改变细胞的表面特征

据英国的免疫学家Harrogate报道，一种叫做tapasin的蛋白质能影响作为细胞表面标志的某种肽的选择性，这种肽能使免疫系统辨认自身或异已物质，该发现可应用于自身免疫病或恶性肿瘤的治疗。     

胃癌相关抗原表位模拟短肽的筛选

目的：筛选能模拟胃癌相关抗原表位的功能短肽。方法：利用离子交换层析，对抗胃癌相关抗原单克隆抗体(mAb)进行纯化，并以此mAb为靶标，将其包被于ELISA板上，以噬菌体随机12肽库对其进行3轮亲和筛选。结果：从噬菌体随机12肽库中，筛选到12个噬菌体阳性克隆：结论：获得了具有模拟胃癌相关抗原表位的阳性噬菌体克隆，且有共同的基序。     

表面展示技术研究进展

表面展示技术（ｓｕｒｆａｃｅｄｉｓｐｌａｙｔｅｃｈｎｌｏｇｅ）是近年来发展起来的一种将外源肽或蛋白质与噬菌体或细菌表面特定量融合并展示于其表面，构建蛋白质或多肽文库，并从中筛选所感兴趣的特异性蛋白质，多肽或抗体的基因工程高新技术，这一技术在抗体的制备，蛋白质间相互作用的研究，活菌苗和生物催化剂发展等方面有其广泛的应用潜力和独特的优点。     

噬菌体表面展示技术进展

噬菌体表面展示技术(Phage Display Techniques,PDT)是近年发展起来的,将外源肽或蛋白基因与噬菌体表面特定蛋白基因在其表面进行融合表达的新技术。可用来构建肽文库、抗体库,并从中筛选出有价值的活性肽或蛋白。随着该技术的不断发展和完善,已在许多领域得到了广泛应用。     

大鼠脊髓后角内甲啡肽标记及非标记结构与C纤维间关系的免疫电镜研究

向大鼠蛛网膜下腔注射辣椒素导致一级传入纤维中的Ｃ纤维变性后，用免疫电镜技术在大鼠脊髓后角浅层内观察到：（１）大量含甲啡肽的轴突终末与未标记树突（或棘）形成对称性（少数为非对称性）突触；（２）含甲啡肽的轴突终未与变性终末共同会聚于同一甲啡肽阴性树突；（３）少量含甲啡肽轴突终末与变性终末间形成轴－轴突触或接触；（４）变性终末与含甲啡肽的树突形成非对称性轴－树突触；（５）甲啡肽阴性轴突终末与变性终末会聚于同一未标记树突并与变性终末间形成轴－轴突触或接触．以上结果表明，在脊髓后角内，脑啡肽除主要以突触后抑制方式调节Ｃ纤维传入外，也可通过轴－轴突触或接触对Ｃ纤维传入进行突触前抑制；非甲啡肽能神经元也能对Ｃ纤维传入进行突出后又突触前抑制．此外，Ｃ纤维在脊髓后角内可通过兴奋性轴－树突触直接影响甲啡肽能中间神经元的活性．     

生物活性短肽RGD在PET表面接枝方法的研究

在高分子材料表面共价引入人工合成的精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸三肽(Arg-Gly-Asp peptides，RGD)，以达到让内皮细胞与之特异结合并更加牢固的目的。实验用紫外辐照法将活性基团羧基(-COOH)接枝到聚对苯二甲酸乙二醇酯(Poly(ethylene terephtalate)，PET)膜的表面，将液相合成的RGD三肽耦合接枝到处理过的材料表面，光电子能谱对以羧基为活性基团的接肽反应结果进行分析，光学、电子显微镜观察内皮细胞生长情况以检测接枝短肽的生物活性。内皮细胞生长实验结果表明，成功接枝的RGD序列对材料内皮细胞种植起到了促进作用。本实验成功运用紫外接枝与化学耦合，将生物活性短肽RGD接枝到膜表面，探索了一种新的接枝生物活性短肽的方法。     

