活血注射液对ox-LDL诱导的单核-内皮细胞黏附作用的影响

目的观察活血注射液对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达及与人单核细胞黏附作用的影响。方法以培养HUVEC作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入ox-LDL制备细胞损伤模型。采用蛋白定量法检测HUVEC与单核细胞的黏附率;RT-PCR检测HUVEC中ICAM-1的mRNA表达;用流式细胞仪测定HUVEC中ICAM-1的蛋白表达。结果ox-LDL作用HUVEC后12、24h时,人单核细胞与HUVEC的黏附率显著升高,HUVEC中ICAM-1的mRNA和蛋白表达水平也均明显升高,均明显高于正常对照组(P<0.01),而活血注射液可明显降低人单核细胞与HUVEC的黏附率,以及显著降低ICAM-1的mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01),这种作用随着剂量的增加而增强。结论活血注射液能通过下调内皮细胞表面黏附分子的表达抑制单核-血管内皮细胞黏附,从而发挥对血管内皮细胞的保护作用,有利于减少或抑制动脉粥样硬化的形成。     

疡愈涂剂对人白细胞与血管内皮细胞黏附影响的分子机制

目的研究疡愈涂剂(YangYuTuJi,YYTJ)对白细胞与血管内皮细胞黏附影响的分子机制,探讨其促进皮肤创伤愈合的机制。方法用虎红染色法观察YYTJ高(132.5mg/L)、中(66.3mg/L)、低(33.2mg/L)浓度对中性粒细胞(polymorphonuclear,PMN)、人单核细胞(THP-1)与肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)黏附的影响,用荧光免疫细胞化学法观察YYTJ对HUVEC表面细胞间黏附分子-1(inter cell ularadhesion molecule-1,ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)和CD44表达的影响。结果 YYTJ和TNF共同作用HUVEC12h后,高浓度YYTJ能明显抑制HUVEC与PMN以及THP-1黏附(P<0.05),能明显抑制HUVEC表面ICAM-1和CD44表达(P<0.05)。中浓度YYTJ能明显抑制HUVEC表面VCAM-1和CD44表达(P<0.05,P<0.01)。低浓度YYTJ能明显降低HUVEC表面CD44表达(P<0.05)。结论疡愈涂剂通过降低TNF诱导的HUVEC表面黏附分子的表达,抑制白细胞与血管内皮细胞的黏附,从而抑制过度的炎性反应。     

雷公藤红素阻断全反式维甲酸导致的白血病细胞与内皮细胞黏附

目的:全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)治疗急性早幼粒细胞白血病,引起白血病细胞与内皮细胞之间黏附增加,是发生维甲酸综合征的重要原因。本文观察雷公藤红素对这种黏附增加的影响。方法:用流式细胞术检测雷公藤红素对急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4和人脐静脉内皮细胞(humanumbilical vascular endothelial cell,HUVEC)在ATRA刺激下表达黏附分子的影响。用细胞黏附功能实验,检测雷公藤红素对ATRA导致的上述两种细胞之间黏附增加的影响。结果:ATRA能引起NB4细胞表面细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表达增加,但可被雷公藤红素明显抑制(P<0.01)。NB4细胞上清液能刺激HUVEC表达ICAM-1(P<0.05);而被ATRA处理过的NB4细胞上清液能明显刺激HUVEC表达选择素E(E-selectin)、血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)和ICAM-1等黏附分子(P<0.01),雷公藤红素对其抑制率分别达25.3%、42.4%和61.0%。ATRA导致上述两种细胞之间黏附增加,雷公藤红素对其完全抑制。结论:雷公藤红素能抑制ATRA导致的白血病细胞与内皮细胞黏附,有可能用于维甲酸综合征的治疗。     

