三氧化二砷诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡的初步研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导子宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡,探讨As2O3 对子宫颈癌的临床应用意义。方法:采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测浓度分别为1.0、2.0、5.0、10.0μmol/L的As2O3 作用1、2、3、4 d后HeLa细胞的存活率,并进行形态学观察;采用细胞凋亡原位检测(TUNEL)法进行细胞凋亡的检测。结果:2.0μmol/L As2O3 处理HeLa细胞48 h后,可见细胞的存活率明显降低(P<0.05),处理96 h后,细胞的存活率进一步降低(P<0.01),经5.0μmol/L As2O3 处理的HeLa细胞24 h后就明显可见细胞的存活率降低;As2O3 作用后,HeLa细胞具有明显的凋亡特征性改变;TUNEL法检测可发现HeLa细胞有DNA的断裂。结论:As2O3 可以诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡,抑制细胞增殖,随着As2O3 浓度增加,作用时间延长,效果越明显,其作用具有浓度和时间依赖性。     

三氧化二砷抑制U266细胞增殖、诱导凋亡及与血管内皮生长因子表达的关系

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)在体外对骨髓瘤细胞系U266增殖、凋亡的影响及与血管内皮生长因子(VEGF)表达的关系.方法 四唑盐比色法(MTT)观察As2O3对U266细胞增殖的影响;缺口末端标记法(TUNEL)分析As2O3对U266细胞凋亡的影响;逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测2 μmol/L AS2O3不同处理时间后U266细胞VEGF mRNA表达的变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测As2O3不同浓度不同处理时间对U266细胞VEGF蛋白表达的变化. 结果 (1)As2 Q3明显抑制U266细胞增殖,半数抑制浓度(IC50)为2 μmol/L;(2)As2O3能诱导U266细胞凋亡,呈剂量依赖性;(3)As2O3(2,5,10μmol/L)分别处理72 h后细胞培养上清中VEGF量呈剂量依赖性减少;(4)考虑细胞增殖对VEGF分泌的影响,2 μmol/L As2O3处理组的上清VEGF量与对照组的差别无统计学意义,RT-PCR显示2μmol/L As2O3处理的U266细胞个体VEGF mRNA的表达无变化.结论 As2O3可以诱导骨髓瘤细胞凋亡,抑制其增殖.As2O3可以通过抑制细胞增殖、诱导凋亡,减少肿瘤负荷,减少VEGF总量,但是不改变细胞个体VEGF的表达.     

三氧化二砷对类风湿关节炎滑膜细胞的影响

目的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的滑膜B型细胞(成纤维细胞样细胞)是增殖滑膜的增殖细胞,表达c-myc基因。本项实验研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)是否影响体外培养的RA滑膜B型细胞的增殖及c-myc基因表达。方法分离、培养RA滑膜B型细胞;用含As2O3浓度分别为2μmol/L和5μmol/L的培养液,分别作用于培养细胞24h和48h;采用流式细胞仪测定细胞死亡情况;采用流式细胞仪测定c-myc蛋白水平。结果2μmol/L As2O3和5μmol/L As2O3作用于RA滑膜B型细胞24h均可使死亡细胞百分率增加,2μmol/L As2O3致细胞死亡率高于5μmol/L As2O3致细胞死亡率,而48h死亡细胞百分率较24h减少,;5μmol/L As2O3作用于细胞48h促进RA滑膜B型细胞增殖,并使c-myc蛋白水平增高。结论As2O3依据作用时间和浓度的不同既可诱导RA滑膜B型细胞死亡,又可促进RA滑膜B型细胞增殖,并上调c-myc基因表达。     

