慢性马兜铃酸肾病肾间质纤维化的实验研究

近 10年来 ,国内外学者对慢性马兜铃酸肾病 (CAAN)的临床和病理特征已有了较深入认识 ,但其发病机制仍不十分清楚 ,我们用关木通浸膏水溶液间断灌胃的方法 ,已成功制作成大鼠CAAN动物模型 ,本文即利用这一模型来探讨CAAN肾间质纤维化的发病机制。一、材料与方法1.试剂 :总RNA提取试剂盒及引物 ,实时定量RT PCR试剂盒 ,兔抗大鼠Ⅰ型胶原 (ColⅠ )多克隆抗体 ,兔抗大鼠转化生长因子 (TGF) β1多克隆抗体 ,山羊抗人结缔组织生长因子 (CTGF)多克隆抗体 ,兔抗大鼠纤溶酶原激活物抑制物 (PAI) 1多克隆抗体 ,兔抗人金属蛋白酶组织抑…     

强的松对大鼠马兜铃酸肾病肾组织纤维化的影响

目的观察强的松对马兜铃酸肾病大鼠肾组织纤维化的影响。方法予大鼠关木通水煎剂灌胃12周,制备大鼠马兜铃酸肾病模型20只并随机分为治疗组和非治疗组,治疗组予强的松10mg/（kg·d）水溶液灌胃4周,非治疗组不予治疗,观察4周时未治疗组和治疗组肾组织转化生长因子-β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）和纤维连接蛋白（FN）表达。结果4周时治疗组较未治疗组血尿素氮（BUN）和肌酐（Scr）明显下降（P〈0.05）,血红蛋白明显升高（P〈0.01）;治疗组较未治疗组肾组织TGF-β1、CTGF和FN光密度值明显下降（P〈0.05）。结论强的松治疗马兜铃酸肾病可能具有一定作用。     

慢性马兜铃酸肾病肾间质纤维化大鼠TGF—β1及BMP-7蛋白的表达

目的：研究慢性马兜铃酸肾病肾间质纤维化大鼠TGF-β1及BMP-7蛋白的改变。为探讨防治肾间质纤维化（RIF）的治疗机理提供参考依据和实验支持。方法：采用关木通免煎剂建立马兜铃酸肾病大鼠模型。将大鼠随机分为分两组,空白对照组和慢性马兜铃酸肾病模型组（CAAN）。检测血清尿素氮（BUN）及血清肌酐（Scr）的差异,采用HE和Masson染色检测肾脏病理、免疫组化法检测肾组织TGF-β1和及BMP-7的表达,比较两组肾间质纤维化程度。结果：与空白对照组相比,CAAN组血清尿素氮、血清水平升高（P〈0．05）,肾间质损害分值增加（P〈0．05）,肾组织TGF-β1表达增加（P〈0．05）,BMP-7表达减少（P〈0．05）。结论：慢性马兜铃酸肾病肾间质纤维化的机制可能与TGF-β1及BMP-7蛋白表达有关。     

肝细胞生长因子在大鼠肾间质纤维化中作用机制的研究

目的：通过观察大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)后，肝细胞生长因子(HGF)的表达及其与转化生长因子-β1(TGF-β1)之间的动态变化关系，以探讨HGF在肾间质纤维化中的作用机制。方法：将36只雄性SD大鼠中的18只行左侧输尿管结扎术，另外18只行假手术。于术后第3、7、14天分别处死各组中的6只大鼠，用免疫组化方法测定HGF、TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及纤维粘连蛋白(FN)的表达，并行苏木精-伊红(H—E)和Masson染色，动态观察肾的病理学改变。结果：在肾间质纤维化早期，肾HGF表达明显增加而TGF-β1表达却明显下降；在肾间质纤维化晚期，肾HGF表达明显下降而TGF-β1表达却明显上升，同时α-SMA和FN的表达明显增强，肾的病理改变明显，而且HGF表达与TGF-β1、α-SMA及FN表达呈明显负相关。结论：HGF可能是肾间质纤维化进程中重要的调节因子，它与TGF-β1相互作用，共同调节肾间质纤维化的发生和发展。     

