猪凝血因子X及凝血因子Xa的制备工艺研究

目的 从猪血中制备猪凝血因子X(FX)及凝血因子Xa(FXa)。方法 采用柠檬酸钡吸附、硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素离子交换色谱等方法制备FX，并优化FX的激活条件，从而制备FXa。通过SDS-PAGE进行FX和FXa的检测。结果 建立了FX和FXa的制备工艺，收率分别为每1ml血浆34，12μg；采用胰蛋白酶激活FX，激活条件为：0．02％酶浓度、pH8．0、37℃下作用70min。结论 此工艺操作简单，收率高，适合于规模化生产。     

凝血因子Ⅹa抑制剂的设计进展

利用模拟技术和Ｘ射线结构分析，早期Ⅹａ因子抑制剂中发现对称双苄脒结构和肽为主的结构已迅速为许多新化合物所取代。本文综述凝血因子Ⅹａ抑制剂的设计进展。目前出现了许多带有一个脒基团的化合物；非苄脒抑制剂的设计是正在出现的研究领域。许多近期报道的方法涉及到降低化合物的总碱度；人们期望，能从碱性降低的化合物中发现药效学和药代动力学性质改善的Ⅹａ因子抑制剂。     

凝血因子Ⅹa抑制剂研究进展

凝血因子Ⅹa是一个丝氨酸蛋白酶,在凝血级联反应中,因子Ⅹa处于外源性和内源性凝血级联反应的交汇点,也就是凝血瀑布共同通路的起始位置。由于其在凝血途径中位置的重要性,Ⅹa因子已经成为新型抗凝药物开发的重要靶点。本文从凝血因子Ⅹa的功能和结构、已上市Ⅹa因子抑制剂以及天然来源的Xa因子抑制剂等方面进行综述。     

重组人凝血因子Ⅷ对凝血因子Ⅹa生成及血友病小鼠凝血功能的影响

目的探究在研重组人凝血因子Ⅷ(recombinant human coagulation factor Ⅷ, rhFⅧ)对凝血因子Ⅹa(coagulation factor Ⅹa, FⅩa)生成的促进效果, 并与已上市同类产品进行比较;进一步开展rhFⅧ对小鼠模型凝血功能影响的研究。方法分别在固定FⅧ、FⅩ、FⅨa中任意2个因子、改变第3个因子浓度时, 通过体外实验检测FⅩa活性, 测定在研rhFⅧ和市售FⅧ产品的FⅩa生成速率并比较。A型血友病模型小鼠(HA小鼠)尾静脉单次静脉注射在研rhFⅧ或市售rhFⅧ产品后, 检测小鼠凝血相关指标的变化。结果体外实验中, 与市售rhFⅧ产品ADVATE、血源性人FⅧ相比, 在研rhFⅧ在不同条件下均具有相似或更高的FⅩa生成速率。注射在研rhFⅧ后HA小鼠活化部分凝血活酶时间缩短(50和100 IU/kg剂量下分别为29.43和20.78 s), 具有剂量依赖性, 同剂量下与市售rhFⅧ产品Xyntha一致。结论在研rhFⅧ与市售rhFⅧ和血源性人FⅧ相比, 在体外具有相同的促FⅩa生成活性, 且在HA小鼠模型中促凝血效果得到了验证, 具备成药...     