三氧化二砷诱导胃癌细胞凋亡及其对bcl-2基因和bax蛋白表达的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导胃癌细胞凋亡及其对bcl-2基因、bax蛋白表达的影响。方法分别以0μmol/L、1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L和8μmol/L浓度的As2O3作用于胃癌SGC-7901细胞24 h、48 h和72 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测法检测各组吸光度值、细胞生长抑制率,采用流式细胞仪(FCM)检测bcl-2基因和bax蛋白的表达情况。结果随着As2O3浓度的增高及作用时间的延长,MTT吸光度值逐渐降低,1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L组分别与0μmol/L组比较,不同作用时间MTT吸光度值比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。1μmol/L的As2O3对细胞增殖抑制作用较小,随着As2O3浓度的增高及作用时间的延长,细胞增殖抑制率相应增加,2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L组分别与1μmol/L组比较,不同作用时间细胞增殖抑制率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同浓度的As2O3作用于SGC-7901细胞后,bcl-2基因呈低表达,bax蛋白呈高表达,bcl-2/bax比值降低且呈剂量依赖性,不同浓度As2O3组与对照组bcl-2基因、bax蛋白表达情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 As2O3对胃癌细胞的生长具有明显的抑制作用,其机制可能与下调bcl-2基因表达,上调bax蛋白表达从而诱导胃癌细胞的凋亡有关。     

三氧化二砷与维甲酸联合作用在NB4,MR2细胞系中的体外研究

目的：观察三氧化二砷(As2O3)和全反式维甲酸(ATRA)联合作用对NB4，MR2不同亚型急性早幼粒白血病细胞株，诱导分化、增殖、凋亡的影响。方法:以NB4，MR2为体外模型，利用细胞生长曲线、台盼蓝拒染法、MTT法、NBT、细胞形态Wrigh‘s-Gimesa染色，观察细胞增殖、分化、凋亡的相互作用。结果：NB4细胞株：0．5μmol/L As2O3与10^-6mol/L ATRA对细胞增殖、分化、凋亡呈现拮抗，而0．5μmol/L As2O3与(10^-7--10^-8mol/L)ATRA呈现协同；MR2细胞株：0．5μmol/L As2O3与10^-6mol/L ATRA对细胞增殖、分化、凋亡呈现协同。结论：As2O3与全反式维甲酸协同效应呈现不同细胞、剂量的特异性，MR2细胞株协同效应明显强于NB4细胞株。     

As2O3对肾癌786-0细胞5-氟尿嘧啶药物敏感性的研究

目的 探讨As2O3与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用对肾癌细胞786-0细胞株细胞增殖、细胞凋亡及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达的影响.方法 取对数生长期786-0细胞,MTT比色法检测As2O3和/或不同浓度5-FU对细胞生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR法及蛋白质印迹法检测XIAP mRNA表达及XIAP蛋白质表达的变化.结果 不同浓度的5-FU分别作用786-0细胞后,细胞生长受到抑制,但无明显的时间、浓度相关性;2μmol/L As2O3与不同浓度5-FU联合应用对786-0细胞的增殖抑制率随作用时间、药物浓度的增加逐渐升高,与单药相比较(P＜0.01),两药相互作用系数显示为协同作用.48h检测2μmol/L As2O3与不同浓度5-FU联合用药处理的786-0细胞的凋亡率明显增加,与单药相比(P＜0.01);XIAP mRNA表达明显减少,与单药相比(P ＜0.01);2μmol/L As2O3与400 μg/ml 5-FU联合应用48h XIAP蛋白表达亦明显减少,与单药相比(P＜0.01).结论 As2O3联合5-FU可以明显提高肾透明细胞癌的化疗敏感性,抑制786-0细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,这一作用与抑制786-0细胞XIAP基因的表达有关.     