抗胃癌单克隆抗体识别的噬菌体呈现肽与天然抗原的关系

噬菌体呈现的随机肽库已成功地用于筛选Ｂ细胞或Ｔ细胞表位。为进一步研究胃癌相关抗原与相应单克隆抗体（ｍＡｂ）结合的结构基序及其相互作用,我所通过两株胃癌ｍＡｂＭＧ７和ＭＧｂ２筛选噬菌体呈现的随机九肽库,获得一些可与ｍＡｂ结合的噬菌体呈现肽。我们采用竞争抑制实验,研究了这些肽与天然胃癌相关抗原的关系。１材料和方法１．１材料胃癌ｍＡｂＭＧ７和ＭＧｂ２由本所研制〔１,２〕,通过筛选噬菌体呈现的随机九肽库〔３,４〕,获得可与相应ｍＡｂ结合的噬菌体呈现肽〔５,６〕。１．２方法１．２．１噬菌体呈现肽竞争抑制试验将纯…     

含Arg-Gly-Asp肽与仿生PLGA-(ASP-PEG)材料结合的实验研究

设计合成含Arg-Gly-Asp[Arg(R)-精氨酸,Gly(G)-甘氨酸,Asp(D)-天冬氨酸]的非病毒基因载体的肽(K16-GRGDSPC) (K-赖氨酸,S-丝氨酸,P-脯氨酸,C-半胱氨酸),用其作材料聚(丙交酯-co-乙交酯)-(天冬氨酸-聚乙二醇)交替预聚物[PLGA-(ASP-PEG)]的表面修饰.合成K16-GRGDSPC, 将PLGA-(ASP-PEG)制成A、B、C三块薄片.薄片 A 、B与交联剂反应,反应后的薄片A再与肽反应,薄片 C作为对照.质谱仪(MS)、高效液相色谱分析仪(HPLC)检测肽的分子量及纯度;x线光电子能谱法(XPS)检测材料表面硫元素;分光光度仪检测残液未反应肽含量.HPLC检测肽的纯度为94.13%,MS检测肽分子量为2741.26.XPS检测改性薄片A中硫元素结合能为164 eV,碳、硫元素的含量比值(C/S)为99.746:0.1014;反应后薄片 B中硫元素结合能为162 eV与 164 eV,C/S为99.574:0.4255; 薄片 C中无硫元素.残液管OD值为0.069, 薄片A表面接枝肽密度为0.04 mg/mm2.提示通过交联剂可将所合成的肽K16-GRGDSPC结合到仿生材料PLGA-(ASP-PEG)表面.     

大鼠隔核中肽能神经元的分布与形态测量

用免疫组织化学方法研究了大鼠隔核各亚核中降钙素基因相关肽，血管活性肠肽，生长抑素，神经降压肽，促皮质释放因子，Ｐ物质，亮氨酸－脑腓肽，黄体生成素释放因子，甘丙肽，胆囊收缩素，促甲状腺素释放因子，甲硫氨酸－脑腓肽，等１２种肽能神经元的分布，并用图象分析仪对肽能神经元的面积，周长，最大径，最小径和灰度进行了测量。肽能神经元主要分布在外侧隔核中间部，内侧隔核；而隔伞核及三角隔核中较少。图象分析仪测量表明     

动脉吻合区肽能神经变化的实验研究

目的：了解小血管吻合区的神经变化。方法：雄性ＳＤ大鼠１１只，在吻合大鼠隐动脉或剥除长约１０ｍｍ的隐动脉外膜后，用ＡＢＣ法作隐动脉手术区的ＮＰＹ、ＣＧＰＲ的免疫组织化学反应。结果：术后３ｄ动脉吻合区或单纯动脉外膜剥除区未见上述两类肽能神经。术后１４ｄ肽能神经已由术区两端进入术区。术后３０ｄ术区肽能神经的数量与形态与正常相似。结论：吻合小血管时剥除外膜可损及局部肽能神经，其恢复时间较长。     

恶性肿瘤患者血清C肽水平的变化及意义

C肽（C—peptide，C—P）和胰岛素（insulin，INS）是由胰岛素原裂解而成，因此，临床上血液中C肽主要用于鉴别血清胰岛素的来源及B细胞的功能。近年来C肽和胰岛素作为鉴别诊断1型、2型糖尿病的重要指标在临床上也得到广泛应用。但由于异位激素分泌作用的存在，一些非内分泌肿瘤能产生和分泌激素或激素类物质，由此可能导致肿瘤患者体内C肽水平的变化。本文通过对105例不同恶性肿瘤患者进行血清C肽的检测，以探讨恶性肿瘤患者血清C肽水平的变化规律及意义。     