猪凝血因子V的制备及其活性分析

从猪血浆中制备猪凝血因子V,并分析凝血因子V加速凝血酶原活化的促凝活性。采用聚乙二醇沉淀、柠檬酸钡吸附、DEAE纤维素离子交换层析等方法,制备了猪凝血因子V。经SDSPAGE检测,猪凝血因子V得以成功制备,收率为每升血浆收90.2mg,纯度为64.4%。经纤维蛋白凝结实验分析,采用上述方法制备的猪凝血因子V具有较高的促凝血酶原活化活性。     

凝血因子Ⅷ制备工艺研究

凝血因子Ⅷ制剂是治疗血友病甲的最主要血液制品。８０年代中期发展了新一代血浆凝血因子Ⅷ浓制剂及基因重组凝血因子Ⅷ技术，不仅提高了凝血因子Ⅷ制剂的纯度，减少了副作用，而且降低了病毒感染的危险性。本文介绍了凝在子Ⅷ制剂的生产及病毒灭活工艺。     

噁唑烷酮类化合物的合成及其凝血因子Ⅹa抑制活性研究

目的利用生物电子等排原理对利伐沙班进行结构改造,以便寻找活性更好的噁唑酮类凝血因子Ⅹa抑制剂。方法以(S)-4-(4-(5-(氨基甲基)-2-氧代噁唑烷-3-基)苯基)吗啉-3-酮盐酸盐为原料,依次经过酰化、烃化反应,设计合成了22个噁唑烷酮类化合物3a～3v,并通过ESI-MS、~1H-NMR及IR谱对目标化合物进行结构确证。结果与结论Ⅹa因子抑制活性的体外实验表明,在100μg·mL~(-1)浓度下,化合物3p表现出比利伐沙班更好的凝血因子Ⅹa抑制作用,而化合物3b、3e、3s的体外Ⅹa抑制作用与利伐沙班相当。     

首批人凝血因子Ⅱ和Ⅹ浓制剂国家标准品协作标定

目的协作标定首批人凝血因子Ⅱ和Ⅹ浓制剂国家标准品。方法用世界卫生组织 98 590批人凝血因子Ⅱ和Ⅹ浓制剂国际标准品 ,采用一期法标定我国首批人凝血因子Ⅱ和Ⅹ浓制剂国家标准品 ,将标准品分别于4℃、2 2℃、37℃保存 5个月 ,进行稳定性考查。结果人凝血因子Ⅱ和Ⅹ国家标准品的效价分别为 1 6 .1IU 支和 1 2 .1IU 支 ,稳定性良好。结论确定了首批人凝血因子Ⅱ和Ⅹ浓制剂的国家标准品     

因子Ⅹa选择性抑制剂戊聚糖钠

因子Ⅹa选择性抑制剂戊聚糖钠是新一代抗栓药物 ,对抗凝血酶Ⅲ有选择性高亲和力 ,特异性催化因子Ⅹa失活 ,产生无因子Ⅱa抑制或抗血小板活性的抗凝血酶作用 ,从而显著降低静脉血栓栓塞的危险性。在预防大型矫形手术后静脉血栓栓塞时 ,戊聚糖钠皮下用药最佳剂量为 1 .5～ 3mg ,每日一次给药 ,具有较好的耐受性 ,在推荐临床剂量 2 .5mg时 ,与标准药物依诺肝素一样具有类似的耐受性 ,但戊聚糖钠不会产生抗体诱导血小板减少的副作用     

新凝血因子Ⅹa抑制剂Bg115-2的抗血栓作用及药代动力学

目的 探讨Bg115-2的抗血栓功效和初步药代动力学性质。方法 试剂盒测定小鼠半体内凝血酶原时间（PT）和活化部分凝血活酶时间（APTT）;采用小鼠下腔静脉结扎模型评价对静脉血栓的作用;采用尾尖测定出血时间法;用FⅩa活性测定Bg115-2的血药浓度。结果 sc给予Bg115-2 0.19~3.0 mg·kg^-1可明显地、剂量依赖地延长PT (P<0.05, P<0.01)和APTT (P<0.01);Bg115-2 0.75~3.0 mg·kg^-1可显著地减轻血栓质量,其抑制50%血栓形成的剂量（ID₅₀）为0.19 mg·kg^-1;ig给予Bg115-2 1.5~6.0 mg·kg^-1也明显地减轻血栓质量(P<0.01)。Bg115-2的出血反应与那曲帕林钙相似,有较高的出血风险效益比,ED₂/ID₅₀为26.8。另外单次sc给予Bg115-2 3.0 mg·kg^-1显示出二室模型的药代动力学特点,t_1/2为（6.18±1.45)h, c_max为(5.20±0.66)mg·L^-1, AUC为(43.75±8.20)mg·L^-1·h。结论 Bg115-2为一注射和口服均可的、强效的静脉血栓形成抑制剂,出血不良作用较轻。它具有较长的半衰期和二室模型的分布特征。     

