培养的大鼠血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ受体的基因表达及调节

在培养的自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和正常血压ＷＫＹ大鼠的主动动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）模型，应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交和逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，分别检测ＡＳＭＣ中碱性成纤维细胞生长因子（ｈＦＧＦ）和血管紧张素Ⅱ（ＡＮＧⅡ）Ｉ型受体（ＡＴ１Ｒ）的基因表达。结果表明：ＳＨＲＡＳＭＣ中ｈＦＧＦ基因的基础表达和ＡＮＧⅡ刺激后的表达水平元旦明显高于ＷＫＹ大鼠；ｂＦＧＦ（１０ｎｍ／ｍｌ）对两种     

PP~(60c-Src)在血管紧张素II诱导的大鼠血管平滑肌细胞信息转导中的作用(英文)

目的:本研究通过观察c -Src在AngII对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)的激活和c -Fos蛋白表达中的影响,以进一步阐明AngII促VSMC增殖的细胞内信息转导机制。方法:原代和传代培养SD大鼠主动脉VSMC ,以脂质体包裹反义c -Src寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODNs)转染培养的VSMC以抑制c -Src蛋白表达和激酶活性。以未转染的VSMC为对照,观察10 -7mol/LAngII刺激对转染的VSMC的MAPK活性和c -Fos蛋白表达的影响。蛋白免疫沉淀和酶自身磷酸化率法测定c -Src激酶活性;髓鞘碱性蛋白(MBP)底物磷酸化率测定MAPK激酶活性;Westernblotting免疫印迹法测定c-Src和c -Fos蛋白表达情况。结果:转染不同浓度反义c-SrcODNs的VSMC ,c -Src蛋白含量呈浓度依赖性降低,c-Src激酶活性也显著抑制,以AngII刺激经转染反义c -SrcODNs的VSMC ,c -Src激酶活性增幅仅为对照组的8 .7% ;MAPK活性仅为对照的1 .6 % ;c -Fos蛋白表达的增幅为对照组的30 .0 %。结论:AngII可诱导VSMCc -Src激活和细胞内信息转导,且AngII引起的MAPK和c -fos的激活依赖于c-Src的激活,提示c -Src是AngII促血管平滑肌细胞增殖的重要信息分子。     

S-亚硝基谷胱苷肽对糖基化终产物诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增生的影响

为探讨脂溶性NO前体药物S 亚硝基谷胱苷肽 (S nitrosoglutathione ,GSNO)对糖基化终产物 (advancedglycosyla tionendproducts ,AGEs)诱导的大鼠血管平滑肌细胞增生的影响 ,利用体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞 ,用MTT法、同位素掺入法及细胞计数法测定其增殖率的变化 ,观察不同浓度的AGEs对血管平滑肌细胞的增殖的影响以及不同浓度的GSNO对AGEs作用的预防和逆转作用。MTT法测定的OD值、3 H 胸腺嘧碇核苷 (3 H TDR)掺入量、细胞计数均显示AGEs可以使血管平滑肌细胞数明显高于对照组 (P <0 0 5 ) ;而用GSNO干预后 ,AGEs的上述作用被明显抑制 (P <0 0 5 )。提示NSNO可以抑制AGEs诱导的血管平滑肌细胞的增殖     

糖尿病大鼠心肌血管紧张素Ⅱ和一氧化氮的动态变化

目的 :观察糖尿病大鼠心肌局部血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )和一氧化氮 (nitricoxide ,NO)的动态变化。方法 :实验动物分为三月对照组和糖尿病组各 8只 ;六月对照组和糖尿病组各 10只 ;分别于 3个月、6个月杀栓 ,测定AⅡ、血管紧张素转换酶 (ACE)、NO的含量和一氧化氮合酶 (iNOS)的表达。结果 :糖尿病大鼠心肌局部AngⅡ、ACE三个月时与对照组比较无显著性差异 ,六个月时明显增高 ,呈动态增加 ;血浆AngⅡ、ACE明显持续增高。心肌局部及血浆一氧化氮代谢产物硝酸盐 /亚硝酸盐含量从三个月起较对照组明显降低 ,到六个月时进一步减低 ,iNOS表达呈持续阳性。结论 :糖尿病心肌局部AngⅡ的不断增高和NO的持续减低可能共同参与了糖尿病心肌病的发生。     