三氧化二砷对前列腺癌细胞PC-3凋亡抑制蛋白XIAP表达的影响

[目的]探讨三氧化二砷(As2O3)对前列腺癌细胞株PC-3细胞增殖、细胞凋亡及X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达的影响.[方法]取对数生长期PC-3细胞,分别经0.5,1.0,2.0μmol/L As2O3处理,采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法及实时荧光定量PCR检测XIAP蛋白表达及XIAP mRNA表达的变化.[结果]0.5,1.0,2.0μmol/LAs2O3均可抑制PC-3细胞增殖,在处理24,48,72h后,细胞生长抑制率间差异具有统计学意义(P<0.01).检测0.5,1.0,2.0μmol/L As2O3处理48h的PC-3细胞株细胞凋亡率分别为11.47%±1.81%,38.47%±1.60%,58.93%±3.35%,相比较差异具有统计学意义(P<0.01).As2O3处理48h时0.5,1.0,2.0μmol/L As2O3组的XIAP mRNA表达水平分别为0.67±0.12,0.25±0.15,0.03±0.01,各组间差异均具有统计学意义(P<0.05).[结论]As2O3可抑制PC-3细胞增殖,诱导细胞凋亡,此作用可能与As2O3抑制PC-3细胞XIAP基因的表达有关联.     

三氧化二砷对黑色素瘤B-16细胞增殖与凋亡的影响

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对体外培养黑色素瘤B-16细胞增殖和凋亡的影响。方法:应用MTT比色法检测细胞增殖活力;采用流式细胞术测定细胞周期及凋亡率;倒置显微镜、激光共聚焦显微镜和透射电子显微镜观察细胞形态学变化和凋亡特征。结果:6.25~100μmol/L As2O3作用细胞24、48小时后,细胞增殖活力明显下降,且具有时-效和量-效依赖关系;50μmol/L As2O3作用细胞12小时后,细胞凋亡率增加,S期细胞百分率下降;倒置显微镜下可见细胞生长密度减小、形态变圆、体积缩小;hoechst33258核染色可见核染色质边集、浓集;电子显微镜下可见到典型的凋亡细胞。结论:三氧化二砷能抑制黑色素瘤B16细胞的增殖并可诱导其发生凋亡。     

维生素C增强As2O3诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究

目的:探讨维生素C是否能影响三氧化二砷(As2O3)诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡,以及它对细胞内端粒酶活性的影响。方法:用噻唑蓝(MTT)法筛选出维生素C的最佳浓度250μmol.L-1,并用该浓度联合不同浓度的As2O3同时处理HeLa细胞后,用光镜、MTT法和流式细胞术研究细胞生长和凋亡的情况,用TRAP-ELISA法检测细胞内端粒酶活性的变化。结果:单独1μmol.L-1As2O3处理过的细胞生长未受到明显抑制,但联合250μmol.L-1维生素C处理细胞,则细胞生长受到抑制,且部分细胞出现凋亡形态学特征。2、51、0μmol.L-1As2O3联合维生素C用药组的细胞凋亡率也比单独用As2O3组明显增高,且出现凋亡的时间提早。端粒酶活性检测结果提示,联合用药组细胞内端粒酶活性均明显比单独用As2O3组低。结论:小剂量维生素C能增强As2O3诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡,并能增强As2O3对细胞内端粒酶活性的抑制作用。     

三氧化二砷联合抗坏血酸对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究三氧化二砷(As2O3)联合抗坏血酸(AA)对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其细胞内谷胱甘肽(GSH)水平.方法:As2O3和AA不同组合孵育细胞HepG2,采用台盼蓝染色实验检测药物对细胞生长的影响,流式细胞仪检测亚二倍体凋亡峰,Annexin V染色检测细胞凋亡率,GSH实验检测细胞内GSH水平.结果:100 μmol/L的AA单独作用与对照组相比在细胞增殖和凋亡都无显著性差异;低剂量(2 μmol/L)和高剂量(5 μmol/L)的As2O3都能抑制细胞增殖活性和诱导细胞凋亡,联合AA作用后,比相应浓度的单独As2O3作用更为显著;AA和As2O3分别处理都能明显消减细胞GSH含量,两种药物联合作用后与相应单独As2O3作用相比GSH水平显著性降低.结论:GSH在As2O3对肝癌细胞抑制增殖和诱导凋亡作用机制中起到重要的作用,高低剂量的As2O3联合AA通过降低GSH水平均可以增强As2O3对肝癌细胞抑制生长及其诱导凋亡作用的敏感性.     

