脐带间充质干细胞对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)抑制人卵巢癌SKOV3细胞增 殖及促进其凋亡的作用。方法：采用Transwell共培养观察UC-MSCs向卵巢癌细胞靶向归巢的作用;MTT 实验检测UCMSCs 条件培养基抑制SKOV3细胞增殖情况;Annexin V-FITC/PI双染法检测其凋亡率;实时PCR检测与SKOV3细胞增殖 和凋亡相关基因Ki-67,Bax,Bcl-2的表达。结果：UC-MSCs体外向SKOV3细胞靶向归巢。MTT 结果显示UC-MSCs条件 培养基明显抑制SKOV3细胞的增殖(P<0.01)。Annexin V-FITC/PI双染法提示75%条件培养基组的凋亡率明显高于对照 组(P<0.05)。实时PCR发现增殖相关基因Ki-67的表达明显下降(P<0.01),凋亡相关基因Bcl-2的表达明显降低(P<0.01), Bax的表达明显增加(P<0.01)。结论：UC-MSCs体外能向卵巢癌细胞靶向归巢,通过调节增殖相关基因Ki-67的表达, 抑制SKOV3细胞增殖;通过调节凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达,促进SKOV3细胞凋亡。     

姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制作用及机制研究

目的:探讨姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制、诱导凋亡作用及其分子作用机制。方法:MTT法检测姜黄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用;流式细胞术PI单染法检测细胞周期;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的mRNA表达水平。结果:姜黄素对MCF-7细胞生长有明显抑制作用,并呈剂量、时间依赖性;FCM结果显示姜黄素能使MCF-7细胞阻滞在G1/S期;Annexin V/PI双染法验证姜黄素可以诱导细胞凋亡;RT-PCR结果显示Bax mRNA水平明显上调,而Bcl-2的mRNA表达水平降低。结论:姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖具有显著的抑制作用并可诱导细胞凋亡,其作用机制可能与其上调Bax基因表达水平的同时,下调Bcl-2基因表达水平,从而诱导细胞凋亡有关。     

miR-572对胃癌细胞增殖和凋亡影响及其作用机制研究

目的研究miR-572对胃癌细胞增殖、凋亡的影响和机制。方法 Real-time PCR方法测定miR-572在胃癌细胞和正常胃黏膜细胞中的表达差异。胃癌细胞NCI-N87中转染miR-572 inhibitor,MTT测定细胞增殖,PI单染法测定细胞周期分布,Annexin V-FITC/PI法测定细胞凋亡变化,Western blot检测细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK4)、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。在线靶基因预测软件发现含WW域的氧化还原酶(WWOX)可能为miR-572的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将WWOX si RNA和miR-572 inhibitor共转染到胃癌细胞中,利用上述方法测定细胞增殖、周期和凋亡变化。结果 miR-572在胃癌细胞中的表达水平明显高于正常胃黏膜细胞。miR-572 inhibitor转染后的胃癌细胞增殖能力下降,细胞G1期比例升高,细胞凋亡率升高,细胞中CDK4、Bcl-2蛋白表达减少,p21、Bax蛋白表达增多。miR-572靶向负调控WWOX蛋白表达。WWOX si RNA可以逆转miR-572 inhibitor对胃癌细胞增殖抑制、周期阻滞和凋亡促进作用。结论下调miR-572靶向负调控WWOX抑制胃癌细胞增殖,阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡。     

球状脂联素对晚期糖基化终产物诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的蛋白表达影响

目的:研究球状脂联素(gAd)抑制晚期糖基化终产物(AGEs)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的相关蛋白表达。方法:体外用AGEs培养HUVECs,经四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)测定细胞活性,Annexin V-FITC/PI双染标记法检测细胞凋亡,免疫印记法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:AGEs作用HUVECs,经MTT和流式细胞仪检测,细胞凋亡具有AGEs浓度依赖性。相同浓度AGEs作用HUVECs时,gAd预处理组与非预处理组比较,明显抑制HUVECs凋亡。免疫印记结果显示gAd预处理组与非预处理组比较,gAd可明显抑制Bax蛋白表达,增强Bcl-2蛋白表达。结论:gAd可通过激活Bcl-2、抑制Bax蛋白表达,拮抗AGEs诱导HUVECs凋亡。     

