双抗原夹心ELISA检测抗HCV总抗体

目的建立检测抗HCV抗体的双抗原夹心ELISA法,评价其可行性。方法将与His或GST融合表达的HCV基因工程抗原,分别用作ELISA的包被和酶标记抗原,建立用于抗HCV总抗体检测的双抗原夹心ELISA。用此方法检测1 968份临床血清标本,并以间接ELISA(北京万泰试剂)与之对照;此外,用套式RT-PCR检测部分血清的HCV RNA。结果有1 761份血清2种ELISA检测均为阴性,有190份血清均为阳性,两种方法符合率为99.1%;有17份血清的检测结果不相符,间接法阳性而本法阴性的14份,其中HCV RT-PCR阳性1份;本法阳性而间接ELISA阴性的3份,其中RT-PCR阳性2份。双抗原夹心ELISA与间接ELISA的敏感性分别为99.48%、98.96%,特异性分别为99.94%、99.27%。结论新研制的检测抗HCV总抗体的双抗原夹心ELISA具有较高的敏感性和特异性,值得作进一步的深入研究。     

ROC曲线对ELISA检测丙型肝炎抗体阳性判断值的确定和分析

目的采用受试者工作特征(ROC)曲线确定和分析2种不同酶免分析系统酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙型肝炎抗体(抗HCV)的阳性判断值(Cut-off)。方法收集202份血清,用重组免疫印迹法(RIBA)确认抗HCV,同时采用国产addcare ELISA 1100全自动酶免分析系统(简称addcare ELISA 1100)和进口TECAN+FAME组合的酶免分析系统(简称TECAN+FAME酶免系统)检测抗HCV,对吸光度(A)值绘制ROC曲线,得出ELISA检测抗HCV在本实验室的最佳Cut-off值。结果以RIBA结果为金标准,ROC曲线分析结果显示,addcare ELISA 1100检测抗HCV的最佳Cut-off值为0.448,敏感性为99.3%,特异性为96.7%,约登指数为0.960,ROC曲线下面积为0.998,TECAN+FAME酶免系统检测抗HCV的最佳Cut-off值为0.406,敏感性为99.3%,特异性为96.7%,约登指数为0.960,ROC曲线下面积为0.998。结论采用ROC曲线分析得到两种不同酶免分析系统ELISA检测抗HCV的Cut-off值分别为0.448和0.406,检测抗HCV的"灰区"分别设定为0.140~0.448和0.140~0.406,均可优化检测性能。     

部分ELISA抗-HCV阴性和阳性血清丙肝抗体分片段检测分析

目的　探讨ELISA抗 HCV检测的血液丙肝不同基因抗体的反应性和血液HCV感染的具体情况。方法留取本站抗 HCV阴性血清 1 6 8份、阳性血清 80份、可疑血清 6 2份 ,分别进行丙肝分片段检测 ,检测阳性的血清再进行HCVRT PCR检测。结果　 1 6 8份阴性血清、80份阳性血清及 6 2份可疑血清中不同基因抗体的阳性数分别为 3份、76份和 2 4份 ,HCVRT PCR的阳性结果分别为 0份、5 7份和 1 1份 ,两个以上片段检测结果阳性的血清与RT PCR结果高度符合 ,单独C区和NS3阳性的血清仍有一半以上RT PCR结果阳性 ,1例NS5阳性的血清RT PCR检测阳性。结论　HCV C和NS3抗体是抗 HCV阳性的主要血清标志 ,但NS4和NS5抗体在抗 HCV检测中也具有重要意义     

HCV核心抗原检测在血液筛查中的初步研究

目的 探讨丙型肝炎病毒核心抗原(HCV cAg)醇免检测试剂用于血液筛查的应用价值.方法 同时用抗HCV抗体和HCV cAg酶免检测试剂平行筛查血液,对HCV抗体阴性样本用Chiron Procleixa TMA系统检测HCV RNA.结果 1 762份无偿献血者样本中,抗HCV阳性12份(0.68％),HCV cAg阳性10份(0.57％),阳性检出率差异无统计学显著性意义(P＞0.05),抗HCV及HCV cAg同时阳性4份(0.23％).1 750份抗HCV阴性样本中,其中HCV cAg阳性样本6份,HCV RNA全为阴性.结论 在血液筛查中增加HCV cAg检测,对降低HCV的输血传播危险具有一定价值.     

