海藻糖封闭液在ELISA体系中的应用

目的探索海藻糖（trehalose）作为封闭液用于酶联免疫吸附检测（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）实验系统的可行性。方法在不同的抗原抗体反应体系采用不同浓度的海藻糖作为封闭液，对直接、间接及双抗体夹心ELISA敏感性与检测本底的影响。结果在一定的封闭时间里，不同浓度的海藻糖封闭液均可以在不影响ELISA反应体系敏感性的前提下增强对于非特异性吸附的抑制，封闭效果明显优于或等同于其他传统封闭液以及二糖类封闭液；结论海藻糖能够作为封闭液用于ELISA，并有望替代部分ELISA体系中的传统封闭液。     

本底差异平衡及临界控制在竞争ELISA中的应用

[目的]探讨本底差异平衡及临界控制在提高竞争ELISA精密度和准确度中的作用。[方法]测定不同来源微孔在空板及充液两种状态下，本底光密度的差异性。选择12份HBeAb和HBcAb值已知样本，单盲常规步骤判定结果；再采用本底差异平衡及加用临界控制后判定其结果，比较两种方法在确定结果上的差异性。[结果]来源不同的微孔本底吸光度及同一微孔在充液前后吸光度差值均存在较大差异，采用常规步骤判定临界值样本有较高的错判几率，采用本底吸光度值均衡及临界控制后，对临界值样本的判定全部正确，重复性好。[结论]本底吸光度值均衡及临界控制可有效提高竞争ELISA的精密度和准确度。     

SFF—200酶标荧光仪的研制及在酶免疫测定中的应用

以辣根过氧化物酶(HRP)为结合物的固相酶免疫测定(ELISA)常用邻苯二胺(OPD)等显色底物进行比色测定。荧光光度法较比色法有敏感度高检测范围大的优点。曾有报道在以HRP作为标记酶的ELISA中改用荧光底物对羟基苯丙酸(HPPA)作酶     

影响酶联免疫试验测定结果的分析前因素及对策

酶联免疫试验(ELISA)由于其灵敏度、特异性强的特点,已经在医学检验中获得了广泛应用。但由于一些内源性及外源性干扰因素的影响,常常导致试验结果的不准确。本文就一些常见干扰因素及解决方法作如下综述。1影响ELISA测定结果的外源性因素及解决方法1.1标本溶血(1)影响原因标本溶血时可释放出大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白,在以辣根过氧化物酶为标记的ELISA测定中,会导致非特异性显色,干扰测定结果。(2)解决方法标本采集和处理时必须避免溶血。1.2标本受细菌污染(1)影响原因细菌菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶,在ELISA试验…     

戊二醛前处理的聚苯乙烯塑料小孔在二点一步酶免疫法中的应用

在酶联免疫吸附测定(ELISA)中,固相载体吸附蛋白性能的优劣是决定测定敏感度的主要因素之一。本文在“单克隆抗体二点一步酶免疫测定HCG中,用戊二醛前处     

TRFIA与ELISA法检测乙肝病毒血清学标志物的分析与比较

时间分辨荧光免疫分析方法(TRFIA)是一种先进的免疫检验新技术,是用镧系元素标记抗原/抗体作为抗原-抗体反应体系示踪物,通过时间延迟和波长分辨将特异性荧光和非特异性荧光分辨开来,达到“零”本底,再根据特异性荧光强度和相对荧光强度的比值来判断反应体系中分析物浓度,达到定量分析的目的[1]。TRFIA法具有高准确度、高灵敏度(可达10-18mol/l)、稳定性好、标准曲线线性范围宽、试剂有效期长[1-3]等特点。酶联免疫吸附方法(ELISA)一直是临床诊断HBV感染的传统手段,为探讨二者在检测乙肝病毒血清标志物结果的符合程度、灵敏度、特异…     

关于标本因素对ELISA检测结果影响的分析

ELISA(enzymelinkedimmunosorbentassay)即酶联免疫吸附试验 ,是一种常用的固相酶免疫测定方法。ELISA的基本原理是 :①使抗原 (或抗体 )结合到某种固相载体表面 ,并保持其免疫活性 ;②使抗原 (或抗体 )与某种酶联结成酶标抗原 (或抗体 ) ,而且此酶标抗原 (或抗体 )既保留其免疫活性 ,又保留其酶活性 ;③测定时将待测标本 (抗体或抗原 )和酶标抗原(或抗体 )按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应 ,再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开 ,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比…     

抗烯醇化酶抗体检测对侵袭性念珠菌病的诊断价值

目的 利用白念珠菌烯醇化酶重组蛋白质为抗原,建立测定人血清中抗白念珠菌烯醇化酶IgG类抗体的ELISA法,评估其在侵袭性念珠菌病(IC)诊断中的应用价值.方法 收集各类确诊IC患者(66例)和白念珠菌定植者(32例)血清,用重组白念珠菌烯醉化酶包被ELISA微孔板,测定血清中的抗烯醇化酶抗体,确定cut off值并对方...     