培养的大鼠血管平滑肌细胞中bFGF基因表达与血管紧张素Ⅱ …

采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测培养的自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和正常血压ＷＫＹ大鼠的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）中碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达，用紫外法和放免法分别测定培养液中血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）活性和血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）含量，发现ＡｎｇⅡ能明显促进ＶＳＭＣ中ｂＦＧＦ基因表达，而ｂＦＧＦ则能明显诱导ＡＣＥ活性和提高ＡｎｇⅡ释放，且ＳＨＲＶＳＭＣ的ｂＦＧＦ基因表达，ＡＣＥ活性和Ａ     

Losartan对神经肽Y诱导血管平滑肌

目的:观察神经肽Y(NPY)与血管紧张素受体拮抗剂losartan对体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC)中PCNA、PDGF、c-myc癌基因表达的影响,从分子生物学的角度探讨NPY在高血压、动脉粥样硬化发生中的作用和losartan的逆转作用。方法:应用荧光免疫组化定量技术(ACAS570共聚焦激光扫描显微细胞仪)。结果:NPY刺激VSMC增殖,使其PCNA、PDGF和c-myc癌基因的表达明显高于对照组;losartan则可逆转NPY对VSMC增殖的刺激作用,使PCNA、PDGF和c-myc癌基因表达的平均荧光值降低。结论:NPY促进VSMC的增殖,其作用与高血压的发生有关;而losartan对高血压的治疗作用可能与拮抗NPY对VSMC增殖的刺激作用有关。     

嵌合性硫代磷酸修饰的反义c-myc寡脱氧核苷酸对动脉平滑肌细胞增殖抑制作用的研究

目的：探讨ｃ－ｍｙｃ基因表达在血管平滑肌细胞增殖信号传导通路中的作用和采用反义ｃ－ｍｙｃ寡脱氧核苷酸抑制血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖的作用。方法：采用针对大鼠ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ包括ＡＵＧ在内的翻译起始区的前５个密码子的嵌合性硫代修饰的反义ｃ－ｍｙｃ寡脱氧核苷酸（ＡＳ－ＯＤＮ）,以ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ导入ＳＭＣ后,通过细胞计数和３Ｈ－ＴｄＲ掺入观察其对ＳＭＣ增殖的抑制作用。结果：ｃ－ｍｙｃＡＳ－ＯＤＮ不仅对从静止状态刺激的ＳＭＣ增殖有抑制作用,而且对处于增殖状态的ＳＭＣ的增殖也有显著抑制作用,这种抑制作用可因加入正义ｃ－ｍｙｃＯＤＮ而减弱甚至消除,而且随着剂量的增加,抑制作用越来越明显。一次性应用ｃ－ｍｙｃＡＳ－ＯＤＮ可达到较持久的作用。而正义ＯＤＮ和错配ＯＤＮ对ＳＭＣ增殖无影响。结论：ｃ－ｍｙｃＡＳ－ＯＤＮ以剂量依赖和序列特异方式抑制ＳＭＣ增殖。ｃ－ｍｙｃ基因表达在ＳＭＣ增殖的信号传导通路中起重要作用。为采用ｃ－ｍｙｃＡＳ－ＯＤＮ抑制ＳＭＣ增殖的反义战略防治再狭窄研究奠定了基础。     

染料木素对非酶糖化低密度脂蛋白诱导大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响

染料木素(genistein)具有广泛的生物学活性,本研究观察其对非酶糖化低密度脂蛋白(AGE-LDL)诱导的SMC增殖的干预作用,为进一步探讨染料木素抗动脉粥样硬化(As)的作用机制奠定基础。     