丙型肝炎病毒不同编码区重组抗原在抗体检测中的应用

目的　探讨丙型肝炎病毒 (HCV)不同编码区重组蛋白片段的免疫反应性及其在抗体检测中的应用。方法　分别以 4种HCV单片段抗原 (C、NS3、NS4或NS5 )检测抗 HCV抗体阳性血清 ;以 4种单片段抗原的混合物 (MIX)检测抗 HCV抗体阳性血清、大学生体检血清和抗 HCV抗体阴性质控血清。结果　 90份抗 HCV抗体阳性血清中共有 75份可与一种或多种单片段抗原反应 ,阳性率分别为 70 .0 % (C)、6 1.1% (NS3)、5 2 .2 % (NS4 )、4 4 .4 % (NS5 ) ,其中仅与C、NS3、NS4和NS5一种抗原发生反应的分别有 8份、1份、2份和 3份血清标本 ;90份抗 HCV阳性血清经MIX抗原检测 ,阳性率为 83.3% (75 / 90 ) ;10 0份大学生血清和39份阴性质控血清经混合抗原检测均阴性。结论　HCV不同编码区重组蛋白片段有不同的免疫反应性 ,在发展抗 HCV抗体诊断试剂时 ,应采用各种不同编码区的混合抗原。     

蛋白芯片检测丙型肝炎病毒分片段抗体

目的用蛋白芯片的方法检测丙型肝炎病毒(HCV)分片段抗体。方法利用生物芯片技术和化学发光技术将高度纯化的抗原HCV Core、NS3、NS4、NS5以特定微阵列固定在固相载体上,用化学发光免疫法检测抗HCV Core、抗HCV NS3、抗HCV NS4和抗HCV NS5。结果174份血清中HCV抗体阳性87份,HCV抗体阴性87份,其中献血员33份,非丙型肝炎的其他肝病患者39份,非肝病者15份。87例雅培公司的AxSYM(微粒子发光)检测抗HCV阳性患者中,蛋白芯片检出阳性85份,阳性率为97.70%;在174份标本中,蛋白芯片检出阳性标本88份,其中抗HCV阳性87份,阳性率98.86%;抗HCV NS3检出49份,阳性率为55.68%;抗HCV NS4检出68份,阳性率为77.27%;抗HCV NS5检出37份,阳性率为42.05%;抗HCV Core检出69份,阳性率为78.41%。结论蛋白芯片显示较高的敏感性和特异性,具有临床实用价值。     

丙型肝炎病毒抗体酶联免疫吸附试验阳性判断值在献血员血液筛检中的意义

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)测定阳性判断值(Cut-off)“灰区”在献血员血液筛检中的应用价值。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测了503份抗-HCV ELISA测定为阴性的献血员血清(浆)标本的HCV RNA。如HCV RNA检测为阳性，则使用重组免疫印迹(RIBA)方法进一步检测抗HCV。结果在503份抗-HCV ELISA阴性献血员血清(浆)标本中，发现有5份HCV RNA阳性，其中2份标本抗HCV ELISA测定S/CO比值小于0．5，RIBA结果均为阴性。另外3份抗HCV阴性(ELISA检测的S/CO值在0．8-0．9之间)但HCV RNA为阳性的献血员血标本，进一步进行RIBA检测，发现其中2份为抗核心区(C22)单独阳性，另外1份为抗NS3单独阳性。阳性标本HCV RNA的含量测定均约为10^4拷贝/ml。结论为尽可能减少输血后HCV感染的发生，有必要将抗-HCV ELISA测定的Cut-off值下移20％，因为S/CO比值接近Cut-off值的血液有很大可能为HCV感染者。     

