腺嘌呤诱发的大鼠肾间质纤维化组织中α-平滑肌肌动蛋白和Ⅳ型胶原的表达及其意义

[目的]探讨腺嘌呤诱发的大鼠肾间质纤维化组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅳ型胶原的表达及其意义.[方法]正常组大鼠灌胃给予生理盐水10mL/kg,模型组给予腺嘌呤250mg/kg,共24d,检测两组大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、钙离子和磷的含量.剖取肾脏,行HE和直接红染色,观察肾组织的病理变化和纤维的增生程度,行免疫组织化学染色观察肾组织α-SMA和Ⅳ型胶原的表达情况.[结果]模型组与正常组比较,血清BUN,Scr含量明显升高,血清钙离子含量明显下降,磷含量显著升高.模型组肾小球数量明显减少,肾间质内胶原纤维、α-SMA和Ⅳ型胶原阳性面密度明显高于对照组.[结论]在腺嘌呤诱发的大鼠肾间质纤维化的发生发展过程中肌成纤维细胞的增殖活化和Ⅳ型胶原发挥重要作用.     

苦参碱?γ干扰素对大鼠肺纤维化干预作用

目的:探讨苦参碱、γ干扰素(IFN-γ)对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化的干预作用及其可能的机制.方法:SD雄性大鼠60只,分为健康对照组、肺纤维化模型组、苦参碱干预组、IFN-γ干预组,各组分别于7 d、14 d、28 d处死5只,行HE染色及Masson 染色半定量判断肺组织肺泡炎及肺纤维化程度.免疫组化测肺组织TGF-β1、CTGF、Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原的蛋白水平表达.结果:苦参碱干预组、IFN-γ干预组大鼠肺泡炎、肺纤维化程度均较模型组好转.与模型组相比,苦参碱、IFN-γ都能够抑制肺组织中的TGF-β1、CTGF、Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原的表达(P<0.05).结论:苦参碱及IFN-γ对大鼠肺纤维化模型均有一定的疗效,其作用机制可能是通过抑制TGF-β1和CTGF的表达来减少Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原的生成.     

舒洛地特对慢性环孢素肾病大鼠的保护作用

目的 观察舒洛地特对慢性环孢素肾病大鼠(CCN)的保护作用.方法 36只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、贝那普利阳性对照组、三组舒洛地特干预组,观察各组大鼠体质量、血尿素氮和肌酐的变化;实验末取肾组织行HE、PAS及Masson染色观察病理变化,分析各组小动脉透明样变性、肾间质纤维化情况.电镜观察肾组织超微结构变化.结果 模型组大鼠体质量下降,血尿素氮、肌酐明显升高.4周后所有用药组体质量均高于模型组,尿素氮、肌酐水平均低于模型组;模型组大鼠可见典型CCN改变,各用药组大鼠的CCN病变明显减轻;模型组大鼠肾小球、肾小管基底膜增厚,细胞核固缩,间质见较多胶原纤维,各用药组病变较轻.结论 舒洛地特干预用药可减轻环孢霉素肾毒性,早期干预效果更好,舒洛地特预防环孢霉素A肾毒性优于贝那普利.     

氯沙坦对糖尿病肾病大鼠肾小球硬化的影响

目的:探讨氯沙坦对糖尿病肾病大鼠细胞外基质降解作用的机制.方法:采用链脲霉素(streptozotozin,STZ)诱导的糖尿病肾病大鼠模型,将大鼠随机分为正常组、模型组和氯沙坦组,16周后测血肌酐、尿素氮.对肾组织进行HE和Masson染色,计算肾小球硬化指数.Western免疫印迹测定肾脏Ⅳ型胶原和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的蛋白表达量,real time-PCR方法检测肾组织Ⅳ型胶原mRNA,转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)mRNA和CTGF mRNA的表达水平.结果:氯沙坦组血尿素氮、肾小球硬化指数及肾组织Ⅳ型胶原、CTGF蛋白表达均低于模型组(均P<0.05);Ⅳ型胶原mRNA,TGF-βJ mRNA及CTGF mRNA的表达水平均低于模型组(均P<0.05).结论:氯沙坦可能通过抑制TGF-βl和CTGF,减少Ⅳ型胶原积聚,减轻肾小球硬化.     

