孕早期大鼠人巨细胞病毒感染对仔鼠海马细胞外信号调节蛋白激酶通路的影响

目的观察孕早期大鼠人巨细胞病毒(HCMV)感染对仔鼠海马细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)通路的影响,为研究HCMV先天性感染对子代大鼠海马学习记忆损伤的机制及防治HCMV先天性感染导致的学习记忆障碍等神经系统后遗症提供实验依据。方法取8～9周龄雌性SPF级SD大鼠12只,按雌雄=31配对,孕鼠随机分为对照组和实验组,每组6只。于孕第5天实验组孕鼠腹腔内注射100半数组织细胞感染量HCMV悬液0.8 mL,对照组孕鼠腹腔内注射等量的人胚肺成纤维细胞上清液。于出生后30 d每组随机取10只仔鼠,取仔鼠脑组织,采用HE染色观察仔鼠海马齿状回(DG)区颗粒细胞的形态学改变;免疫组织化学法观察仔鼠海马DG区ERK1、ERK2、p-ERK的表达,并应用SPSS 13.0软件进行分析。结果对照组仔鼠海马未见明显的神经元缺失,排列紧密,均匀整齐,胞核呈圆形或椭圆形,核仁明显,染色质均匀;实验组仔鼠海马细胞数减少,组织结构较稀疏,排列紊乱。ERK1、ERK2、p-ERK主要表达于胞核和胞质,阳性部位呈现棕黄色。实验组仔鼠海马DG区的ERK1、ERK2、p-ERK染色强度及平均积分光密度均低于对照组,差异均有统计学意义(Pa<0.01)。结论孕早期HCMV感染可降低仔鼠海马DG区ERK1、ERK2、p-ERK的表达,可能与HCMV先天感染损伤海马的学习记忆功能有关。     

孕早期人巨细胞病毒感染对仔鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸受体亚基表达的影响

目的探讨孕早期人巨细胞病毒(HCMV)感染对子代SD大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚基的影响及对仔鼠学习记忆的影响。方法取8周龄SPF级SD雌鼠18只。按雌雄31合笼交配,将受精大鼠随机分为实验组和对照组,每组9只,于妊娠第5天分别腹腔内注射5×107L-1半数组织培养感染量(TCID50)HCMV悬液0.8 mL和等量的人胚成纤维细胞上清液。出生后1个月分别从每组随机抽取10只子代大鼠,取仔鼠脑组织,采用HE染色观察仔鼠海马形态学变化;使用Morris水迷宫评价子代大鼠的学习记忆功能;应用免疫组织化学方法检测大鼠海马组织NMDA受体表达变化。采用SPSS 16.0软件进行统计学处理。结果对照组子代大鼠海马未见神经元缺失,排列紧密,均匀整齐,胞核呈圆形或椭圆形,核仁明显,染色质均匀;与对照组比较,实验组子代大鼠海马有神经细胞坏死、减少、水肿、细胞核消失现象,部分细胞呈巨细胞变;在Morris水迷宫实验中,实验组子代大鼠的学习记忆成绩较对照组明显下降(Pa<0.01);免疫组织化学结果显示实验组子代大鼠海马组织NR1、NR2A及NR2B平均吸光度均较对照组低(Pa<0.01)。结论孕早期HCMV感染可导致仔鼠学习记忆能力受损,可能与其海马区NMDA受体的表达减少有关。     

人巨细胞病毒感染对人骨髓粒－单系祖细胞生长的影响

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)对人骨髓粒－单系祖细胞(GM－CFUc)集落形成能力的影响。方法采用造血祖细胞培养技术,以HCMVAD169持续攻击骨髓GM－CFUc,观察计数GM－CFUc集落、簇的产率及集落的大小和维持的时间。结果①HCMV感染组GM－CFUc集落和簇的产率明显低于对照组(P＜0.01);②HCMV感染GM－CFUc后,大集落的产率明显低于对照组;③集落维持的时间缩短,而集落出现峰值的时间无明显差异。结论在体外HCMV对GM－CFUc生长、集落的形成有明显抑制作用,提示HCMV感染患儿粒细胞减少可能与HCMV损伤GM－CFUc有关。     

