“百会”透“曲鬓”头针疗法对急性脑出血大鼠脑组织GDNF及VEGF表达的影响

目的 观察“百会”透“曲鬓”头针疗法对急性脑出血大鼠脑组织胶质源性神经营养因子（GDNF）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法 选取健康雄性Wistar大鼠150只制备脑出血模型,随机分为模型组、针刺组、西药组,每组50只;每组再随机分为6 h、1 d、2 d、3 d、7 d 五个亚组,每个亚组10只;另设10只正常大鼠作为空白组。针刺组捆绑固定,针刺患侧“百会”透“曲鬓”穴。西药组给予茴拉西坦稀释液1 mL灌胃,3次/d。模型组大鼠给予针刺组相同捆绑30 min/d,生理盐水1 mL灌胃,3次/d。运用原位杂交及免疫组化法检测各组大鼠脑组织中GDNF和VEGF阳性细胞的表达。结果 与空白组比较,模型组6 h～3 d GDNF阳性细胞数增多,各时间点VEGF阳性细胞数增多,差异均有统计学意义(P<0.01)。针刺组各时间点GDNF阳性细胞数均较模型组和西药组增多,差异均有统计学意义(P<0.01);西药组各时间点与模型组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,针刺组6 h～3 d VEGF阳性细胞数减少,7 d时间点VEGF阳性细胞数增多,且高于西药组同期,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 “百会”透“曲鬓”头针疗法可能在脑出血急性期通过促进内源性GDNF表达、早期抑制VEGF的表达并后期促进VEGF的表达等途径发挥神经重塑作用。该方法可能在脑出血急性期具有良性的双向调节作用,疗效优于茴拉西坦。     

“百会”透“曲鬓”对急性脑出血大鼠脑组织AQP-4表达影响的实验研究

目的:通过观察"百会"透"曲鬓"头针疗法对急性脑出血大鼠脑组织中AQP-4表达的影响来揭示针刺头部腧穴对脑水肿拮抗作用的相关机理。方法:选取健康雄性Wistar大鼠160只,随机分为三组:模型组、针刺组、西药组,每组50只大鼠,每组再随机分为6h、1d、2d、3d、7d五个亚组,每个亚组10只大鼠;制备脑出血模型;另设10只正常大鼠作为空白组。针刺组针刺患侧"百会"透"曲鬓"穴。运用免疫组化方法检测各组大鼠脑组织中AQP-4阳性细胞的表达。结果:各造模组大鼠术后均出现不同程度的AQP-4阳性表达上升现象。模型组大鼠术后6h即出现AQP-4阳性细胞表达增多;3d时达高峰;7d时仍高于空白组。针刺组AQP-4表达低于模型组和西药组,在1d～3d时差异明显(P0.01)。西药组与模型组比较,2d时稍有差异(P0.05)。结论:"百会"透"曲鬓"可能在脑出血急性期通过抑制内源性AQP-4表达的途径发挥拮抗脑水肿作用。     

“百会透曲鬓”针刺法对脑出血模型大鼠脑组织IL-6蛋白表达影响的实验研究

目的:通过观察"百会透曲鬓"针刺法对脑出血急性期大鼠模型脑组织中白介素-6(IL-6)蛋白表达的影响,研究本针刺法对脑出血后继发性脑损伤的神经保护机制,从而指导临床实践。方法:选用60只雄性Wistar大鼠,随机分为空白组、模型组、针刺组、西药组(脑复康)。分别于脑出血急性期大鼠模型造模成功后6h,2天,7天三个时间点并完成相应治疗,治疗后进行神经功能学评分,然后处死大鼠,取大鼠脑组织,用免疫组化分析法(IHC)检测脑组织中IL-6蛋白表达的平均灰度值,在光镜下观察脑组织形态学变化。结果:针刺治疗能减少神经功能缺损评分,造模后2天及7天后,针刺组与模型组比较有显著性差异(P0.01);针刺治疗能降低IL-6阳性细胞平均灰度值,造模后2天及7天后,针刺组与模型组比较有显著性差异(P0.01);光镜下脑组织病理改变结果显示,针刺组与模型组有差异。结论:"百会透曲鬓"针刺法可明显改善大鼠的神经功能学评分,有利于脑出血后肢体运动功能的恢复。在脑出血急性期,针刺"百会透曲鬓"穴可以通过下调IL-6的蛋白表达,减轻脑出血后炎性反应导致的继发性脑损伤程度,从而改善脑组织缺血缺氧状态及保护受损伤的神经元细胞。     

