人体肿瘤组织内血管内皮细胞的定量分析

为建立一种检测瘤内血管生成准确定量的新方法,采用抗CD34单克隆抗体标记实体肿瘤组织中的血管内皮细胞,运用流式细胞术进行定量分析;并采用免疫组化法定量瘤内微血管密度,比较两种方法检测值的相关性.结果显示流式细胞术实验组与对照组平均检测值(%)具有显著性差异(P＜0.001);其相关性分析提示流式细胞术内皮细胞百分比与免疫组化法微血管计数值紧密相关(CD34,r=0.913, P＜0.001;Ⅷ因子相关抗原,r=0.868,P＜0.001).以上可见,流式细胞术可用于准确、快速、定量地检测实体肿瘤组织中的血管内皮细胞.     

犬旋股下动脉侧支血管内皮细胞培养的实验研究

目的：探讨犬肢体血管内皮细胞简易培养方法，为在肢端复合组织体外保存方法及保存后组织细胞（血管内皮细胞（活性判定方面的研究奠定基础；方法：手术切取犬旋股下动脉侧支，采用血管外翻术使血管内皮朝外，以０．２０％Ｔｒｙｐｓｉｎ－ＥＤＴＡ液消化分离血管内皮细胞后体外静置培养。利用免疫组化法对增殖细胞分别进行Ⅷ因子和ＣＤ３４相关抗原的检测。结果：分离的细胞活率为９９．３&;#177;０．７％。培养２４小时多数细胞已贴壁，     

鼻息肉组织中血管内皮细胞的定量研究

目的:探讨鼻息肉中微血管生成准确定量的新方法,了解糖皮质激素对鼻息肉中CD34的表达及微血管密度的影响。方法:采用抗CD34单克隆抗体标记法检测了13例鼻息肉组织和11例鼻喷布地奈德的鼻息肉中CD34蛋白的表达,同时应用流式细胞仪行定量分析,与免疫组化法测定的MVD比较,对CD34阳性血管行MVD计数,并了解微血管的分布情况。结果:流式细胞术表明,鼻息肉组与激素治疗组平均检测值(%)差异有统计学意义(P<0.05)。相关分析提示,流式细胞术测定血管内皮细胞百分率与免疫组化测定的MVD相关(r=0.675,P=0.011)。结论:糖皮质激素可能通过调控CD34蛋白,抑制血管内皮生长,这可能为阐明糖皮质激素治疗鼻息肉的机制提供了新的研究方向。也提示流式细胞术可准确、快速、定量地测定鼻息肉组织中血管内皮细胞,这为了解鼻息肉生物学特性提供了较准确的信息和检测指标,为预测其预后和可能的抗血管治疗提供了可靠的依据。     

犬旋股下动脉侧支血管内皮细胞的体外培养

目的：探索犬肢体血管内皮细胞简易培养方法,为在肢端复合组织体保存方法及存后组织细胞（血管内皮细胞）活性判定方面的研究奠定基础。方法：手术切取术旋股下动脉侧支,采用血管外翻术,消化分离血管内皮细胞后体外培养,用免疫组化法对增殖细胞分虽进行ＶＩＩＩ因子和ＣＯ３４相关抗原的检测。结果：分离的细胞存活率炒９９．３％,培养２４ｈ多数细胞已贴壁,至第３ｄ,细胞开始增殖,可见细胞分裂相,至第７ｄ,亚细胞克隆组单个细胞分裂增殖,呈环片样生长,扩增组细胞殖呈盛,呈铺路石样结构,ＶＩＩＩ因子和ＣＤ３４相关抗原表达阳性。结论：血管内皮细胞的分离采用因管外翻术手消化可获得理的分离效果,该方法简易行,重复性好,体外培养的犬血管内皮细胞可以检测至ＶＩＩＩ因子和ＣＤ３４相关抗原。     

低氧对体外培养的肺血管周细胞免疫表型的影响

用细胞培养,免疫细胞化学染色、图像分析及流式细胞术观察低氧和猪肺动脉缺氧内皮细胞条件培养液（ＨＦＣＣＭ）对体外培养的新生大鼠肺血管周细胞（ＰＣ）α－ＳＭ－ａｃｔｉｎ,ＣＤ３４、Ｓ－１００和ＰＣＮＡ的表达及细胞周期的影响。结果发现,低氧和ＨＥＣＣＭ可促进ＰＣ表达α－ＳＭ－ａｃｔｉｎ和ＰＣＮＡ,而抑制ＣＤ３４和Ｓ－１００的合成,促进ＰＣ由静止期（Ｇ０／Ｇ１）进入ＤＮＡ合成期（Ｓ期）及有丝分裂期（Ｇ２＋     