先天性和围产期人巨细胞病毒感染的临床特征分析

报告１０７例活动性人巨细胞病毒感染的临床表现，所有病例（ＣＭＶ－ＩｇＭ抗体皆阳性。先天性感染组７９例，围产期感染组２８例，两组均以出现早，程度重，消退迟或退而复现的病理性黄疸或伴肝脾肿大，肝功能有异常为主，余为先天畸形和神经系统异常。３１例中１７例有所通路传导障碍。先天组中新生儿窒息２０例，如遇此等表现，应警惕ＣＭＶ感染的存在。     

pp65抗原与人巨细胞病毒感染

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染可引起肝脏疾病、肺炎、腹泻病、血小板减少性紫癜、听力障碍等疾病,具有较高的感染率与病死率.pp65(phosphoprotein 65)作为病毒颗粒的主要结构蛋白,与病毒基因表达、宿主免疫逃避及细胞代谢相关.pp65检测目前被认为诊断活动性巨细胞病毒感染的"金标准"之一,且其抗原水平与HCMV感染的临床症状呈正相关性,可用于指导临床"抢先治疗"并改善预后.该文就pp65的蛋白特性、致病机制、诊断方法及其在诊断和预防的应用等方面作一综述.     

儿童130例人巨细胞病毒感染的血液学有关表现

目的探讨儿童人巨细胞病毒(humancytomegalovirus,HCMV)感染的血液学表现。方法回顾性分析130例人巨细胞病毒感染患儿的临床特征、血象、骨髓象和免疫学指标的变化及治疗和转归。结果130例中有64例出现外周血象的改变(49·2%)。其中贫血46例(35,4%),血小板减少35例(26·9%),粒细胞减少4例(3·1%),全血细胞减少5例(3·8%),外周血出现异型淋巴细胞11例(8·5%)。29例出现血液系统并发症(22·3%),包括传染性单核细胞增多综合征、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、自身免疫性溶血性贫血(AIHA)、病毒相关性噬血细胞综合征(VAHS)等。部分行免疫功能检查的患儿中,27·5%的病人存在体液免疫异常,71·4%存在细胞免疫异常。结论儿童是HCMV感染的易感人群。HCMV几乎可以感染人体所有组织,造血系统受累,可引起多种造血功能紊乱,甚至发生多种CMV感染相关性血液系统疾病。早期足疗程地应用更昔洛韦,配合对症、支持、免疫调节等综合治疗,可明显提高疗效。     

长春地区儿童和献血员人巨细胞病毒感染的调查

用核酸分子杂交技术，对长春地区１２９名献血员、３００名儿童人巨细胞病毒感染状况和输血后获得人巨细胞病毒感染的危险性进行了研究。结果表明，长春地区献血员人巨细胞病毒的带毒率为１７．１％；儿重带毒率为１９．８％，儿童尿排毒率为１５．６％。在儿童中，其带毒率在年龄上无显著差别，１０岁以后，女性高于男性；尿排毒率与性别无关，但１～５岁组明显高于其他年龄组。儿童输血后，获得人巨细胞病毒的感染危险性为５．３。提示输血在人巨细胞病毒传播中占有重要地位；在儿童中，５岁以下为重点监测对象。     

人巨细胞病毒感染的实验室检测与诊断

人巨细胞病毒(HCMV)是儿童先天性感染和出生后获得性感染的重要病原,可引起多种急、慢性感染和神经系统迟发后遗症。早期、准确诊断HCMV感染意义重大,但仅依靠临床表现难以对HCMV感染做出明确诊断。现简要介绍HCMV感染的实验室检测及诊断新技术。     

病毒编码微小RNA在人巨细胞病毒感染中的作用

微小RNA是存在于大多数真核细胞与某些病毒之中的一类非编码小分子RNA,可通过转录后抑制作用调控基因表达,由于其不具有免疫原性,可作为病毒逃避免疫系统攻击的一种高效工具,并且在病毒感染阶段的溶解性复制与潜伏感染的转换中起重要作用.人巨细胞病毒(HCMV)感染在人群中广泛流行,HCMV编码微小RNA通过影响病毒靶基因与细胞靶基因表达,在病毒潜伏感染中发挥重要作用,有望成为诊断和治疗HCMV感染的新靶点.该文就HCMV编码微小RNA在病毒感染中作用的研究进展进行综述.     

