腺垂体细胞培养及低温冻存研究

垂体移植目前依就是解决垂体功能低下的有效治疗手段.垂体细胞的培养及低温冻存是垂体移植研究中的基础.本文对腺垂体培养的发展过程及目前的现状进行了简要的回顾和概括,对低温冻存的理论发展过程做过综述,同时从腺垂体移植发展的角度对垂体细胞培养及垂体移植工作的意义前景做了展望.     

培养鼠腺垂体细胞的形态和分泌功能实验研究

目的利用细胞培养技术,对大鼠腺垂体细胞进行体外培养,进而确定腺垂体细胞在体外生长的最佳时机,为垂体移植细胞库的建立以及垂体移植的应用提供实验依据.方法取大鼠腺垂体细胞做体外培养,动态观察培养细胞的生长状态,通过RIA和免疫化学染色技术,评价体外培养的垂体细胞的功能状态.结果培养液中GH、LH的含量在培养的第7天最高,为9.49±2.21(ng/ml)和7.83±1.51(ng/ml),以后逐渐下降.免疫化学染色证实分散培养后的垂体细胞中有多种激素细胞的生长.结论培养至第7天的腺垂体细胞分泌GH、LH的功能状态为最佳,提示适于进行移植或保存.     

培养鼠腺垂体细胞的形态和分泌功能实验研究

目的　利用细胞培养技术 ,对大鼠腺垂体细胞进行体外培养 ,进而确定腺垂体细胞在体外生长的最佳时机 ,为垂体移植细胞库的建立以及垂体移植的应用提供实验依据 .方法　取大鼠腺垂体细胞做体外培养 ,动态观察培养细胞的生长状态 ,通过RIA和免疫化学染色技术 ,评价体外培养的垂体细胞的功能状态 .结果　培养液中GH、LH的含量在培养的第 7天最高 ,为 9.4 9± 2 .2 1(ng/ml)和 7.83± 1.5 1(ng/ml) ,以后逐渐下降 .免疫化学染色证实分散培养后的垂体细胞中有多种激素细胞的生长 .结论　培养至第 7天的腺垂体细胞分泌GH、LH的功能状态为最佳 ,提示适于进行移植或保存     

器官冻存与移植排斥反应

液氮超低温冻存器官不仅能达到长期保存的目的 ,而且能杀伤某些低温敏感免疫细胞及组织细胞 ,显著降低移植后免疫排斥反应。本文以冻存胰岛、心脏瓣膜和皮肤为例 ,阐述器官冻存对移植排斥反应的影响。     

低温冻存对人脐血淋巴细胞免疫活性的影响

为了解脐血淋巴细胞免疫活性的特点,供临床脐血移植参考。本文工作采用单向混合淋巴细胞培养(MLC)的方法对成人外周血、脐血及低温冻存(-196℃)3小时后的脐血进行了研究,比较了脐血与成人外周血和脐血低温冻存前后淋巴细胞免疫原性(?)对异体抗原反应性的区别。以20份外周血和20份冻存前后的脐血淋巴细胞分别与作为刺激细胞的10份“O”     

垂体腺瘤细胞培养的实验研究

目的 通过对垂体腺瘤细胞体外培养以垂体腺瘤细胞为移植物供体进行颅外移植,补充垂体功能不足及为腺垂体移植细胞库的建立奠定基础。方法 利用术中切除的垂体腺瘤组织进行了体外培养,并通过染色和放射免疫测定技术,评价体外培养的垂体腺瘤组织的功能状态,寻找其功能最佳间期的规律。结果 没有NGF和HRP介入的情况下,垂体腺瘤细胞的形态和功能状态在培养的第6天为最佳。结论 体外培养的垂体腺瘤细胞仍具有分泌激素的功能,为以垂体腺瘤细胞为移植物供体进行颅外移植的研究奠定了实验基础。     

垂体腺瘤细胞培养的实验研究

目的通过对垂体腺瘤细胞体外培养以垂体腺瘤细胞为移植物供体进行颅外移植,补充垂体功能不足及为腺垂体移植细胞库的建立奠定基础. 方法利用术中切除的垂体腺瘤组织进行了体外培养,并通过染色和放射免疫测定技术,评价体外培养的垂体腺瘤组织的功能状态,寻找其功能最佳间期的规律. 结果没有NGF和HRP介入的情况下,垂体腺瘤细胞的形态和功能状态在培养的第6天为最佳. 结论体外培养的垂体腺瘤细胞仍具有分泌激素的功能,为以垂体腺瘤细胞为移植物供体进行颅外移植的研究奠定了实验基础.     