针刺对脑出血急性期大鼠脑损伤及脑水肿拮抗作用的机理研究

目的:探讨针刺对脑出血急性期脑损伤及脑水肿拮抗作用的机理。方法:选取健康雄性W istar大鼠320只随机分为3组:模型组、针刺组、西药组,每组100只大鼠,每组再随机分为6 h、1 d、2 d、3 d、7 d共5个亚组,每个亚组20只大鼠;制备脑出血模型;另设20只正常大鼠作为空白组。针刺组针刺患侧"百会"透"曲鬓"穴。在光镜和电镜下观察各组大鼠脑组织形态学改变;应用干-湿重法测定各组大鼠脑水含量。结果:①针刺组较模型组神经细胞肿胀减轻,线粒体结构破坏较轻,突触结构较清晰。②干-湿重法结果显示,各造模组大鼠术后均出现不同程度的脑水肿现象。模型组大鼠术后6 h出现轻度脑水肿现象;3 d脑水肿达高峰;7 d仍有轻度脑水肿现象。针刺组较模型组和西药组脑水肿程度减轻,与模型组比较在1~7 d时差异明显(P0.01);与西药组比较在1~3 d时差异明显(P0.01)。结论:"百会"透"曲鬓"在脑出血急性期能明显减轻神经细胞损伤及超微结构的破坏、减少炎性细胞浸润、降低血肿周围脑组织脑水肿程度,提示对脑组织损伤及脑水肿有拮抗作用。     

针刺对急性期脑出血大鼠脑组织VEGF表达调控的动态研究

目的:观察脑出血大鼠脑组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的动态变化,以及"百会"透"曲鬓"针刺法对VEGF的动态调控,探讨该针刺法治疗脑出血的可能作用机制。方法:采用自体血注入法制备脑出血模型;实验大鼠分为空白组、模型组和针刺组。针刺组针刺病灶侧"百会"透"曲鬓"穴。应用神经行为学指标观察各组大鼠神经功能缺损程度;在电镜下观察各组大鼠神经细胞胀亡变化;运用免疫组化方法动态测定不同时间点各组大鼠脑组织中VEGF的表达。结果:①空白组的大鼠表现正常;各造模组术后均出现不同程度的神经功能缺损,以2~3 d时最为严重。针刺组大鼠神经功能缺损征较模型组有明显恢复,与模型组比较,6 h、1 d评分无差异,无统计学意义(P0.05);而2 d、3 d、7 d评分有差异,有统计学意义(P0.01)。②电镜下可见模型组大鼠术后6 h可见神经细胞胞浆内线粒体肿胀,粗面内质网扩张;2 d~3 d时神经细胞胞体胀亡最为严重。针刺组较模型组神经细胞胀亡减轻,神经细胞膜及核膜破损程度也较轻,线粒体肿胀呈空泡较模型组相应减少。③模型组和针刺组大鼠术后均出现不同程度的VEGF阳性细胞表达增多现象。模型组大鼠术后6 h即出现大量的VEGF阳性细胞表达并出现第一个高峰;1 d、2 d出现缓慢下降态势;3 d突然增高并达峰值;7 d时阳性表达仍高于空白组。针刺组大鼠在1 d~3 d时间点,VEGF的表达明显低于模型组(P0.01);而在7 d时间点,针刺组VEGF阳性表达反而较模型组明显增多(P0.01)。结论:①脑出血大鼠脑组织内VEGF表达上调,且其变化与行为学评分和神经细胞胀亡的形态学变化相关;②头针疗法在脑出血早期能够降低鼠脑内VEGF阳性细胞表达,而在脑出血后期又可促进VEGF阳性细胞表达,从而提示针刺在脑出血急性期可能具有良性的双向调节作用。     