血管生成及细胞凋亡与喉粘膜上皮癌变的关系

目的：探讨血管生成及细胞凋亡与喉粘膜上皮癌变的关系．方法：应用免疫组化和原位末端标记（ＩＳＥＬ）方法分别检测正常喉粘膜（Ｎ）、炎症（ＩＦ）、不典型增生（ＤＹＳ）和鳞癌（ＳＣＣ）中间质的微血管数量及上皮的细胞凋亡情况,标记后的血管和凋亡细胞通过计数分别以微血管密度（ＭＶＤ）及凋亡指数（ＡＩ）表示．结果：ＭＶＤ值从Ｎ,ＩＦ,ＤＹＳ至ＳＣＣ依次增高,ＤＹＳ及ＳＣＣ组的ＭＶＤ值与Ｎ,ＩＦ组存在显著性差异（Ｐ＜０．０５）;ＤＹＳ组的凋亡指数（ＡＩ）在所有病变中最高;ＤＹＳ及ＳＣＣ组的ＡＩ值较正常Ｎ及ＩＦ组明显增多,且有显著性差异（Ｐ＜０．０５）．结论：血管生成及细胞凋亡与喉粘膜癌前病变和癌变关系密切,在喉粘膜上皮癌变发生中起着重要的作用．     

流式细胞仪检测胃癌中CD44s及CD44v6表达

目的　探讨黏附因子ＣＤ４４ｓ和ＣＤ４４ｖ６的表达与胃癌生物学行为的关系。方法　应用流式细胞术对５８例胃癌及４０例胃良性病变的新鲜标本检测ＣＤ４４ｓ和ＣＤ４４ｖ６,并应用免疫组化测定ＰＣＮＡＬ１。结果　胃癌组ＣＤ４４ｓ的阳性率（６２．１％,３６／５８）明显高于良性病变组（２７．５％,１１／４０,Ｐ＜０．０１）,且与ＰＣＮＡＬＩ（Ｐ＜０．０５）有关。胃癌组ＣＤ４４ｖ６的阳性率（５８．６％,３４／５８）高于良性病变组（３２．５％,１３／４０,Ｐ＜０．０５）,且与肿瘤部位（Ｐ＜０．０５）、淋巴结转移（Ｐ＜０．０５）及ＰＣＮＡＬＩ（Ｐ＜０．０５）有关。ＣＤ４４ｓ与ＣＤ４４ｖ６表达在胃良性病变组（Ｒｓ＝０．５９,Ｐ＜０．０１）及胃癌组中（Ｒｓ＝０．２９,Ｐ＜０．０５）存在相关性。结论　ＣＤ４４ｓ和ＣＤ４４ｖ６之间存在相关性并在胃癌中表达增强并和增殖活性有关,ＣＤ４４ｖ６与肿瘤部位及淋巴结转移有关。     

原发性肝癌血管起源的研究

目的 研究原发性肝癌的血管起源。方法 用病理及ＣＤ３４,荆豆凝聚集（ＵＥＡ－１）免疫组化的方法对２１例肝癌及癌旁组织中血管形成进行检测和观察。结果 癌旁组织血窦内皮细胞ＣＤ３４及ＵＥＡ－１染色阴性,炎症组织内的血管染色阳性。肿瘤血管与癌旁组织血管相连或不相连。结论 部分原发性肝癌血管可能起源于毛细血管化的癌旁肝血窦。     

人脑胶质瘤组织内微血管定量和nm23基因表达

目的：探讨人脑胶质瘤组织内微血管数量（ＭＶＣ）和ｎｍ２３基因表达的临床意义。方法：对５４例人脑质瘤组织内的ＭＶＣ和ｎ２３基因表达采用免疫组化染色进行回顾性研究。结果：ＭＶＣ随胶质瘤的恶性程度及瘤周水肿的严重程度增加而增多,复发组ＭＶＣ明显高于未复发组（Ｐ〈０．０１）。同时发现ｎｍ２３表达生强度与人脑胶质瘤的恶性程度及瘤周水肿呈负相关（ｒ分别为－０．４８和－０．５１,Ｐ〈０．０１）,复发组ｎｍ２３阳     

