己糖;采用放射免疫方法检测血浆中6-酮前列腺素F1α(6-K)和血栓素B2(TXB2);观察胃组织病理形态学变化.结果:PAR-2激动剂组pHi(4.71±0.23vs4.53±0.11,P<0.05)、氨基己糖(5.26±1.48g/kgvs1.19±0.58g/kg,P<0.05)、6-K(856.92±165.21ng/Lvs654.50±221.31ng/L,P<0.05)高于阴性对照组,TXB2(338.67±12.91ng/Lvs378.89±15.10ng/L,P<0.05)、UI(37.50±24.42vs69.00±33.27,P<0.05)低于阴性对照组.除6-K(856.92±165.21ng/Lvs687.60±219.50ng/L,P<0.05)外,PAR-2激动剂组与奥美拉唑组相比其他参数差异无统计学意义(P>0.05),并且两组病理形态学观察均表现为无明显血栓形成.结论:蛋白激酶受体-2激动剂通过促进胃黏液分泌、舒张血管起到保护胃黏膜的作用,其机制可能是激活辣椒素敏感性感觉神经元.     

蛋白酶激活受体的研究进展

蛋白酶激活受体属于与G蛋白相偶联、有七个跨膜单位的受体家族,有四个成员:PAR-1,PAR-2,PAR-3和PAR-4.PAR-1是凝血酶受体,PAR-2是胰岛素、肥大细胞纤维蛋白溶酶、凝血因子Ⅶa和Ⅹa和其他未知蛋白水解酶的受体.PAR-2可诱导唾液腺和胰腺的分泌.PAR-1和PAR-2都对胃黏膜有保护作用,但机制不尽相同.在肠黏膜,PAR-2有前炎性和抗炎性双重作用,其和PAR-1,PAR-4均可调节胃肠道平滑肌.蛋白酶激活受体,尤其是PAR-1和PAR-2对调节胃肠道功能有非常重要的作用.     

蛋白酶激活受体2在冠心病中作用的研究进展

蛋白酶激活受体2（PAR2）是G蛋白耦联受体的家族成员,作为一种细胞表面受体,PAR2可被丝氨酸蛋白酶及药理学上的合成配体激活,其在机体内分布广泛并在心血管病理生理机制中发挥着重要作用。近年来大量研究显示PAR2在动脉粥样硬化、心肌缺血再灌注损伤及心肌纤维化中具有重要作用,且抗凝剂利伐沙班可通过作用于PAR2对心脏产生...     

蛋白酶激活受体-2激动剂在大鼠应激性溃疡中的作用

目前认为应激性溃疡的发生机制涉及机体神经内分泌失调、胃黏膜保护功能削弱及胃黏膜损伤因素作用增强等。蛋白酶激活受体-2（protease-activated receptor-2，PAR-2）属于蛋白酶激活受体超家族成员，其受体激动剂可刺激辣椒素敏感性感觉神经元，起到保护胃黏膜的作用。本实验分别用PAR-2激动剂辣椒素和奥美拉唑预防大鼠应激性溃疡，从而为胃黏膜损伤的治疗提供新的靶点。     

蛋白酶激活受体2对大鼠缺血预处理心肌NF-κBp65和C-myc表达的影响

目的 探讨蛋白酶激活受体2（PAR-2）预处理对缺血预处理（IPC）大鼠心肌细胞核因子（NF-κBp65）和凋亡相关基因C-myc表达的影响及其机制.方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、缺血再灌注组（I/R）、缺血预处理组（IPC）和PAR-2低剂量组（0.5 mg/kg）、高剂量组（3.0 mg/kg）.应用Langendroff离体灌流装置,采用完全停灌复灌的方法制作离体大鼠心肌缺血再灌注模型,采用Western blot法检测大鼠心肌组织NF-κBp65和C-myc的表达水平.结果 与正常对照组比较,I/R组心肌损害程度增加,NF-κBp65和C-myc表达显著增加（83.33%比8.33%,P＜0.01）;与I/R组比较,IPC组NF-κBp65和C-myc表达显著降低（58.33%比83.33%,P＜0.05）;与IPC组比较,PAR-2低剂量组NF-κBp65和C-myc表达明显降低（41.67%比58.33%,P＜0.05）;PAR-2高剂量组与低剂量组比较,NF-κBp65和C-myc表达差异有统计学意义（25.00%比41.67%,P＜0.01）.结论 PAR-2预处理具有明显降低大鼠缺血再灌注后心肌细胞凋亡的作用,能进一步抑制缺血预处理心肌细胞凋亡.其机制可能与PAR-2预处理抑制NF-κBp65和C-myc参与的细胞凋亡有关.     