层粘蛋白及Ⅲ型胶原在酒精性肾脏损害中的表达

目的建立大鼠酒精性肾脏损害模型,观察层粘蛋白、Ⅲ型胶原在肾脏的表达. 方法以酒精灌胃法建立大鼠肾脏损伤的动物模型,应用HE染色、透射电镜等观察其病理改变;用免疫组化方法检测实验组和对照组肾组织层粘蛋白及Ⅲ型胶原的表达.结果随着酒精刺激时间的延长,HE染色可见实验组肾脏逐渐出现肾小球系膜增殖、间质局灶性炎性细胞浸润、肾小管上皮细胞空泡变性或肿胀、管腔闭塞等改变.免疫组化染色,实验组层粘蛋白表达明显高于对照组(P<0.01);Ⅲ型胶原在两组之间无显著性差异(P>0.05). 结论长期持续的乙醇刺激,不仅可造成肝脏损害,还可引起明显的肾脏改变且以肾小管-间质损害为重.层粘蛋白在酒精性肾损害中表达增加,而Ⅲ型胶原无改变.     

基于Notch信号通路探讨枸杞多糖对糖尿病肾病大鼠肾纤维化的改善作用

目的:探究枸杞多糖(LBP)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾纤维化的改善作用，并初步探究其可能的作用机制。方法:将SD大鼠分为对照组、模型组(DN组)、LBP组、Notch1抑制剂组(FLI-06组)、LBP+FLI-06组，每组10只。采用全自动生化分析仪对空腹血糖(FBG)和肾功能指标[血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、24 h尿微量白蛋白(UMA)]水平。采用放射免疫法检测血清纤维化相关因子[透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)]水平。采用HE染色、Masson染色、透射电镜观察大鼠肾组织形态结构变化。采用免疫印迹和免疫组化法检测肾组织Notch信号通路相关蛋白(Notch1、Jagged1、Hes1)表达水平及阳性表达情况。结果:与对照组比较，其他四组FBG、BUN、Scr、24 h尿UMA、HA、LN、PCⅢ、C-Ⅳ水平升高，肾组织损伤评分、胶原纤维比例升高，Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达水平及阳性表达率升高(均P<0.05)。与DN组比较，LBP组、FLI-06组、LBP+FLI-06组FBG、BUN、Scr、2...     

姜黄素对大鼠肾毒血清肾炎肾组织细胞外基质积聚的影响

目的:观察姜黄素是否抑制肾炎大鼠肾组织Ⅳ型胶原和纤维连接蛋白(fibronectin, FN)的积聚而对肾脏起保护作用.方法:72只雄性SD大鼠随机分成3组,每组24只.对照组尾静脉及腹腔注射生理盐水作对照;模型组尾静脉注射肾毒血清0.5 ml/d,连用2 d,腹腔注射二甲亚砜0.5 ml*kg-1*d-1;姜黄素组尾静脉注射肾毒血清0.5 ml/d,连用2 d,同时腹腔注射姜黄素50 mg*kg-1*d-1.分别于第3、7、14、28天各处死6只大鼠,部分肾组织福尔马林固定、石蜡包埋后进行免疫组织化学染色.结果:对照组大鼠肾小球基膜Ⅳ型胶原以及FN染色弱阳性.模型组大鼠肾小球Ⅳ型胶原和FN沉积的范围随着病程的进展逐渐增多,与相应时间对照组比较有显著差异(P ＜0.01).姜黄素组肾小球Ⅳ型胶原和FN沉积的范围亦随时间的发展逐渐扩大,然而Ⅳ型胶原较同期模型组比较染色范围却明显缩小 (P ＜0.01) ,而FN于7 d后才比模型组减少(P ＜0.01). 结论:姜黄素可抑制肾炎组织内Ⅳ型胶原和FN的积聚并可能延缓肾小球硬化的发生发展.     