人巨细胞病毒感染防治进展

人巨细胞病毒感染非常普遍，在免疫缺损者及少数先天感染的患儿可引起严重疾病。但是，目前尚缺乏非常有效的防治措施。本文介绍了近年来国外对ＨＣＭＶ感染防治方面的研究进展，如抗病毒药物防治；免疫防治；以及各种措施相结合的联合防治方法。     

妊娠期低分子质量肝素干预对新生鼠肝细胞先天性感染人巨细胞病毒的影响

目的 探讨妊娠期应用低分子质量肝素(LMWH)对新生鼠肝细胞先天性感染人巨细胞病毒(HCMV)的病理改变和病毒DNA载量的影响.方法 取健康纯系清洁级Balb/c小鼠48只.随机选择配对,每对雌雄小鼠各1只.实验组20对,正常对照组4对.实验组每4对为1组,共5组,每只分别腹腔内注射6.0 log半数组织培养感染剂量(TCID50)HCMV-AD169.正常对照组4对,每只腹腔内注射相应细胞维持液高糖改良Eagles培养液(DMEM)1.0 mL.所有小鼠于接种后配对,隔离喂养,并观察受精情况,记录受精时间.发现妊娠后,分别予实验Ⅰ组皮下注射LMWH 1 000 U·kg-1,实验Ⅱ组皮下注射 LMWH 500 U·kg-1,实验Ⅲ组皮下注射LMWH 250 U·kg-1,实验Ⅳ组肌肉注射更昔洛韦(GCV)60 mg·kg-1,各10 d;实验Ⅴ组为阳性对照组,孕鼠不注射LMWH和GCV.每组随机取10只新生鼠,出生1 d处死,取出肝脏,进行病理学检查和荧光定量PCR检测.结果 实验Ⅰ组肝组织病理损害较阳性对照组明显减轻,HCMV DNA载量[(1.60±1.12)×103拷贝数/50 mg]较阳性对照组[(5.91±2.91)×107拷贝数/50 mg]显著降低(P＜0.01),与实验Ⅳ组[(1.75±1.05)×103拷贝数/50 mg]比较差异无统计学意义(P＞0.05).实验Ⅱ组肝组织炎性反应较阳性对照组稍减轻.实验Ⅲ组肝组织炎性反应与阳性对照组比较无明显变化,实验Ⅲ组HCMV DNA载量为(5.49±2.76)×107拷贝数/50 mg,与阳性对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论在妊娠期给予LMWH 1 000 U·kg-1干预能显著降低HCMV AD169株先天性感染Balb/c新生鼠肝细胞病毒感染和复制,减轻细胞炎性反应.     

婴儿癫(癎)与人巨细胞病毒感染的关系

目的探讨婴儿癫癎与人巨细胞病毒(HCMV)感染的关系。方法采用荧光定量聚合酶链式反应法检测婴儿癫癎52例及健康儿童20例尿HCMV-DNA,比较HCMV阳性与HCMV阴性癫癎患儿头颅CT、脑干听觉诱发电位(BAEP)异常率。结果婴儿癫癎组HCMV-DNA检出率为59.62%(31例),对照组为30%(6例),二者比较有显著差异(P<0.05)。HCMV阳性癫癎组头颅CT、BAEP异常率(54.84%、25.81%)远高于HCMV阴性癫癎组(23.81%、4.76%)(Pa<0.05)。结论HCMV感染可能是婴儿癫癎的重要致病因子之一,其感染导致的脑组织损伤在婴儿癫癎的发生发展中可能起重要作用。     

巨细胞病毒感染对淋巴系祖细胞增殖的影响及其干预措施

目的探讨人类巨细胞病毒（HCMV）对淋巴系祖细胞（CFU-TL）体外增殖的影响、作用机制及其干预措施。方法本实验共分为空白对照组、灭活对照组、HCMV感染组、更昔洛韦（GCV）干预组、黄芪注射液（AMI）干预组5组。采用甲基纤维素半固体培养CFU-TL集落，不同浓度HCMV-AD169持续攻击CFU-TL，用AMI、GCV粉剂干预，观察CFU-TL集落形成：用四甲基偶氮唑盐法测HCMV对宿主细胞增殖活性的影响；用PCR检测CFU-TL集落细胞内HCMV-AD169DNA。结果1．与空白对照组及灭活对照组比较，各病毒感染组CFU-TL集落产率明显减少、维持时间明显缩短（P均〈0．01），抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系；2．HCMV感染48、72、96、120h对宿主细胞增殖活性的影响与对照组比较均有显著差异（F分别为11．412，18．058，13．259，56．360 P均〈0．01）。3．PCR检测到HCMV感染组CFU-TL集落细胞内HCMV-AD169DNA。4．与HCMV感染组比较，HCMV＋AMI组、HCMV＋GCV组CFU-TL集落产生率明显增加，集落维持时间均显著延长（P均〈0．01）。结论HCMV在体外能抑制CFU-TL集落的增殖和分化；HCMV感染患儿免疫功能低下可能与HCMV直接抑制CFU-TL有关；GCV、AMI在体外能有效干预HCMV感染所致的CFU-TL增殖抑制的发生。     