抗-HCV-IgG抗体及血清HCV RNA在丙型肝炎诊断中的应用价值

目的探讨抗-HCV-IgG抗体与血清HCV RNA应用于丙型肝炎诊断中的临床价值。方法选择2014年10月~2016年10月检验科收集的114例丙型肝炎待查者的血清标本,采用酶联免疫吸附法(ELISA)对抗-HCV-IgG抗体进行检测,同时采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)对HCV RNA载量进行检测。统计所有标本抗-HCV-IgG抗体、HCV RNA检测结果。结果采用ELISA检测抗-HCV-IgG抗体阳性率为25.44%(29/114);采用荧光定量PCR检测HCV RNA阳性率为27.19%(31/114)。31例HCV RNA阳性标本中抗-HCV-IgG阳性标本有26例,符合率为83.87%(26/31)。ELISA检测抗-HCV-IgG抗体阳性率与荧光定量PCR检测HCV RNA阳性率的差异无统计学意义(P0.05)。伴随HCV RNA病毒载量的不断增多,抗-HCV-IgG阳性抗体检出率明显提高;不同HCV RNA病毒载量的相邻区间的抗-HCV-IgG阳性抗体检出率比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 ELISA检测抗-HCV-IgG抗体和荧光定量PCR检测HCV RNA应用于丙型肝炎诊断均具有一定的临床价值,血清HCV RNA病毒载量是判断HCV感染的重要依据,能够有效反映病毒活动性及复制程度,然而单一的抗-HCV-IgG抗体、HCV RNA检测尚存在局限性,易出现漏诊,两者联合检测可显著提高丙型肝炎检出率,做到早诊断、早治疗,提高临床疗效。     

丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂的研制及初步应用

目的　研制丙型肝炎病毒核心抗原 (HCV cAg)ELISA检测试剂 ,用于诊断早期丙型肝炎。方法　用基因工程表达的HCV cAg ,免疫Balb/c小鼠 ,制备抗HCV cAg单克隆抗体 ,建立检测HCV cAg双抗体夹心酶联免疫吸附试验 (ELISA) ;以此检测 12 5份抗 HCV、抗 HIV、抗 TP阴性 ,但单项ALT高的献血者血浆。结果　 12 5份单项ALT高的献血者血浆中检出 9份HCV cAg阳性。结论　HCV cAg双抗体夹心ELISA试剂 ,有望用于早期丙型肝炎诊断。     

丙型肝炎患者HCV分片段抗体的检测及分析

[目的] 研究丙肝感染者体内各分片段抗体的分布情况，以及与总抗体和HCVRNA之间的关系。[方法] 用一种新的丙型肝炎病毒抗体分片段酶联免疫测定试剂盒检测100份抗HCV总抗体阳性血清和100份抗HCV总抗体阴性血清中四种HCV分片段抗体(HCV-C、HCV-NS3、HCV-NS4、HCV-NS5)的存在情况。[结果] 100份抗HCV总抗体阴性血清中97份血清四种分片段抗体阴性，符合率为97％，有三份分片断抗体检测为阳性，分别为HCV-C、HCV-NS3阳性，HCV-C、HCV-NS3、HCV-NS4三抗体阳性，HCV-NS3、HCV-NS4阳性；100份抗HCV总抗体阳性血清中两种(或以上)分片段抗体检测阳性的标本有100份，符合率为100％。[结论] 4种分片段抗体阳性共有15种分布模式，其中HCV-C片段抗体阳性率最高有96％，HCV-C( )、HCV-NS3( )2个分片段抗体阳性率次之为80％。     

抗-HCV阳性样本的分片段抗体辅助实验研究

目的调查并证实ELISA法检测HCV抗体的假阳性问题。方法采用抗-HCV分片段检测试剂对2次或2次以上ELISA法检测HCV抗体阳性的样本进行辅助确认实验。结果ELISA法检测379份HCV抗体阳性的样本,分片段确认阳性样本61份,可疑阳性样本57份,总计118份,确认阳性样本百分率31.13%(118/379)。结论采用国产的分片段检测试剂对抗-HCV ELISA法检测的阳性样本进一步确认,同时再辅以PCR检测,对减少血液资源的浪费具有现实意义。     