肥大细胞及蛋白酶激活受体-2在肠易激综合征中的作用

目的:探讨肥大细胞及蛋白酶激活受体-2(protease activated receptor-2,PAR-2)在肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)中的作用.方法:2012-01/2012-12自南京医科大学附属南京医院消化内科门诊随机选取腹泻型IBS患者60例及正常者30例,采用免疫组织化学检测各组肥大细胞、PAR-2蛋白的表达强度;采用Western blot检测各组Occludin的表达量.结果:免疫组织化学法结果显示IBS-D组与对照组相比,肥大细胞表达明显增多(5.20±2.78vs 1.40±0.55,P<0.05);PAR-2蛋白的表达明显增多(3.20±1.64 vs 1.20±0.45,P<0.05);Western blot结果示IBS-D组Occludin蛋白的表达明显低于正常组(2108.33±59.58 vs 3113.00±77.74,P<0.01).结论:本研究提示IBS-D患者肥大细胞过表达、激活后可刺激PAR-2活化,从而进一步损伤细胞间紧密连接.     

阿片受体在电针预处理诱导大鼠脑缺血耐受效应中的作用

目的 探讨阿片受体在重复电针灸预处理诱导大鼠脑缺血耐受形成中的作用。并研究可能参与作用的阿片肽种类。方法 雄性SD大鼠42只，随机分为空白对照组，戊巴比妥钠组，电针（EA）组，EA＋8受体拮抗剂naltrindole（NTI）组，EA＋K受体拮抗剂nor-binaltorphimine（BNI）组，NTI组和BNI组。EA组、EA＋NTI组和EA＋NBI组接受相同电针灸刺激（疏密波2／15Hz，1mA，30min／d）连续5d，EA＋NTI组和EA＋BNI组分别于每次电针灸开始前给予NTI（1mg／kg）或BNI（2．5mg／kg）腹腔注射；NTI组和BNI组单纯腹腔注射相同剂量的NTI或BNI。最后一次处理24h后采用MCAO模型。再灌注24h进行神经学评分后取脑，经TTC染色计算脑梗死容积。结果脑梗死容积：EA组明显小于空白对照组（P=0．000）；EA＋NTI组与空白组比较没有明显的统计学差异（P=0．219），而与EA组有明显的统计学差异（P=0．000）；EA＋BNI组与空白组比较有明显统计学差异（P=0．000），与EA组比较没有明显的统计学差异（P=0．319）；说明NTI（1mg／kg）能够阻断EA预处理诱导的脑保护效应，而BNI（2．5mg／kg）不能。结论 阿片受体参与了重复电针灸刺激大鼠百会穴诱导的脑缺血耐受效应，δ受体发挥了主要作用。     

蛋白酶激活受体-2对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

24只雄性SD大鼠随机分为假手术组、I／R组和SLIGRL—NH2组,结扎左冠状动脉前降支30min,再灌注120min制作心肌缺血再灌注模型;以缺口末端标记法和免疫组织化学法分别检测心肌细胞凋亡指数（AI）及Bcl-2、Bax蛋白表达水平。发现与假手术组相比,I／R组的AI和Bcl-2、Bax蛋白表达水平均明显增加;与I／R组比较,SLIGRL—NH2组的AI、Bax蛋白表达水平下降,而Bcl-2蛋白表达水平显著增高。提示蛋白酶激活受体-2（PAR-2）对心肌缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与上调Bcl-2、下调Bax蛋白表达水平,抑制心肌细胞凋亡有关。     

