Mg2+在药物无菌检查中的应用

目的探讨Mg2＋作为中和剂在无菌检查中的合理应用。方法添加不同浓度Mg2＋,观察对培养基、稀释剂和冲洗液性状、以及对微生物生长的影响。结果以规定验证菌试验,对Mg2＋最敏感验证菌为铜绿假单孢菌。结论 Mg2＋作为中和剂应用于无菌检查,其使用方式、使用量（浓度）应进行考察,选择合理的应用方式。     

三氟拉嗪对大鼠脑突触体内Ca2+水平和Ca2+, Mg2+-ATP酶活性的作用

用Quin 2法测得大鼠脑突触体内静息游离Ca²⁺浓度([Ca²⁺]_i)为85±13 μmol·g^-1 protein. 三氟拉嗪(TFP) 1, 5和10 μmol·L^-1对静息突触体[Ca²⁺]_i无明显影响, 但能以剂量依赖方式增高65 mmol·L^-1 KCl所致突触体[Ca²⁺]_i升高, 从192±58 μmol·g^-1 protein分别达到233±63, 431±99和661±173 μmol·g^-1 protein. TFP 5,10和50 μmol·L^-1分别使突触体Ca²⁺, Mg²⁺-ATP酶活性降低31％, 41％和45％; 使Mg²⁺-ATP#FK酶活性降低30％, 36％和39％, 提示TFP可能是通过抑制钙调素, 进而抑制Ca²⁺, Mg²⁺-ATP酶活性, 使突触体[Ca²⁺]_i升高, 促进神经末梢释放递质.     

1,6-二磷酸果糖镁对异丙肾上腺素所致大鼠心肌损伤的保护作用

研究1,6-二磷酸果糖镁（FDP-Mg）对异丙肾上腺素（Iso）所致心肌损伤的保护作用. 大鼠sc Iso (8 mg·kg^-1·d^-1, 3 d)造成心肌损伤模型,测定心肌组织和血清肌酸激酶（CK）, 乳酸脱氢酶（LDH）, 超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）, Mg²⁺, P和K⁺含量. 结果：每天给予Iso的同时给予FDP-Mg（250-1000 mg·kg^-1·d^-1, 3 d）能明显降低血清CK,LDH水平,抑制心肌组织中CK,LDH释放,提高血清和心肌SOD活性,降低MDA水平,提高心肌及血清Mg²⁺和P含量,降低血清K⁺浓度。综合了FDP-Na₂（530 mg·kg^-1·d^-1, 3 d）和硫酸镁（150 mg·kg^-1·d^-1, 3 d）的作用特点。结果表明,FDP-Mg对Iso所致大鼠心肌损伤具有保护作用,与其抗氧化及改善心肌代谢有关.     

芦荟苷预处理对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡、TNF-α含量和Ca2+-ATPase活性的影响

目的 研究芦荟苷(Barbaloin,Barb)对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法 结扎大鼠左冠状动脉前降支复制心肌缺血再灌注损伤模型,实验分为假手术组、缺血再灌注组(IR)、Barb高、低剂量预处理组。采用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡指数(AI),ELISA法测定血清TNF-α水平,化学法测定线粒体Ca²⁺-ATPase活性。结果 与IR组比较,Barb组AI和TNF-α水平显著降低 (P<0.05或P<0.01),Ca²⁺-ATPase活性明显增高(P<0.05)。结论 Barb能明显抑制IR引起的心肌细胞凋亡,其作用可能与降低TNF-α水平和提高Ca²⁺-ATPase活性有关。     

