硫化氢通过p38MAPK信号通路对肝纤维化大鼠肝细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对肝纤维化大鼠肝细胞增殖、凋亡的调节作用以及P-p38丝裂原活化蛋白激酶(p38mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)蛋白的表达的影响.方法:用四氯化碳诱导肝纤维化SD大鼠模型,将提取的肝纤维化大鼠肝细胞分组:对照组、H2S组(对照组基础上加H2S的供体N a H S至最适浓度)、S B组(对照组基础上加SB203580至最适浓度)、SB+H2S组(对照组基础上加Na HS、SB203580至最适浓度).M T T法检测N a H S及S B203580对肝纤维化大鼠肝细胞的增殖、增殖抑制率的影响;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测肝纤维化大鼠肝细胞凋亡率;Western blot技术检测P-p38MAPK蛋白在各组中的表达水平.结果:与对照组相比,低浓度H2S(50μmol/L)促进肝纤维化大鼠肝细胞增殖明显(P=0.000),对肝纤维化大鼠肝细胞凋亡无影响;SB203580可抑制肝纤维化大鼠肝细胞的增殖,伴随药物浓度的升高细胞存活率降低(P=0.000),并诱导肝纤维化大鼠肝细胞凋亡(P=0.000);P-p38MAPK蛋白在各组中均有表达,H2S组表达水平高于对照组(P=0.000),SB组、SB+H2S组与对照组、H2S组相比,P-p38MAPK蛋白的表达量均减少(均P=0.000).结论:低浓度H2S对肝纤维化大鼠肝细胞凋亡无诱导作用,但能通过激活p38MAPK信号转导通路促进其细胞增殖.     

p38MAPK信号通路的抑制减轻缺氧复氧环境下心肌细胞凋亡

目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路抑制剂对缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法心肌细胞H9C2分为对照组(Con组)、缺氧复氧组(H/R组)、p38MAPK信号通路抑制剂SB203580组(SB203580组),Con组细胞正常培养,H/R组、SB203580组进行缺氧复氧处理,SB203580组细胞在缺氧前用p38MAPK信号通路抑制剂SB203580预处理24 h。噻唑蓝(MTT)检测细胞存活情况,流式细胞术检测细胞凋亡,二硝基苯肼显色法检测上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量,用硫代巴比妥酸比色法检测细胞中丙二醛(MDA)含量,用黄嘌呤氧化法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)含量,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测细胞中活性氧(ROS)含量,Western blot检测细胞中p38MAPK、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达。结果 H/R组、SB203580组细胞存活率低于Con组,凋亡率高于Con组,细胞中MDA、ROS含量高于Con组,培养液上清中LDH高于Con组,细胞中SOD含量低于Con组,细胞中p-p38MAPK、Cleaved Caspase-3蛋白水平高于Con组。SB203580组细胞存活率高于H/R组,凋亡率低于H/R组,细胞中MDA、ROS含量低于H/R组,培养液上清中LDH低于H/R组,细胞中SOD含量高于H/R组,细胞中p-p38MAPK、Cleaved Caspase-3蛋白水平低于H/R组。结论 p38MAPK信号通路抑制剂能够减轻缺氧复氧环境下心肌细胞凋亡和氧化损伤。     

p38MAPK信号通路介导右美托咪定对缺氧/复氧心肌细胞损伤的保护作用

目的探讨右美托咪定(Dex)是否通过p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路发挥对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞损伤的保护作用。方法培养大鼠心肌细胞H9c2,随机分为空白对照组、H/R组、Dex预处理(Dex+H/R)组、抑制剂SB203580(H/R+SB)组和Dex预处理+SB203580(Dex+H/R+SB)组。采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)含量,分光光度计检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,Western印迹检测细胞中磷酸化(p)-p38MAPK、细胞色素(Cyt)C和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切Caspase)-3蛋白水平。结果与H/R组比,Dex预处理可提高H9c2细胞活力,降低细胞凋亡率,下调LDH和CK的漏出量,减少MDA含量,上调SOD和GSH-Px活性,抑制p-p38MAPK、CytC和酶切Caspase-3蛋白表达,差异有统计学意义(P0.05)。p38MAPK信号通路抑制剂SB203580可明显增强Dex对H/R心肌细胞损伤的保护作用。结论 Dex可能通过p38MAPK信号通路抑制细胞中的氧化应激,下调CytC和酶切Caspase-3蛋白的表达,抑制H9c2细胞凋亡对H/R心肌细胞损伤的保护作用。     