化痰法结合补气、活血法促进肝星状细胞系HSC-T6凋亡的实验研究

目的:观察化痰法结合补气、活血法对肝星状细胞系HSC-T6生长的抑制作用及对相关凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法:制备相关化痰法药物血清,采用MTT法检测各组含药血清对HSC-T6细胞增殖的影响;AnnexinⅤ/PI双染法,流式细胞技术检测细胞周期及细胞凋亡率;Western blot方法检测细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达情况。结果:MTT结果表明化痰法结合补气、活血法可有效抑制肝星状细胞HSC-T6的增殖;AnnexinⅤ/PI双染色流式细胞术检测结果表明化痰法结合补气、活血法可以促进HSC-T6细胞凋亡;Western blot结果显示化痰法结合补气、活血法能降低细胞中Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,且Bcl-2/Bax明显下降。结论:化痰法结合补气、活血法可通过抑制Bcl-2蛋白表达、促进Bax蛋白表达来诱导HSC-T6细胞凋亡,进而发挥抗肝纤维化作用。     

苦参碱对肺癌细胞A549增殖、凋亡和迁移的作用及机制研究

目的 探讨苦参碱对肺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移的作用及其机制。方法 以不同浓度的苦参碱干预A549细胞,采用CCK-8检测细胞增殖能力变化;Hoechst 33528/PI双染分析细胞凋亡形态变化;划痕实验分析细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western Blot检测Opa1、p53、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cleaved-caspase-3、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达。结果 苦参碱可以降低肺癌细胞A549的增殖活性、提高A549细胞凋亡率。划痕和Transwell实验证实苦参碱可以抑制A549细胞的侵袭转移能力。Western Blot检测发现苦参碱可以提高A549细胞中p53、Bax和Cleaved-caspase-3蛋白的表达,同时可以抑制A549细胞中Opa1、Bcl-2、Caspase-3、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达,且随着浓度变化呈量效关系。结论 苦参碱具有抑制肺癌细胞增殖和迁移侵袭,增强细胞凋亡的药理作用,其中药理学机制与其对Opa1/p53/Bcl-2/Bax/Caspase-3信号...     

阿霉素诱导Tca8113细胞凋亡及其分子机制的研究

【目的】观察阿霉素诱导Tca8113细胞凋亡及其过程中某些凋亡相关分子表达的变化,探讨其诱导凋亡作用的分子机制。【方法】采用MTT法检测阿霉素对Tca8113细胞的增殖作用;以光镜、荧光纤维镜、流式细胞仪和Annexin V-FITC标记法检测细胞凋亡;以蛋白印迹法分析阿霉素对Bcl-2、Bax和Survivin蛋白表达的影响。【结果】阿霉素以剂量依赖方式抑制Tca8113细胞增殖;光镜及荧光显微镜下可见明显凋亡细胞;流式细胞仪检测显示细胞停滞于G1或S期,有明显凋亡峰出现;Annexin V-FITC标记法定量检测证实阿霉素可诱导细胞凋亡发生;蛋白印迹检测表明阿霉素可使Bax表达升高,Bcl-2和Survivin表达下降。【结论】阿霉素可显著抑制Tca8113细胞增殖,可通过调节Bcl-2、Bax和Survivin蛋白表达来实现致凋亡作用。     

辛伐他汀通过氧化应激诱导K562细胞凋亡

目的:观察辛伐他汀对K562细胞凋亡的影响,探讨辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的分子机制.方法:不同浓度辛伐他汀处理K562细胞,Annexin V-FITC/PI双染法检测辛伐他汀对K562细胞凋亡的影响.辛伐他汀处理K562细胞48 h,流式细胞仪检测活性氧(Reactive oxygen species,ROS)浓度,免疫组织化学法测定突变P53蛋白表达.RT-PCR测定c-junmRNA表达.结果:Annexin V-FITC/PI双染法检测结果显示,5、10、20μmol/L辛伐他汀作用K562细胞48-72h能诱导其凋亡.辛伐他汀作用K562细胞后,与对照组比较,处理组细胞内ROS明显升高.辛伐他汀处理K562细胞后突变P53蛋白表达明显下调,c-jun mRNA 表达上调.结论:辛伐他汀改变K562细胞内氧化还原状态,细胞氧化应激,下调突变P53蛋白表达,上调c-jun 表达诱导K562细胞凋亡.     

姜黄素调节Bcl-2、Bax蛋白表达诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡

目的 研究姜黄素诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡及其分子机制.方法 用10、20、40 μmol/L姜黄素(对照组0μmol/L)处理增生性瘢痕成纤维细胞24 h,MTT法检测姜黄素对细胞增殖的影响,Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡率,分光光度法检测Caspase-9、Caspase-3活性,Western Blot法检测Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 MTT结果显示姜黄素对增生性瘢痕成纤维细胞具有抑制作用,抑制率随姜黄素浓度增加而上升(P＜0.05);Annexin V-FI℃/PI双标法结果显示成纤维细胞凋亡率随姜黄素浓度增加而上升(P＜0.05);经姜黄素作用,Caspase-9、Caspase-3的活性随姜黄素浓度增加而升高(P＜0.05);West-ern Blot结果显示Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达升高,Bax/Bcl-2比值增大,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 姜黄素对增生性瘢痕成纤维细胞有抑制增殖和诱导凋亡的作用,其机制与下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达,升高Caspase-9、Caspase-3活性有关.     