婴儿期特发性血小板减少性紫癜与人巨细胞病毒感染的关系

目的探讨婴儿期特发性血小板减少性紫癜(ITP)与人巨细胞病毒(HCMV)感染及免疫功能的关系。方法对54例ITP患儿(病例组)及30例正常婴儿(对照组)采用酶联免疫吸附法(ELISA)行HCMV抗体检测,PCR法行HCMV DNA检测,并对病例组采用直接免疫荧光染色法行血T细胞亚群检测,比较两组差异。结果两组HCMV抗体、DNA阳性数比较,差异有显著性意义(P均<0.01)。病例组HCMV-IgM阳性与阴性者T细胞亚群CD4 、CD8 及CD4 /CD8 比较,差异有显著性意义(P均<0.01)。结论婴儿期HCMV感染可能为ITP发病的重要因素之一。免疫功能紊乱与ITP发生、发展密切相关。     

筛选与分析与人巨细胞病毒UL133编码蛋白相互作用的蛋白

目的 应用酵母双杂交技术筛选人胎脑cDNA文库中与人巨细胞病毒(HCMV)UL/b′ UL133编码蛋白相互作用的蛋白,为研究UL/b′编码蛋白的生物学功能,揭示HCMV先天感染的致病机制奠定基础.方法 设计特异性引物,在引物上下游分别引入NdeⅠ和BamHⅠ限制性内切酶识别位点,采用PCR技术扩增 HCMV临床分离株H株的UL133基因片段,将其扩增产物与载体pGBKT7 同时使用NdeⅠ和BamHⅠ进行双酶切,纯化后,将UL133片段插入到pGBKT7载体上,构建诱饵质粒 pGBKT7-UL133,并测序分析.利用醋酸锂小量酵母转化方法,将测序正确的诱饵质粒pGBKT7-UL133转化入AH109酵母感受态细胞中,然后将转化的菌液涂布在色氨酸缺陷型培养基(-Trp)上,筛选阳性菌落.再将人胎脑cDNA文库质粒转化到含pGBKT7-UL133质粒的AH109菌株中,在四缺培养基(-Ade/-His/-Leu/-Trp)中筛选,在铺有X-Gal的滤纸上进行显色反应,提取显蓝色的阳性酵母筛选质粒,运用电穿孔方法将其转化到TG1的大肠杆菌中,并行PCR鉴定,提取大肠杆菌中的文库质粒,并将其回转到含诱饵质粒pGBKT7-UL133 的酵母菌株中,进行回转验证.对筛选到的阳性克隆进行测序和生物信息学分析.结果 用于酵母双杂交筛选的诱饵质粒pGBKT7-UL133成功构建,含有诱饵质粒的酵母菌株在-Trp上生长.转化有人胎脑cDNA文库和诱饵质粒pGBKT7-UL133的酵母菌AH109,在四缺培养基中观察到有28个酵母菌落生长,通过显色反应、酵母质粒转化及回转酵母细胞筛选得到4个阳性克隆.通过序列比对,发现在这些基因中,其中一个基因编码人类还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)依赖性氧化还原酶1.结论 成功应用酵母双杂交系统筛选出与HCMV UL/b′区UL133编码蛋白相互作用的蛋白-NADPH,提示UL133蛋白可能在增加病毒毒力和传染性,干扰细胞间的信号传导和细胞的生长、分裂、凋亡等方面发挥重要作用.     