硫化氢在外源性SB203580预处理人卵巢癌SKOV3细胞增殖中的作用

目的探讨硫化氢(H2S)供体硫氢化钠(Na HS)对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响及可能机制。方法体外培养SKOV3细胞,随机分为正常对照组、Na HS组、SB203580组、Na HS+SB203580组,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组SKOV3细胞增殖,流式细胞术检测各组SKOV3细胞周期分布,Western印迹检测各组SKOV3细胞中P-p38MAPK蛋白表达。结果与正常对照组比较,Na HS组SKOV3细胞增殖明显增加,G1期细胞明显减少,S期细胞明显增加,且p-p38MAPK表达明显增加(均P<0.01);SB203580组、Na HS+SB203580组SKOV3细胞增殖均明显减少,G1期细胞均明显增加,S期细胞均明显减少,且p-p38MAPK表达均明显降低(均P<0.01)。而与Na HS组比较,SB203580组、Na HS+SB203580组SKOV3细胞增殖均明显减少,G1期细胞均明显增加,S期细胞均明显减少,且p-p38MAPK表达均明显降低(均P<0.01);与SB203580组比较,Na HS+SB203580组SKOV3细胞的增殖明显增加,G1期细胞明显减少,S期细胞明显增加,且p-p38MAPK表达明显增加(均P<0.01)。结论 H2S可能通过活化p38MAPK信号通路促进SKOV3细胞增殖。     

软脂酸通过丝裂原活化蛋白激酶通路促进血管内皮细胞凋亡

目的探讨软脂酸(PA)诱导的血管内皮细胞凋亡中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的作用。方法将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分对照组、PA组、MAPK通路干预组[分别先用p38抑制剂SB203580、氨基末端激酶(JNK)抑制剂PD98059、细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂SP600125干预]再分为PA+SB组、PA+PD组、PA+SP组。流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测caspase-3、磷酸化p38、JNK和ERK1/2表达水平;分光光度法检测caspase-3的活性。结果与对照组比较,PA组、PA+SB组、PA+PD组、PA+SP组HUVEC凋亡及caspase-3表达和活性明显增加,PA组磷酸化p38MAPK表达明显增加(P<0.05)。与PA组比较,PA+SB组HUVEC细胞凋亡率、caspase-3表达和活性明显降低(P<0.05);而PA+PD组和PA+SP组HUVEC凋亡率、caspase-3表达和活性无明显变化(P>0.05)。结论 PA通过p38MAPK通路促进内皮细胞凋亡。     

硫化氢通过调控p38丝裂原活化蛋白激酶抑制阿霉素引起的心肌细胞损伤

目的 研究硫化氢(H2S)是否通过调控p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路保护H9c2心肌细胞对抗阿霉素(DOX)引起的损伤.方法 应用DOX处理心肌细胞建立心肌细胞损伤模型.为观察H2S的保护作用,在DOX处理心肌细胞前,应用400 μmol/L硫氢化钠(NaHS,为H2S的供体)预处理细胞30 min.Western blot法测定p38MAPK蛋白的表达水平;应用细胞计数试剂盒8(CCK-8)比色法测定细胞存活率;Hoechst 33258核染色法观察细胞凋亡的形态学改变;双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相测定细胞内活性氧(ROS)水平.结果 在15 ～60min的时间范围内,5μmol/L DOX呈时间依赖性地上调心肌细胞磷酸化p38MAPK的表达水平;在DOX作用心肌细胞前,400 μmol/L NaHS预处理30 min能明显地抑制DOX对p-p38MAPK表达的上调作用,并能显著地阻断DOX引起的心肌细胞损伤,使细胞存活率升高、凋亡细胞数量和ROS生成均减少;与NaHS的保护作用相似,p38MAPK的抑制剂SB203580(3 μmol/L)预处理60 min能保护H9c2心肌细胞对抗DOX引起的损伤.结论 p38MAPK通路参与DOX对心肌细胞的损伤作用;H2S可通过抑制p38MAPK通路保护心肌细胞对抗DOX诱导的损伤.     