猪胰淀粉酶的制备工艺研究

以猪胰脏为原料，利用（NH4）2SO4盐析、凝胶层析及真空低温冻干等方法制备胰淀粉酶。该工艺制备的胰淀粉酶的活性为108．57ku／g，收率为1．4%，纯度为59%，低成本。结果表明本方法能生产出高活性低成本的胰淀粉酶。     

凝血因子Ⅺa小分子抑制剂研究进展

血栓性疾病严重影响着人类的生活质量,其发病率呈逐年上升的趋势。目前临床上用于治疗血栓性疾病的药物主要是抗凝药物,尽管其抗血栓效果较好,但往往伴随着出血风险。近几年研究发现,凝血因子Ⅺa（FⅪa）抑制剂能够降低静脉血栓的发病率而对出血并没有明显影响,因而在治疗血栓性疾病方面具有重要潜在价值。因此,FⅪa抑制剂可作为一种新型的抗血栓药物。综述近年来发现的源自天然产物和化学合成的小分子FⅪa抑制剂的研究进展,为FⅪa抑制剂类药物设计和发现提供参考。

     

微生物来源的凝血因子Ⅲa抑制剂SIPI—94—1129—Ⅰ的研究

从菌种ＳＩＰＩ－９４－１１２９的发酵液中，经溶煤萃取、硅胶柱和凝胶柱分离、结晶等方法，分离出具有ＦＸⅢａ抑制活性的化合物ＳＩＰＩ－９４－１１２９－Ⅰ（１），通过对其理化性质和ＵＶ、ＩＲ、ＮＭＲ（＾１Ｈ和＾１３Ｃ）等波谱分析，确定其结构为Ｎ－［２－（４－痉苯基）乙基］乙酰胺，即Ｎ－乙酰酪胺，它对ＦＸⅢａ在０．２￣１２．８ｍｍｏｌ／Ｌ都具有抑制活性。     

微量生色底物法测定肝素钠抗Ⅹa因子和抗Ⅱa因子活性

目的英国药典中收载了半微量生色底物法测定低分子肝素抗Ⅹa因子和抗Ⅱa因子活性,在此基础上,我们考虑是否可以将实验方法进行改进,用微量生色底物法测定肝素类药物活性。方法调整样品与试剂浓度,降低总反应体积,在96孔酶标板中进行反应,用酶标仪测定样品吸光度。结果对6个肝素样品进行抗Ⅹa因子和抗Ⅱa因子活性测定,实验结果误差小,重复性良好。结论微量生色底物法可以用于肝素类药物抗Ⅹa因子和抗Ⅱa因子活性测定,该法提高了实验效率,降低了检验成本,可以考虑用本法取代传统的凝血法测定肝素效价。     

D-聚甘酯的分子量与抗FⅩa/抗FⅡa活性比值的相关性研究

目的 观察不同分子量的D-聚甘酯(DPS)对大鼠抗FⅩa/抗FⅡa活性比值的影响.方法 将30只大鼠随机分为5组,分别给予生理盐水、低分子肝素(360 U·kg-1)及3种不同分子量的DPS(9 mg·kg-1).给药后1h,分别测定血浆的APTT、PT、FⅠB、ATⅢ及抗FⅩa、抗FⅡa活性.结果 高剂量DPS组的抗FⅡa活性高于低分子肝素及中、低剂量DPS组,抗FⅩa/抗FⅡa比值明显低于其余各组.结论不同分子量的D-聚甘酯,抗FⅩa活性无显著性差异.分子量增加,抗FⅡa活性增强,抗凝作用增强;分子量减小,抗FⅩa/抗FⅡa比值增大,抗栓作用增强.     