针刺对急性期脑出血大鼠脑组织神经元特异性烯醇化酶表达的影响

目的：观察脑出血大鼠血肿周围脑组织神经元特异性烯醇化酶（neuron specific enolase,NSE）的表达,探讨＂百会＂透＂曲鬓＂头针疗法治疗脑出血的可能作用机制。方法：选取220只健康雄性W istar大鼠,将其中200只大鼠随机分为两组：模型组和针刺组,每组100只,每组再随机分为6h、1d、2d、3d、7d五个亚组,每个亚组20只;而剩余20只作为空白组。采用自体血注入法制备脑出血模型;针刺组针刺病灶侧＂百会＂透＂曲鬓＂穴。应用神经行为学指标观察各组大鼠神经功能缺损程度;在光镜下观察各组大鼠脑组织病理形态学改变;运用免疫组化方法测定不同时间点各组大鼠脑组织中NSE的表达。结果：①空白组的大鼠表现正常;而各造模组大鼠术后均出现不同程度的神经功能缺损,以3d时最为严重。针刺组大鼠神经功能缺损征较模型组有明显恢复,与模型组比较,2d、3d,7d评分,差异统计学意义（P〈0.01）。②光镜下可见模型组血肿周围脑组织坏死、水肿、炎性细胞浸润,神经细胞核固缩、空泡化,毛细血管扩张、充血,3天时最严重。针刺组脑组织逐渐修复,水肿程度较轻,炎性细胞减少。③空白组大鼠脑组织未见NSE阳性细胞表达;而模型组和针刺组大鼠术后均出现不同程度的NSE阳性细胞表达增多现象。模型组大鼠术后6h即出现大量的NSE阳性细胞表达;至3d时达高峰,7d时有所下降。针刺组NSE阳性细胞表达低于模型组,与模型组在相同时间点比较均差异明显（P〈0.01）。结论：①脑出血后大鼠脑组织内NSE表达上调,且其表达水平的变化与脑组织病理形态的改变、神经功能缺损程度相关;②＂百会＂透＂曲鬓＂针刺法可能是通过降低NSE在脑出血大鼠急性期脑组织中的表达、抑制脑水肿的形成,从而保护受损的神经元细胞、促进缺血半暗带的神经元细胞的存活,以达到脑保护的作用。     

脑出血患者治疗前后谷氨酸、基质金属蛋白酶-2及基质金属蛋白酶-9表达分析

目的探讨脑出血患者治疗前后谷氨酸、基质金属蛋白酶(MMP)-2及MMP-9表达变化及其意义。方法对住院脑出血患者60例采用颅内血肿微创清除术治疗。2组在治疗前后进行谷氨酸、MMP-2及MMP-9表达测定,同时进行预后CSS评分与疗效评价。结果本组患者痊愈35例,显著进步15例,进步7例,无变化3例,无死亡患者,有效率为95%。同时治疗后CSS评分有明显下降(P<0.05)。脑出血患者治疗后的谷氨酸、MMP-2及MMP-9表达量明显高于入院时,有显著性差异(P<0.05)。入院时与治疗后患者的谷氨酸、MMP-2及MMP-9含量与NDS评分都有明显正相关性(P均<0.05)。结论脑出血患者治疗前后谷氨酸、MMP-2及MMP-9表达变化可反应预后情况,可作为评价治疗效果的生物学指标。     

百会透曲鬓对脑出血急性期大鼠血清中VEGF、ICAM-1含量的影响

目的 通过观察百会透刺曲鬓针刺法对脑出血急性期模型大鼠血清中血管内皮生长因子（VEGF）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的动态变化的影响,探讨头穴透刺治疗脑出血可能的作用机制。方法 选取60只健康雄性Wistar大鼠,将其中54只随机分为模型组、模型＋针刺组（针刺组）、模型＋茴拉西坦组（西药组）3组。每组再分为出血后1 d、3 d和7 d3个时间点,每个时间点随机分配6只大鼠,制备脑出血（ICH）大鼠模型,剩余6只大鼠作为备用。采取酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清中VEGF和ICAM-1水平。结果 针刺组与模型组相比,大鼠血清内VEGF在3 d、7 d均有显著上调（均P＜0.05）。针刺组与西药组相比,出血后1 d,西药组对大鼠血清内VEGF上调显著大于针刺组（P＜0.05）;出血后7 d,针刺组对大鼠血清内VEGF上调显著大于西药组（P＜0.05）。针刺组与模型组相比,大鼠血清内ICAM-1在不同时间点均有显著下调（P＜0.05）。针刺组在出血后3 d、7 dICAM-1较西药组有显著下调（P＜0.05）。结论 百会透曲鬓针刺法可以调整脑出血大鼠血清中VEGF、ICAM-1的含量,是针刺百会透刺曲鬓治疗脑出血的可能机理之一。     

头穴透刺对脑出血大鼠脑组织p-Akt影响的实验研究

目的:通过百会透曲鬓穴针刺治疗脑出血急性期大鼠,观察其脑组织中p-Akt蛋白表达的变化,探讨百会透曲鬓对脑出血后脑神经的保护作用。方法:选用雄性Wistar大鼠54只,随机分为3组,模型组、针刺组(模型+针刺组)、针刺组+抑制剂组(针刺组+LY294002),每组18只;按文献方法建立模型;针刺组采用百会穴向曲鬓穴透刺,头部顶区向颞叶、额叶透刺;造模,治疗后于1、3、7天3个时间点,取大鼠脑组织,免疫组化法检测脑组织中p-Akt蛋白表达。结果:p-Akt在大鼠脑出血后1天表达增多,3天达高峰后迅速减少,7天仍有表达。与模型组比较,针刺组各时间点p-Akt表达明显增多,(P0.01);与针刺+抑制剂组比较,有统计意义(P0.05)。结论:针刺百会透曲鬓穴能够增加脑出血急性期大鼠脑组织p-Akt蛋白的表达,而这一作用可被LY294002阻断,提示本针刺方法能够激活AKT通路,起到脑保护作用。     