p38MAPK-eNOS-N0信号通路在人脐静脉内皮细胞凋亡中的保护作用

目的探讨p38MAPK信号通路在胰高血糖素样肽1(GLP-1)拮抗人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用。方法实验分为对照组、糖基化终末产物(AGE)组、GLP-1组、AGE+GLP-1组、AGE+SB203580组、AGE+GLP-1+SB203580组及AGE+GLP-1+L-NAME组,Western blot检测p-p38MAPK/p38MAPK、磷酸化内皮型一氧化氮合酶/内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS/eNOS)蛋白表达情况,NO检测试剂盒(一步法)检测NO含量,DCFH-DA荧光探针检测细胞活性氧(ROS)含量,Annexin V/PI流式检测细胞凋亡率。结果与AGE组相比,GLP-1预处理可诱导p-p38MAPK蛋白表达下降(P=0.000);与对照组比较,GLP-1或p38 MAPK抑制剂(SB203580)预处理后,受AGE抑制的eNOS蛋白表达或诱导的ROS水平分别显著升高(P=0.004)或下降(P=0.000);GLP-1预处理后,因AGE诱导的细胞凋亡率显著降低(P=0.000),而加入L-NAME后,GLP-1的抗凋亡作用显著减弱(P=0.002);GLP-1预处理后,细胞NO含量较单纯AGE组明显升高(P=0.000),而予以L-NAME后,细胞NO含量显著降低(P=0.011)。结论GLP-1可抑制p38 MAPK信号通路的活化,拮抗AGE对血管内皮细胞的氧化损伤;上调eNOS蛋白的表达,拮抗AGE诱导的内皮细胞NO生成障碍及细胞凋亡,从而延缓糖尿病合并动脉粥样硬化的发生发展。     

硫化氢在外源性SB203580预处理人卵巢癌细胞增殖与凋亡中的作用

目的探讨硫氢化钠(Na HS,H2S供体)通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路对人卵巢癌细胞(SKOV3细胞株)增殖与凋亡的调控作用。方法体外培养人卵巢癌细胞,随机分为正常对照组、Na HS (0. 01 mol/L)组、SB203580(0. 1 mol/L)组、Na HS联合SB203580组,每组均经药物干预处理48 h后收集细胞,细胞增殖采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测,细胞周期分布与细胞凋亡率均采用流式细胞术检测。结果 (1)与正常对照组比较,Na HS组、SB203580组、Na HS联合SB203580组人卵巢癌SKOV3细胞抑制率均显著升高,G1期细胞比例均明显增加,S期细胞均明显减少,且细胞凋亡率均明显增加,差异有统计学意义(均P0. 01)。(2)SB203580组人卵巢癌SKOV3细胞抑制率、细胞周期各时相分布、细胞凋亡率均与Na HS组比较差异无统计学意义(P0. 05),而与Na HS组比较,Na HS联合SB203580组人卵巢癌SKOV3细胞抑制率明显增加,G1期细胞比例明显增加,S期及G2/M期细胞比例明显减少,且细胞凋亡率明显增高,差异有统计学意义(均P0. 01)。(3)与SB203580组相比,Na HS联合SB203580组人卵巢癌SKOV3细胞抑制率明显增加,G1期细胞比例明显增加,S期及G2/M期细胞比例明显减少,且细胞凋亡率显著增高,差异有统计学意义(均P0. 01)。结论 H2S可能通过抑制p38MAPK信号通路抑制人卵巢癌细胞的增殖,促进人卵巢癌细胞凋亡,且H2S可协同SB203580调节人卵巢癌细胞的增殖与凋亡。     

甘丙肽受体2激动剂后处理对人胃黏膜上皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制研究

胃缺血再灌注损伤常导致胃黏膜细胞钙超载、自由基产生过量、白细胞浸润、微循环障碍。缺氧后处理能有效减轻缺氧/复氧(H/R)造成的损伤。甘丙肽受体2(GaIR2)主要分布于消化系统和神经系统,对许多内分泌活动具有调节作用。目前关于GalR2对预防胃黏膜上皮细胞H/R损伤的作用尚未明确。目的:探讨GalR2激动剂后处理对人胃黏膜上皮细胞H/R损伤的保护作用及其机制。方法:以人胃黏膜上皮细胞GES-1制备H/R损伤模型。实验分为正常对照组(N组)、H/R组、M1145(GalR2激动剂)后处理组(M组)、SB203580(p38MAPK信号阻断剂)+M1145后处理组(S+M组)、DMSO溶剂对照组(D组)。以MTT检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Hoechst染色法观察细胞凋亡情况;ELISA法检测乳酸脱氢酶(LDH)含量;实时定量PCR检测Bcl-2、Bax、p38MAPK表达水平。结果:H/R组细胞存活率显著低于N组和M组(P0.05);H/R组细胞凋亡率显著高于N、M、S+M组(P0.05),M组凋亡率显著低于S+M组(P0.05);H/R组LDH含量显著高于M组和S+M组(P0.05);N组、M组Bcl-2表达水平显著高于H/R组、S+M组以及D组(P0.05);H/R组Bax表达水平显著高于N、M、S+M组(P0.05);H/R组、S+M组p38MAPK表达水平显著低于M组(P0.05)。结论:GalR2激动剂M1145能有效减轻H/R引起的胃黏膜GES-1细胞损伤,且可能通过p38MAPK途径发挥作用。     

