NF-κB诱导TNF-α在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达及PDTC对其表达的影响

目的 :探讨核转录因子 κB(NF κB)及肿瘤坏死因子 α(TNF α)在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达及吡咯醛二硫氨基甲酸 (pyrrolidinedithiocarbamate ,PDTC)对其表达的影响作用。方法 :建立大鼠视网膜缺血再灌注模型 ,6 0只SD大鼠随机分为缺血再灌注组和缺血再灌注 +PDTC组。每组按再灌注后不同时间段分为 1、6、12、2 4、4 8、72小时组 ,每组 5只 ,以原位杂交法检测视网膜中NF κB和TNF α的表达 ,每只大鼠处死前行视网膜电图 (ERG)检测。结果 :缺血再灌注组在 6小时开始检测到NF κB和TNF α的表达 ,在 2 4小时表达最强 ,以后逐渐减弱。缺血再灌注 +PDTC组在再灌注 6小时未能检测到NF κB和TNF α的表达 ,在第 12小时有NF κB和TNF α的表达 ,2 4小时表达最强 ,但低于缺血再灌注组 (P <0 0 5 )。缺血再灌注组在再灌注 6小时后各期ERG波幅明显低于缺血再灌注 +PDTC组 (P <0 0 5 )。结论 :NF κB及其诱导的TNF α在视网膜缺血再灌注损伤中发挥重要作用 ,PDTC可能通过抑制NF κB的活性减轻视网膜缺血再灌注损伤     

增生性玻璃体视网膜病变增生膜内炎性细胞因子mRNA表达

目的 检测炎前因子mRNA在增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy, PVR)中的表达情况，证实其在PVR发病中的作用。 方法 收集14例不同分级的PVR患者玻璃体切割术中所取出的增生膜，石蜡包埋切片，用生物素标记的寡核苷酸探针进行原位杂交，检测IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的表达，两例角膜移植后的供体眼作为正常对照。 结果 共有5例样本有阳性表达。3例增生膜中IL-1βmRNA表达，3例表达了IL-6 mRNA，1例表达了IL-8 mRNA，3例表达TNF-αmRNA。其中1例既表达了IL-1β又表达了IL-6 mRNA，1例IL-1β、IL-8和TNF-αmRNA三者均表达，2例有IL-6和TNF-αmRNA两者表达。正常视网膜未检测到炎前因子mRNA的表达。 结论 IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α参予了PVR增生膜的形成过程。 (中华眼底病杂志, 2002, 18: 286-288)     

IL-1β和TNF-α对培养的人视网膜色素上皮细胞的影响

目的：观察白介素1β（IL－1β）和α肿瘤坏死因子（TNF－α）对培养的人视网膜色素上皮细胞（RPE）生长的影响，了解在增生性玻璃体视网膜病变（PVR）中炎前因子的调控机制。方法；通过MTT比色实验和^3H-TdR掺入实验，检测IL－1β和／或TNF－α对培养的人视网膜色素上皮细胞增殖的影响。结果：IL－1β和／或TNF－α（0.02-20ng/ml0可促进培养的RPE增殖，呈剂量和时间依赖性，DNA合成也明显增加。结论：炎前因子IL－1β和／或TNF－α可能促进PVR中细胞的增殖。     

核因子-κΒ在眼内炎症反应及视网膜增生性病变中作用的初步实验研究

目的 :探讨核因子 (nuclearfactor,NF) κB活性对眼内炎症反应以及视网膜增生性病变发病的影响。方法 :10只健康新西兰大白兔 ,右眼造成视网膜裂孔后随机等分两组 ,对照组右眼玻璃体内注入白细胞介素 (interleukin ,IL) 1β 10 0ng/10 0 μl,治疗组右眼于注入等量IL 1β前 1小时先注入NF κB的特异性抑制剂二硫代氨基甲酸乙酯 (pyrrolidinedithiocarba mate,PDTC) 10nmol/ 10 μl。裂隙灯和间接眼底镜观察兔眼 1个月。 1月后取右眼行光镜检查。结果 :观察期间对照组 2只兔眼玻璃体中度混浊、3只重度混浊 ,治疗组 3只兔眼玻璃体轻度混浊、2只中度混浊。 1个月时 ,对照组 4只眼视网膜前有增生物形成 ,治疗组无类似改变。组织学检查证实对照组视网膜前增生物形成。结论 :NF κB参与视网膜损伤和IL 1β诱导的兔眼眼内炎症反应及视网膜增生性病变的发生 ;抑制NF κB活性可能对葡萄膜 -视网膜炎、视网膜增生性病变等炎症相关性视网膜疾病有治疗意义     