虫草菌粉对慢性马兜铃酸肾病大鼠模型肾间质纤维化的保护作用

目的研究虫草菌粉对慢性马兜铃酸肾病（CAAN）模型大鼠肾间质纤维化的拮抗作用。方法雄性sD大鼠随机分为对照组、模型组和虫草组;每组6只。于0、1、4,8及12周末分别检测大鼠体重、尿糖、尿蛋白定量和血清肌酐（SCr）;并于第12周末处死大鼠留取肾组织,行Masson染色观察肾间质纤维化程度,逆转录实时聚合酶链反应和免疫组织化学方法检测肾组织中转化生长因子-β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）、纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）、金属蛋白酶组织抑制物-1（TIMP-1）和Ⅰ型胶原（ColⅠ）mRNA及蛋白质表达。结果模型组大鼠尿蛋白定量及SCr显著高于对照组（P〈0．01及P〈0．05）;12周时肾间质纤维化面积显著增加（P〈0．01）;肾组织内上述指标的mRNA及蛋白质表达显著上调（P〈0．01）。与对照组相比,模型组大鼠肾组织TGF-β1、CTGF、PAI-1、TIMP-1和ColⅠ的mRNA表达分别上调4．19、2．66、6．12、3．09和7．03倍;蛋白质表达分别上调2．31、3．53、3．17、3．18和6．87倍。虫草组大鼠第12周时尿蛋白定量、SCr及肾间质纤维化面积均显著低于模型组（P〈0．05）,上述高表达的mRNA及蛋白质指标均被显著抑制（P〈0．05）,与模型组相比,虫草组大鼠肾组织TGF-β1、CTGF、PAI-1、TIMP-1和ColⅠ的mRNA表达分别下调45％、41％、47％、48％和67％;蛋白质表达分别下调38％、39％、49％、46％和61％。结论虫草菌粉可通过抑制肾组织促细胞外基质（ECM）合成因子（TGF-β1、CTGF）及抗ECM降解因子（TIMP-1、PAI-1）生成,而改善CAAN的肾间质纤维化及肾功能。     

双环醇对肾间质纤维化大鼠的干预作用

目的 观察单侧输尿管梗阻（UUO）模型大鼠在双环醇的干预下,肝细胞生长因子（HGF）、转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的动态变化,探讨双环醇延缓肾间质纤维化的可能机制。方法 将60只雄性SD大鼠随机分为3组：假手术组、模型组、双环醇组,每组各20只,建立单侧输尿管梗阻模型。双环醇组于术前2 d给予双环醇[200 mg/（kg·d）]灌胃,假手术组、模型组给予等量自来水灌胃。每组分别在术后3、6、9、14 d时随机处死5只大鼠并取左侧肾组织,行HE染色观察肾组织病理变化,免疫组织化学染色观察HGF、TGF-β1蛋白的表达,RT-PCR法检测肾组织HGF mRNA的表达水平。结果 模型组中HGF蛋白及mRNA表达均呈现早期升高后期降低的趋势,在第6天表达量最高,随后逐渐下降,表达量在术后3、9、14 d与术后6 d比较差异有高度统计学意义（P〈0.01）。而TGF-β1蛋白的表达量呈现随梗阻时间延长逐渐升高趋势,术后3、6、9 d与术后14 d比较,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。在相同时间点,双环醇组与模型组相比,HGF蛋白及mRNA表达量显著升高,差异有高度统计学意义（P〈0.01）,而TGF-β1蛋白表达量显著降低,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 双环醇通过上调HGF及下调TGF-β1的表达而发挥缓解肾间质纤维化的作用。     

冬虫夏草对马兜铃酸肾病大鼠模型肾纤维化的保护作用与机制研究

目的 探讨冬虫夏草对马兜铃酸肾病(aristolochic acid nephropathy,AAN)大鼠模型肾纤维化的保护作用.方法 将30只SD大鼠随机分为正常组、模型组和治疗组,每组均为10只.治疗组给予冬虫夏草进行干预,30 d后比较各组大鼠肾功能,并通过Masson染色观察各组大鼠肾脏病理变化,RT-PCR法测定各组大鼠肾组织Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ)mRNA的表达.结果 模型组大鼠肾脏明显纤维化,其collagen Ⅰ mRNA的表达亦显著升高.冬虫夏草可下调AAN大鼠BUN、SCr水平及collagenⅠmRNA的表达及肾脏胶原面积百分比.结论 冬虫夏草可有效抑制AAN大鼠模型肾纤维化,其机制可能与下调collagen Ⅰ mRNA的表达、阻断胶原沉积相关.     