金樱子对大鼠糖尿病肾脏的实验研究

目的 研究中药金樱子对糖尿病大鼠肾脏的保护作用并探讨其保护机制.方法 用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射诱导法建立SD大鼠糖尿病模型,随机分为糖尿病模型组和金樱子干预组,同时另设正常对照组和金樱子对照组.观察大鼠一般状态,测定血糖、体重(BW)及肾重(KW)、肾脏指数(KW/BW),肾组织光镜检查了解组织形态,肾组织免疫组化检查观察金樱子对糖尿病大鼠肾脏组织转化生长因子β1(TGF-β1),Ⅳ型胶原表达影响.结果 糖尿病模型组血糖及肾脏指数明显升高,肾脏病理改变明显,TGF-β1、Ⅳ型胶原表达明显增加.治疗24周后,金樱子干预组血糖降低,肾脏肥大明显改善,TGF-β1,Ⅳ型胶原表达明显下降(P＜0.05),肾脏病理改变较糖尿病模型组有较大改善,但金樱子对照组肾组织无明显病理改变.结论 金樱子对糖尿病大鼠肾脏有保护作用,其机制与抑制糖尿病大鼠肾脏TGF-β1,Ⅳ型胶原蛋白过度表达有关.     

健脾补肾方对腺嘌呤所诱发大鼠肾间质纤维化的治疗作用

[目的]观察健脾补肾方对腺嘌呤所诱发大鼠肾间质纤维化的治疗作用.[方法]灌胃给予200mg/(kg.d)腺嘌呤24d建立大鼠肾间质纤维化模型,将实验动物分为正常对照组、模型对照组、西药组、健脾补肾方小、大剂量组.建立模型后治疗第4周末检测大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、Ca和P含量.取肾组织行HE和直接红染色,观察肾组织的病理变化和纤维组织增生程度,采用免疫组织化学SP法观察肾组织中α-SMA和Ⅳ型胶原的表达.[结果]与西药组比较,健脾补肾方大剂量组大鼠血清BUN与Scr值明显降低,Ca与P平衡改善(P<0.01);西药组及健脾补肾方小、大剂量组肾组织病理改变及间质纤维化减轻,胶原纤维、α-SMA和Ⅳ型胶原阳性面密度明显低于模型对照组(P<0.01,P<0.001).[结论]健脾补肾方可改善肾功能,减轻腺嘌呤诱发大鼠肾间质纤维化,其机制可能与通过抑制肌成纤维细胞的增殖和活化,减少细胞外基质合成和分泌有关.     

测定血清透明质酸、层粘蛋白等对肾纤维化诊断的意义

目的探讨血清透明质酸、血清层粘蛋白、血清Ⅲ型前胶原和血清Ⅳ型胶原测定对。肾纤维化实验研究及诊断的价值。方法采用腺嘌呤制作大鼠慢性肾功能衰竭模型,将其分为正常对照组、模型组,测量两组血清透明质酸、血清层粘蛋白、血清Ⅲ型前胶原、血清Ⅳ型胶原、尿素氮和血肌酐水平,并对大鼠肾脏组织进行病理观察。结果大鼠慢性肾功能衰竭模型组大鼠血清尿素氮、血肌酐水平较对照组明显升高（P〈0．01）;血清透明质酸水平较对照组明显升高（P〈0．01）,且与肾纤维化程度呈正相关关系;血清层粘蛋白、血清Ⅲ型前胶原、血清Ⅳ型胶原水平较对照组差异无统计学意义。病理结果表明,对照组大鼠肾脏组织大致,模型组大鼠肾组织病理损伤严重。结论血清透明质酸等检测可较好地反映糖尿病肾病肾纤维化程度,在肾纤维化的诊治及预后方面能够提供一定的参考价值,可作为早期预测肾纤维化的实验室无创性检测指标之一。     