妊娠浓度的雌激素增强调节性T细胞抑制功能的实验研究

目的 体外观察妊娠浓度的雌激素（E₂）能否诱导天然CD⁺₄CD⁺₂₅Treg细胞的增殖并增强其抑制功能. 方法 天然CD⁺₄CD⁺₂₅Treg细胞的增殖检测：CFSE标记天然CD⁺₄CD⁺₂₅Treg细胞作为反应细胞预先经妊娠水平的E2孵育2 h后,加入抗CD₃/CD₂₈单抗体外培养. 以是否经E2孵育或加入抗CD₃/CD₂₈单抗分为2个阴性对照组和空白对照组. 120 h后检测天然CD⁺₄CD⁺₂₅Treg细胞的增殖情况. 天然CD⁺₄CD⁺₂₅Treg细胞的功能检测：以CFSE标记CD⁺₄CD₂₅naive T细胞作为反应细胞与预先经E₂孵育2 h的天然CD⁺₄CD⁺₂₅Treg细胞共培养,并于其中加入抗CD₃/CD₂₈单抗. 以是否经E2孵育或加入抗CD₃/CD₂₈单抗分为2个阴性对照组和空白对照组. 120 h后检测CD⁺₄CD₂₅ naive T细胞的增殖情况. 结果 增殖检测提示两阴性对照组与空白对照组天然CD⁺₄CD⁺₂₅Treg细胞无明显增殖,而实验组则较对照组增殖明显; 功能检测提示空白对照组标记细胞不发生明显增殖,阴性对照组A中标记细胞增殖明显; 实验组标记细胞增殖能力在经E2孵育的天然CD⁺₄CD⁺₂₅Treg细胞作用下受到明显抑制,与阴性对照组A和空白对照组差异均有显著性; 阴性对照组中标记细胞的增殖也被明显抑制,与阴性对照组A比较差异有显著性,但同时其增殖抑制作用又弱于实验组,差异也有显著性. 结论 体外实验表明,妊娠状态下高水平的雌激素能通过促使天然CD⁺₄CD⁺₂₅Treg细胞的扩增而增强其抑制功能.     

Bcl-2蛋白对环匹阿尼酸诱导CHO细胞凋亡的保护作用

Hoechst 33258染色和DNA电泳分析揭示了内质网钙泵抑制剂环匹阿尼酸(CPA)呈浓度依赖性地诱导CHO细胞凋亡, 表现出染色体固缩和DNA片断形成的典型特征. Bcl-2的过度表达对CPA诱导的CHO细胞凋亡具有保护作用. 采用Fura-2技术测定细胞内游离钙浓度(［Ca²⁺］_i)变化，观察到Bcl-2对CPA触发的细胞Ca²⁺库Ca²⁺释放无任何影响. 结果表明Bcl-2蛋白对CPA诱导的CHO细胞凋亡的保护作用不是通过抑制CPA诱导的Ca²⁺释放，而是作用于［Ca²⁺］_i升高的下游途径.     

乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液无菌检查方法的建立及验证

目的 建立乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液的无菌检查方法。 方法 根据《中华人民共和国药典(二部)》2010年版所列方法,通过增加冲洗液用量和加入中和剂,采用薄膜过滤法进行实验研究。 结果 以0.1%蛋白胨水溶液作为冲洗液,每管冲洗液容量为700 ml,每次冲洗100 ml,金黄色葡萄球菌不能正常生长。然而,使用含中和剂的培养基时,冲洗量每管300 ml,所有阳性对照菌均生长良好。 结论 本法简单方便,适用于乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液的无菌检查。     

姜黄抗运动性疲劳效果与作用机制研究

目的 研究中药姜黄抗运动性疲劳效果及其作用机制。方法 灌胃给予不同剂量姜黄30 d后,进行小鼠爬杆实验、耐缺氧实验和大鼠骨骼肌收缩力学实验,并测定大鼠比目鱼肌超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和Ca²⁺ Mg²⁺ ATP酶活性。结果姜黄能明显延长小鼠爬杆时间、增强耐缺氧能力,可使大鼠骨骼肌收缩力增强,SOD和Ca2+ Mg2+ ATP酶活性增强、MDA值降低。结论姜黄在增加机体对运动负荷的适应能力、抵抗疲劳产生和加速疲劳消除方面具有明显的作用。     

99锝［99Tc］亚甲基二膦酸盐对胶原诱导性关节炎大鼠的疗效观察

目的 探讨⁹⁹锝［⁹⁹Tc］亚甲基二膦酸盐（⁹⁹Tc-MDP）对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠的治疗作用. 方法 设立正常组大鼠10只, 建立CIA大鼠模型18只, 分为模型组和 ⁹⁹Tc MDP组各9只. ⁹⁹Tc-MDP组CIA大鼠予以尾静脉注射⁹⁹Tc-MDP, 相当于⁹⁹TC 0.04 μg&#8226;kg^-1&#8226;d^-1共21 d. 测量各组大鼠体重、关节肿胀程度和关节炎指数（AI）, 观察滑膜病理组织形态学变化, 并用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子（TNF-α）水平. 结果 ①与正常组大鼠比较, 模型组CIA大鼠体重明显减轻, 关节肿胀程度严重, AI 评分明显升高, 滑膜组织病理评分也明显升高（均P<0.01）; ②⁹⁹Tc-MDP干预治疗可明显缓解CIA大鼠体重下降, 改善关节肿胀程度, 降低AI 评分和滑膜组织病理评分; ③正常对照组和⁹⁹Tc-MDP组大鼠血清TNF-α水平显著性低于模型组大鼠（均P<0.01）. 结论 CIA大鼠关节炎症状明显, ⁹⁹Tc-MDP可明显改善CIA大鼠一般状况, 减轻关节炎症状及滑膜组织的病理评分, 降低血清TNF-α水平, 对CIA有显著治疗效果.     