p38 MAPK信号转导通路参与NO诱导兔关节软骨细胞凋亡

目的探讨p38 MAPK信号转导通路在软骨细胞凋亡中的作用。方法体外培养兔关节软骨细胞,一氧化氮(NO)供体NOC-18和p38 MAPK抑制剂SB203580作用于细胞24 h,用AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测软骨细胞凋亡率,W estern b lot测定p38、磷酸化p38蛋白的表达水平。结果与对照组比较,SB203580显著降低了NOC-18诱导的软骨细胞凋亡率(P<0.05);NOC-18以浓度依赖的方式促进p38 MAPK的磷酸化,而SB203580能抑制其磷酸化(P<0.05)。结论p38 MAPK通路参与了NO诱导的兔关节软骨细胞凋亡的信号转导。     

p38MAPK抑制剂SB203580对脓毒症大鼠心功能的影响及机制探讨

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶p38MAPK抑制剂SB203580对脓毒症大鼠心功能的影响及其机制.方法 30只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、干预组,各10只.模型组和干预组采用盲肠结扎穿刺术（CLP）制备脓毒症大鼠模型.干预组给予p38MAPK抑制剂SB203580干预.干预后1、3、6、12、24h检测各组血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、IL-6水平,24h后行心脏彩超检测各组大鼠的左室射血分数（EF）及短轴缩短率（FS）;并分离左室心肌采用Western blot方法检测p38MAPK蛋白表达.结果 模型组、干预组术后血清TNF-α、IL-6水平迅速升高,于24h到达高峰,但干预组升高幅度小于模型组（P均＜0.05）.术后24h模型组、干预组左心室EF和FS较对照组显著降低（P均＜0.05）.干预组左心室EF和FS下降程度小于模型组（P均＜0.05）.与对照组比较,术后24h模型组、干预组心肌组织中p38MAPK蛋白相对表达量升高,干预组低于模型组（P均＜0.05）.结论 p38MAPK抑制剂SB203580对脓毒症大鼠心功能有保护作用,降低TNF-α、IL-6水平可能为其主要机制.     

特异性p38蛋白激酶抑制剂SB203580对小鼠感染肺炎衣原体后细胞因子变化的影响

目的 探讨特异性p38蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂SB203580对小鼠感染肺炎衣原体后细胞因子变化.方法 使用TLR4基因缺失(C3H/HeJ)小鼠90只,随机分为正常组、感染组和SB203580组,每组再分别按0、1、4、7、14 d分成5小组.正常组鼻内接种二磷酸蔗糖缓冲液,感染组鼻内接种肺炎衣原体约4.0×106 IFU/ml,SB203580组在感染肺炎衣原体后腹腔注射SB203580(100 mg/kg).分别在接种后第0天,第1天、第4天、第7天、第14天预定的时间处死小鼠,取肺组织分别采用Western blot法测p38 MAPK蛋白的表达,用酶联免疫吸附法检测肺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1(IL-1)的表达,同时观察各组小鼠肺组织病理变化.结果 感染组肺组织中TNF-α、IL-1的表达水平在各时间点均高于正常组(P＜0.05或P＜0.01),并在第4天出现高峰,14天以后开始下降.SB203580组肺组织中细胞因子TNF-α、IL-1的表达水平在各时间点均低于感染组(P＜0.05或P＜0.01).同时,SB203580组p38 MAPK蛋白表达强度弱于感染组.结论 p38 MAPK参与小鼠感染肺炎衣原体的炎症反应,特异性p38 MAPK抑制剂SB203580能抑制小鼠感染肺炎衣原体后的细胞因子表达,减轻炎症反应.     