百会透曲鬓调控EGFR/STAT3通路抑制脑出血大鼠神经功能损伤的机制研究

] 目的：观察百会透曲鬓对脑出血大鼠神经功能损伤的干预效果及对EGFR/STAT3通路的影响。方法：选用健康雄性SD大鼠126只随机分为假手术组、模型组和针刺组,采用大鼠尾状核自体血注入法复制脑出血模型,评定造模成功后给予百会透曲鬓针刺干预,在6 h、3 d、7 d 3个时间点进行改良大鼠神经功能缺损评分（mNSS）并取材,免疫荧光观察脑组织GFAP、EGFR阳性细胞分布 ;Western blot检测脑组织p-JAK1、p-STAT3蛋白表达;Real-time PCR检测脑组织GFAP、EGFR mRNA水平。结果：不同时间点模型组、针刺组大鼠mNSS评分较假手术组显著升高( P<0.05) ,针刺组大鼠mNSS评分在第3d、7d明显低于模型组( P<0.05) 。免疫荧光显示,在7 d 时模型组、针刺组大鼠GFAP、EGFR阳性细胞计数较假手术组明显增多( P<0.05),针刺组明显低于模型组( P<0.05)。Western blot和Real-time PCR结果可见,不同时间点模型组、针刺组大鼠的p-JAK1、p-STAT3蛋白表达和GFAP、EGFR mRNA水平均较假手术组显著升高( P<0.05) ,针刺组大鼠在第3d、7d明显低于模型组( P<0.05) 。结论：百会透曲鬓可通过调控EGFR/STAT3通路减轻脑出血大鼠神经功能损伤,在脑出血治疗中发挥脑保护作用。     

头针对急性脑出血大鼠BDNF和NGF表达的影响

目的:通过观察"百会"透"曲鬓"头针疗法对急性脑出血大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)表达的影响,揭示脑出血后神经重塑的可能机理。方法:通过自体血注入法复制急性脑出血模型,术后随机分为模型组、针刺组和西药组。运用原位杂交法检测各组大鼠脑出血后6h、1d、2d、3d、7d五个时相点BDNFmRNA和NGFmRNA的表达变化。结果:①各造模组大鼠血肿周围脑组织BDNFmRNA的表达随不同时相点的变化而逐渐增加,至2d时达高峰,3至7d时逐渐下降。在相同时相点,针刺组BDNF的表达均明显高于模型组和西药组,且差异有统计学意义(P0.01)。②各造模组大鼠血肿周围脑组织NGFmRNA的表达随不同时相点的变化而逐渐增加,至7d时达高峰。在相同时相点,针刺组NGF的表达均明显高于模型组和西药组,且差异有统计学意义(P0.01)。结论:"百会"透"曲鬓"头针疗法可能是通过增加内源性BDNFmRNA和NGFmRNA的合成与分泌,以促进脑出血损伤后神经的修复与重塑,从而实现对出血后继发性脑损伤的神经保护作用。     

早期针灸干预对急性高血压脑出血患者脑水肿消退的临床观察

目的:探析早期针灸干预对急性高血压脑出血患者脑水肿消退的临床效果。方法:选择2012年2月—2013年8月我院收治的急性高血压脑出血患者60例为研究对象,随机分为两组,其中给予对照组常规治疗,而观察组在常规治疗的基础上,再运用针灸联合治疗,对比分析两组的治疗效果。结果:经过28 d的治疗,观察组的治疗总有效率为86.7%(26/30);而对照组的治疗总有效率为66.7%(20/30),并且与对照组相比,观察组的脑血肿体积变化明显,组间比较差异明显,具有统计学意义(P0.05)。结论:临床上将早期针灸干预运用在急性高血压脑出血患者的治疗中,不仅可以提高治疗效果,还能改善脑水肿状态,降低出现并发症的概率,使患者的预后生活质量得到改善。     