IL-1β和TNF-α对培养的人视网膜色素上皮细胞波形蛋白表达的影响

目的　观察IL 1β和TNF α对培养的人视网膜色素上皮 (RPE)细胞波形蛋白表达的影响。 方法　采用免疫组织化学和彩色图像分析技术检测IL 1β和 /或TNF α( 2 0ng/mL)对RPE细胞波形蛋白表达的影响。 结果　波形蛋白表达的灰度值分别为 :IL 1β TNF α处理组 76 9± 8 1,IL 1β处理组 78 4± 8 1,TNF α处理组 90 2± 6 7。与对照组 110 2±10 7比较均有显著性差异 (P <0 0 1)。结论　IL 1β和 /或TNF α可上调波形蛋白的表达 ,在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)中可能参与RPE细胞增殖过程中中间丝的改变。     

白细胞介素-1β诱导大鼠视网膜核因子-κB活化的研究

目的　研究白细胞介素 1β(interleukin 1β,IL 1β)对视网膜组织中核因子 κB(nuclearfactor κB ,NF κB)活化的诱导作用 ,以及四氢化吡咯 二硫代氨基甲酸酯 (pyrrolidinedithiocarbamate,PDTC)对NF κB的抑制作用。方法　将 16只Sprague Dawley (SD)大鼠随机等分为A、B两组。A组实验眼 (右眼 )玻璃体腔内 (下同 )注入 5 μl的IL 1β(5× 10 7U/L) ,对照眼 (左眼 )注入等量PSS ;B组实验眼先注入 10 μl的PDTC液 (1mmol/L) ,对照眼注入等量PSS ,1h后双眼再分别注入5 μl的IL 1β(5× 10 7U/L) ;均分别于 4h和 2 4h后处死大鼠 ,摘除眼球 ,取视网膜组织制备核提取物 ;用泳动迁移试验检测两组视网膜中NF κB/DNA结合活性。结果　SD大鼠玻璃体腔内注药 4h后 ,A组实验眼NF κB/DNA结合活性较对照眼增加 ,B组实验眼NF κB/DNA结合活性较对照眼降低 ;2 4h后 ,A组实验眼及B组对照眼的NF κB/DNA结合活性均较 4h者降低。结论　视网膜NF κB可被眼内IL 1β激活 ,NF κB在视网膜炎性反应中可能起重要调控作用     

NF-κB、IL-6在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达及β-七叶皂甙钠对其表达的影响

目的 :探讨核转录因子 κB(NF κB)及白细胞介素 6 (IL 6 )在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达及 β 七叶皂甙钠对其表达的影响。方法 :建立大鼠视网膜缺血再灌注模型 ,6 0只SD大鼠随机分为缺血再灌注组和缺血再灌注 β 七叶皂甙钠治疗组。每组按再灌注后不同时间段又分为 1h、6h、12h、2 4h、4 8h、72h组 ,每小组 5只大鼠 ,以原位杂交法检测视网膜中NF κB和IL 6的表达情况 ,每只大鼠处死前行视网膜电图 (ERG)检测。结果 :缺血再灌注组在 6h时开始检测到NF κB和IL 6的表达 ,在 2 4h时表达最强 ,以后逐渐减弱。缺血再灌注 β 七叶皂甙钠治疗组在再灌注 6h时未能检测到NF κB和IL 6的表达 ,在第 12小时有NF κB和IL 6的表达 ,2 4h时表达最强 ,但低于缺血再灌注组 (P <0 .0 5 )。缺血再灌注组在再灌注 6h时后各期ERG波幅明显低于缺血再灌注 β 七叶皂甙钠治疗组 (P <0 .0 5 )。 结论 :NF κB可能诱导IL 6在视网膜缺血再灌注损伤中发挥重要作用 ,β 七叶皂甙钠可能通过抑制NF κB的活化而减轻视网膜缺血再灌注损伤。     