蛋白酶激活受体-2在急性坏死性胰腺炎大鼠肠黏膜组织中的表达

目的 探讨蛋白酶激活受体-2(PAR-2)的表达与急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠肠黏膜屏障损伤的相关性.方法 制备ANP大鼠模型,采用免疫组织化学法、Western印迹法及RT-PCR方法检测假手术对照组和造模后6、12、24 h大鼠肠黏膜组织中PAR-2的表达.组间数据比较采用单因素方差分析.结果 免疫组织化学法显示,假手术对照组大鼠小肠黏膜组织中PAR-2的表达较微弱.ANP造模后,PAR-2阳性细胞表达数量明显增加,染色强度明显增强.造模后6、12、24 h的免疫组织化学评分分别为4.88±0.33、5.87±0.32、11.17±0.27,与假手术对照组(2.86±0.31)相比,差异有统计学意义(F=747.08,P＜0.01).假手术对照组大鼠小肠黏膜中PAR-2的mRNA和蛋白表达量均较少,随着ANP造模时间的延长,两者的表达水平均逐渐升高,造模后6、12、24 h,mRNA分别为0.56±0.03、0.69±0.03、1.05±0.05,蛋白分别为0.28±0.02、0.35±0.03、0.69土0.04;各时间点与假手术对照组相比,差异均有统计学意义(F=785.69、1177.82,P值均＜0.01).结论 PAR-2在ANP炎性反应中被激活,在肠黏膜屏障损伤的发生发展过程中发挥重要作用.     

蛋白酶激活受体2与肠道功能

蛋白酶激活受体2(PAR2)是一种七次跨膜的G蛋白耦联受体,是蛋白酶激活受体超家族的一员。它广泛分布于肠道,可与肠腔内或黏膜的丝氨酸蛋白酶相互作用,参与调控肠道运动、感觉、炎症以及肿瘤的增殖转移等,可作为治疗各类肠道疾病的新靶点。     

IL－6对肥大细胞蛋白酶激活受体表达的影响

目的探讨IL-6对P815肥大细胞蛋白酶激活受体（PAR）表达的影响及其在过敏与炎症中的作用机制。方法P815肥大细胞激发后,收集各时间点的细胞和上清。采用实时定量PCR和流式细胞术的方法在mRNA和蛋白水平检测PAR－1、PAR-2、PAR．3和PAR-4表达情况。结果IL-6上调PAR－1、PAR-2、PAR－3、PAR-4mRNA的表达;下调PAR－1、PAR－3、PAR-4蛋白的表达;IL-6抗体的应用可阻断IL-6对PARs表达的上调作用。结论IL-6能够调节肥大细胞表面PAR的表达,并可能通过这一途径参与过敏性炎症反应。     

肥大细胞及蛋白酶激活受体-2与肝纤维化

近年来研究表明肥大细胞与肝纤维化的发生发展有密切关系,但其具体作用途径不甚明确,目前推测肥大细胞可能通过蛋白酶激活受体-2途径在肝纤维化中发挥重要作用.现将肥大细胞、蛋白酶激活受体-2与肝纤维化的有关进展作一综述.     

蛋白酶激活受体-1拮抗剂对兔心脏骤停后综合征中肾损伤的保护作用及机制

目的：探讨蛋白酶激活受体-1（PAR-1）拮抗剂对心脏骤停后综合征（PCAS）中肾损伤的影响及机制。方法：将日本大耳白兔随机分为假手术组（n ＝5）、PCAS 组（n＝10）、PAR-1拮抗剂组（n＝10）。采用窒息性心脏骤停法制备兔 PCAS 模型。PAR-1拮抗剂组于心肺复苏后10 min 给予静脉滴注 PAR-1拮抗剂 SCH79797（25μg／kg）,其余各组给予等量生理盐水静脉滴注。72 h 后取股静脉血检测血清肌酐和胱抑素 C 水平;取肾组织制备石蜡切片后行 HE 染色;采用 TUNEL 法测定肾脏细胞凋亡情况;应用Western blot 测定肾组织半胱天冬酶（casepase）-3、细胞外调节蛋白激酶（ERK）活化情况。结果：与假手术组相比,PCAS 组血清肌酐和胱抑素 C 水平明显上升,肾组织有大量炎性细胞浸润,凋亡细胞数显著增多,有催化活性的 caspase-3裂解片段（cleaved caspase-3）表达增高,磷酸化 ERK （p-ERK）表达减少（P ＜0．05）。与 PCAS 组相比, PAR-1拮抗剂组肾组织损伤减轻,血清肌酐和胱抑素 C 水平明显下降,凋亡细胞数减少, cleaved caspase-3表达降低,而 p-ERK 表达显著增高（P ＜0．05）。结论：PAR-1拮抗剂 SCH79797能抑制 PCAS 兔肾组织的炎症反应和细胞凋亡,可能与 ERK 信号通路激活有关。     