p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂减少大鼠肝脏炎症细胞因子的表达

目的 观察p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580阻断p36 MAPK信号通路,减少脑死亡大鼠肝脏促炎细胞因子表达的作用.方法 雄性Wistar大鼠30只,体质量180～200 g,随机分3组,每组10只.脑死亡组:诱导大鼠及死亡;脑死亡+SB203580组:大鼠脑死亡诱导成功后,经阴茎背静脉注射SB203580(10 mg/kg);两组大鼠脑死亡诱导成功,行人工呼吸6 h后,若平均动脉压大于80 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),则为脑死亡供体,获取肝脏待检.对照组:正常大鼠麻醉后取肝脏待检.逆转录-聚合酶链反应检测肝脏肿瘤坏死因子(TNF)α和白细胞介素(IL)-1β的mRNA表达,Western blot检测肝脏TNF α和IL-1 β的蛋白质表达以及磷酸化p38 MAPK的表达.多个样本间比较行One-Way ANOVA分析,SNK法行两两样本间比较.结果 脑死亡组大鼠肝脏出现p38 MAPK磷酸化,磷酸化p38 MAPK的相对表达量比对照组明显增加(0.190±0.004比0.001±0.002),差异有统计学意义(q=172.53,P＜0.01);肝脏TNF α的mRNA和蛋白质表达量分别为0.670±0.012和0.240±0.003,较对照组(分别为0.130±0.013和0.001±0.002)明显增加(q值分别为123.99和243.09,P值均＜0.01);肝脏IL-1 β的mRNA和蛋白质表达量分别为0.560±0.009和0.190±0.003,较对照组(分别为0.160±0.010和0.001±0.002)明显增加(q值分别为135.35和192.23,P值均＜0.01).脑死亡SB203580组大鼠肝脏p38 MAPK磷酸化下降,磷酸化p38 MAPK的表达量(0.120±0.004)比脑死亡组明显下降(q=63.90,P＜0.05),但仍明显高于对照组(q=108.63,P＜0.01);肝脏TNF α的mRNA和蛋白质表达量分别为0.430±0.016和0.180±0.004,较脑死亡组明显下降(q值分别为55.11和61.03,P值均＜0.01),但仍高于对照组(q值分别为68.89和182.06,P值均＜0.01);肝脏IL-1β的mRNA和蛋白质表达量分别为0.270±0.009和0.140±0.004,较脑死亡组明显下降(q值分别为98.13和50.85,P值均＜0.01),但仍高于对照组(q值分别为37.22和141.38,P值均＜0.01).结论 SB203580能抑制p38 MAPK的磷酸化,阻断p38 MAPK信号通路,减少脑死亡大鼠肝脏促炎细胞因子表达,降低肝脏免疫原性.     

p38信号通路在内皮细胞微粒诱导人脐静脉内皮细胞表达细胞间黏附分子-1中的作用

目的观察p38信号通路（P38MAPK）在内皮细胞微粒（EMPs）诱导人脐静脉内皮细胞（HU—VECs）表达细胞间黏附分子-1（ICAM-1）中的作用。方法将体外培养的HUVECs随机分组：①EMPs不同时点观察组：用EMPs（终浓度105／m1）分别刺激细胞0、3、6、12、24h;②EMPs不同剂量作用组：分别用终浓度为0、10^2、10^3、10^4、10^5／ml的EMPs刺激细胞24h;③EMPs＋p38MAPK特异性抑制剂SB203580组：在EMPs（终浓度10^5／ml）刺激前,与终浓度为5μmol／L的SB203580共同孵育30min。用蛋白免疫印迹法（Western blot）测定p38MAPK磷酸化表达,实时荧光定量PCR测定ICAM—1mRNA的表达。结果EMPs可激活p38MAPK,使磷酸化p38MAPK蛋白表达量及ICAM—1mRNA表达量增加,且呈剂量和时间依赖性。p38MAPK特异性拈抗剂SB203580可显著抑制EMPs的此作用。结论p38信号通路可能部分参与了对EMPs诱导HUVECs表达ICAM-1的调控。     