葛根素对人脐静脉内皮细胞ICAM-1、VCAM-1、MCP-1、IL-6及NO含量的影响

目的观察葛根素对人脐静脉内皮细胞(HUVE)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-6(IL-6)及一氧化氮(NO)含量的影响。方法选择HUVE,探寻葛根素抑制HUVE细胞生长的最佳浓度。随机分为正常组、模型组、葛根素组、雷帕霉素组,其中模型组用终浓度为5U/L的凝血酶为刺激物,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞法检测HUVE细胞周期分布情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HUVE细胞IL-6、MCP-1、ICAM-1、VCAM-1表达;硝酸还原酶法检测HUVENO的表达。结果 1×10-2mol/L浓度的葛根素对由凝血酶刺激的HUVE生长有明显的抑制作用(P0.01)。与模型组比较,葛根素组可抑制由凝血酶刺激导致的血管内皮细胞S期和G2期时相(P0.05),使IL-6、MCP-1、VCAM-1表达水平明显下降(P0.05),而ICAM-1无明显变化(P0.05)。与模型组比较,葛根素组HUVE上清液NO含量明显升高(P0.01)。结论葛根素组可抑制由凝血酶刺激导致的血管内皮细胞分裂增殖,主要表现为抑制内皮细胞S期和G2期时相,其主要机制可能是通过提高上清液中NO含量,抑制内皮细胞释放VCAM-1、MCP-1及IL-6而发挥作用。     

福辛普利与缬沙坦对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞ICAM-1及NO表达的影响

目的 研究福辛普利与缬沙坦对氧化性低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM1-)及一氧化氮(nitric oxide,NO)表达的影响.方法 采用硝酸还原酶法测定细胞培养液上清中 NO 的含量,细胞 ELISA 法测定细胞表面 ICAM-1 的含量,免疫组织化学法结合图像分析测定细胞一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)含量.结果 ox-LDL 可明显增加脐静脉内皮细胞各时点 ICAM-1 的表达,并减少 NO 及 NOS 的表达,且有浓度依赖性.福辛普利与缬沙坦均可显著抑制 ox-LDL 的上述作用,两者作用的差异无显著性意义.结论 抑制 ox-LDL 诱导的内皮细胞 ICAM-1 的表达,并增加内皮细胞 NO的合成,可能为福辛普利与缬沙坦抗动脉粥样硬化的作用机制之一.     

胍丁胺抑制单核-内皮细胞黏附作用及其机制的研究

目的探讨内源性胍丁胺对氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein,ox-LDL）诱导的单核-内皮细胞黏附的作用及其可能的机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）,用不同浓度的胍丁胺作用于ox-LDL诱导的HUVEC 24h,加或不加硝基精氨酸甲酯（L-NAME）,观察人单核细胞对HUVEC的黏附及ICAM-1在HUVEC的蛋白表达。结果胍丁胺浓度依赖地抑制ox-LDL诱导的单核细胞对HUVEC的黏附及ICAM-1在HUVEC的表达（P〈0．01）,二者成正相关（r=0．8857,P〈0．001）,加入L-NAME后AGM的作用减弱（P〈0．05）。结论AGM可能通过下调ICAM-1的表达抑制循环单核细胞与内皮细胞的黏附,该作用与一氧化氮合酶（NOS）有关。     

Y-27632通过抑制ROCK通路降低内皮细胞中基质金属蛋白酶2和9表达

目的：探讨ROCK通路抑制剂Y-27632对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)基质金属蛋白酶2和9(matrix metalloproteinase 2 and 9,MMP2,MMP9)的表达与活性的影响。方法：体外培养原代HUVEC,分别予以TNF-α (25 ng/mL)、TNF-α+Y-27632(10 μmol/L)处理24 h。 Real-time PCR检测血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、MMP2和MMP9 mRNA的表达水平;明胶酶谱检测MMP2和MMP9蛋白活性的改变情况。结果：与对照组相比,TNF-α明显上调ICAM-1,VACAM-1,MMP2,MMP9 mRNA的表达(P<0.01)和MMP2,MMP9的蛋白活性(P<0.05);与TNF-α处理组相比,Y-27632可显著抑制ICAM-1,VCAM-1,MMP2和MMP9 mRNA的表达(P<0.01),下调MMP2和MMP9的蛋白活性(P<0.05)。结论：Y-27632可以抑制TNF-α诱导的HUVEC炎症反应和MMP2,MMP9 mRNA和蛋白活性水平。     

二甲双胍减轻软脂酸诱导的血管内皮细胞损伤机制探讨

目的 了解二甲双胍在软脂酸(PA)诱导的血管内皮细胞损伤中的保护作用及机制.方法 人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)在空白对照、PA、二甲双胍和PA联合二甲双胍培养液中培养24 h.RT-PCR方法测定单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的mRNA表达,Western blot测定24 h细胞的ICAM-1、核因子κB p65(NF-κB p65)和磷酸化抑制因子κBα(IκBα)的蛋白表达.结果 与对照组相比,PA组的MCP-1和ICAM-1表达显著增加(P<0.05).加入二甲双胍后,MCP-1和ICAM-1表达显著减少(P<0.05).二甲双胍降低PA诱导的NF-κB p65和磷酸化IκBα表达增加.结论 二甲双胍可能通过激活AMPK,阻断PA对NF-κB的激活,减少MCP-1和ICAM-1表达,从而减轻PA诱导的HUVEC损伤.     