蛋白酶激活受体-2与消化系统疾病的研究进展

蛋白酶激活受体-2(protease activated receptor-2,PAR-2)属于G蛋白耦联受体,具有蛋白酶受体家族较特异的分子结构与激活方式,广泛分布于胃肠道,可被多种蛋白酶激活,产生多种生物学效应,包括影响多种消化腺的分泌,具有胃黏膜保护作用,影响胃肠道运动,参与胰腺炎的发生、发展,与消化道恶性肿瘤密切相关.PAR-2与消化系统疾病的关系正成为当前研究的一个热点.     

蛋白酶激活受体1在癌旁组织中的高表达与肝癌早期患者术后预后不良相关

目的 研究蛋白酶激活受体1(PAR1)在肝细胞肝癌(HCC)及癌旁组织的表达水平,探讨其与HCC早期患者预后的相关性.方法 应用实时定量聚合酶链反应检测随机选择的41例经根治性切除的HCC早期患者癌组织及对应的癌旁组织中PAR1的mRNA表达水平,并分析其与肝细胞肝癌预后的相关性.另随机选择49例H C C早期患者组织石蜡切片做免疫组织化学染色,分析其与HCC临床病理特征及预后的相关性.计数资料比较采用卡方或Fisher精确概率法;计量资料比较用两组间比较的t检验或Wilcoxon符号秩检验;生存率的判定使用Kaplan-Meier方法,差异性使用Log-rank检验评估.结果 癌旁组织中,复发组的PAR1 mRNA表达水平明显高于非复发组(0.591±0.458比0.361±0.177,T=-2.379,P＜0.05).PAR1蛋白在癌旁组织的表达水平与肿瘤分化程度相关(P＜0.05).PAR1阳性组患者生存时间为(58.39±4.59)个月,1、3、5年累计生存率分别为90.3%、83.9%和61.8%; PAR1阴性组患者生存时间为(75.84±1.87)个月,1、3、5年累计生存率分别为100.0%、100.0%和94.1%.PAR1阳性组患者至复发时间为(51.97±4.30)个月,1、3、5年累计复发率分别为10.2%、25.2%和40.6%;阴性组患者至复发时间为(71.92±3.77)个月,1、3、5年累计复发率分别为0、5.6%和21.3%.癌旁组织PAR1蛋白阳性表达组1、3、5年总生存率明显低于阴性表达组(x2=5.297,P＜0.05),累计复发率明显高于阴性表达组(x2=4.682,P＜0.05).结论 PAR1在HCC早期患者癌旁组织中的表达与术后患者的预后密切相关,其可能参与了凝血酶介导的肝细胞肝癌的恶性侵袭行为,并可能成为判断预后的预测指标.

Abstract：

Objective To evaluate the relationship between PAR1 (Protease-Activated Receptor 1)expression and the clinicopathologic features and to investigate the prognostic value of PAR1 expression in hepatocellular carcinoma (HCC) in early stage after curative resection. Methods Real-time PCR was used to detect PAR1 expression in 41 pairs of tumors and matched peritumoral samples of HCC in early stage.Prognostic value of PAR1 mRNA expression was evaluated. Meanwhile, another 49 tissue paraffin slices of HCC were tested using immunohistochemistry (Envision) and the prognostic value of PAR1 expression and other clinicopathologic factors were evaluated. Results Peritumoral PAR1 mRNA expression was significantly increased in HCCs from the patients with tumor recurrence as compared with those without recurrence (P＜0.05). Peritumoral PAR1 protein expression was related to tumor differentiation (P＜0.05). KaplanMeier analysis showed that Peritumoral PAR1 protein expression was associated with the overall survival(OS) (P＜0.05) of HCC patients and the time to recurrence (TTR) (P＜0.05). The 1,3 and 5 -year overall survival time and the cumulative recurrence time in the high PAR1 protein expression group were significantly lower as compared to the low PAR1 expression group in the peritumoral liver tissue. Conclusion Peritumoral PAR1 expression is closely associated with the prognosis of early stage HCC patients after curable surgery. PAR1 may be involved in thrombin-mediated invasion process and may be used as a prognostic marker for HCC.     