直接肾素抑制剂阿利吉仑对肾纤维化小鼠上皮-间质转化的调节作用

目的：探讨直接肾素抑制剂阿利吉仑对单侧输尿管结扎引起的小鼠肾纤维化中上皮-间质转化（EMT）的调节作用,阐明阿利吉仑抗肾纤维化的作用机制。方法：24只雄性ICR小鼠分为假手术组、模型组和阿利吉仑干预组,采用单侧输尿管结扎方法制作小鼠肾纤维化模型。HE染色观察小鼠肾间质纤维化的病理组织形态,Masson染色观察小鼠肾间质纤维化中胶原蛋白的表达情况,免疫组织化学染色法观察胞浆中α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,免疫印迹法检测小鼠肾组织中E钙黏蛋白（E-cad）、α-SMA和Ⅰ型胶原（Col Ⅰ）的表达水平。结果：通过单侧输尿管结扎方法成功制备小鼠肾纤维化模型。HE染色和Masson染色,与模型组比较,阿利吉仑干预组小鼠肾纤维化程度明显降低,胶原蛋白表达明显减少。免疫组织化学染色,阿利吉仑干预组小鼠肾小管间质纤维化区域胞浆内α-SMA阳性显色较模型组明显减少。免疫印迹法,模型组小鼠肾组织中α-SMA和Col Ⅰ蛋白表达水平升高,分别是假手术组的1.79倍和1.95倍;E-cad蛋白表达水平降低,为假手术组的37.23%,组间比较差异有统计学意义（P<0.05）;阿利吉仑干预组小鼠肾组织中α-SMA和Col Ⅰ蛋白表达水平降低,E-cad蛋白表达水平升高,分别是模型组的63.72%、65.54%和2.1倍,组间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：阿利吉仑能够通过上调E-cad的表达同时下调α-SMA、Col Ⅰ的表达抑制小鼠肾纤维化中EMT,进而发挥抗纤维化的作用。     

近交系五指山小型猪骨髓间充质干细胞体外分泌 肝细胞生长因子延缓慢性肾脏病纤维化进展

目的：分离培养近交系五指山小型猪骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs), 并建立其慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)模型,体外研究同物种BM-MSCs对CKD肾纤维化的修复作用及其 可能机制。方法：采用密度梯度法分离培养BM-MSCs,并从细胞形态、表面抗原、分化能力等方面鉴定;采用左侧 输尿管部分梗阻(left partial ureteral obstruction,LPUUO)方法制作CKD模型,并通过B超、单光子发射计算机断层成像 术(single-photon emission computed tomography,SPECT)、病理染色等评估;体外实验分为肾组织与BM-MSCs共培养、 肾组织单独培养、BM-MSCs单独培养3组,体外培养7 d,每天收集3组上清液,酶联免疫吸附法测定肝细胞生长因子 (hepatocyte growth factor,HGF)累积分泌量。肾组织行HE染色,Masson染色。结果：分离培养的BM-MSCs表达抗原 CD29,CD90而不表达CD45,成骨诱导茜素红染色阳性,成软骨诱导阿利新蓝染色阳性。LPUUO术后12周,B超示 左肾皮质变薄、肾盂积液;SPECT示左肾充盈延迟、梗阻性肾功能受损。上清液HGF累积含量示BM-MSCs+CKD肾组 织共同培养组第1,5,6,7天HGF累积分泌量明显高于CKD肾组织单独培养组(P<0.05)。HE染色显示BM-MSCs+CKD 肾组织共同培养组和CKD肾组织单独培养组中肾均出现不同程度的病变,并随时间延长加重,但CKD肾组织单独培 养组病变更严重;Masson染色显示BM-MSCs+CKD肾组织共同培养组术后第5,6,7天肾组织被染成蓝色的胶原纤维 的累计光密度值明显低于CKD肾组织单独培养组(P<0.05)。结论：近交系五指山小型猪BM-MSCs体外分泌HGF,抑制 或延缓CKD纤维化进展。     

阿魏酸钠对大鼠肺纤维化的预防作用

目的：探讨阿魏酸钠对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的预防作用。方法：30只SD大鼠随机分为对照组,肺纤维化模型组和阿魏酸钠预防组,每组10只;模型组和预防组以气管内滴入博来霉素（5mg/kg）建立肺纤维化动物模型,预防组采用阿魏酸钠（150mg/kg）灌胃治疗;HE染色检测肺组织病理改变及细胞计数,胶原纤维染色检测总胶原纤维表达,免疫组织化学检测Ⅰ型胶原纤维。结果：与对照组比较,肺纤维化模型组肺组织内细胞数、肺内总胶原纤维及Ⅰ型胶原纤维均显著增加;阿魏酸钠预防组与肺纤维化模型组比较,肺组织内细胞数、肺内总胶原纤维及Ⅰ型胶原纤维均显著降低。结论：阿魏酸钠能有效地减轻肺纤维化大鼠肺组织的炎症和纤维化程度,对肺纤维化有一定的预防作用。     