深低温冻存时限对成骨细胞生物学特性影响的实验研究

探讨深低温冻存不同时限后复苏对成骨细胞生物学特性的影响。取新生SD大鼠颅骨,胶原酶消化法培养成骨细胞。采用活细胞数、成骨细胞增殖功能、碱性磷酸酶(ALP)活性的测定等对深低温冻存1、3、6个月后复苏的成骨细胞和新鲜培养的细胞进行了比较。发现各组成骨细胞在细胞增殖功能、碱性磷酸酶活性方面均无显著性差异(P>0.05)。深低温冻存6个月后复苏组成骨细胞活细胞数与冻存1、3月后复苏组及新鲜培养的细胞组相比,活细胞数降低,有显著性差异(P<0.05),深低温冻存1、3个月后复苏组的活细胞数与新鲜培养的细胞组相比无显著性差异(P>0.05)。实验结果表明:较长时间深低温冻存能减少复苏后成骨细胞的活细胞数。但经深低温冻存后复苏的细胞仍保持成骨细胞原有的生物学特性。     

腺垂体发育调控分子的研究进展

腺垂体内不同类型的激素分泌细胞均来自于共同的垂体原基，由一种或几种干细胞分化而来，这些激素分泌细胞在多种内源性和外源性的信号分子以及它们所诱导激活的转录因子的作用下，按照精确的时间和空间顺序表达。了解胚胎发育期间调控腺垂体发育的分子机制，对将来在体外进行垂体干细胞的分离、培养以及对不同类型的激素分泌细胞进行定向诱导分化，从而获得足够的移植物来源、满足细胞移植的个体化需要具有重要的意义。     

不同冻存方法对羊膜超微结构和上皮细胞活性的影响（英文）

背景:羊膜冻存方法众多,对羊膜超微结构和生物活性的影响不一,目前尚无有效的冻存方法。目的:比较不同冻存方法对羊膜超微结构和活性影响的研究,探寻更为理想的冻存方法。方法:将新鲜羊膜采用深低温和玻璃化冻存法保存,分别于冻存后3,6个月复苏羊膜,以新鲜羊膜组织为对照组,比较羊膜的超微结构差异、羊膜上皮细胞离体氧分压和乳酸脱氢酶活性。结果与结论:不同冻存方法保存的羊膜超微结构有明显改变,但玻璃化冻存对其超微结构的影响相对较小;与新鲜羊膜相比较,深低温冻存组3,6个月羊膜的乳酸脱氢酶灰度值和氧分压明显降低(P0.05);玻璃化冻存组6个月后的羊膜乳酸脱氢酶灰度值和氧分压明显降低(P0.05),而玻璃化冻存组3个月后的上述检测结果与新鲜羊膜相比差异无显著性意义(P0.05)。结果证实,羊膜的玻璃化冻存技术优于深低温冻存技术,不仅维持了羊膜的超微结构,而且保持了羊膜上皮细胞的功能和活性。     

快速深低温冻存对新生大鼠卵巢组织免疫原性的影响

目的:探讨快速冻存法冻存新生大鼠卵巢器官的效果,以及冻存对卵巢抗原性的影响。方法:采用快速冻存法冻存出生1 d的鼠(新生鼠)卵巢组织,移植入同系去卵巢成年雌性大鼠的肾被膜下,利用免疫组织化学方法及Western blot检测观察移植物内CD8 和CD4 T淋巴细胞的浸润情况。结果:新生鼠卵巢组织移植后动情周期恢复率(66.67%)低于新鲜移植组(90.51%),但无显著性差异。各移植物内毛细血管丰富;有正常发育阶段的各级卵泡、间质腺及闭锁卵泡;CD8 和CD4 阳性细胞计数值及其蛋白表达明显低于新鲜移植组。结论:快速冻存法可有效地冻存新生鼠的卵巢;冻存降低新生鼠卵巢组织抗原性。     