ghrelin抑制ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞粘附分子表达

目的 探讨不同剂量ghrelin预处理对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞粘附分子表达的作用. 方法 人脐静脉内皮细胞经传代培养后随机分配为对照组、ox-LDL组及1 ng/mL、10 ng/mL与100 ng/mL ghreli预处理组,采用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组血管内皮细胞粘附分子-1(VCAM-1)与细胞间粘附分子-1( ICAM-1)的RNA水平变化. 结果 与空白对照组相比:ox-LDL组内皮细胞VCAM-1与ICAM-1分子的表达水平明显升高(P＜0.05).与ox-LDL组相比,1ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL ghrelin预处理可使内皮细胞VCAM-1 mRNA含量依次降低33％、52％、63％,内皮细胞ICAM-1 mRNA分子表达水平依次降低18％、46％、57％.结论 ghrelin对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞中粘附分子VCAM-1及ICAM-1的表达有明显的抑制作用.     

ox-LDL对人脑微血管内皮细胞活性及黏附分子表达的影响

目的观察氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)对体外培养人脑微血管内皮细胞活性及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的影响,探讨毒损脑络的现代分子生物学机制。方法以培养人脑微血管内皮细胞为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入不同浓度的ox-LDL(0、5、10、25、50、75、100、150 mg/L)培养24、48、72 h,用四唑盐比色(MTT)法检测细胞活性,并以MTT测得的实验结果为基础选取ox-LDL浓度组(0、50、75、100 mg/L)和时间点(24、72 h),采用细胞免疫化学法和图像定量分析系统观察ICAM-1和VCAM-1的变化。结果ox-LDL对内皮细胞活性的影响有时间和浓度依赖性,统计学差异显著。细胞免疫化学法和图像定量分析系统显示ox-LDL各组(50、75、100 mg/L)OD值在24、72 h与正常对照组相比都有显著性差异(P(0.01),相同浓度组在24、72 h相比无统计学差异。结论不同浓度的ox-LDL能改变体外培养人脑微血管内皮细胞的活性,提高ICAM-1和VCAM-1的表达,构成了内毒损伤络脉的部分生物学基础。     

MCP-3对人脐静脉内皮细胞表达ICAM-1、VCAM-1、TF/TFPI及其凋亡的影响

目的研究单核细胞趋化因子-3（MCP-3）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）表达ICAM-1、VCAM-1、TF、TFPI 及其凋亡
的影响。方法分离、培养人脐静脉内皮细胞,分别给予0~3.0 ng/ml的MCP-3进行干预,确定MCP-3对HUVECs的最适作用
浓度,以此浓度干预HUVECs,在MCP-3 加药之前1 h 分别给予MCP-3 抗体（20 ng/ml）、PI3K抑制剂LY-294002（5 mmol/ml）
处理细胞,MCP-3 作用24 h 后提取各组总RNA、总蛋白,用RT-PCR、Western blot 分别检测干预后的ICAM-1、VCAM-1、TF、
TFPI 的表达。模拟病理状态,用ox-LDL 干预HUVECs与空白组对照,24 h 后提取各组总RNA、总蛋白,用RT-PCR、Western
Blot 分别检测各组MCP-3 表达情况。最后,用MCP-3 及MCP-3+CCR2 拮抗剂RS102895（6μmol/L）分别干预HUVECs,作用
24、48 h 分别检测HUVECs凋亡率及caspase3 的表达,并与空白对照组比较。结果MCP-3 对HUVECs的最适作用浓度为
0.3 ng/ml（P<0.05）;MCP-3 可诱导HUVECs 细胞中ICAM-1、VCAM-1、TF 表达的增加,同时可抑制TFPI 表达（P<0.05）;
MCP-3 抗体和LY-294002 可分别拮抗、抑制此作用（P<0.05）;ox-LDL 可上调HUVECs表达MCP-3（P<0.05）;作用24、48 h 后
MCP-3 可明显诱导HUVECs凋亡,CCR2 抑制剂可拮抗此作用。结论ox-LDL 可诱导HUVECs表达MCP-3,MCP-3 可诱导
HUVECs凋亡,且可能部分通过PI3K信号通路影响HUVECs功能。
     