自愿献血员中的抗丙型肝炎病毒抗体和肝脏病

为了评价献血员丙型肝炎病毒抗体(抗HCV)的特异性及它们与肝脏病的关系,本文对经酶联免疫吸附法(ELISA)反复检测抗HCV 抗体阳性的50例献血员进行研究。全部献血员的血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阴性,无器官特异性自身抗体(抗核抗体,抗平滑肌抗体及抗线粒体抗体),每日酒精摄入量小于50克,近期未用过损肝药物史及血清α_1抗胰蛋白酶、铜蓝蛋白和铜浓度正常。由于ELISA     

丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂的临床评价

[目的]对研制的丙型肝炎病毒核心抗原（HCV—cAg）ELISA检测试剂进行临床特异性及敏感性评价。[方法]制备抗HCV-核心区（Core）抗原四株单克隆抗体，研制出双抗体夹心检测HCV～core抗原酶联免疫检测（ELISA）试剂。三家临床单位收集抗HCV阴性样品3040份，HBsAg阳性100份，抗HIV阳性40份，从10万份抗-HCV筛查出临界样品28人份。[结果]3040份阴性样品检测有3份HCV—cAg阳性，3份经HCVPCR检测有1份阳性，100份HBsAg阳性，40份抗HIV阳性样本检测均为阴性，在10万份抗HCV抗体筛查样品中，选择28份抗-HCV检测临界样品进行HCV—cAg检测，有4份阳性，4份HCV—cAg阳性样品中有3份HCV—RNA检测阳性。[结论]研制的双抗体夹心HCV-核心抗原ELISA试剂具有很好的特异性和灵敏度。     

丙型病毒性肝炎病毒标志物联合检测的临床应用分析

目的讨论丙型病毒性肝炎(HCV)标志物(抗-HCV抗体、HCV-RNA和HCV核心抗原)联合检测在临床中的应用。方法收集2012年5月至2013年5月该院住院和门诊检测HCV患者共25 469例,对其分别检测抗-HCV抗体和HCV核心抗原。另将35份抗-HCV抗体或HCV核心抗原阳性标本送检HCV-RNA,分析其检测结果。结果抗-HCV抗体或HCV核心抗原阳性患者109例,阳性率为0.43%。其中抗-HCV抗体单独阳性94例,HCV核心抗原单独阳性3例,两者同时阳性12例。在35例抗-HCV抗体或HCV核心抗原阳性患者中检出HCV-RNA阳性为24例,阳性率为68.57%。结论 HCV标志物的联合检测必将成为临床丙型肝炎感染诊断的主要方式,具有重要的临床应用价值。     

核酸扩增技术在上海血液筛检中的初步应用

目的 为正确评估目前酶免抗体筛检方法的血液安全性,探讨在我国血液筛检中引进核酸扩增技术(NAT),防止酶免抗体筛检方法窗口期漏检的可行性。方法 使用Procleix~(TM)TMA HIV-1/HCV检测方法,分2个阶段,分别以8份样品和24份样品混合的形式,总共筛选了103539份上海市区的献血标本。结果 发现5份第2次酶免检测(EIA-2)HCV抗体和NAT同时阳性的标本,同时也发现275份(0.27％)EIA-2 HCV抗体阳性但NAT阴性标本和107份(0.10％)EIA-2 HIV抗体阳性但NAT阴性的标本,未发现血清抗体转换窗口期标本。结论 上海市的血液安全水平目前已接近发达国家水平,HCV和HIV的感染危险性已经小于1:100000,Procleix~(TM)TMAHIV-1/HCV检测技术具有较高的敏感性和特异性,适合在中国血液筛检中应用。     

某地区丙型病毒性肝炎患者HCV基因分型研究

目的 了解该地区丙型病毒性肝炎(以下简称丙型肝炎)患者丙型肝炎病毒(HCV)基因分型情况.方法 分别以ELISA和重组免疫印迹试进行血清标本抗HCV抗体筛查和确认,对抗HCV抗体阳性标本用实时荧光定量PCR进行病毒载量检测.对病毒载量大于103 copy/mL的标本用多重PCR进行HCV基因分型.结果 125例抗HCV抗体阳性标本中,HCV基因型主要为1b、2a、3a、1c、2c的检出率分别为58.4%、21.6%、3.2%、4.0%和8.0%.结论 该地区HCV感染主要以1b型为主,其次是2a和3a型,检出其他地区少见的1c和2c型,说明该地区丙型肝炎流行的基因型呈多样性.     