骨肉瘤iNOS过度表达与血管生成及预后的关系

目的 探讨骨肉瘤中诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）的表达及其与血管生成和预后的关系。方法 应用免疫组化方法检测８０例骨肉瘤标本ｉＮＯＳ的表达,ＦⅧ－ＲＡ和ＣＤ３１免疫组化染色显示肿瘤内微血管密度。结果 ８０例骨肉瘤中５２例ｉＮＯＳ阳性（６５％）,肿瘤细胞境质中的巨噬细胞和部分血管内皮细胞均为阳性。ｉＮＯＳ阳性表达和肿瘤内微血管密度（ＭＶＤ）显著正相关,而且ｉＮＯＳ阳性组病人生成率显著低于ｉＮＯＳ阴性     

骨肉瘤血管内皮生长因子表达及微血管密度与肿瘤预后

目的：研究骨肉瘤中血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）的表达与微血管密度（ＭＶＤ）及其与临床预后的关系。方法：对６９例骨肉瘤患者的临床病理资料进行回顾性研究,应用ＣＤ３４,ＶＥＧＦ（ＪＨ１２１?mＡb对其组织切片分别进行免疫组化染色,并将上述资料与患者预后进行统计学分析。结果：骨肉瘤ＶＥＧＦ表达与ＭＶＤ相关（Ｐ〈０．０５）。骨肉瘤ＶＥＧＦ表达、ＭＶＤ同临床肿瘤大小、边界微小病灶、Ｅｎｎｅｋｉｎｇ外科分期一样     

脐带血、成人外周血的干祖细胞检测及CFU-GM与CD34~+细胞百分率相关性研究

本文利用桥联酶标ＡＰＡＡＰ技术，用ＣＤ３４＋单抗ＱＢＥＮＤ１０标记脐血和外周血造血干细胞，同时采用体外半固体培养法检测脐血和外周血ＣＦＵ－ＧＭ产率血，并对两者的相关性进行了分析。结果表明：（１）体外培养ＣＦＵ－ＧＭ产率，脐血为９６．０６±６３．３７，外周血为７．２４±６．２０，两者差异显著，Ｐ＜０．０１。（２）ＣＤ３４＋细胞百分率，脐血为１．６９±１．０６％，外周血为０．００６５＋０．００４７％，两者差异显著，Ｐ＜０．０１。（３）脐血ＣＦＵ－ＧＭ产率与ＣＤ３４＋细胞百分率呈正相关，Ｒ＝０．７５９，Ｐ＜０．０１，回归方程Ｙ＝０．０１２７Ｘ＋０．４６４９。外周血不相关Ｒ＝０．０４４７，Ｐ＜０．０５。提示采用桥联酶标法检测ＣＤ３４＋细胞百分率可以代替ＣＦＵ－ＧＭ用于预测脐血造血重建能力，由于该法简便、快速、敏捷，不需昂贵设备，值得推广和应用     

乳腺癌组织中第Ⅷ因子相关抗原和组织蛋白酶D与癌转移及预后的关系

目的探讨乳腺癌组织中第Ⅷ因子相关抗原和组织蛋白酶Ｄ在其转移、预后中的关系。方法采用免疫组化ＳＰ法对３３例乳腺癌进行第Ⅷ因子相关抗原（Ｆ８）和组织蛋白酶Ｄ（Ｃａｔｈ－Ｄ）染色。结果３３例乳腺癌微血管Ｆ８染色均阳性（１００％）。癌组织内染色阳性在７０％以上者７例（２１．２１％）,癌周组织阳性在７０％以上者２５例（７１．６７％）,两者有明显差异（Ｐ＜０．０１）。Ｆ８表达与腋窝淋巴结转移有相关性（Ｐ＜０．０１）。３３例乳腺癌Ｃａｔｈ－Ｄ阳性者３０例,占９０．０９％。结论Ｆ８、Ｃａｔｈ－Ｄ免疫组化染色对判断乳腺癌转移、预后有着重要意义。两项同时检测可起互补作用。     