p38丝裂原活化蛋白激酶对急性坏死性胰腺炎大鼠低钙血症的影响

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠低钙血症和甲状旁腺激素受体1(PTHR1)表达的影响.方法 将雄性SD大鼠72只按完全随机法分为ANP组、SB203580干预(SB)组和假手术(SO)组,每组分3、6、12 h 3个时间点,每个时间点8只.以5%牛磺脱氧胆酸钠逆行胰胆管注射建立ANP模型,SB组在造模前30 min腹腔注射p38MAPK特异抑制剂SB203580 10 mg/kg体重.观察各组血清钙浓度,蛋白质印迹法(Western blotting)分析骨组织磷酸化p38MAPK(P-p38 MAPK)和TNF-α变化,实时RT-PCR检测骨组织PTHR1 mRNA表达.结果 制模后6 h,SO组、ANP组和SB组血清钙浓度分别为(2.50±0.08)mmoL/L、(2.11±0.06)mmol/L和(2.35±0.10)mmol/L;骨组织P-p38 MAPK表达量分别为0.14±0.04、0.80±0.06和0.33±0.05;骨组织TNF-α表达量分别为0、0.91±0.04和0.44±0.03;骨组织PTHR1 mRNA表达量分别为1.00±0.12、0.23±0.04和0.44±0.06.SB组骨组织P-p38 MAPK及TNF-α表达较ANP组显著降低(P＜0.01);骨组织PTHR1 mRNA表达量及血清钙浓度较ANP组显著增加(P＜0.01).结论 p38MAPK信号转导通路可介导ANP低钙血症的发生,抑制该通路可改善ANP低钙血症.     

导痰汤对人脐静脉内皮细胞间黏附分子1mRNA和p38表达的影响

目的探讨导痰汤通过对p38丝裂原活化蛋白激酶的调节而干预内皮细胞间黏附分子1（ICAM-1）mRNA的表达,以明确导痰汤治疗动脉粥样硬化的机制。方法取新生儿脐带,分离脐静脉内皮细胞（HUVEC）,传代培养的1～3代用于实验。含药血清的置备：将导痰汤按照0．9g·kg^-1·d^-1剂量给sD大鼠灌胃后10d,经腹主动脉采血,分离血清。实验共分7组：HUVEC为空白对照组,含药血清（20％）处理HUVEC为导痰汤对照组,肿瘤坏死因子仪（TNF—α）预处理HUVEC为TNF—α诱导组,先采用5％、10％、20％含药血清预处理HUVEC,再与TNF-α共培养为5％、10％、20％导痰汤组,使用p38特异性阻滞剂SB203580处理HUVEC为SB203580阻滞组。通过实时定量PCR和Westernblot等方法,观察导痰汤对TNF—α刺激脐静脉内皮细胞培养内皮细胞ICAM-1mRNA的表达和p38表达的影响。结果①TNF-α诱导组ICAM-1mRNA的表达（1．17±0．26）和p38的表达（0．77±0．19）显著高于空白对照组和导痰汤对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）;使用导痰汤含药血清或SB203580处理后,5％导痰汤组ICAM-1mRNA的表达为0．97±0．15;10％导痰汤组为0．85±0．17;20％导痰汤组为0．73±0．10;SB203580阻滞组为0．64±0．19;②5％导痰汤组p38的表达为0．69±0．21;10％导痰汤组为0．59±0．27;20％导痰汤组为0．47±0．11;SB203580阻滞组为0．36±0．09,表达显著下降,差异有统计学意义（P〈0．05）;p38活性与ICAM-1mRNA水平呈显著正相关（r=0．706,P〈0．01）。结论导痰汤可以通过调节p38表达而抑制TNF—α刺激所致的脐静脉内皮细胞ICAM—1mRNA的表达,故能起到治疗动脉粥样硬化的作用。     