血管冷冻保护剂的临床应用

背景：冷冻保存的同种异体血管在血管移植修复中蕴藏着广泛的临床应用前景。深低温冻存是实现同种异体血管长期保存的常用方法。在低温保存过程中,有效的冷冻保护剂对于防止血管组织低温损伤和保持细胞活力至关重要,但对于最佳保护剂的选择并未达成共识。目的：总结近年来各大血管组织库中使用的冷冻保护剂,比较其临床应用效果,以期为将来深低温冻存同种异体血管的应用提供参考。方法：由第一作者检索中国知网、万方、PubMed和Google Scholar数据库2015-2022年发表的相关文献,中文检索词为“同种异体血管,动脉,静脉,深低温冻存,冷冻保护剂,冷冻损伤,血管移植”,英文检索关键词为“cryopreservation,blood vessels,vascular allografts,arteries,veins,cryoinjury,cryoprotectants,cryoprotective agents”,检索国内外有关应用于临床的血管冷冻保护剂及其近远期结果的相关文献,最终选取54篇文献进行综述。结果与结论：(1)在血管的深低温冻存研究中,常使用包含渗透性和非渗透性的冷冻保护剂组合,通过程序...     

低温冻存对成人骨髓间质干细胞生物学特性的影响

目的：研究低温冻存对骨髓间质干细胞（MSCs）其生物学特性的影响，探讨MSCs理想的保存方法。 方法： 体外分离培养、扩增正常成人骨髓MSCs,在5％DMSO-30%FBS-DMEM冻存保护剂条件下，分别采用二步法和程控降温冻存方法低温保存3月，以台盼蓝拒染回收率(TBR)、MSCs生长曲线、MSCs表面抗原表达以及其多向分化能力检测，比较两种不同的冻存方法对MSCs生物学特性的影响。 结果： 程控降温冻存后MSCs活力优于二步法［TBR（87.67±2.52）％ vs （79.00±3.61）％，P<0.05］。多因素方差分析显示MSCs代数和冻存方法均是影响冻存后MSCs增殖的重要因素。两种冻存方法中P8代细胞的增殖能力明显劣于P1代细胞（P<0.01）或P4代细胞（P<0.01）。MSCs程控冻存后增殖能力与冻存前无差异（P<0.05），优于二步法冻存后的增殖能力（P<0.05）。 程控冻存后MSCs稳定表达CD29、CD44、CD166（与冻存前比较，P>0.05）。而二步法冻存后细胞CD29表达下降（与冻存前比较，P<0.05）。两种冻存方法对MSCs向成骨细胞、脂肪细胞和神经元细胞分化没有显著影响，与冻存前比较，P>0.05。 结论： 采用5％DMSO-30%FBS-DMEM冻存保护液和程控降温的冻存体系，可较完整保持MSCs生物学特性，是深低温保存MSCs的理想方案。     

微囊化细胞冻存的研究进展

背景:细胞微囊化为细胞大规模、高活性体外培养及长期存储提供了新的途径,低温保存是目前保存细胞的重要方法,技术日新月异,复苏细胞在临床和基础研究中的应用越来越多。目的:分析近年来微囊化细胞冻存的相关研究,对微囊化细胞冻存技术的发展作一总结。方法:以"微囊,冻存"为检索词,检索中国期刊网(1979/2010)及维普数据库(1989/2010),限定文章语言种类为中文;以"Cryopreservation,Microencapsule"为检索词,检索PubMed数据库(1979/2010),限定文章语言种类为English。纳入含有微囊化细胞冻存的研究,排除其他形式细胞冻存的研究,结果以各种细胞微囊化后进行冻存处理后产生作用为指标,共检索到43篇文献。结果与结论:随着生物人工肝与以及其他细胞移植研究的深入,对微囊化细胞的需要量将显著增加,微囊化细胞的低温保存技术已成为保正其顺利应用的关键技术之一。目前,微囊化细胞的低温保存技术已经开展了不少研究,有多项研究结果表明复苏后微囊化细胞的存活率和生物学功能都能保持较好的水平,但相关机制仍未完全阐清,各种冻存方法还需要优化。     

人胚胎期垂体的形态学研究

将各胚胎期垂体分别测量后速入Bouin或Helly液固定,石蜡包埋,将连续切片进行特殊染色,在光镜下观察并记述了腺垂体和神经垂体的早期发生过程及内部构筑。我们将腺垂体的发生过程分为原基变形期、增生期和增生分化期。实验中记录了各种阳性细胞出现时间及百分值,并且將各种数据进行了统计学处理。文末对垂体发生和分化的动力学问题进行了讨论。     