蛋白酶活化受体1诱导大鼠肝星状细胞分泌MCP-1

目的 探讨蛋白酶活化受体1（proteinase—activated receptors 1，PAR1）激动剂和活性肽对大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）分泌单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein 1，MCP—1）的调控作用。方法 应用改良的Friedman方法和Nycodenz一步密度梯度离心法分离SD大鼠HSC，选用生长7天的HSC，接种于12孔培养板各孔内，分别用不同浓度的PAR1激动剂-凝血酶、凝血酶抑制剂水蛭素、PAR1活性肽SFLLR和反活性肽RLLFS进行刺激，刺激时间为2、8、16h，用ELISA方法检测培养细胞上清液中的MCP—1水平。结果 经过16h的培养，PAR1激动剂-凝血酶和活性肽SFLLR可引起HSC MCP-1的释放增加，凝血酶抑制剂水蛭素及PAR1反活性肽RLLFS不能引起MCP—1的释放增加。结论 PAR1活性肽和凝血酶可促进SD大鼠HSC分泌MCP—1及肝纤维化大鼠肝脏炎症反应，PAR1反活性肽和凝血酶抑制剂在肝纤维化炎症反应中可能具有抗炎作用。     

活血通腑汤对大鼠脑出血后脑水肿的治疗作用

目的　研究活血通腑汤对脑出血后脑水肿的治疗作用。方法　利用大鼠自体血注入大脑一侧的尾状核建立脑出血实验动物模型,随机分组。观察药物对大鼠的神经功能缺损症状、脑血肿周围组织脑水含量以及钠离子含量的影响。结果　活血通腑汤能改善脑出血大鼠的神经功能评分,降低脑血肿周围脑组织的钠水含量,与对照组比较有显著差异P <0 . 0 1。结论　活血通腑汤对大鼠脑出血后脑水肿具有明显的治疗作用,为临床应用提供实验理论依据。     

过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路在大鼠高脂血症发生发展中的作用

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR) γ/Caspase-8/Caspase-3信号通路在大鼠高脂血症发生发展中的作用.方法 将健康雄性SD大鼠60只〔4周龄,体质量(110±10)g〕随机分为正常对照组、高脂饮食组、叶酸组、维生索B12组、叶酸+维生素B12组.适应性喂养1周后,叶酸组、维生索B12组、叶酸+维生素B12组分别腹腔注射叶酸(0.5 mg/d)、维生素B12 (0.05 mg/d)、叶酸(0.5mg/d)+维生素B12(0.05 mg/d),同时给予高脂饲料喂养;对照组腹腔注射0.9％NaCl溶液(0.5 ml/d)同时给予正常饲料喂养;高脂饮食组给予高脂饲料喂养.第17周末取腹主动脉利用反转录-聚合酶链反应检测各组PPARγ、Caspase-8和Caspase-3 mRNA的表达.结果 叶酸组、叶酸+维生素B12组腹主动脉的PPARγ mRNA水平高于高脂饮食组;Caspase-8、Caspase-3mRNA水平低于高脂饮食组(P＜0.05),且叶酸+维生素B12组较叶酸组降低mRNA水平更明显(P＜0.05).结论 叶酸与维生素B12可以改善血管壁PPARγ、Caspase-8和Caspase-3 mRNA的水平从而防止高脂血症对血管内皮的损伤.     

大承气汤对心脏骤停后综合征兔心肺组织蛋白酶激活受体1活性的抑制作用

目的:探讨大承气汤对心脏骤停后综合征(PCAS)兔心、肺组织蛋白酶激活受体1(PAR-1)激活的影响。方法:采用窒息性心脏骤停制备兔PCAS模型,复苏成功兔随机分为PCAS组、大承气汤组,另选5只健康兔作为正常对照组。在ROSC后15 min,大承气汤组给予大承气汤15 g/(kg·d)灌胃。48 h取动物血液检测,后处死动物,取心肺组织,采用Western blot测定PAR-1蛋白含量。结果:PCAS组兔心肺组织中PAR-1蛋白含量降低(均P0.01)。大承气汤组心肺组织中PAR-1蛋白含量较PCAS组升高(P0.05)。结论:PCAS发生时,心肺组织存在PAR-1过度激活,大承气汤对PCAS兔PAR1激活有抑制作用。