三氧化二砷对血管内皮细胞增殖和周期的影响

目的:观察As2O3对血管内皮细胞增殖、凋亡和细胞周期的干扰,探讨As2O3对血管内皮细胞生长的直接影响。方法:血管内皮细胞EVC-304体外培养,As2O3干预。采用MTT测定细胞活性,流式细胞仪测定细胞周期、细胞凋亡。结果:ECV-304细胞经过As2O3干预,其存活率明显降低,并且呈剂量依赖性。As2O3干预后,进入S期的细胞减少,细胞周期被阻在G1期,细胞可能在G1期进入凋亡。As2O3诱导早期凋亡是对照组的2.88～5.1倍,并且呈剂量依赖性;其晚期凋亡是对照组的1.17～1.67倍。结论:As2O3可直接干扰血管内皮细胞的细胞周期,阻滞细胞在G1期,并诱导细胞凋亡,进而抑制血管内皮细胞的增殖。     

氧化砷通过线粒体跨膜电位下降与激活Caspase-3诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡

目的　探讨氧化砷 (As2 O3)是否诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡与其可能机制。方法　以两株多发性骨髓瘤细胞系RPMI82 2 6和U2 66为体外模型。以细胞形态学观察、流式细胞仪检测亚G1期细胞含量以及DNA凝胶电泳判定细胞凋亡。通过检测胞内Rhodamine12 3染色强度来判定线粒体跨膜电位。通过Western印迹分析蛋白表达。结果　 0 1- 0 5μmol LAs2 O3抑制RPMI82 2 6与U2 66细胞系生长 ,2 0 μmol LAs2 O3 诱导两株细胞凋亡 ,而 1 0μmol LAs2 O3抑制细胞生长同时也诱导部分细胞凋亡。As2 O3诱导的细胞凋亡伴随线粒体跨膜电位下降与细胞凋亡 ,而二巯基苏糖醇 (二巯基还原剂 )则部分抑制以上效应。虽然全反式维甲酸 (ATRA)诱导RPMI82 2 6细胞凋亡 ,但是它与As2 O3无协同效应。结论　不同深度As2 O3可抑制多发性骨髓瘤细胞生长与诱导细胞凋亡。线粒体是As2 O3 诱导细胞凋亡的重要且共同的“靶子”。     

三氧化二砷对人骨髓增生异常综合征MUTZ-1细胞的作用

目的:研究不同浓度三氧化二砷(As2O3)对人骨髓增生异常综合征难治性贫血伴原始细胞过多型(MDS-RAEB)细胞株MUTZ-1细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:采用MTT法分析细胞生长曲线,用细胞形态学观察细胞凋亡。结果:低浓度As2O3(0.05～0.25μmol/L)对MUTZ-1细胞无明显生长抑制作用,高浓度As2O3(1.0～20.0μmol/L)对MUTZ-1细胞有明显生长抑制作用,且呈浓度、时间效应-依赖关系(P<0.01)。结论:低浓度As2O3(0.05～0.25μmol/L)对MUTZ-1细胞无明显生长抑制作用。高浓度As2O3(1.0～20.0μmol/L)对MUTZ-1细胞有明显生长抑制作用,且呈浓度、时间效应依赖关系。     

三氧化二砷对兔晶体上皮细胞增殖的影响及其机制的实验研究

目的:观察不同浓度的三氧化二砷作用不同时间对兔晶体上皮细胞影响及其作用机理。方法:应用不同浓度的三氧化二砷作用于兔晶体上皮细胞后,观察三氧化二砷对兔晶体上皮细胞生长状态的影响;用噻唑蓝(MTT)比色法、透射电镜技术观察其对兔晶体上皮细胞增殖的影响;应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)及流式细胞技术检测三氧化二砷对兔晶体上皮细胞凋亡的诱导作用。结果:不同浓度的三氧化二砷作用于兔晶体上皮细胞有明显的时间和剂量依赖性。三氧化二砷作用后细胞生长明显受抑制,并出现明显的凋亡特征性改变;8μmol/L三氧化二砷作用24小时、48小时及72小时后TUNEL法可检测到细胞凋亡水平显著性升高,流式细胞仪分析显示,兔晶体上皮细胞在G1峰前出现明显的凋亡峰。结论:三氧化二砷可明显抑制兔晶体上皮细胞的生长,其机理主要是诱导兔晶体上皮细胞凋亡。     