人脐静脉内皮细胞的继代培养

目的：研究人血管内皮细胞在体外长期传代培养的方法，方法；采用０．１２５％胰酶ＥＤＴＡ液灌注冲洗法，从人脐静脉中分离在管内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）；用０．０２％ＥＤＴＡ消化传代ＥＣ，用新生小牛视网膜提取物（ＲＤＳ）作为生长促进剂。应用光镜，电镜，免疫组化等方法对原代和继代内皮细胞进行鉴定和生长特性观察，结果：人脐静脉内皮细胞继代培养３６代，原代和继代内皮细胞胞浆中含有Ｗ－Ｐ小体和Ⅷ因子相关抗原；传代ＥＣ     

烧伤后CD11b/CD18介导的中性多形核白细胞粘附对肺微血管内皮细胞单层通透性的影响

目的观察烧伤后中性多形核白细胞（ＰＭＮ）对肺微血管内皮细胞单层通透性的影响，以及ＰＭＮ粘附及其粘附分子ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８在该影响中的介导作用。方法用培养血管内皮细胞单层模型，建立培养肺微血管内皮细胞（ＰＭＥＣ）单层通透性测定的方法，根据处理内皮细胞单层的不同成份，将实验分为７组，用含荧光素异硫氰酸酯白蛋白的灌流液灌流后，测定液体滤过系数（ｋｆ）和渗透压反射系数（δ）。结果烧伤后ＰＭＮ能使反映小分子物质通透性的ｋｆ值明显增加，使渗透压反射系数（δ）显著下降。用单抗封闭ＰＭＮ膜上ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８能使δ值的变化得到纠正；用孔径０２μｍ的滤膜阻断ＰＭＮ与内皮细胞单层的粘附则使ｋｆ值和δ值均接近正常水平。结论白细胞与内皮细胞的粘附是介质类物质发生作用的前提条件，这些物质主要影响肺血管对小分子物质的通透性。粘附分子ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８本身可能具有着生物学信号调控的作用，并介导着对肺血管内皮细胞大分子物质通透性的影响     

2型糖尿病患者血小板颗粒膜蛋白测定的临床意义

目的：探讨血小板颗粒膜蛋白（ＧＭＰ）在２型糖尿病患者（ＮＩＤＤＭ）中的表达及临床价值。方法：采用荧光标记的单克隆抗体用流式细胞仪（ＦＣＭ）测定了８５例ＮＩＤＤＭ患者（无微血管病变３５例,有微血管病变５０）及３０例健康珍血小板活化标志物ＧＦＭＰＣＤ６２ｐ及ＧＭＰＣＤ６３的表达。结果：患者血小板ＧＭＰＣＤ６２ｐ及ＣＤ６３表达较对照组显著增高（Ｐ〈０．００１）,有微血管病变组与无微血管病变组的ＣＤ６２ｐ     

Lp(a)与Ⅱ型糖尿病血管合并症及代谢紊乱的相关性研究

测定了５２例Ⅱ型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者Ｌｐ（ａ）、ＴＣ、ＴＧ、ＨＤＬ、ＶＬＤＬ、ＬＤＬ、ＡｐｏＡＩ、ＡｐｏＢ１００、ＦＰＧ、ＦＴＭ、Ｃ肽的变化,并与年龄相配的正常对照组相比,结果显示,ＮＩＤＤＭ伴有血管合并症组Ｌｐ（ａ）水平增高,有大血管、微血管病变组分别比无大血管、微血管病变组Ｌｐ（ａ）值增高。有血管合并症组较无血管合并症组ＴＧ明显升高（Ｐ＜０．０１）。ＮＩＤＤＭ患者ＡｐｏＢ１００较对照组升高,且以有血管合并症组升高为著。有血管合并症组ＶＬＤＬ较对照组升高。相关分析表明,Ｌｐ（ａ）与糖脂代谢指标间无相关性。表明Ｌｐ（ａ）可能作为ＮＩＤＤＭ血管病变的独立危险因素     

瘤内微血管密度与胃癌临床病理特征相关性研究

探讨肿瘤内血管生成在胃癌生长,侵袭、转移中的作用。方法采用免疫组织化学ＳＰ法,用抗血管内皮ＣＤ３４单克隆抗体对４０例胃癌及１０份正常胃组织标本进行标记分析。结果肿瘤微血管密度较正常胃组织显著增高;淋巴结转移组ＭＶＤ显著高于无淋巴结转移组;肿瘤瘤肝脏转移组ＭＶＤ较无肝较转移组增高。结论瘤内血管密与胃癌的侵袭、转移密切相关,血管生成可能促进胃癌的发展并影响其预后。     