转化生长因子-β受体Ⅱ在增生性玻璃体视网膜病变增生膜中的表达

目的:观察及评估转化生长因子-β受体Ⅱ(TGF-βRⅡ)在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)增生膜中的表达及临床意义。 方法:采用免疫组化和原位杂交方法,对13例PVR患者行玻璃体手术增生膜获得的16例进行TGF-βRⅡ的蛋白和mRNA的检测。 结果:免疫组化结果为:9例C2～C3级膜中,染色反应为阳性的有8例,总阳性率为88.9％。7例D1～D3级膜中有6例为阳性,总阳性率为85.7％。阳性细胞多是一类胞体为长圆形,胞核呈圆形或卵圆形的上皮样细胞。统计学分析TGF-βRⅡ标记与膜分级间无相关性(P>0.05)。原位杂交结果与免疫组化基本一致。 结论:PVR发生过程中视网膜色素上皮细胞在生长因子等的刺激下,TGF-βRⅡ表达显著上调,表明了TGF-β参与PVR增生膜的形成。眼科学报 2003;19:244-247。     

核因子-Κb在眼内炎症反应及视网膜增生性病变中作用的初步实验研究

目的：探讨核因子（nuclear factor,NF)-κB活性对眼内炎症反应以及视网膜增生性病变发病的影响。方法：10只健康新西兰大白兔，右眼造成多膜裂孔后随机等分两组，对照组右眼玻璃体内注入白细胞介素（interleukin,IL)－1β 100ng/100μl，治疗组右眼于注入等量IL－1β前1小时先注入NF－κB的特异性抑制剂二硫代氨基甲酸乙酯（pyrrodidine dithiocarbamate,PDTC)10nmol/10μl，裂隙灯和间接眼底镜观察兔眼1个月，1月后取右眼行光镜检查。结果：观察期间对照组2只兔眼玻璃体中度混浊，3只重度混浊，治疗组3只兔眼玻璃体轻度混浊，2只中度混浊，1个月时，对照组4只眼视网膜有增生物形成，治疗组无类似改变，组织学检查证实对照组视网膜前增生物形成，结论：NF－κB参与视网膜损伤和IL－1β诱导的免眼眼内炎症反应及视网膜增生性病变的发生，抑制NF－κB活性可能对葡萄膜－视网膜炎，视网膜增生性病变等炎症相关性视网膜疾病有治疗意义。     

肾上腺髓质素及其受体在增生性玻璃体视网膜病变前膜中的表达

目的 探讨肾上腺髓质素(ADM)及其受体(ADMR)在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)前膜中的表达。方法 标本取自2001年7-11月在我院眼科研究所确诊为孔源性视网膜脱离合并PVR行玻璃体手术的10例连续病例,PVR均为C级以上,采用原位杂交法对术中所取标本的ADM和ADMR mRNA表达情况进行观察。结果10例增生性玻璃体视网膜病变前膜中有7例ADM和ADMR mRNA阳性。阳性细胞内分布不均匀,部分细胞以胞质阳性为主,部分细胞的阳性主要出现在胞核。结论 ADM和ADMR在PVR前膜中表达,PVR的发病过程中有ADM和ADMR的参与。(中华眼科杂志,2004,4D：317-320)     

单核细胞趋化蛋白-1和基质金属蛋白酶-2在增生性玻璃体视网膜病变增生膜中的表达

目的观察单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotac ticprotein-1，MCP-1)和基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2，MMP-2)在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)增生膜中的表达。方法 玻璃体手术取出的PVR增生膜24例，其中C级膜11例，D级膜13例，用免疫组织化学方法检测MCP-1和MMP-2的表达。结果在全部24例增生膜中，MCP-1和MMP-2均有表达，MCP-1阳性表达8例，强阳性表达16例；MMP-2阳性表达7例，强阳性表达17例。结论MCP-1和MMP-2均存在于PVR增生膜中，提示2者在PVR增生膜的形成和PVR发生发展过程中起重要作用。     