冷沉淀凝血因子制备方法的改进

目的 通过冷沉淀凝血因子制备方法的改变提高了产品质量.方法 1将新鲜冰冻血浆置于4±2摄氏度水浴箱内融化后,虹吸出血浆,袋内剩余40～50 ml冷沉淀凝血因子2将新鲜冰冻血浆置于(4±2)℃冰箱中过夜融化,经离心后分离出冷沉淀凝血因子20～30 ml.结果 离心法优于虹吸法.结论 本文对比离心法和虹吸法两种方法制备冷沉淀凝血酶因子,得出离心法制备冷沉淀凝血因子质量优于虹吸法,将冷沉淀凝血因子制备方法进行改进.     

4种冷沉淀凝血因子制备方法的比较研究

目的 探讨4种制备方法对冷沉淀凝血因子质量的影响。方法 将160袋新鲜冰冻血浆随机分成4组,每组40袋,分别用4种不同制备方法[Pool方法(A组)、虹吸法(B组)、水浴离心法(C组)及基于虹吸法改良的全自动冷沉淀制备仪法(D组)]制备冷沉淀凝血因子。比较4组凝血因子Ⅷ(FⅧ)、纤维蛋白原(FIB)水平及其回收率。结果 4组FⅧ和FIB水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。A组FⅧ水平与D组比较,差异有统计学意义(P<0.05);B组FⅧ水平分别与C组、D组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。B组FIB水平分别与A组、C组、D组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。4组FⅧ回收率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。4组FIB回收率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。A组FⅧ回收率与D组比较,差异有统计学意义(P<0.05);B组FⅧ回收率分别与C组、D组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 采用基于虹吸法改良的全自动冷沉淀制备仪制备冷沉淀凝血因子的方法最优,其可有效控制制备操作过程中影响质量的诸多因素,有效降低...     

抗栓药Apixaban

由百时美施贵宝公司和辉瑞公司联合研制的抗栓药apixaban（曾用代号BMS-562247,BMS-562247—01）属于氨基苯并曝唑类化合物,是一种高选择性、可逆的凝血因子Xa抑制剂,口服有效,临床前研究和Ⅰ期研究结果显示该药具有较好的抗血栓作用,且安全性和耐受性良好。目前,将apixaban用于防治静脉血栓的Ⅱ期临床试验已完成,Ⅲ期临床研究正在进行中。     

Fondaparinux:一个新的选择性Ⅹa因子抑制剂

fondaparinux是一个化学合成的全新戊聚糖化合物 ,能够有效地预防大型的下肢骨科手术后常见的静脉血栓栓塞。本文就其药效学、药动学、临床应用及其现状等作一综述。     

选择性凝血因子Ⅺa抑制剂防治血栓性疾病的临床研究进展

血栓性疾病严重威胁人类生命健康,影响生活质量。虽然近年来不断有新型抗血栓药物上市应用,但往往伴随着不同程度的高出血风险,因此研发效果好而出血风险低的抗血栓药物显得尤为重要。凝血因子Ⅺa(FⅪa)是主要参与凝血过程内源性途径的关键蛋白酶因子,抑制该因子功能可发挥抗血栓作用。近期研究显示,特异性FⅪa抑制剂能够降低静脉血栓栓塞症发病率而对出血无明显影响,因此在防治血栓性疾病方面具有重要潜在价值。目前已有多个FⅪa抑制剂类药物处在不同的研究和开发阶段,适应证均为血栓性疾病。本文综述了近年正在开展临床研究的FⅪa抑制剂,为该类药物进一步上市及临床应用提供参考。