脂多糖和氧化型低密度脂蛋白协同促进人内皮细胞表达细胞间黏附分子-1

目的探讨脂多糖(LPS)和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)是否诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达(HU-VEC)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA以及p38蛋白激酶是否参与此过程。方法将生长至汇合的HUVEC分为对照组、LPS组、LPS+SB203580组、ox-LDL组、HUVEC+SB203580组、LPS+ox-LDL组。采用原位杂交检测其细胞间黏附分子-1 mRNA的表达。用免疫细胞化学法检测正常对照组、脂多糖组和氧化型低密度脂蛋白组p38蛋白激酶蛋白的表达。结果培养的HUVEC能表达较低水平的ICAM-1 mRNA。原位杂交显示各实验组的ICAM-1 mRNA明显高于对照组(P<0.01)。免疫细胞化学显示,p38蛋白激酶蛋白在对照组的细胞核阳性表达率为8.3%,当HUVEC暴露于LPS或ox-LDL后,细胞核阳性表达率升至38.5%或48.6%。结论LPS和ox-LDL能诱导HUVEC表达ICAM-1 mRNA,p38蛋白激酶可能参与了该过程。     

尼古丁和牙龈卟啉单胞菌脂多糖影响单核细胞黏附血管内皮细胞的分子机制

目的：研究牙龈卟啉单胞菌和尼古丁影响动脉粥样硬化的初步分子机制。方法：在单核细胞U937细胞中,用CCK-8法检测尼古丁、牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.g-LPS）及二者联合对U937细胞增殖能力的影响;实时定量荧光聚合酶链反应（Real-time PCR）检测尼古丁对P.g-LPS诱导炎症因子白细胞介素（interleukin, IL）-6能力的影响。在血管内皮细胞中,用Real-time PCR和蛋白印记杂交实验检测尼古丁、P.g-LPS及二者联合应用对单核细胞趋化因子（C-C模体） 配体8 ［chemokine (C-C motif) ligand 8, CCL-8］和血管细胞黏附因子1（vascular cell adhesion molecule 1,Vcam-1）、非常晚期抗原4α（very late antigen 4 alpha,VLA4α）、肿瘤坏死因子受体超家族成员4（tumor necrosis factor receptor superfamily member 4,OX40）和其配体（OX40 ligand,OX40L）的表达的影响。同时,在尼古丁和P.g-LPS共同作用下,用黏附实验检测单核细胞与血管内皮细胞的黏附能力。结果：P.g-LPS并不影响尼古丁促进单核细胞系U937增殖的作用,100 μmol/L尼古丁能抑制P.g-LPS诱导U937细胞产生IL-6的能力。在血管内皮细胞中,与对照和单一药物处理相比,尼古丁和P.g-LPS共同作用可以促进其表达CCL-8及Vcam-1、VLA4α、OX40和OX40L。黏附实验结果显示,尼古丁和P.g-LPS共同刺激可以明显提高单核细胞黏附血管内皮细胞的能力。结论：牙龈卟啉单胞菌和尼古丁可能通过上调CCL-8表达募集单核细胞到血管内皮损伤处,并通过增强黏附分子Vcam 1/VLA4α及OX40L/OX40的相互作用,促进单核细胞与血管内皮细胞黏附,参与动脉粥样硬化病损的启动和形成。     

细胞间黏附分子1和血管细胞黏附分子1在血管瘤组织中表达的意义

目的：探讨细胞间黏附分子1（ICAM-1）和血管细胞黏附分子1（VCAM-1）在小儿血管瘤增殖退化病理生理演变过程中的表达及作用机制.方法：应用SABC免疫组化法检测28例增殖期血管瘤及22例退化期血管瘤的ICAM-1、VCAM-1在血管内皮细胞上的表达情况,同时以血管畸形及正常皮肤为对照.结果：ICAM-1在增殖期血管瘤强阳性表达,退化期阳性表达,两时期差异十分显著（P＜0.01）;VCAM-1在增殖期和退化期血管瘤均为阳性表达,两时期无明显差异;ICAM-1和VCAM-1在血管畸形和正常皮肤几乎均为阴性表达,与不同时期血管瘤相比差异均十分显著（P＜0.01）.结论：ICAM-1可能在血管形成早期发挥作用,介导内皮细胞间黏附,参与血管瘤发病和消退的病理过程.     