人胚胎期小肠六种肽能神经发生的研究

采用免疫组织化学ＰＡＰ法，对５３例不同胎龄的人胚胎小肠的亮氨酸脑啡肽（Ｌ－Ｅｎｋ）、Ｐ物质（ＳＰ）、神经肽Ｙ（ＮＰＹ）、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）、血管活性肠肽（ＶＩＰ）和甘丙素（ＧＡＬ）等６种肽能神经的发生发育过程进行观察，并与ＡＣｈ能神经和膀胱的肽能神经的发生做了对比研究。结果表明，人胚胎小肠神经中ＡＣｈ能神经发生早于肽能神经；同一个体不同器官肽能神经并非同时发生。本文观察到的小肠肽能神经的     

从噬菌体短肽库中筛选单克隆抗体识别的抗原表位

将随机合成的寡聚核苷酸重组到噬菌体表面单价表达载体，构建了噬菌体随机八肽库。以抗原识别性明确的单克隆抗体９Ｅ１０固相化，对噬菌体短肽库进行了４～５轮“吸附－洗脱－扩增”的筛选，任选多个所获克隆进行ＥＬＩＳＡ检测。发现第４轮后６／２２个克隆可与９Ｅ１０结合，第５轮后１０／１０可与９Ｅ１０结合，此结合反应可被９Ｅ１０所针对的十肽抗原以及游离的９Ｅ１０特异性抑制。对所获阳性克隆进行ＤＮＡ序列测定发现，它们的序列可分为两种，其中一种序列与ｃ－ｍｙｃ十肽具有同源序列ＩＳＥｘｘＬ，而另一种的序列则完全不同。证实噬菌体表面单价表达体系用于构建噬菌体短肽库的有效性，为进一步筛选其它的具有高亲和力的特异性短肽打下了基础。     

靶向性磁共振造影剂在肿瘤分子影像学中的应用

分子影像学即应用影像学的方法直接或间接地监测和记录一些与生物化学、生物学、诊断学和治疗学相关的分子或细胞的分布与变化情况的科学。利用分子影像技术检测细胞表面受体的上调水平，能有效地监测疾病的进展并进行分期。在分子影像学的最初阶段，常用具有放射性的抗体和短肽等分子探针，采用核医学成像技术如单光子发射计算机断层摄影术（SPECT）、正电子发射断层摄影术（PET）等进行成像。而MR分子成像技术具有分辨力高、可获得三维解剖结构和生理信息等优点，     

CTL对同种异体靶细胞杀伤作用的实验研究

目的：研究特异性CTL杀伤的效应与HLA型别之间的关系。方法：用已知型别的EB病毒转化的B淋巴母样细胞（Epstein-Barr-transformed B lymphoblastoid cell line,EBV-LCL）与同种异体外周血单个核细胞（PBMC）共培养，激活同种异体抗原特异性细胞毒性T细胞（cytotoxicity T cell,CTL），然后利用同位素释放法观察CTL对HLA－I类表型不同的EBV－LCL的杀伤活性。结果：用EBV－LCL－1刺激自身PBMC－1所诱翌的CTL－1a，只能杀伤EBV－LCL－1，而不能杀伤HLA－I类表型不同的EBV－LCL－2；但用EBV－LCL－2刺激PBMC－1所诱导的CTL－1b，却能有效杀伤HLA－I类表型不同的EBV－LCL－2。结论：①MHC表型不同的免疫细胞之间可以发生相互作用；②TCR既不单独识别靶细胞表面的抗原肽，也不直接识别靶细胞表面的MHC分子（MHC特异性抗 原决定簇），而是识别MHC－抗原肽复合物的表达综合信息，后者可能是由MHC－抗原肽复合物表面的空间构象、电荷性质及其分布等信息所构成；③所谓CTL的特异性杀伤作用，是MHC－抗原肽复合物表面信息激活该信息性T细胞克隆的结果。     

MUC1黏蛋白模拟表位的筛选和鉴定

目的从噬菌体表面展示的随机12肽库中筛选出MUC1抗原的模拟表位。方法通过生物淘洗,获得阳性噬菌体克隆,通过基因测序,推导氨基酸序列,同MUC1核心序列比较,选出2个模拟表位,进行抗原表位预测和竞争抑制实验。结果筛选到的两个模拟表位与MUC1单克隆抗体的亲和力均较强,能特异性抑制MUC1的抗原抗体结合,且包含有与某些MHCⅠ类分子较好结合的位点。结论从噬菌体12肽库中筛选出两个MUC1的模拟表位可以作为靶向MUC1肿瘤疫苗的候选肽。     