溶血性磷脂酰胆碱诱导血小板活化及蛋白质酪氨酸激酶和蛋白激酶C的作用

应用双道血小板聚集仪和荧光分光光度计分别测定溶血性磷脂酰胆碱(LysoPC)诱导的兔洗涤血小板聚集,细胞内钙离子浓度(［Ca²⁺］_i),细胞内pH值(pH_i)的变化及5-羟色胺(5-HT)的释放,并观察蛋白质酪氨酸激酶(PTK)抑制剂金雀异黄素(Gen)和蛋白激酶C(PKC)抑制剂星形孢菌素(Sta)对其作用的影响. 结果表明：LysoPC(30-300 μmol·L^-1)诱导血小板聚集,5- HT释放和［Ca²⁺］_i 升高,均呈现良好的浓度依赖性,100 μmol·L^-1以上时伴有pH_i的增加;Gen使LysoPC 诱导的聚集浓度效应曲线右移,半效聚集浓度值从(100±23) μmol·L^-1增加到(200±42) μmol·L^-1,明显抑制 ［Ca²⁺］_i 升高和胞浆碱化,对5-HT释放无明显影响;Sta对较低浓度LysoPC 诱导的血小板聚集,5-HT释放, ［Ca²⁺］_i 和pH_i的增加均有明显抑制作用,但对高浓度LysoPC 诱导的血小板活化无明显影响. 提示：LysoPC通过内Ca²⁺调节和Na^＋/H^＋交换介导血小板聚集和致密颗粒释放;PTK的激活参与了LysoPC诱导的血小板聚集,内Ca²⁺调节和Na^＋/H^＋交换,而在5-HT释放的机理中意义不大;PKC的激活在较低浓度LysoPC 诱导的血小板活化中起重要作用,高浓度LysoPC通过不依赖于PKC的途径激活血小板.     

血管紧张素Ⅱ对大鼠肾入球小动脉细胞内钙离子浓度的影响及Losartan的拮抗作用

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对肾小球入球小动脉细胞内钙离子浓度([Ca²⁺]i)的影响与高血压肾小动脉重建的关系及Losartan的治疗作用。方法 细胞培养：大鼠肾小球入球小动脉细胞随机分为4组。对照组：不加AngⅡ处理;AngⅡ组：加入终浓度为0.1 μmol·L^-1的AngⅡ;Losartan组：加入终浓度为50 μmol·L^-1的Losartan;AngⅡ+Losartan组：同时加入Losartan 50 μmol·L^-1和AngⅡ0.1 μmol·L^-1。负载后上机检测[Ca²⁺]i。结果 细胞培养显示AngⅡ引起了细胞收缩变化,表现为胞突变细变短,胞突回缩,胞体变圆,细胞长度与直径均明显缩小。Losartan处理组较AngⅡ组细胞形态变化减轻且Losartan对AngⅡ增高RASMCs内[Ca²⁺]i有明显抑制作用。结论 AngⅡ可引起肾小球入球小动脉细胞内[Ca²⁺]i的上升,导致细胞收缩,因此Ca²⁺超载可能是肾素-血管紧张素系统起作用的重要环节。Losartan可抑制细胞内Ca²⁺超载。     

抗心律失常药E-4031对豚鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换电流的影响

应用全细胞电压钳的斜坡脉冲程序测定离体豚鼠心肌细胞准稳态电流电压关系曲线,研究Ⅲ类抗心律失常药E-4031对Na⁺/Ca²⁺交换电流的影响,结果表明E-4031 0.1, 1.0, 10, 50 μmol·L^-1使Ni²⁺敏感电流浓度依赖性增加,膜电位+50 mV时分别增加(70±38)%,(91±53)%,(118±63)%,(122±51)%;膜电位-100 mV时增加(25±20)%,(51±32)%,(113±84)%,(93±73)%。提示E-4031对心室肌细胞Na⁺/Ca²⁺交换电流的增强作用可能是其正性变力作用的重要机理。     

丙泊酚抑制去甲肾上腺素诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞内游离钙浓度升高作用的机理

用荧光分光光度法及同位素放射免疫分析法检测丙泊酚(30-300 μmol·L^-1)影响大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)内游离钙离子浓度(［Ca²⁺］_i)与肌醇-1,4,5-三磷酸(IP₃)合成作用,以探讨丙泊酚舒张肺动脉平滑肌的作用机理.结果表明,与丙泊酚共同培养72 h,对PASMC ［Ca²⁺］_i 基础水平无明显影响,但可浓度依赖性抑制去甲肾上腺素(NE 3 μmol·L^-1)引起的［Ca²⁺］_i升高作用;当细胞外液无钙或存在钙通道阻滞剂维拉帕米(30 μmol·L^-1)时,丙泊酚抑制NE升高［Ca²⁺］_i作用被增强;丙泊酚还可浓度依赖性抑制NE促进 IP₃合成作用. 结果提示丙泊酚舒张血管平滑肌作用与抑制IP₃介导的细胞内钙释放密切相关.     