影响酶联免疫吸附试验结果的操作因素

酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)是利用酶标记物作为指示物,以抗原-抗体的特异性结合反应为基础,在酶标记物同抗原-抗体结合后,由于酶的催化放大作用,使得ELISA既保持抗原-抗体反应的特异性,又体现酶催化放大的敏感性.整个反应过程的完成是在非均相反应体系中,即固相免疫吸附.为此反应的每一步都经过洗涤程序,不仅除去未反应物质,还除去某些非特异的干扰物质,从而进一步提高了检测的特异性[1].     

酶联免疫吸附试验用于血吸虫病研究的新动态

自Ferrira(1974)最早应用酶联免疫吸附试验(ELISA)诊断曼氏血吸虫病获得满意结果以来,国内外学者在进一步研用ELISA诊断血吸虫病人的同时,也对ELISA的方法学进行了改良,提高了ELISA的免疫学诊断价值。本文将近年来ELISA方法学的改良和应用于血吸虫病诊断的初步评价综述如下。方法学的改良: 一、酶联金葡菌A蛋白(SPA)于ELISA诊断日本血吸虫病的研究郑志国(1982)应用SPA-ELISA诊断日本血吸虫病人,敏感性为95.2％,平行检测与常用ELISA     

振荡孵育法用于国产一步法HBsAg ELISA试剂盒的改进

目的 改变酶反应条件以提高国产一步ELISA乙型肝炎表面抗原(HBsAg)试剂盒检测敏感性.方法 将酶反应的条件由37 ℃孵育改为37 ℃振荡孵育,观察检测结果的敏感性和精密度的变化.结果将酶反应的条件改为37 ℃振荡孵育,HBsAg ELISA试验检测的阳性判定值(CO)不变;20份雅培i2000检测HBsAg为阴性的标本,在振荡孵育时仍为阴性结果;灰区标本振荡孵育后,吸光度A值增加2倍左右,与单纯孵育检测相比敏感性提高4倍左右;80份化学发光微粒子免疫测定(CMIA)弱阳性标本中有62份可被振荡孵育的ELISA检出(检出率77.5%),而孵育组仅检出46份(检出率57.5%),故振荡孵育法对弱阳性标本的检出率明显高于孵育法的ELISA.结论 振荡孵育应用于HBsAg ELISA酶反应中可明显提高检测的灵敏度.     

同型半胱氨酸检测方法性能评价研究

目的对比高效液相色谱法(HPLC)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、循环酶法与酶比色法在同型半胱氨酸检测中的性能,了解和评价同型半胱氨酸检测方法。方法对HPLC、ELISA、循环酶法与酶比色法4种检测方法的线性范围、准确度、精密度以及抗干扰能力等指标进行分析。结果 HPLC回归方程为Y=1.21×10~5 X-7.00×10~4,R~2=0.999 8;ELISA回归方程为Y=0.991 X+0.603 1,R~2=0.999 6;循环酶法回归方程为Y=0.998 X+0.605 5,R~2=0.996;酶比色法回归方程为Y=0.993 X+0.605 7,R~2=0.999 4。HPLC、ELISA、循环酶法、酶比色法试剂实际测试精密度变异较小。胆红素(200mg/L)、乳糜微粒(0.5%)、血红蛋白(1.5g/L)、抗坏血酸(300mg/L)均不会对HPLC、ELISA、循环酶法与酶比色法造成干扰。HPLC平均回收率为91.4%;ELISA平均回收率为86.0%;循环酶法平均回收率为89.9%;酶比色法平均回收率为80.2%。4种方法测定结果具有较好一致性。结论在同型半胱氨酸检测中,4种方法线性范围有所不同,精密度较佳,回收率较高,且有着较强的抗干扰能力。     

振动态ELISA可抑制钩状效应

酶联免疫吸附实验(ELISA)是目前应用较为广泛的一种免疫学方法,献血者体检 HBsAg、抗-HIV、抗-HCV均为ELISA方法检测.钩状效应(hook effect)是ELISA方法中因被测样本中抗原或抗体浓度过高而出现假阴性的带现象(zone phenomenon).笔者选择了15例因表面抗原浓度过高而引起后带(Post Zone)反应的标本,进行了振动态ELISA,现介绍如下.     