基质细胞衍生因子受体CXCR4在视网膜增生膜中表达的研究

目的 观察基质细胞衍生因子(SDF-1)受体CXCR4在增生型糖尿病视网膜病变(PDR)和增生性玻璃体视网膜病变(PVR)增生膜中的表达,评估其在2种疾病发展过程中的作用.方法 采用免疫组织化学单染色法检测12例PDR及21例PVR增生膜中CXCR4的表达,并对增生膜进行免疫组织化学双染色,使用GFAP标记胶质细胞并观察其与CXCR4阳性细胞间的关系.结果 免疫组织化学单染色可见CXCR4在PDR与PVR增生膜内均有表达,表达CXCR4的细胞数量在PDR增生膜内显著高于PVR增生膜(P=0.033).CXCR4在PDR增生膜内血管内皮细胞上有表达.免疫组织化学双染色可见双阳性细胞(同时表达GFAP与CXCR4的细胞)多位于增生膜的边缘,胞浆丰富,胞核呈椭圆形,细胞存在成团、聚集现象.双阳性细胞在增生膜内的阳性表达率:PDR为50%,PVR为66.7%,两者相比差异无统计学意义(P>0.05).结论 CXCR4可能参与了PVR和PDR的发展并且在2种疾病中的作用有所不同;CXCR4可能通过神经胶质细胞参与了视网膜增生膜的形成过程.     

甘糖酯对糖尿病大鼠视网膜病变中炎性因子TNF-α和IL-1β表达的影响

目的：探讨甘糖酯对糖尿病大鼠视网膜病变中炎性因子肿瘤坏死因子－α（ tumor necrosis factor ,TNF－α）和白细胞介素－1β（ interleukin－1β,IL－1β）表达变化的影响,为将甘糖酯应用于临床上防治糖尿病视网膜病变提供可靠的理论和实验依据。方法：选取清洁级雄性成年Wistar大鼠,随机分为正常对照组、糖尿病组、50 mg／kg 甘糖酯治疗组和100 mg／kg甘糖酯治疗组。大鼠采用链脲佐菌素（ STZ）60mg／kg一次性腹腔内注射制作糖尿病模型,甘糖酯治疗组的给药方法为甘糖酯溶液灌胃,持续12 wk。给药12 wk 后处死各组大鼠并分离视网膜,取房水、血清,用ELISA法检测大鼠视网膜组织、房水及血清中TNF－α和IL－1β蛋白的表达变化,免疫组织化学检测大鼠视网膜TNF－α和IL－1β蛋白表达的变化。结果：给药12 wk后大鼠糖尿病视网膜病变模型中,甘糖酯对糖尿病大鼠的血糖没有影响;ELISA检测表明,糖尿病组大鼠血清与视网膜中的TNF－α和IL－1β含量增加,与正常对照组比较,差异有统计学意义（P＜0．05）;甘糖酯干预后血清及视网膜中TNF－α和IL－1β显著降低,与糖尿病组比较差异有统计学意义（P＜0．05）,且甘糖酯浓度越高,降低越明显。但是甘糖酯干预组房水中TNF－α和IL－1β蛋白的产生无明显变化。免疫组织化学检测表明,正常对照组视网膜中几乎不表达TNF－α蛋白,糖尿病组TNF－α蛋白呈高表达状态,主要位于视网膜神经节细胞层内丛状层、外丛状层及色素上皮层;50 mg／kg甘糖酯干预组TNF－α弱表达,100mg／kg甘糖酯干预组TNF－α几乎不表达。而在正常对照组视网膜中IL－1β在外核层微量表达,糖尿病组IL－1β在内丛状层、外丛状层及色素上皮层高表达;50 mg／kg甘糖酯干预组及100 mg／kg甘糖酯干预组IL－1β呈低表达。结论：甘糖酯能抑制大鼠早期糖尿病视网膜病变中的炎性因子TNF－α和IL－1β的产生,提示其可能对糖尿病视网膜病变起着防治作用。     