低分子质量肝素联合更昔洛韦体外抗人巨细胞病毒的作用

目的 研究低分子质量肝素(LMWH)联合更昔洛韦(GCV)体外抗人巨细胞病毒(HCMV)感染的作用.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定LMWH联合GCV对人胚肺成纤维细胞(HELF)的最大无毒质量浓度(TC0).应用体外细胞培养技术建立HCMV-AD169感染HELF模型.固定联合药物中LMWH的TC0(625.00 mg·L-1),设LWMH 625.00 mg·L-1、GCV 35.00 mg·L-1、GCV 17.50 mg·L-1、GCV 8.75 mg·L-1、LMWH 625.00 mg·L-1+ GCV 35.00 mg·L-1、LMWH 625.00 mg·L-1+ GCV 17.50 mg·L-1、LMWH 625.00 mg·L-1+ GCV 8.75 mg·L-1 7个不同用药组,分别干预HCMV感染细胞模型,使用MTT法检测各组细胞存活率,观察感染细胞特征性细胞病变(CPE),同时应用荧光定量PCR法检测用药后各组HCMV的载量.结果 联合药物的TC0中GCV的质量浓度为375.00 mg·L-1,LMWH的质量浓度为625.00 mg·L-1.当HCMV AD169浓度为100倍半数组织培养感染量(TCID50)感染HELF时,LMWH和GCV均可提高受染细胞存活率,降低受染细胞的HCMV DNA的拷贝数;当固定LMWH的TC0,与3种不同质量浓度GCV配伍时,均在HELF上有明显的抗HCMV的生物活性,并显示配伍后的抑制作用明显大于对应质量浓度单用GCV的抑制作用(P<0.01);当联合用药中GCV剂量减半时与全量应用GCV时的抗HCMV效果相同[即GCV 35.00 mg·L-1组与联合用药LMWH 625.00 mg·L-1+GCV 17.50 mg·L-1组的病毒抑制率和DNA拷贝数比较差异无统计学意义(P>0 05)];且联合用药对细胞的毒性试验结果及显微镜下观察细胞形态变化显示,随着联合用药中二者药物质量浓度的下降,细胞存活率升高,对细胞的毒性作用减弱.结论 LMWH联合GCV具有良好的体外抗HCMV作用,二者具有协同抗病毒作用.     

再生障碍性贫血患儿骨髓内人巨细胞病毒活动性感染对造血功能的影响

目的探讨再生障碍性贫血(再障)患儿骨髓内人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染与骨髓CD34 细胞/有核细胞的百分比之间的关系,了解骨髓HCMV活动性感染对再障患儿骨髓造血功能的影响。方法收集23例再障初诊患儿(再障组),5例非血液病患儿作为对照。所有患儿均于治疗前抽取骨髓液标本,一部分骨髓液采用Trizol法抽提骨髓液RNA,然后进行反转录聚合酶链反应,扩增后通过琼脂糖凝胶电泳检测患儿骨髓内是否存在HCMV活动性感染;将再障组和对照组患儿另一部分骨髓液进行多参数流式细胞术检测,分别检测二组患儿骨髓CD34 细胞/有核细胞百分比。结果23例再障患儿中9例患儿骨髓标本内可检测到HCMV RNA表达,阳性率为39.1%;5例对照组患儿骨髓标本内均未检测到HCMV RNA表达。流式细胞术检测显示再障患儿骨髓CD34 细胞/有核细胞为(0.27±0.21)%,明显低于对照组[(1.57±0.45)%](P<0.05)。骨髓HCMV RNA阳性再障患儿的CD34 细胞/有核细胞为(0.13±0.07)%,显著低于HCMV RNA阴性患儿[(0.36±0.22)%](P<0.05)。结论HCMV可感染再障患儿的骨髓组织,其活动性感染可导致骨髓CD34 细胞/有核细胞的百分比明显减少,提示骨髓内HCMV活动性感染对骨髓造血功能有抑制作用。     

聚合酶链反应在检测脑性瘫痪患儿人巨细胞病毒感染中的应用

目的　探讨聚合酶链反应 (PCR)在检测脑性瘫痪 (CP)患儿人巨细胞病毒 (HCMV)感染中的意义。方法　对 5 6例CP患儿用PCR检测尿巨细胞病毒 (CMV)DNA ,病毒分离检测尿标本 ,观察CMV特征性致细胞病变效应 (CPE) ,ELISA检测血清CMVIgM和IgG。结果　PCR检测CMVDNA阳性率为 5 3 .6% ,9例CMV病毒分离结果阳性 ;CMVIgM、IgG阳性率分别为 12 .5 %、3 7.5 % ;病毒分离 :CMVIgM阳性与CMVDNA阳性的符合率分别为 10 0 %、10 % ,前两者与后者比较均有显著差异 (P <0 .0 1) ;CMVIgG阳性与PCR阳性符合率为 6.7% ,两者无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论　PCR检测CMVDNA能够早期快速检测到CP患儿CMV感染 ,可应用于CP患儿中CMV感染的检测 ,为早期干预提供可靠依据。