Probucol对碱性成纤维细胞生长因子和过氧化氢促大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:研究probucol对bFGF和H₂O₂促大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法:采用MTT、细胞计数和[3H]-TdR掺入法观察probucol对bFGF和H₂O₂促VSMC增殖的影响。结果:①Probucol抑制bFGF和H₂O₂刺激VSMC增殖和DNA合成,且呈剂量依赖性。Probucol+bFGF和probucol+H₂O₂组与bFGF和H₂O₂组比较,细胞计数、A值和[3H]-TdR掺入量分别下降了40.0%、39.1%、45.5%和46.9%、45.0%、39.5%(P＜0.05,P＜0.01)。②bFGF和H₂O₂刺激前给予probucol预处理24h能显著抑制VSMC增殖和DNA合成(P＜0.05),而bFGF和H₂O₂刺激后24h给予probucol则无明显影响(P＞0.05)。结论:Probucol能显著抑制bFGF和H₂O₂刺激的VSMC增殖和DNA合成,但对bFGF和H₂O₂预刺激诱导的细胞增殖无抑制作用。     

肾上腺髓质素抑制溶血磷脂酸的促平滑肌细胞增殖作用

目的和方法：在培养的家兔血管平滑肌细胞上,观察了肾上腺髓质素（Ａｄｍ）对溶血磷脂酸（ＬＰＡ）诱导的ＤＮＡ合成和丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性途径激活的影响。结果：ＬＰＡ使［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入和ＭＡＰＫ活性增加,Ａｄｍ对基础水平的ＭＡＰＫ活性和［３Ｈ］－ＴｄＲ的掺入并无显著影响,但Ａｄｍ对ＬＰＡ刺激［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入和ＭＡＰＫ活性具有抑制作用。结论：Ａｄｍ和ＬＰＡ相互作用参与血管平滑肌细胞增殖的调节。     

P物质对气道平滑肌细胞增殖的调节作用

目的：观察Ｐ物质对犬气道平滑肌细胞增殖的调节作用。方法：以第四代ＡＳＭＣ为研究对象,分别以ＳＰ和「Ｓａｒ＾９,Ｍｅｔ（Ｏ２）＾１１」－ＳＰ（ＮＫ－１受兴奋剂）刺激,观察两者对细胞增殖的影响。又分别以ＧＲ ７１２５１（ＮＫ－１受体拮抗剂）,新霉素「磷脂酶Ｃ（ＰＬＣ）抑制剂」和尼群地平为干预因素,观察它们对ＳＰ作用的影响。     

尼氟灭酸对气道平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨尼氟灭酸(NFA)对气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的影响及机制。方法:采用含胎牛血清的DMEM原代培养BALB／c小鼠ASMCs,[³H]-TdR掺入法检测不同剂量NFA(10和50 μmol／L)对ASMCs增殖活性的影响。激光共聚焦显微镜下观察NFA及硝苯地平对组胺致ASMCs中[Ca²⁺]i变化的影响。间接免疫荧光法观察NFA对ASMCs表达MAPK蛋白的影响。结果:10 μmol／L和50 mol／L NFA组细胞的活性明显低于对照组,并且高浓度50 μmol／L NFA组比低浓度10 mol／L NFA组更显著(P<0.01),表现出剂量依赖性。共聚焦显微镜下,对照组ASMCs胞浆和胞核呈现亮绿色荧光,胞膜周围较淡。加入激动剂组胺后,荧光亮度逐渐增强。相反,当同时存在NFA或硝苯地平干预时,镜下观察荧光强度变化不够明显。间接免疫荧光染色结果表明,培养24 h后,对照组中ASMCs细胞沿梭形胞浆出现大斑片状亮绿色荧光,而NFA干预组细胞表现为弱绿色荧光,胞浆内分布区域局限。结论:NFA能有效抑制培养ASMCs的增殖活性,这种作用可能是通过阻断钙激活性Cl^-通道对 [Ca²⁺]i的正反馈效应,以及降低MAPK的表达来实现的。     

Pharmacological characterization of the relaxant effect induced by adrenomedullin in rat cavernosal smooth muscle