血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞p38丝裂素激活蛋白激酶通路的作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)激活人脐静脉内皮细胞(HUVECs)p38丝裂素激活蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路的作用。方法用含20%胎牛血清的DMEM培养基与CO_2培养箱(5%CO_2+95%空气)培养HUVECs。待细胞生长至80%融合时,无血清培养16h后分组:(1)AngⅡ不同时点观察组:用AngⅡ(终浓度100 nmol/L)分别刺激细胞0、5、10、15、30、45 min和60 min。(2)AngⅡ不同剂量作用组:分别用终浓度为0、10、100、1000 nmol/L和10 000 nmol/L的AngⅡ刺激细胞15 min。(3)AngⅡ+p38MAPK特异性抑制剂SB202190组:在AngⅡ(终浓度100 nmol/L)刺激前30 min,分别将1000 nmol/L和5000 nmol/L(终浓度)的SB202190加入培养基,共同孵育30 min。上述各组作用一定时间后收集细胞,用Western blot方法测定细胞p38MAPK磷酸化表达。结果 AngⅡ(100 nmol/L)可诱导HUVECs p38MAPK磷酸化表达,15～30 min达到高峰,分别升高2.25和2.51倍(P<0.005,n=5),随时间呈峰形变化;AngⅡ呈剂量依赖性诱导HUVECs p38MAPK磷酸化,在AngⅡ100 nmol/L时p38MAPK磷酸化表达即有明显增强,在AngⅡ刺激剂量为1000 nmol/L和10 000 nmol/L时,p38MAPK磷酸化表达分别增加2.03和2.11倍(P<0.005,n=5);p38MAPK特异性抑制剂SB202190可显著抑制HUVECs p38MAPK磷酸化,且呈剂量依赖性,5000 nmol/L SB202190的抑制率为53.9%(P<0.01,n=6)。结论 AngⅡ可激活人脐静脉内皮细胞p38MAPK信号通路。     

Cellular events during arthritis-induced hyperalgesia are mediated by Interleukin-6 and p38 MAPK and their effects on the expression of spinal mu-opioid receptors

Activation of mitogen-activated protein kinase (MAPK) enzymes in nociceptive plasticity has been extensively studied. P38 MAPK enzyme, which can be activated by cytokines, acts as a crucial intracellular regulator of environmental changes. The aim of this study was to elucidate the cellular events during arthritis-induced hyperalgesia that are mediated by interleukin-6 and p38 MAPK, and their effects on the expression of spinal mu-opioid receptors (MORs), in different stages of arthritis in male Wistar rats. Complete Freund’s adjuvant (CFA)-induced arthritis (AA) was caused by subcutaneous injection of CFA into the rats’ hindpaw. Anti-IL-6 antibody and p38 MAPK phosphorylation inhibitor were administered during 21 days of study. Spinal MOR, p38, and phosphorylated-p38 (pp38) proteins expressions were detected by Western blotting. Daily treatment with anti-IL-6 antibody and p38 MAPK phosphorylation inhibitor, SB203580, significantly decreased paw edema in AA group. Daily anti-IL-6 and SB203580 administration caused a significant reduction in hyperalgesia in the first week of the study, but increased hyperalgesia in the next 2 weeks in experimental groups compared to the AA control group. Expression of pp38 MAPK protein significantly decreased on the 3, 7, 14, and 21 days in AA+SB203580 and AA+anti-IL6 groups compared to AA group. Additionally, daily treatment with anti-IL6 antibody and SB203580 in AA group caused significantly decrease in spinal MOR expression compared to AA control group. The results of our study can confirm that activated spinal p38 MAPK enzyme may play an important role in cellular IL-6 signaling pathways in hyperalgesia variation during different stages of AA inflammation. Also, it can be suggested that at least a part of p38 MAPK effects on hyperalgesia is mediated by spinal MOR expression variation.     

Coronary microembolization induced myocardial contractile dysfunction through a p38 mapk pathway

Background Cathepsin S and its endogenous inhibitor cystatin C are implicated in the pathogenesis of atherosclerosis,especially in the plaque destabilization and rupture leading to acute coronary syndrome.However, whether circulating cathepsin S and cystatin C also change in association with coronary plaque morphology is unknown yet. Methods Sprague-Dawley rats were randomly divided into three groups;Sham group,CME group and SB203580 group (n=10 per group).CME rats were produced by injection of 42μm microspheres into the left ventricle with occlusion of the ascending aorta.SB203580,a p38 MAPK inhibitor,was injected into femoral vein after finishing the injection of microspheres in SB203580 group.Left ventricular Ejection Fraction was determined by echocardiography.The level of phosphorylated and total P38 MAPK in myocardium was assessed by Western Blot.Results Left ventricular(LV) Ejection Fraction was depressed at 3 hours and until up to 12 hours in CME group.The increased p38 MAPK activation was observed in CME group.The administration of SB203580 partly inhibited the p38 MAPK activity and preserved cardiac contractile function.Conclusions p38 MAPK is significantly activated by CME and the inhibition of p38 MAPK can partly preserve cardiac contractile function.