特异性HPV16E7 CTL表位肽-MHC I复合物单抗的制备及鉴定

目的制备抗HPV16E7CTL表位（49-57）-MHC Ⅰ类分子复合物的特异性单克隆抗体，并对其敏感性、特异性及亲和力进行鉴定，为今后研究HPV16感染后机体对病毒蛋白的免疫呈递途径研究奠定基础。方法制备高纯度的HPV16E7 CTL表位（49．57）肽RAHYNIVTF，将其与TAP缺陷的RMA-S细胞孵育后免疫BALB／c小鼠，常规收集小鼠脾细胞与SP2／0细胞融合，筛选杂交瘤细胞株的阳性克隆，并对其进行一系列鉴定。结果筛选出的杂交瘤细胞株能稳定分泌抗HPV16E7（49．57）-MHC Ⅰ类分子复合物的单抗，不仅能与装载有RAHYNIVTF的TAP缺陷的RMA-S细胞结合，也能与具有内源性抗原处理能力的RMA细胞结合，但不能与装载有类似变异肽（进行氨基置换后的RAHYNIVTF）或乙肝病毒对照肽的RMA-S或RMA细胞反应，具有良好的敏感性、特异性及亲和力。结论本实验制备表位肽．MHC Ⅰ类复合物单抗的方法，对今后研究包括HPV16感染在内的病毒感染免疫有很大的临床应用价值。     

下丘脑室旁核神经元多重神经支配的电镜研究

为了探讨下丘脑神经内分泌的突触调控机制，本文用电镜细胞化学与免疫电镜双标技术相结合的方法，研究了大鼠下丘脑室旁核神经元的多重神经支配。即先用６－ＯＨＤＡ损毁ＣＡ能神经末梢，再于振动切片上用包埋前免疫电镜法，分别以ＤＡＢ和ＴＡＢ为呈色剂先后对肽能（ＯＴ或ＳＰ）神经元和ＧＡＢＡ神经元进行双重标记。电镜观察结果表明：在下丘脑室旁核内存在肽能（ＯＴ，ＳＰ）和氨基酸（ＧＡＢＡ）能神经元及ＣＡ神经末梢；ＯＴ神     

利用噬菌体肽库筛选汉滩病毒受体结合表位的研究

目的 确定汉滩病毒（HTNV）上可与宿主细胞受体结合的一段配基表位。方法 型特异性mAb3G1,与HTNV糖蛋白G2及核蛋白（NP）具有双结合活性，且中和效价很高。以纯化的mAb 3G1作为配基，淘筛噬菌体随机12肽库，经ELISA法鉴定后，对阳性克隆进行测序并与天然病毒蛋白G2及NP的序列进行同源性比较分析。结果 经3轮筛选，噬菌体显示有良好的富集效果。从第3轮筛选产物中，随机挑取21个克隆进行ELISA结合实验。结果显示，9个克隆与mAb 3G1有较强的特异结合活性；DNA测序结果表明，具有保守性序列模式PX（1－2）HX（0－2）H。该基序分别与G2^96YPWHTAKCH Y^105及NP^81 PTGVEPGDHLKERS^94相似。结论 从噬菌体随机肽库中，筛选到能与mAb 3G1特异性结合的一段短肽基序PX（1－2）HX（0－2）H，其与HTNV G2部分氨基酸的同源性较高，可能是与宿主细胞受体结合的表位，为进一步证实和研究HTNV的受体奠定了基础。     

人胚胎海马发育的形态学研究Ⅲ．肽能神经元的发生

利用Ｇｏｌｇｉ镀银法、免疫组织化学法，对不同胎龄人肛胎海马的肽能神经元进行了研究．发现ＳＳ阳性神经元于胚胎１９周出现，ＳＰ阳性神经元、ＮＰＹ阳性神经元于１７周出现，ＧＡＢＡ阳性神经元在１６周即已显示。随胎龄增加，肽能神经元不断增多．肽能神经元广泛分布于海马的各区，但以多形层最为多见．和锥体细胞及颗粒细胞相比，肽能神经元有下列形态特点：（１）细胞形态和大小差异较大；（２）细胞突起多少不一，出现部位也无一定规律；（３）轴突投射范围小，但分枝多．Ｇｏｌｇｉ可以同时显示多种不同肽能神经元．ＧＡＢＡ阳性细胞与ＳＳ阳性细胞在发生时间和形态特点方面具有高度一致性，说明ＳＳ可与ＧＡＢＡ共存。