增生性玻璃体视网膜病变眼玻璃体液白细胞介素和肿瘤坏死因子的研究

增生性玻璃体视网膜病变(PVR)是严重的致盲性眼病,近年来研究表明某些细胞因子在其发生发展中起重要作用,如白细胞介素(IL)-1、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子(TNF)等[1, 2].我们通过检测PVR患者和正常眼玻璃体IL-1、IL-6、IL-8和TNF水平,探讨这些细胞因子在PVR发病中的作用.     

PDTC对过氧化氢诱导鼠晶状体上皮细胞NF-κB活化表达的影响

目的　观察过氧化氢 (H2 O2 )诱导鼠白内障形成过程中晶状体上皮细胞核因子 KB(NF κB)的活化表达及吡咯烷二硫氨基甲酸 (PDTC)对核因子κB(NF κB)活化表达的抑制作用 ,探讨NF κB及PDTC在白内障发生、预防和治疗中的作用。方法　大鼠晶状体器官离体培养 ,免疫组织化学方法检测晶状体上皮细胞NF κB的活化表达。结果　随过氧化氢损伤时间的延长 ,H2 O2 组晶状体上皮细胞NF κB活化表达逐渐增强 ,且与晶状体混浊程度呈正相关。PDTC可以明显抑制晶状体上皮细胞NF κB阳性活化表达和减轻晶状体混浊程度 ,且存在一定程度的剂量依赖性。结论　过氧化氢可以诱导鼠晶状体上皮细胞NF κB的活化表达 ,PDTC可以有效抑制NF κB的活化表达 ,有可能对抗或延缓白内障的发生     

增生性玻璃体视网膜病变眼玻璃体液白细胞介素 和肿瘤坏死因子的研究

增生性玻璃体视网膜病变（PVR）是严重的致盲性眼病，近年来研究表明某些细胞因子在其发生发展中起重要作用，如白细胞介素（IL）-1、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子（TNF）等。我们通过检测PVR患者和正常眼玻璃体IL-1、IL-6、IL-8和TNF水平，探讨这些细胞因子在PVR发病中的作用。     

增殖性玻璃体视网膜病变玻璃体白细胞介素6(IL-6)表达的研究

目的 :研究白细胞介素 6(IL 6)在增殖性玻璃体视网膜病变 (PVR)玻璃体中的表达水平 ,分析IL 6在PVR中的作用。方法 :对 3 7例增殖性玻璃体视网膜病变及 1 2例正常对照玻璃体IL 6进行定量测定 ,其中视网膜脱离PVR 2 2例 ,外伤性PVR 1 5例。IL 6的测定采用双抗夹心法 (ELISA)。结果 :3 7例PVR玻璃体IL 6水平为 2 64 87± 1 3 6 4 1 pg/ml,其中 2 2例视网膜脱离并发PVR者玻璃体IL 6水平为 2 61 4 2± 1 3 1 2 7pg/ml,外伤性PVR者玻璃体IL 6水平为 2 97 97± 1 4 1 53 pg/ml。正常对照玻璃体IL 6水平为 3 5 69± 2 0 64 pg/ml。PVR玻璃体IL 6水平显著高于正常对照组 (P <0 0 1 )。IL 6水平在PVRC、D级最高。结论 :白细胞介素 6(IL 6)在PVR中呈上行性表达 ,参与PVR的发生发展。IL 6主要在PVR中晚期发挥作用。     