地拉罗司分散片微生物限度检查方法研究

目的 建立地拉罗司分散片的微生物限度检查方法。方法 根据中国药典2015年版四部通则1105非无菌产品微生物限度检查中的微生物计数法,通则1106非无菌产品微生物限度检查中的控制菌检查法和通则1107非无菌药品微生物限度标准进行方法适用性试验。微生物限度检查方法学适用性试验采用常规法筛查了抑菌性,然后利用稀释和中和原理改进供试液的制备,即将中和剂3%聚山梨酯-80、0.3%卵磷脂添加至pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液作为稀释液,需氧菌总数计数（稀释成1：500）及霉菌和酵母菌总数计数（稀释成1：50）均采用平皿法,控制菌检查法采用培养基稀释法（500 mLTSB）。结果 5种试验菌的回收试验结果均在0.5~2.0之间。结论 该方法适用于地拉罗司分散片微生物限度的检查。     

氯丙烯对神经细胞内 Ca2+, 游离钙调蛋白, 环腺苷酸含量和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ活性的影响

用培养的鸡胚脑神经细胞研究了1.02和2.04 mmol·L^-1氯丙烯作用24 h后细胞内Ca²⁺, 游离钙调蛋白(CaM)和环腺苷酸(cAMP)含量及钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca²⁺/CaM-PK Ⅱ)活性的改变. 结果显示, 随着氯丙烯浓度的增加, 细胞内Ca²⁺分别增加了4.2和6.2倍, cAMP含量增加了22%和39%, Ca²⁺/CaM-PK Ⅱ活性增加了2.8和5.0倍(P<0.01); 而游离CaM含量则分别减少了55%和69%(P<0.01). 结果提示氯丙烯引起病理性神经轴浆内微管和神经微丝堆积与细胞内Ca²⁺增加有关. 这可能由于细胞内Ca²⁺增加, 激活CaM, 继而激活Ca²⁺/CaM-PK Ⅱ, 催化微管相关蛋白2和tau-蛋白磷酸化, 抑制微管组装, 使解聚的微管堆积在轴浆内.     

强啡肽对培养脊髓神经元高钾刺激性胞内钙增高的双向作用

为探讨强啡肽(Dyn)镇痛与致瘫的细胞机理，采用Fura-2显微荧光光度技术观测了不同浓度的Dyn A(1-17)对原代培养脊髓神经元单个细胞内游离钙离子浓度(［Ca²⁺］_i)的影响. Dyn A 0.1-100 μmol·L^-1对基础［Ca²⁺］_i均无影响. Dyn A 0.1和1 μmol·L^-1使高钾(50 mmol·L^-１)刺激的Ca²⁺内流峰值反应分别下降94%(n=6)和83%(n=4, P<0.05); Dyn A 10和100 μmol·L^-1对高钾刺激反应峰值无明显影响，但所有测试细胞均呈现持续性［Ca²⁺］_i升高；预先给予低浓度的Dyn A (0.1和1 μmol·L^-1), 则高浓度Dyn A (10 和100 μmol·L^-1)的促进作用明显 减弱甚至消失. 结果表明低浓度和高浓度Dyn A(1-17)对培养脊髓神经元的基础［Ca²⁺］_i无影响，但可分别抑制和促进去极化性钙离子内流，低浓度Dyn A 可对抗高浓度Dyn A 的促进作用.     