肾康注射液对梗阻性大鼠肾间质NF-KB和TGF-β1表达影响的研究

目的 研究肾康注射液对梗阻性大鼠肾间质NF-KB和TGF-β1的表达情况的影响,为临床用药提供依据.方法 采用单侧输尿管结扎(UUO)肾间质纤维化模型,将Wistar大鼠72只随机分为三组假手术组、模型组和治疗组.于术后第5天、第10天、第15天,处死各组大鼠8只,在光镜下观察肾脏组织病理改变,并应用免疫组织化学方法检测肾小管间质中NF-KB和TGF-β1的表达情况.结果 同模型组相比,治疗组可明显降低NF-KB和TGF-β1在肾间质中的表达.结论 肾康注射液可通过降低NF-KB和TGF-β1在肾间质中的表达,抑制肾间质纤维化,从而具有延缓慢性肾功能衰竭的作用.     

波生坦及缬沙坦对马兜铃酸肾病大鼠肾间质纤维化的影响

目的研究非选择性内皮素受体拮抗剂(波生坦)及血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂(缬沙坦)能否抑制慢性马兜铃酸肾病(CAAN)大鼠模型肾间质纤维化的进程。方法雄性SD大鼠予关木通浸膏水溶液灌胃致成CAAN模型,并分为模型组,波生坦组(100mg·kg-1·d-1灌胃)和缬沙坦组(30mg·kg-1·d-1灌胃)。对照组予自来水灌胃。每组动物6只。检测大鼠体重、24h尿蛋白定量、β2微球蛋白(β2mG)、血清肌酐(SCr);于第16周处死大鼠,取肾组织切片做Masson染色;用RTPCR及免疫组化方法检测肾组织中转化生长因子β1(TGFβ1)、结缔组织生长因子(CTGF)、纤溶酶原激活物抑制物1(PAI1)、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP1)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)mRNA及蛋白质的表达。结果与对照组相比,CAAN模型组大鼠24h尿蛋白定量、尿β2mG、SCr到实验后期均显著上升(P<0.05或0.01);肾间质纤维化面积显著性扩大(P<0.01);肾组织内TGFβ1、CTGF、PAI1、TIMP1及ColⅠ各指标的mRNA及蛋白质表达均显著上调(P<0.01)。在波生坦及缬沙坦干预组上述上调指标均被显著抑制(P<0.05或0.01),而两干预组间无明显差异(P>0.05)。结论波生坦及缬沙坦能抑制CAAN大鼠肾间质纤维化进程,延缓肾损害进展,此作用可能是通过抑制促细胞外基质合成因子(TGFβ1、CTGF)及抑制抗细胞外基质降解因子(PAI1、TIMP1)而获得。     

管周毛细血管密度下降致低氧对慢性马兜铃酸肾病肾间质纤维化的影响

目的研究慢性马兜铃酸肾病(CAAN)管周毛细血管(PTC)密度下降致低氧对慢性马兜铃酸肾病肾间质纤维化进展的影响。方法将60只大鼠随机分为两组,CAAN组(n=30):给予关木通水煎剂灌胃8周;正常对照组(n=30)大鼠予饮用水灌胃8周。在第8、12、16周两组分别处死10只大鼠留取肾组织作病理、免疫组织化学染色和RT-PCR等检查。结果CAAN组不同时间点、不同组别低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、结缔组织生长因子(CTGF)、金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)、胶原-Ⅰ(Col-Ⅰ)和CD34表达间差异均有统计学意义(P<0·05);肾脏病理提示肾小管-间质损伤随时间呈进行性加重。PTC密度与HIF-1α、CTGF、TIMP-1、Col-I及相应mRNA的表达呈负相关。HIF-1α表达与CTGF、TIMP-1、Col-I及相应mRNA的表达呈正相关。结论CAAN肾脏PTC密度下降导致低氧与CAAN肾间质纤维化进展密切相关。     