结缔组织生长因子在增生性玻璃体视网膜病变增生膜中的表达

目的观察结缔组织生长因子(CTGF)在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)增生膜中的表达,并鉴别增生膜中阳性细胞来源。方法采用SABC免疫组织化学方法对玻璃体切割手术获得的43例PVR增生膜进行CTGF蛋白的检测,并采用免疫荧光双标记技术在阳性表达的增生膜和正常人眼球标本中判定CTGF阳性细胞来源。结果免疫组织化学显示PVR增生膜中阳性细胞形态多是一类胞体为长圆形或多角形,胞浆丰富的上皮样细胞。17例C2-C3级膜中12例阳性,26例D1-D3级膜中19例阳性,其染色反应为阴性"-"、弱阳性" "、阳性"2 "和强阳性"3 "的分别有5、3、6、3例和7、5、8、6例,总阳性率分别为70.6%和73.1%。统计学分析CTGF阳性表达与膜分级问无相关性(P>0.1)。免疫荧光双标记法显示PVR增生膜中有RPE、巨噬细胞、神经胶质细胞,CTGF阳性细胞来源于RPE细胞;正常眼球RPE层不表达CTGF。结论正常眼球RPE层不表达CTGF,PVR形成过程中RPE细胞在TGF-β1等生长因子的刺激下,CTGF表达上调,表明CTGF参与了PVR增生膜的形成和发展。     

α-平滑肌肌动蛋白在PVR增生膜中的表达以及PDGF对其在人RPE细胞中表达的影响

目的 探讨α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)增生膜中的表达以及血小板源性生长因子(PDGF)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞表达α-SMA的影响.方法 通过免疫荧光实验和免疫组化法对14例PVR患者视网膜表面增生膜(PRM)中α-SMA的表达进行定性及定量分析;用外源性PDGF-BB处理体外培养的人RPE细胞,并通过免疫荧光实验检测PDGF-BB对RPE细胞表达α-SMA的影响.结果 免疫组织化学结果显示:α-SMA在14例不同级别的PRM中均有表达,主要分布在胞浆中,但其表达的程度有差异.α-SMA阳性细胞在PVR/C级PRM膜中比率为35/80,在PVR/D级PRM膜中的比率为50/60.免疫荧光定量分析结果显示:α-SMA在C级PRM膜和D级PRM膜中的平均荧光强度分别为12.31和23.09,二者差异有统计学意义(P＜0.01).外源性的PDGF-BB(50 μg·L-1)能显著促进人RPE细胞中α-SMA的表达(50 μg·L-1 PDGF-BB处理前后平均荧光强度分别为10.08和17.23),差异有统计学意义(P＜0.05),这种促进作用在培养基中有血清存在时明显增强.结论 α-SMA在PVR增生膜中广泛表达,其表达量与PVR病变程度有关,提示α-SMA可作为检测PVR病变程度的一个潜在因子;PDGF促进d-SMA的表达,这提示PDGF在PVR发病中有重要作用,为临床上PVR的预防和治疗提出新的思路.     

增生性玻璃体视网膜病变中组织型转谷氨酰胺酶的表达

目的:检测增生性玻璃体视网膜病变(PVR)视网膜前膜和视网膜色素上皮(RPE)细胞中组织型转谷氨酰胺酶(tTG)的表达情况,探讨tTG是否参与PVR的发病过程.方法:PVR患者21例,收集视网膜前膜,C级8例,D级13例,行tTG免疫组织化学染色.另对培养3-5代的人RPE细胞分别用含有1 00mL/L PVR玻璃体液、正常玻璃体液和PBS的DMEM培养液进行孵育24h后行tTG免疫细胞化学染色.光镜下观察,比较C级和D级膜的表达阳性率,显微图像分析测量3组RPE细胞染色的平均灰度值.结果:在PVR视网膜前膜中tTG呈阳性表达(81%),C级和D级膜表达阳性率无差异 (C级88%,D级77%,P＞0.05).培养的人RPE细胞表达tTG,在PVR患者的玻璃体液作用下,tTG表达的平均灰度值为137.0±2.6,与正常玻璃体液组(143.5±2.9)及PBS对照组(143.6±3.0)相比,表达水平升高(P＜0.05).结论:PVR视网膜前膜和培养的人RPE细胞tTG表达阳性,在PVR患者的玻璃体液作用下,RPE细胞的tTG表达水平升高,这表明tTG参与了PVR的发病过程,在PVR视网膜前膜的形成过程中可能有重要作用.