Microlab FAME全自动酶免分析仪检测的影响因素及质量控制

正酶联免疫吸附试验(ELISA)是血站血液筛查传染病项目的常用检测方法。由于血站ELISA检测对设备要求通量大,一般均采用全自动检测设备进行检测。费米(FAME)全自动酶免分析仪是瑞士哈美顿公司公司生产的完全自动化的酶标处理系统,1997获得美国FDA许可,用于血站筛查实验室[1]。     

化学发光酶免疫分析法及ELISA检测抗-HCV的结果比较

目的对比化学发光酶免疫分析法及酶联免疫吸附试验(ELISA)用于丙型肝炎抗体检测的效果。方法选取丙型肝炎患者140例,抽取血液标本后分别进行丙型肝炎病毒(HCV)相关抗体的化学发光酶免疫分析法及ELISA法检测。结果化学发光酶免疫分析法检出抗-HCV阳性的检出率为98.6%,高于ELISA法的检出率(94.3%),差异有统计学意义(P0.05)。化学发光酶免疫分析法对于抗AMA-M2抗体、抗3E抗体、抗SP100抗体、抗PML抗体、抗GP210抗体的检测阳性率分别为80.0%、73.6%、37.9%、55.7%和47.9%,而ELISA法检测结果分别为12.9%、12.9%、13.6%、10.7%和6.4%,差异均有统计学意义(P0.05)。结论相对于ELISA法,化学发光酶免疫分析法在丙型肝炎中的应用有较高的检出阳性率,对于相关抗体检测有较高的敏感性,值得推广应用。     

梅毒螺旋体两种检测方法的比较

目的为了探讨金标法检测梅毒螺旋体的敏感性。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法对本院1189例临床样本进行初筛试验,再对初筛结果阳性的30例血清进行金标法梅毒螺旋体检验。结果酶联免疫吸附试验(ELISA)阳性的30例样本中,金标法阳性28例,二者符合率为93.3%。结论ELISA法和金标法在敏感性方面有较高的符合率,适合于标本量较少的基层医院和急诊检验。     

酶免疫测定进展

1971年瑞典斯德哥尔摩大学的Engvall和Perlmann[1]与荷兰Organon Tecknika公司的van Weemen和Schuurs[2]分别发表了首创的以酶作为标记物的免疫测定(enzyme immunoassay,EIA);瑞典学者称之为"酶联免疫吸附剂测定"(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA),因为测定中应用了固相吸附剂以便于分离"游离的"和"结合的"酶结合物.1974年Voller等在《世界卫生组织公报》上发表了以实验室中通用的8×12孔塑料微量滴定板(简称微板)为固相的ELISA方法检测血清中疟疾抗体的报告等[3],展示了ELISA在医学检验中广阔的应用前景.其后世界卫生组织在各国举办了"ELISA讲习班".1978年在上海和北京的讲习班上,Voller和Bidwell作了讲演.这一活动促进了国内开展ELISA的研究和应用.1983年用ELISA检测乙型肝炎标志物的研究报告发表[4],推动了国产ELISA试剂的大规模生产和广泛的临床应用.     

85例丙型肝炎病毒抗体弱反应的比较分析

目的比较酶联免疫吸附试验(ELISA)法与微粒子酶免疫技术(MEIA)两种方法对同一种样本检测结果的一致性。方法采用ELISA法检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV),对吸光度值/临界值(S/CO)比值在1.0～3.5之间的弱反应样本,应用MEIA进行复检。结果在85例复检的样本中,有63例(占74.1%)呈阴性反应(荧光速率值小于1.0),与ELISA法比较差异有统计学意义。结论ELISA法检测抗-HCV弱反应存在明显的假阳性,对这种弱反应结果应采用多方法和多试剂进一步做确认检查,以防止漏诊和误诊。     

类风湿因子对ELISA检测乙型肝炎表面抗原的影响

目的 研究类风湿因子(RF)对酶联免疫法(ELISA)检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的影响,为临床检测中出现假阳性结果 的分析提供依据.方法 RF 采用速率散射免疫比浊法,HBsAg先后采用ELISA法和微粒子酶免疫分析法(MEIA).结果 RF 阳性血清经ELISA法检测HBsAg 阳性率为43.3%.通过ELISA法检测出HBsAg 阳性的血清经MEIA检测HBsAg 阳性率为0;RF浓度与ELISA法测定 HBsAg 的OD 值间无显著相关性(0.1500 IU/mL)干扰ELISA法检测HBsAg,产生较明显假阳性,但RF 浓度与是否产生假阳性并无显著相关性.     

抗-HCV ELISA试剂在全自动酶免分析系统的应用

FAME全自动酶联免疫分析系统(下简称费米系统)是将ELISA实验中试剂分配、保温、洗板、酶标读板等实验步骤由专业控制软件编程通过计算机来对费米系统进行全自动的操作控制.它避免因手工操作带来的人为误差所造成的重复性不佳问题,可提高ELISA实验结果的精密度.笔者发现国产ELISA 试剂盒在费米系统上应用时必须结合仪器设计特性,充分考虑试剂盒的实验条件才能获得满意的实验结果.