代谢酶在马兜铃酸肾病中的作用

马兜铃酸（aristolochic acid,AA）是马兜铃酸肾病（aristolochic acid nephropathy,AAN）的致病因素,已受到国际上的高度重视,有关AA肾毒性机制的研究目前已成为毒理学领域的研究热点之一。马兜铃酸I（AAI）是马兜铃酸的主要毒性成分,氧化和还原是AAI体内快速清除必不可少的代谢过程。参与AAI氧化还原的代谢酶及此代谢过程在AAN中的作用取得了重大进展,因此对相关的研究结果进行综述,为进一步深入研究AAI肾毒性机制提供参考。     

慢性马兜铃酸肾病动物模型的建立及其意义

目的探讨建立马兜铃酸引起的大鼠慢性肾间质纤维化动物模型.方法将雌性wistar大鼠分为马兜铃酸组与对照组.马兜铃酸组大鼠腹膜内注射马兜铃酸5mg@kg-1@d-1共16周,开始用药后8、12、16、20、24周分别处死6只大鼠.对照组大鼠(5只)腹膜内注射生理盐水2ml/d,共16周,24周时处死.两组动物处死时分别留取血、尿、肾组织标本,分别作生化、病理(光镜,免疫荧光,电镜)等方面的检查及应用电脑软件测定肾小管-间质面积.结果马兜铃酸组大鼠用药后16、20、24周体重明显低于对照组;用药后16周血尿素氮、血清肌酐明显高于对照组,24周时肾功能损伤进一步加重.光镜检查可见马兜铃酸组大鼠有明显肾小管-间质损伤,16周时肾小管面积明显增加,管腔面积明显小于对照组;24周时出现明显肾小管萎缩,肾小管面积明显缩小,而肾间质面积明显增加,肾间质呈多灶性纤维化.电镜检查16周时肾小管上皮细胞胞质内初级溶酶体、次级溶酶体明显增加,部分肾小管上皮细胞刷状缘消失;20、24周时可见胞质内次级溶酶体和髓样小体堆积.结论建立了慢性马兜铃酸肾病动物模型.马兜铃酸具有慢性肾毒性作用,可引起大鼠慢性肾间质纤维化.     

慢性马兜铃酸肾病大鼠模型肾组织中蛋白质组的差异表达

目的:制备慢性马兜铃酸肾病的大鼠模型,建立马兜铃酸肾病大鼠肾组织和正常大鼠肾组织的双向电泳图谱,从而展示差异表达的蛋白质,为进一步筛选介导马兜铃酸毒性作用的蛋白质分子奠定基础. 方法:应用马兜铃酸腹腔注射制备大鼠慢性马兜铃酸肾病模型,提取其肾组织中总蛋白质,采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对模型组和正常组肾组织中蛋白质进行差异展示. 结果:成功制备了慢性马兜铃酸肾病大鼠模型,并建立了模型组和正常组大鼠肾组织的双向电泳图谱,发现了差异蛋白质. 结论:马兜铃酸导致大鼠肾组织中蛋白质差异表达,这些差异表达的蛋白质可能介导了马兜铃酸的毒性作用.     