The aim of the present study was to determine the mechanisms underlying the relaxanteffect of adrenomedullin (AM) in rat cavernosal smooth muscle (CSM) and theexpression of AM system components in this tissue. Functional assays using standardmuscle bath procedures were performed in CSM isolated from male Wistar rats. Proteinand mRNA levels of pre-pro-AM, calcitonin receptor-like receptor (CRLR), and Subtypes1, 2 and 3 of the receptor activity-modifying protein (RAMP) family were assessed byWestern immunoblotting and quantitative real-time polymerase chain reaction,respectively. Nitrate and 6-keto-prostaglandin F_1α(6-keto-PGF_1α; a stable product of prostacyclin) levels were determinedusing commercially available kits. Protein and mRNA of AM, CRLR, and RAMP 1, -2, and-3 were detected in rat CSM. Immunohistochemical assays demonstrated that AM and CRLRwere expressed in rat CSM. AM relaxed CSM strips in a concentration-dependent manner.AM_22-52, a selective antagonist for AM receptors, reduced therelaxation induced by AM. Conversely, CGRP_8-37, a selective antagonist forcalcitonin gene-related peptide receptors, did not affect AM-induced relaxation.Preincubation of CSM strips with N^G-nitro-L-arginine-methyl-ester (L-NAME,nitric oxide synthase inhibitor), 1H-(1,2,4)oxadiazolo[4,3-a]quinoxalin-1-one (ODQ,quanylyl cyclase inhibitor), Rp-8-Br-PET-cGMPS (cGMP-dependent protein kinaseinhibitor), SC560 [5-(4-chlorophenyl)-1-(4-methoxyphenyl)-3-trifluoromethyl pyrazole,selective cyclooxygenase-1 inhibitor], and 4-aminopyridine (voltage-dependentK⁺ channel blocker) reduced AM-induced relaxation. On the other hand,7-nitroindazole (selective neuronal nitric oxide synthase inhibitor), wortmannin(phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor), H89 (protein kinase A inhibitor), SQ22536[9-(tetrahydro-2-furanyl)-9H-purin-6-amine, adenylate cyclase inhibitor],glibenclamide (selective blocker of ATP-sensitive K⁺ channels), and apamin(Ca²⁺-activated channel blocker) did not affect AM-induced relaxation.AM increased nitrate levels and 6-keto-PGF_1α in rat CSM. The major newcontribution of this research is that it demonstrated expression of AM and itsreceptor in rat CSM. Moreover, we provided evidence that AM-induced relaxation inthis tissue is mediated by AM receptors by a mechanism that involves the nitricoxide-cGMP pathway, a vasodilator prostanoid, and the opening of voltage-dependentK⁺ channels.     

培养的人主动脉平滑肌细胞异常表达HLA—DR,DP抗原

用γ-IFN、淋巴细胞条件培养液(LCM)对培养的人主动脉平滑肌细胞(SMC)进行诱导,观察其是否异常表达DR、DP抗原,以探讨在动脉粥样硬化(AS)发病中的意义。结果表明,γ-IFN组DR、DP阳性率分别为80%和73%;LCM组DR、DP阳性率为74%和70%。两组均明显高于正常对照组DR、DP的阳性率(11%,7%)。提示激活的T淋巴细胞通过分泌γ-IFN(或合并其它因子)诱导SMC异常表达DR、DP抗原,可能在AS的发生发展中起一定作用。     

188铼辐射抑制血管平滑肌细胞增殖研究

目的：探讨放射性核素¹⁸⁸铼（¹⁸⁸Re）对培养平滑肌细胞增殖的作用及其机制。方法：应用¹⁸⁸Re β射线进行培养平滑肌细胞的内辐射。通过细胞计数、再增殖试验、[³H]-TdR掺入试验、流式细胞术细胞周期分析、免疫细胞化学及细胞存活率检测等方法,观察辐射抑制平滑肌细胞增殖的有效及最佳剂量、有效抑制时间、细胞增殖率变化、细胞周期分布、细胞存活率及其相关基因表达。结果：5.2 Gy剂量辐射,50%以上平滑肌细胞增殖受抑,细胞增殖率为46%;20.6 Gy剂量辐射,DNA合成抑制率达92%,增殖期细胞占3%;辐射后2周未见细胞再增殖,<20.6 Gy辐射未见细胞存活力下降;辐射后P53表达升高,PCNA表达降低。结论：¹⁸⁸Re β辐射对平滑肌细胞增殖抑制有效且持久半数有效剂量为5 Gy最佳辐射剂量为20 Gy。低剂量辐射抑制平滑肌细胞增殖的主要机制为损伤细胞分裂增殖能力。P53及PCNA调控辐射抑制细胞增殖过程。     