犀角地黄汤对大鼠脑出血后脑水肿及行为学影响的研究

目的观察犀角地黄汤对大鼠脑出血后脑水肿及行为学变化的影响,并探讨其作用机制。方法以自体血制作大鼠脑出血模型,将成功模型随机分为模型组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、尼莫地平组,不造模者分为正常组、假手术组,以脑含水量、脑指数作为脑水肿观察指标;以Rosenberg行为学评分法作为行为学观察指标。结果脑出血后第7日,中药各剂量组和尼莫地平组大鼠脑指数和脑组织含水量明显降低;脑出血后第3日,中药各剂量组和尼莫地平组大鼠神经功能缺损症状有不同程度的改善,第7日改善明显。结论犀角地黄汤和尼莫地平均能降低脑出血后大鼠脑指数和脑组织含水量,改善神经功能缺损症状。     

头针透刺对脑出血大鼠脑组织IL-6表达影响的研究

目的:通过对白介素-6(IL-6)蛋白表达变化的观察,探讨头穴透刺对急性脑出血(Intracere-bral hemorrage,ICH)炎症反应的干预作用。方法:将96只健康雄性Wistar大鼠按完全随机方法平均分为模型组、针刺组和西药组。每组再按照6h、24h、48h、72h和168h分为5个亚组,每个亚组6只大鼠,另设6只大鼠作为空白对照组。制备ICH大鼠模型,采用免疫组化技术观察不同时间点头穴透刺对ICH大鼠脑组织IL-6蛋白表达的影响。结果:针刺组大鼠脑内IL-6表达在不同时间点均有显著下调,与模型组比较具有显著性差异(P0.05)。结论:针刺可抑制IL-6蛋白表达,减轻脑出血后炎症反应所致的继发性脑损伤。     

急性脑出血瘀热病机生物标志物的血浆差异代谢组学研究＊

目的 采用血浆差异代谢组学的方法筛选和评价急性脑出血瘀热病机的特征代谢物，并确立生物标志物。方法 根据《中医脑出血瘀热评分量表》，采用匹配的方法收集临床瘀热型与非瘀热型急性ICH患者各40例，健康对照40例，应用液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)检测瘀热组(YP)、非瘀热组(FP)及健康组(JP)之间血浆差异代谢物。采用主成分分析(PCA)、偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)对代谢组学数据进行多维统计分析，筛选急性脑出血瘀热病机单元的特征代谢物。结果 YP/JP检测出27个差异代谢物；FP/JP检测出23个差异代谢物；FP/YP检测出14种差异代谢物，主要涉及类固醇激素合成、组氨酸代谢、半乳糖代谢等9个通路。结论 可的松21-乙酸酯、酸甲酯和甘油三酯可作为一组急性脑出血瘀热病机的潜在生物标志物。     

苦瓜提纯液对糖尿病肾病大鼠肾脏MMP-9、TIMP-1 mRNA表达的影响

目的探讨苦瓜对糖尿病肾病大鼠细胞外基质及基质金属蛋白酶9（MMP-9）、组织抑制剂1（TIMP-1）基因表达的影响。方法将60例Wistar雄性大鼠随机分为对照组、模型组、苦瓜组及洛汀新组，采用链脲佐菌素一次性腹腔内注射法诱导糖尿病模型，造模1、5周测定各组24h尿蛋白、肾功能及血糖，5周后取各组肾组织用RT—PCR技术检测MMP-9、TIMP-1的基因表达。结果模型组较对照组肾小球MMP-9、TIMP-1 mRNA表达增加，反映肾功能的各项生化指标水平升高。苦瓜组、洛汀新组较模型组MMP-9、TIMP-1 mRNA表达减少，肾功能有所改善。结论苦瓜对糖尿病大鼠肾结构功能具有保护作用，除降低血糖外，调节肾小球MMP-9、TIMP-1表达从而减轻肾小球细胞外基质沉积也可能是其作用途径之一。     

醒脑静治疗高血压脑出血疗效观察及对铁蛋白的影响

目的：观察醒脑静对高血压脑出血患者的临床疗效及对血清铁蛋白的影响,以期为高血压脑出血的治疗提供理论依据。方法：选择120例高血压脑出血患者分为治疗组和观察组各60例,观察组给予神经内科脑出血常规治疗,治疗组在此基础上给予醒脑静进行治疗,比较两组临床疗效及铁蛋白水平变化。结果：治疗组显著进步的比例明显高于对照组,而无变化和死亡的比例明显低于对照组（P〈0．05）,治疗后14d和治疗后28d两组水平均明显下降,但治疗组水平明显低于对照组（P〈0．01）。结论：醒脑静能显著降低铁蛋白含量,从而提高对高血压脑出血患者的临床疗效,值得临床推广应用。