鳖甲煎丸对肾间质纤维化模型大鼠肾脏的保护作用

目的观察鳖甲煎丸对肾间质纤维化实验大鼠肾脏的保护作用并探讨其作用机理。方法采用单侧输尿管结扎的方法复制大鼠肾梗阻模型,将其随机分为缬沙坦组、鳖甲煎丸组与模型组,并设假手术组。观察梗阻侧肾脏肾上腺髓质素(ADM)在蛋白及基因水平的表达,并测定其在肾组织中蛋白含量。结果模型组及各治疗组大鼠肾脏中肾上腺髓质素组织蛋白含量、蛋白表达以及mRNA的基因表达较假手术组明显降低,鳖甲煎丸组、缬沙坦组的含量及表达均高于模型组(P<0.05?,但两组之间比较无显著性差异。结论鳖甲煎丸能够明显上调肾间质纤维化大鼠肾脏ADM的蛋白及mRNA的表达,对肾脏起到保护作用。     

地灵丹汤对单侧输尿管梗阻大鼠模型肾间质纤维化的防治作用

目的：研究中药复方地灵丹汤对单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction，UUO）致肾间质纤维化模型大鼠肾间质纤维化的防治作用及其可能机制。 方法：将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依那普利组及地灵丹组。采用UUO法建立肾间质纤维化大鼠模型，观察血尿素氮、血清肌酐和24h尿蛋白定量及肾组织病理改变，并采用免疫组织化学法检测转化生长因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、纤维连接蛋白（fibronectin，FN）及层黏连蛋白（laminin，LN）的表达。 结果：第7天模型组肾间质大量炎症细胞浸润及胶原表达，TGF-β1、FN和LN表达面积百分率较假手术组明显增加（P＜0．05）；地灵丹组间质纤维化面积较模型组减少（P＜0．05）。第14天地灵丹组和依那普利组肾间质TGF-β1、α-SMA、FN和LN表达面积百分率较模型组减少（P＜0．05），BUN、SCr和24h尿蛋白无明显差异。第21天地灵丹组SCr、肾间质纤维化和TGF-β1表达面积百分率较依那普利组和模型组下降（P＜0．05）。 结论：地灵丹能减轻单侧输尿管梗阻模型大鼠的蛋白尿和肾间质纤维化，抑制TGF-β1、α-SMA、FN和LN的表达。在较长时间应用后，地灵丹对模型大鼠的肾功能保护作用优于依那普利。     

慢性马兜铃酸肾病与慢性肾小球肾炎肾衰竭贫血的比较研究

目的通过与原发性慢性肾小球肾炎（CGN）肾衰竭患者相比较,探讨慢性马兜铃酸肾病（AAN）肾衰竭患者肾性贫血的临床特点。方法自2003年3月～2005年3月我科共经治26例慢性AAN肾衰竭患者。选择同期31例原发性CGN肾衰竭患者作为对照,测定用药前的血红蛋白（Hb）及血肌酐,根据MDRD公式估算。肾小球滤过率（GFR）。根据GFR分为GFR≥60ml／min及GFR〈60ml／min两个亚组,比较两组及两组中相应亚组Hb的差异,以Hb为因变量,GFR为自变量,求线性回归方程,并比较两组线性回归方程斜率及截距差异的显著性。结果两组之间GFR差异无统计学意义（P〉0．05）,慢性AAN组hb比CGN组显著低（P〈0．01）,两个亚组中也是慢性AAN组Hb比CGN组显著低（P均〈0．01）。慢性AAN组Hb与GFR倒数的线性回归方程的斜率及截距均显著比CGN组小（P〈0．01）。结论与CGN肾衰竭患者相比,慢性AAN肾衰竭患者贫血发生早、进展快、程度重,这种特点可能与其肾小管间质损害的病理损害特征有关。     

肾康注射液、肾康栓治疗慢性肾功能衰竭的疗效分析

目的:观察肾康注射液治疗慢性肾功能衰竭的疗效,为控制慢性肾功能衰竭进程、延缓进行肾替代治疗提供一个好的治疗途径.方法:将40例慢性肾功能衰竭患者随机分为治疗组和对照组,20例治疗组常规治疗+静脉滴注肾康注射液+肾康栓,20例对照组常规治疗+海昆肾喜+包醛氧淀粉,平行治疗28天后总结观察疗效.结果:治疗组与对照组在临床疗状、生化指标(血肌酐、尿素氮)改善方面存在显著的统计学差异(P<0.05),前者优于后者.结论:肾康注射液+肾康栓续贯治疗慢性肾功能衰竭、延缓其临床进展,是治疗慢性肾功能衰竭多种治疗方案的有益补充.