血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌血小板源生长因子

目的:观察血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌血小板源生长因子(PDGF)受体β亚单位的调节,探讨两条信号转导途径的交互作用在血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的意义。方法:制备两肾一夹肾性高血压大鼠模型,免疫印迹法检测主动脉组织PDGF受体β亚单位的含量。培养大鼠主动脉VSMC,观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对PDGF受体β亚单位的影响。结果:两肾一夹大鼠术后8周动脉血压明显增高,同时主动脉PDGF受体β亚单位的表达高于对照组126.6%(P＜0.05)。AngⅡ刺激培养的VSMC可导致PDGF受体β亚单位上调192.74%(P＜0.01),该效应可被Ⅰ型AngⅡ受体(AT1)的拮抗剂losartan和磷脂酶C(phospholipasec,PLC)的抑制剂U73122完全阻断(P＜0.01),但仅被丝裂原活化蛋白激酶激酶抑制剂PD98059部分阻断(P＜0.01)。结论:AngⅡ可以通过AT1及下游的信号分子PLC上调PDGF受体β亚单位的表达,而细胞外信号调节激酶可能参与AngⅡ的胞内信号转导。     

血管紧张素Ⅱ2型受体对大鼠血管平滑肌增殖的影响及其机制

目的：观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）2型受体（AT2R）对培养的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。方法：将AT2RcDNA转染到培养的大鼠VSMC中,分别观察AngⅡ、AngⅡ＋losartan、AngⅡ+PD123319等不同处理因素处理对VSMC的细胞数目以及PCNA、NOS表达的影响。结果：losartan处理组细胞数目和PCNA表达量少于AngⅡ处理组,NOS表达量高于AngⅡ处理组,而PD123319处理组细胞数目和PCNA表达量显著高于AngⅡ处理,NOS表达量较之为少。结论：激活AT2R能拮抗AngⅡ的由AT1R介导的促细胞增殖作用,这种作用可能与激活AT2R后NOS表达增多使NO合成增多有关。     

培养的大鼠血管平滑肌细胞中bFGF基因表达与血管紧张素Ⅱ释放的相互关系

采用Northern杂交检测培养的自发性高血压人鼠（SHR）和正常血压WKY大鼠的血管平滑肌细胞（VSMC）中碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）基因表达，用紫外法和放免法分别测定培养液中血管紧张素转换酶（ACE）活性和血管紧张素Ⅱ（Aug11）含量。发现AugⅡ能明显促进VSMC中bFGF基因表达，而bFGF则能明显诱导ACE活性和提高AugⅡ释放，臣SHRVSMC的bFGF基因表达、ACE活性和AugⅡ释放均显著高于WKY大鼠。结果提示，VSMC中bFGF基因表达和AugⅡ释放间存在相互促进的正反馈联系。     

血管紧张素II及其受体在血管平滑肌细胞迁移中的作用

摘要目的:探讨血管紧张素II(AngII)及其受体(ATRs)在局部血管损伤后血管平滑肌细胞(VSMC)迁移中的作用及其机制。方法:以体外培养VSMC为基础,采用细胞化学和改良Boyden'schamber的方法,观察AngⅡ干预VSMC后AngII受体的表达、VSMC迁移能力的变化、肌动蛋白纤维丝的动态组装变化,并探讨AT₁R拮抗剂、AT₂R拮抗剂对上述观测指标的影响。结果:AngII10^-7mol/L可以刺激VSMC发生迁移,该作用是通过影响VSMC内应力纤维动态组装而实现的;AngII干预VSMC后可使AT₁R表达上调,随着作用时间延长AT₁R表达水平下降。AT₁R拮抗剂可下调AT₁R表达。AngII通过AT₁R的介导发挥其影响VSMC迁移能力的生物学效应。AT₂R对此无明显影响。结论:AngII通过AT₁R介导来调节VSMC内肌动蛋白微丝的动态组装,进而改变VSMC的迁移能力,从而发挥其介导VSMC迁移的生物学效应。