蛋白芯片检测丙型肝炎病毒分片段抗体

目的 用蛋白芯片的方法检测丙型肝炎病毒（HCV）分片段抗体。方法 利用生物芯片技术和化学发光技术将高度纯化的抗原HCV Core、NS3、NS4、NS5以特定微阵列固定在固相载体上,用化学发光免疫法检测抗HCV Core、抗HCV NS3、抗HCV NS4和抗HCV NS5。结果 174份血清中HCV抗体阳性87份,HCV抗体阴性87份,其中献血员33份,非丙型肝炎的其他肝病患者39份,非肝病者15份。87例雅培公司的AxSYM（微粒子发光）检测抗HCV阳性患者中,蛋白芯片检出阳性85份,阳性率为97．70％;在174份标本中,蛋白芯片检出阳性标本88份,其中抗HCV阳性87份,阳性率98．86％;抗HCV NS3检出49份,阳性率为55．68％;抗HCV NS4检出68份,阳性率为77．27％;抗HCV NS5检出37份,阳性率为42．05％;抗HCV Core检出69份,阳性率为78．41％。结论 蛋白芯片显示较高的敏感性和特异性,具有临床实用价值。     

一种抗丙肝病毒核心多肽酶联免疫吸附法的敏感性

作者采用一种新的抗丙肝病毒(HCV)核心多肽酶联免疫吸附法(ELISA)与最初的抗-C100ELISA 对比测定:A 组225例血友病患者的储存血清;B 组44例慢性非甲非乙(NANB)型肝炎患者的新鲜血清或血浆和 C 组9例输血后 HCV 感染的血清样本,来评价本法的敏感性。抗-HCV ELISA 是测定15种氨基酸合成的、HCV 核心蛋白的多肽抗体。并用4种抗原重组免疫斑点法(4-RIBA)测定1种结构重组抗原(C-22=核心)和3种非结构重组抗原     

HCV抗体和核心抗原联合监测在输血安全性中应用的评估

[目的]探讨HCV抗体和核心抗原联合监测在输血安全性中的应用价值.[方法]利用抗-HCV ELISA、HCV-cAg ELISA及HCV RT-PCR荧光定量方法检测2 000份献血员血清.[结果]2 000份血清标本经抗-HCV ELISA、HCV-cAg ELISA及HCV RT-PCR荧光定量检测,其HCV阳性率...     

ORTHO抗-HCV酶联免疫试剂2种孵育试验程序在血液筛查中的比较研究

目的确定1种3代抗-HCV酶免试剂(ORTHO HCV 3.0 ELISA试剂)2种孵育试验过程在血液筛查中是否存在差异。方法随机留取常规献血者血液筛查中检出的抗-HCV反应性的血液标本180(人)份作HCVRNA检测,并用RIBA和不同于血站常规抗-HCV筛查的酶免试剂作抗-HCV复测;依据ORTHO HCV 3.0 ELISA检测试剂说明书中的长、短2种孵育检测程序,同时作对比检测。结果 180份初筛抗-HCV阳性标本中,有16份ORTHO HCV 3.0 ELISA 2种检测程序的检测结果不一致,其中5份为短孵育试验反应性、11份为长孵育试验反应性,短孵育试验漏检2份被确证抗-HCV阳性标本。ORTHO HCV 3.0 ELISA试剂的长孵育检测程序灵敏度高于短孵育试验程序,2种试验程序的S/CO值分布没有差别,但RIBA不确定标本其S/CO值分布在一定的灰区范围内。结论在献血人群血液筛查中,采用具有更高灵敏度的长孵育酶免程序和设定合理的结果判定灰区,有助于预防输血传播HCV,提高血液的安全。