丹参酮与三氧化二砷协同诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株凋亡的体外研究

目的 为评估丹参酮ⅡA（Tanshinone ⅡA,Tan ⅡA）与三氧化二砷（As2O3）联合应用抑制NB4细胞增殖、诱导其凋亡的效应,观察二药的相互作用和相互影响,期望对两药的临床应用提供理论依据。方法 以不同浓度的As2O3、TanⅡA单独及联合应用作用于急性早幼粒细胞白血病细胞（NB4）作为实验组,通过观察细胞形态学改变,MTT法测定细胞存活率,并采用流式细胞术（FCM）检测细胞周期分布,分析不同浓度的As2O3、TanⅡA单独及联合应用对NB4细胞的增殖、凋亡的影响。结果 TanⅡA、As2O3均能抑制NB4细胞生长,以1.0 μmol/L As2O3作用更显著,二者联合应用后的增殖抑制作用表现为协同效应;经TanⅡA组处理后的NB4细胞,其形态改变更多显示一定程度的成熟粒细胞的特征,As2O3组则更多表现为细胞凋亡的形态学改变,并经电镜检查证实,两药联合应用可加强NB4细胞的凋亡形态改变;处理后的NB4细胞G0/G1期比例增高,S期细胞比例降低,细胞增殖指数（PI）下降,两药联合应用后具有协同效应。结论 1. TanⅡA、As2O3对NB4细胞均有增殖抑制作用,二者的增殖抑制作用具有协同效应,并与剂量相关;2. TanⅡA与As2O3联合作用于NB4细胞具有诱导凋亡作用,两药的诱导凋亡作用具有协同效应;3. 小剂量的As2O3联合TanⅡA即可对NB4细胞产生促进凋亡的效应,故临床可以选择小剂量的As2O3,以减轻砷剂的毒副作用。     

H2O2对ECV304细胞Grx mRNA表达的影响

目的通过体外实验，研究H2O2对人脐静脉内皮细胞（ECV304）谷氧还蛋白（Grx）mRNA表达水平的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（ECV304）；MTT实验观察H2O2对ECV304细胞增殖的影响；在时间相关性研究中，将细胞分为6组，第1组为正常对照组，第2、3、4、5、6组分别给予终浓度100μmol／L H2O2作用5min、10min、30min、60min、120min；在剂量相关性研究中，将细胞分为6组，第1组为正常对照组，第2、3、4、5、6组分别给予终浓度100μmol／L、200μmol／L、300μmol／L、400μmol／L、500μmol／L H2O2作用30min，采用Trizol一步法提取细胞总RNA，并用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）研究各组细胞Grx mRNA表达水平的差异。结景MTT结果表明，100μmol／L H2O2对细胞增殖无影响，200—500μmol／L H2O2均在不同程度上抑制细胞增殖（P〈0．05）。RT-PCR结果显示，在时间相关性研究中，终浓度100μmol／L H2O2作用10min、30min、60min均能使ECV304细胞中Grx mRNA表达水平增高，30min达到最大值，差异显著（P〈0．05）；剂量相关性研究表明，终浓度100μmol／L H2O2．400μmol／L H2O2作用30min均能使Grx mRNA表达水平增高，差异显著（P〈0．05），其中终浓度300μmol／L H2O2可使Grx mRNA的表达量最高（P〈0．01）。结论H2O2影响人脐静脉内皮细胞Grx mRNA的表达水平。     