比较不同类型抗抑郁剂对新生大鼠神经细胞内游离Ca2+浓度的影响

The ability of antidepressant drugs to increase the concentration of intracellular Ca²⁺(［Ca²⁺］_i) was examined in dispersed brain cells from neonatal rat cortex and hippocampus using the Ca²⁺ sensitive fluorescent indicator Fura-2. Desipramine (DIM 0.1-1.0 mmol·L^-1) increased ［Ca²⁺］_i in a concentration-dependent manner. DIM (1.0 mmol·L^-1) and fluoxetine (1.0 mmol·L^-1) induced ［Ca²⁺］
_i increases were not altered by the absence of external Ca²⁺ or by the presence of nimodipine (10 μmol·L^-1). Pretreatment with neomycin (10 mmol·L^-1), an inhibitor of inositol 1,4,5-trisphosphate production, significantly inhibited DIM-induced ［Ca²⁺］_i increase but could not effectively inhibit fluoxetine-induced ［Ca²⁺］_i increase. Pretreatment with dantrolene (0.05 mmol·L^-1), an exhaustor of Ca²⁺ store, inhibited fluoxetineinduced ［Ca²⁺］_i increase, suggesting that DIM and fluoxetine provoke intracellular Ca²⁺ mobilization. In addition, fluoxetine-induced ［Ca²⁺］_i increase was about 1.5 times higher than that induced by DIM at the same concentration (0.4 mmol·L^-1). Moclobemide, an inhibitor of monoamine oxidase A, did not affect ［Ca²⁺］_i. It is concluded that DIM and fluoxetine may be Ca²⁺ mobilizing agents.     

巴罗沙星与DNA的相互作用及Mg2+的影响

目的研究巴罗沙星与DNA的分子作用机制和Mg²⁺对巴罗沙星与DNA相互作用的影响。方法利用荧光光谱研究巴罗沙星与DNA的作用强度并计算热力学数据ΔH；利用紫外光谱、黏度测定、竞争实验、与变性DNA作用的比较等方法确定巴罗沙星与小牛胸腺DNA的相互作用方式；利用荧光光谱考察Mg²⁺对巴罗沙星与小牛胸腺DNA相互作用的影响。结果DNA对巴罗沙星的荧光猝灭常数为(5.43±0.07)×10³ L·mol^-1，ΔH=-8.03 kJ·mol^-1；Mg²⁺使巴罗沙星与DNA的作用增强。结论巴罗沙星以沟槽键合方式与DNA相互作用；Mg²⁺对巴罗沙星与DNA的结合有中介作用。     

6-［4-(4′-吡啶)氨基苯］-4，5-二氢-3(2H)哒嗪酮对大鼠胸主动脉环收缩功能的影响

目的 研究新型钙增敏强心剂6-［4-(4′-吡啶)氨基苯］-4，5-二氢-3(2H)哒嗪酮(MCI-154)的扩血管作用机制。方法 采用生物张力换能器及生理记录仪测定大鼠离体胸主动脉环和蜕膜胸主动脉环的收缩张力。结果 MCI-154可浓度依赖性抑制1 nmol·L^-1~10 μmol·L^-1去甲肾上腺素（pD₂′为4.21±0.23）和80 mmol·L^-1 KCl（IC₅₀为7 μmol·L^-1）引起的血管环收缩，提示其可通过抑制血管平滑肌细胞膜上受体操纵性和电压依赖性钙通道而减少胞外钙内流。在无Ca²⁺ K-H液中，MCI-154预处理可浓度依赖性降低3 μmol·L^-1苯肾上腺素（IC₅₀为5 μmol·L^-1）及20 mmol·L^-1 咖啡因（IC₅₀为16 μmol·L^-1）引起的血管环收缩张力，提示其可抑制血管平滑肌细胞胞内钙释放。在1 μmol·L^-1 Ca²⁺溶液中，MCI-154可显著降低蜕膜血管环收缩张力（IC₅₀为10 μmol·L^-1)，提示其可降低血管平滑肌对Ca²⁺的敏感性。结论 MCI-154可通过抑制血管平滑肌胞外钙内流、胞内钙释放和降低其对Ca²⁺敏感性来降低血管平滑肌收缩张力，体外具有扩血管效应。     

抗心律失常药E-4031通过蛋白激酶C途径影响豚鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换

应用全细胞电压钳技术的斜坡脉冲程序,测定离体豚鼠心肌细胞准稳态电流-电压关系曲线,研究E-4031增强Na⁺/Ca²⁺交换电流的机理. 结果表明蛋白激酶C激动剂十四酰佛波乙酯（TPA）5,10和15 nmol·L^-1使膜电位+50 mV时的Ni²⁺敏感电流分别增加（116±43）%,（225±63）% 和（289±69）%. 使膜电位-100 mV时的Ni²⁺敏感电流分别增加（29±17）%,（104±21）%和（140±29）%. 蛋白激酶C拮抗剂他莫昔芬20 μmol·L^-1可完全阻断E- 4031和TPA对该电流的刺激作用. 结果提示,E-4031通过蛋白激酶C途径激动Na⁺/Ca²⁺交换.