人胎盘组织液抗腹膜粘连作用及其作用机制研究

目的：观察人胎盘组织液抗大鼠腹膜粘连作用并探讨其作用机制。方法：采用大鼠腹膜缺损/盲肠刮伤模型,设立模型组、假手术组和人胎盘组织液组,于术后7、14d麻醉下再次开腹,肉眼评定盲肠与周围组织的粘连情况,并取粘连组织进行组织病理学观察,包括HE染色、Masson染色、免疫组化TGF-β1测定。结果：与模型组相比,人胎盘组织液组粘连评分明显降低（P〈0.05）。HE染色和Masson染色显示人胎盘组织液组肉芽组织量少,肉芽组织疏松,炎细胞明显减少,胶原纤维明显减少。免疫组化结果显示人胎盘组织液抑制了TGF-β1的表达。结论：人胎盘组织液通过抑制TGF-β1表达,抑制成纤维细胞的增生和胶原蛋白的形成,减轻了大鼠术后粘连发生的程度和范围。     

富氢水抗1型糖尿病小鼠肾脏氧化应激的作用

目的：研究富氢水对糖尿病小鼠肾脏的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法：60只健康ICR雄性小鼠,随机分成空白对照组（A组）、糖尿病组（B组）和糖尿病富氢水干预组（C组）。链脲佐菌素（STZ）150 mg/kg腹腔注射诱发糖尿病,造模成功后,C组每日腹腔注射富氢水5 m L/kg,B组腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液,连续8周。尾静脉取血测定小鼠血糖,HE染色观察肾脏组织学变化,免疫组织化学染色观察NADPH氧化酶4（Nox4）和血红素加氧酶-1（HO-1）蛋白的表达。结果：C组Nox4表达水平明显低于B组,而HO-1表达明显高于B组;B组与C组的空腹血糖均明显高于A组（P〈0.01）,B组与C组之间差异无统计学意义（P〉0.05）;3组肾脏组织病理HE染色未显示明显病变。结论：富氢水可减轻糖尿病小鼠肾脏组织的氧化应激水平。     

DNMT3A与CTGF在AAC致大鼠心肌纤维化中的表达及相关性研究

目的 探讨经腹主动脉缩窄(AAC)导致大鼠心肌纤维化中DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)与结缔组织生长因子(CTGF)的表达及相关性.方法 将60只8周龄雄性SD大鼠随机分为模型组及对照组.模型组行AAC术,对照组行假手术,术后2周处死大鼠获取血液标本,并取心脏.同时测定心重指数,采用ELISA法测量Ⅰ型胶原和CTGF在心肌组织匀浆中的含量,HE和Masson染色法观察心肌组织病理学改变;Western blot法测定DNMT3A和CTGF的表达.结果 与对照组比较,模型组大鼠的心重指数显著上升,且心肌组织中Ⅰ型胶原和CTGF的含量明显增加;HE和Masson染色显示,模型组心肌组织呈现明显的胶原沉积;Western blot检测表明模型组DNMT3A、CTGF的含量水平明显高于对照组;DNMT3A和CTGF在大鼠心肌纤维化组织中的表达呈正相关性(r--0.64,P＜0.01).结论 DNMT3A参与心肌纤维化的形成过程,并在其中起到一定的促进作用,可能与CTGF的升高有一定的相关性.     

大黄对尿酸性肾病大鼠肾组织bFGF及COX-2的影响

目的:研究大黄对尿酸性肾病大鼠肾组织碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和环氧合酶2(COX-2)的作用及探讨大黄治疗肾脏病的作用机制。方法:将32只SD雄性大鼠随机分为4组,即正常对照组、模型组、大黄组、别嘌呤醇组,用酵母和腺嘌呤合用造模,造模成功后分别给予生理盐水、大黄、别嘌呤醇灌胃,治疗2周后,检测各组大鼠血中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、尿酸(UA),应用免疫组织化学技术检测大鼠肾组织bFGF和COX-2的表达情况。结果:与正常对照组比,模型组血UA、BUN、Cr均明显升高(P<0.05),COX-2、bFGF在肾组织表达明显增加(P<0.01);与用药前比,用药后,大黄组和别嘌呤醇组大鼠血UA、BUN、Cr均明显降低(P<0.05),大黄组血UA、BUN及Cr水平与别嘌呤醇组比,差异无显著性(P>0.05),而大黄组肾组织bFGF与COX-2表达明显低于别嘌呤醇组(P<0.01)。结论:大黄能降低bFGF、COX-2在尿酸性肾病大鼠模型肾组织中的表达,从而减轻肾脏损害,保护肾功能。