不同组织冻存体系对牙周膜干细胞体外扩增的影响

背景：冻存是保证干细胞移植治疗的关键步骤之一。传统的冻存是将细胞直接置于冻存液中进行保存,然而冻存液中二甲基亚砜虽能减少细胞复苏过程中冰晶对细胞膜产生的机械性损伤,但同时又对细胞具有毒性作用,直接影响细胞生存状态,不利于临床移植治疗。 目的：寻找适宜牙周膜干细胞体外扩增的牙周周组织冻存的最佳方案。 方法：收集健康人牙,刮取牙周组织后将其平均分为3等份,随机分为新鲜组、5%二甲基亚砜组和10%二甲基亚砜组,后2组分别以体积分数5%和10%二甲基亚砜添加冻存1个月后提取牙周膜干细胞。新鲜组直接提取牙周膜干细胞。 结果与结论：5%二甲基亚砜组原代细胞游出组织团块所需时间和细胞收获量虽不及新鲜培养组,但却明显优于10%二甲基亚砜组(P < 0.05)。新鲜组、5%二甲基亚砜组和10%二甲基亚砜组第1代牙周膜干细胞克隆形成率、活细胞比率、第3代牙周膜干细胞BrdU细胞增殖能力、MTT细胞生长曲线和牙周膜干细胞表面标志物表达差异没有显著性意义(P > 0.05)。提示5%二甲基亚砜添加冻存体系不仅能比10%二甲基亚砜添加的普通冻存体系明显缩短牙周膜干细胞体外扩增所需时间,增加细胞收获量同时还能保持细胞基本生物学特性,降低二甲基亚砜的总体用量和其在反复冻存复苏细胞过程中对细胞造成的直接损伤,为未来更加安全的实施临床移植治疗提供了保障,是供体组织储存新的选择。     

冻存卵巢移植后功能及其影响因素

卵巢组织缺失、发育不全或其功能衰退将影响女性患者的生理功能 ,随器官移植及冷冻保存技术发展 ,冻存卵巢组织移植为年轻女性患者恢复内分泌及生育能力提供了可能。多种动物实验表明 ,冻存卵巢移植后其功能可恢复 ,并能保持较长期功能。移植后卵巢组织的功能恢复与多种因素有关 ,同时此项技术应用于临床仍有较多问题须待解决。     

精原干细胞治疗非梗阻性无精子症的前景展望

非梗阻性无精子症的治疗是生殖医学领域的一个难题,目前,非梗阻性无精子症的诊疗大都采用精子库提供的精子而满足当父亲的愿望。精原干细胞是哺乳动物成体睾丸生精上皮内唯一可复制的多潜能二倍体细胞,它能在体外分离、纯化、培养、冻存及同体或异体移植。近年来,随着精原干细胞移植技术的发展,将为这一难题探索出一种新的治疗方法。本文对精原干细胞的体外培养和移植进行综述及展望。     

腺垂体发育调控分子的研究进展

腺垂体内不同类型的激素分泌细胞均来自于共同的垂体原基,由一种或几种干细胞分化而 来,这些激素分泌细胞在多种内源性和外源性的信号分子以及它们所诱导激活的转录因子的作用下, 按照精确的时间和空间顺序表达。了解胚胎发育期间调控腺垂体发育的分子机制,对将来在体外进行 垂体干细胞的分离、培养以及对不同类型的激素分泌细胞进行定向诱导分化,从而获得足够的移植物 来源、满足细胞移植的个体化需要具有重要的意义。     

不同冻存方法对羊膜超微结构和上皮细胞活性的影响

背景：羊膜冻存方法众多,对羊膜超微结构和生物活性的影响不一,目前尚无有效的冻存方法。 目的：比较不同冻存方法对羊膜超微结构和活性影响的研究,探寻更为理想的冻存方法。 方法：将新鲜羊膜采用深低温和玻璃化冻存法保存,分别于冻存后3,6个月复苏羊膜,以新鲜羊膜组织为对照组,比较羊膜的超微结构差异、羊膜上皮细胞离体氧分压和乳酸脱氢酶活性。 结果与结论：不同冻存方法保存的羊膜超微结构有明显改变,但玻璃化冻存对其超微结构的影响相对较小;与新鲜羊膜相比较,深低温冻存组3,6个月羊膜的乳酸脱氢酶灰度值和氧分压明显降低(P < 0.05);玻璃化冻存组6个月后的羊膜乳酸脱氢酶灰度值和氧分压明显降低(P < 0.05),而玻璃化冻存组3个月后的上述检测结果与新鲜羊膜相比差异无显著性意义(P > 0.05)。结果证实,羊膜的玻璃化冻存技术优于深低温冻存技术,不仅维持了羊膜的超微结构,而且保持了羊膜上皮细胞的功能和活性。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：