血管紧张素Ⅰ转换酶基因多态性与Ⅱ型糖尿病肾病

用 Ｐ Ｃ Ｒ 技术对２７４ 例无肾病并发症的Ⅱ型糖尿病（ Ｎ Ｉ Ｄ Ｄ Ｍ） 、１０２ 例Ⅱ型糖尿病肾病合并肾功能不全（ Ｒ Ｉ） 、１２４ 例Ⅱ型糖尿病肾病无肾功能不全（ Ｎ Ｒ Ｉ） 、２４２ 例正常对照组进行了血管紧张素Ⅰ转换酶（ Ａ Ｃ Ｅ） 基因插入／ 缺失多态性的检测,同时观察血清血管紧张素转换酶（ Ａ Ｃ Ｅ） 水平与 Ａ Ｃ Ｅ 基因多态性及疾病的关系。结果： Ｒ Ｉ组 Ｄ 等位基因频率０ ．５２ , Ｄ Ｄ 基因型频率０ ．３０ ,与对照组（０ ．３８ ,０ ．１６） 比较有显著差异（ Ｐ＜ ０ ．０５ , Ｐ＜ ０ ．００１） ; Ｄ Ｄ 基因型较 Ｉ Ｉ对 Ｒ Ｉ 的比数比为２ ．９１（９５ ％ Ｃ Ｉ为１ ．５２ ～５ ．５８ , Ｐ＜ ０ ．０１） 。 Ｎ Ｉ Ｄ Ｄ Ｍ 组及 Ｎ Ｒ Ｉ组基因型频率分布与对照组比较无显著差异（ Ｐ＞ ０ ．０５） ;各组中 Ｄ Ｄ 基因型个体血清 Ａ Ｃ Ｅ 水平最高 Ｉ Ｉ基因型最低, Ｒ Ｉ组及 Ｎ Ｒ Ｉ组血清 Ａ Ｃ Ｅ 水平显著高于对照组（ Ｐ＜ ０ ．００１） ,基因多态性与血清 Ａ Ｃ Ｅ 水平呈相关性（ ｒ ＝ ０ ．６５ , Ｐ＜ ０ ．０１） 。表明血清 Ａ Ｃ Ｅ 水平升高对糖尿病肾病的发生及进展有重要作用, Ａ Ｃ Ｅ 基因缺失多态性可能是中     

脐血抗—HPCA—2和Tük3标记的CD34阳性细胞的流式细胞仪比较分析

在标记脐血造血祖细胞表面抗原（ＨＰＣＡ），ＣＤ３４中，比较抗－ＨＰＣＡ－２－ＦＩＴＣ和Ｔｋ３（纯抗体）标记的ＣＤ（３４＋）细胞在流式细胞仪分析中的荧光特征及两种单抗标记的ＣＤ（３４＋）细胞与体外培养的粒单细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ），红系爆发形成单位（ＢＦＵ－Ｅ），和混合集落形成单位（ＣＦＵ－Ｍｉｘ）的相关性。结果发现脐血有核细胞中，抗ＨＰＣＡ－２阳性细胞占１．０５±０．７２％（ｎ＝１３），Ｔｋ３阳性细胞占２．０６±１．２５％（ｎ＝８），差别显著（Ｐ＜０．０５）。每毫升脐血两种抗体标记的细胞分别为９６．５６±５６．６４和２３１．４０±１６３．９３（Ｐ＜０．０５）。尽管ＨＰＣＡ－２阳性细胞与Ｔｋ３阳性细胞数量呈显著正相关（ｒ＝０．８７５，Ｐ＜０．０１），前者与ＣＦＵ－ＧＭ，ＢＦＵＥ，ＣＦＵ－Ｍｉｘ及集落总数ＣＦＵｓ均呈正相关，而后者仅与ＣＦＵ－ＧＭ，ＣＦＵｓ相关。研究提示在检测造血祖细胞时，用抗－ＨＰＣＡ－２－ＦＩＴＣ代替Ｔｋ３可降低假阳性，获得较好的ＯＤ（３４＋）细胞与ＣＦＵ间的线性关系。