三氧化二砷联合阿霉素对人淋巴瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）联合阿霉素（adriamycin, ADM）对淋巴瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法：将Raji细胞分为实验组与对照组,实验组分为1 μmol/L As2O3组、2 μmol/L As2O3组、ADM组、1 μmol/L As2O3与ADM联合组、2 μmol/L As2O3与ADM联合组。用As2O3和ADM干预不同时间的人淋巴瘤细胞株Raji,采用Wright-Giemsa染色法观察细胞凋亡的形态学变化;采用噻唑蓝比色法检测As2O3联合ADM对淋巴瘤细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测As2O3联合ADM对淋巴瘤细胞凋亡率及淋巴瘤细胞内ADM荧光强度的影响;半定量聚合酶链反应检测As2O3和ADM对淋巴瘤细胞p53表达的影响。结果：As2O3联合ADM作用细胞24h后,可观察到细胞出现凋亡形态学改变。与As2O3和ADM单药组相比,As2O3联合ADM可增强对Raji细胞的抑制率,差异有统计学意义（P＜0.05）,其作用呈浓度和时间依赖性;As2O3与ADM联合组与单药组相比,Raji细胞的凋亡率差异具有统计学意义（P＜0.05）;As2O3和ADM单药组及联合组p53的表达水平均低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;另外,加入1 μmol/L和2 μmol/L As2O3后细胞内ADM的荧光强度分别为18.53和18.12,分别增加0.056倍和0.023倍,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：As2O3和ADM单药及两种药物联合体外均可抑制淋巴瘤细胞增殖,诱导凋亡和下调突变型p53;As2O3和ADM联合体外有协同抗淋巴瘤作用;As2O3对Raji细胞内ADM浓度无显著影响;As2O3可增强淋巴瘤细胞的化疗敏感性,其下调突变型p53的表达可能是其分子水平的作用机制之一。     

三氧化二砷逆转A549细胞对TRAIL耐药的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)逆转人非小细胞肺癌A549细胞对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)耐药的机制。方法将处于对数生长期的A549细胞分为对照组(仅加入DMEM)及实验组,实验组又分为As2O3组(1μmol/LAs2O3处理)、TRAIL组(100μg/L TRAIL处理)及联合组(1μmol/L As2O3、100μg/L TRAIL联合处理)。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测A549细胞核因子kappa B(NF-κB)、caspase-3、survivin mRNA的表达。结果作用24、48、72h后,联合组A549细胞的增殖抑制明显增强(P<0.05),且呈时间依赖性。As2O3、TRAIL联合作用48h可明显下调NF-κB、survivin mRNA,上调caspase-3mRNA的表达。结论 As2O3通过NF-κB通路下调survivin,上调caspase-3,从而增强TRAIL诱导A549细胞的凋亡。     

STUDY ON EFFECTS OF ARSENIC TRIOXIDE ON GASTRIC CANCER CELL LINES

Ｒ啨ｓｕｍ啨　　 Ｏｂｊｅｃｔｉｆ　Ｃｅｔｔｅ啨ｔｕｄｅａｐｏｕｒｂｕｔｄ 啨ｖａｌｕｅｒｌ ｅｆｆｅｔｄｕｔｒｉｏｘｙｄｅｄ ａｒｓｅｎｉｃｓｕｒｌ ａｐｏｐｔｏｓｅｅｔｓｕｒｌａｄｉｆｆ啨ｒｅｎｃｉａｔｉｏｎｄｅｓｌｉｇｎ啨ｅｓｃｅｌｌｕｌａｉｒｅｓｄｕｃａｎｃｅｒｇａｓｔｒｉｑｕｅ .　Ｍ啨ｔｈｏｄｅｓ　Ｌｅｓｌｉｇｎ啨ｅｓｃｅｌｌｕｌａｉｒｅｓｄｕｃａｎｃｅｒｇａｓ ｔｒｉｑｕｅ :ＭＫＮ45ｄｅＳＧＣ790 1ｓｏｎｔｔｒａｉｔ啨ｅｓｐａｒｌｅｔｒｉｏｘｙｄｅｄ ａｒｓｅｎｉｃａｕｘｄｉｆｆ啨ｒｅｎｔｅ…