不同类型维生素E对人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子-1表达的影响

目的:观察不同类型维生素E(α、γ、mixed-tocopherols)对氧化型低密度脂蛋白 (oxLDL)及重组人C反应蛋白 (rhCRP)诱导的人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)细胞间黏附分子-1 (ICAM-1)表达的影响,以探讨不同类型维生素E的抗炎、抗动脉粥样硬化机制及不同效果. 方法: 体外培养HUVECs,分别加oxLDL、oxLDL α-tocopherol、oxLDL γ-tocopherol、oxLDL mixed-tocopherols、rhCRP、rhCRP α-tocopherol、rhCRP γ-tocopherol、rhCRP mixed-tocopherols孵育 24 h,采用细胞酶联免疫吸附(ELISA)、流式细胞、RT-PCR技术分别测定ICAM-1蛋白和mRNA表达水平. 结果: oxLDL和rhCRP均可诱导HUVECs的ICAM-1蛋白和mRNA表达增加,不同类型维生素E均可抑制oxLDL诱导的HUVECs的ICAM-1蛋白和mRNA表达,并呈浓度依赖性(50～200 μmol/L).与相同浓度的α、γ-tocopherol相比, mixed-tocopherols抑制作用最强.不同类型维生素E均不能抑制 rhCRP诱导的HUVECs的ICAM-1蛋白和mRNA表达.结论: 不同类型维生素E均可抑制oxLDL诱导的HUVECs的ICAM-1蛋白和mRNA表达,与α、γ-tocopherol相比,mixed-tocopherols对oxLDL诱导HUVECs表达ICAM-1的抑制作用最强.     

外源性胍丁胺抑制脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞活化及损伤

目的研究胍丁胺对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞活化及损伤的影响,并探究其与NF-κB、MAPK通路及活性氧（ROS） 的产生是否相关。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）。MTT法检测0~4 mmol/L胍丁胺作用24 h对HUVECs细胞 活力的影响。HUVECs细胞机分为：①空白对照组;②脂多糖（10 μg/mL）组;③胍丁胺干预组：脂多糖（10 μg/mL）+胍丁胺 （0.125、0.5、1 mmol/L）。ELISA 法检测24 h 细胞上清中可溶性细胞间粘附分子-1（sICAM-1）、可溶性血管间粘附分子-1 （sVCAM-1）、可溶性E-选择素（sE-selectin）及单核细胞趋化因子-1（MCP-1）水平,确定胍丁胺最适干预浓度（1 mmol/L）。后续 实验中HUVECs细胞随机分为：对照组、脂多糖（10 μg/mL）组、胍丁胺（1 mmol/L）组及脂多糖（10 μg/mL）+胍丁胺（1 mmol/L） 共同组,作用1、6、24 h;抑制剂组即在脂多糖刺激前1 h,用10 μmol/L NF-κB（PDTC）、ERK1/2（PD98059）及p38（SB203580）抑 制剂进行预处理。qRT-PCR法检测ICAM-1、VCAM-1、E-selectin、MCP-1、血红素氧合酶（HO-1）、醌氧化还原酶（NQO1）mRNA 表达水平;DCFH-DA作为荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）水平;Western blot 法检测细胞VCAM-1、ICAM-1、p65、磷酸化- p65（p-p65）、IκBα、p-IκBα、ERK、p-ERK、p38、p-p38、JNK、p-JNK蛋白表达水平。结果（1）HUVECs经10 μg/mL脂多糖刺激24 h 后,上清sVCAM-1、sICAM-1、sE-选择素、MCP-1 含量明显升高（P<0.05）,细胞内ROS明显增加（P<0.05）;刺激6 h 后各因子 mRNA水平升高（P<0.05）;（2）胍丁胺（1 mmol/L）干预后上述指标显著下调（P<0.05）,这与p38、ERK及NF-κB信号通路抑制剂 预处理细胞后的抑制效应相似;（3）胍丁胺干预组6 h HO-1 mRNA表达较脂多糖组明显增加（P<0.05）,而NQO-1无明显变化; （4）胍丁胺明显抑制脂多糖刺激引起的细胞内p38、ERK、核内p65（Ser536）与胞浆IκBα磷酸化,并上调胞浆IκBα蛋白水平。结 论胍丁胺可能通过抑制NF-κB、MAPK通路的激活下调粘附分子及趋化因子水平,并增强HO-1表达以减少活性氧产生对抗脂 多糖诱导的人脐静脉内皮细胞活化及损伤。