汉黄芩素对卵巢癌HO-8910细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨汉黄芩素对人卵巢癌HO-8910细胞增殖、凋亡的影响,并分析可能的作用机制。方法 采用不同浓度(0、20、50、80、100、130μg/m L)的汉黄芩素处理人卵巢癌HO-8910细胞,48 h后分别用MTT法检测细胞活力的变化,AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡的变化,Western blotting分析p21、cyclin B1、p53和Bax蛋白的表达水平。结果 随着处理浓度的增加,汉黄芩素剂量依赖性地抑制人卵巢癌HO-8910细胞的增殖(P<0.05),同时诱导细胞大量凋亡。进一步分析证实,汉黄芩素能够剂量依赖性地下调细胞周期相关蛋白cyclin B1的表达,同时上调p21的表达(P<0.05),提示汉黄芩素可通过抑制细胞有丝分裂进程来抑制细胞的增殖。此外,汉黄芩素还能显著诱导p53通路的活化及其下游促凋亡分子Bax的表达(P<0.05);而用p53通路抑制剂PFT-α预处理能够显著性降低汉黄芩素诱导的促卵巢癌细胞的凋亡效应(P<0.05)。结论 汉黄芩素能通过抑制细胞有丝分裂进程及调控p53促凋亡通路的活化来抑制卵巢癌细胞的增殖,同时显著诱导细胞大量凋亡,提示汉黄芩素可能具有一定的抗卵巢癌活性,从而为进一步探讨其作为临床治疗卵巢癌的潜在药物奠定理论基础。     

HOXA1基因反义寡核苷酸对食管癌细胞生长的影响

  目的  探讨同源异形盒A1(HOXA1)基因反义寡核苷酸（ASODN）对食管癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及机制。  方法  采用蛋白免疫印迹（Western blot）检测正常食管上皮细胞Het-1A和人食管鳞癌TE-1、EC9706和Eca109细胞HOXA1蛋白的表达,筛选高表达的食管鳞癌细胞进行后续实验;设计合成HOXA1 ASODN链、正义寡核苷酸(SODN)链及无义寡核苷酸（N-ODN）链;将筛选出的高表达的食管鳞癌细胞分为HOXA1 ASODN组（5、10、15 μmol/L的HOXA1 ASODN转染Eca109细胞）、对照组（细胞常规培养,不进行细胞转染）、SODN组（细胞转染15 μmol/L的SODN）和N-ODN组（细胞转染15 μmol/L的N-ODN）。采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术、Transwell小室分别检测细胞活力、凋亡率及侵袭迁移能力;Western blot检测HOXA1、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶（p-AKT）、细胞增殖核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、B细胞淋巴瘤-2蛋白（B-cell lymphoma 2,Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。  结果  与正常食管上皮细胞Het-1A比较,人食管鳞癌TE-1、EC9706和Eca109细胞HOXA1蛋白表达均升高,差异有统计学意义（P<0.05）。HOXA1蛋白在Eca109细胞表达最高,因此选用Eca109细胞进行后续实验。转染HOXA1 ASODN的Eca109细胞HOXA1蛋白表达降低（P<0.05）。随着Eca109细胞转染HOXA1 ASODN浓度及时间增加,Eca109细胞活力降低,与对照、SODN、N-ODN组比较差异有统计学意义（P<0.05）。15 μmol/L的HOXA1 ASODN转染Eca109细胞后,与对照组比较,细胞侵袭和迁移能力降低,凋亡率升高,p-AKT、PCNA和MMP-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高（P<0.05）。  结论  HOXA1基因反义寡核苷酸可抑制食管癌细胞增殖、侵袭和迁移能力,并诱导凋亡,机制与抑制磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/AKT信号通路可能有关。     

三乙酰白藜芦醇对白血病细胞HL-60增殖及凋亡作用的研究

目的 研究三乙酰白藜芦醇(triacetyl resveratrol,TRES)诱导白血病细胞HL-60凋亡的作用。 方法 采用Alamar blue法检测不同浓度(5、12.5、25、50、75μmol/L)TRES在不同时间点(12、24、48 h)对HL-60细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI双染色流式法测定不同浓度(5、25、50μmol/L)TRES作用于细胞12 h和24 h时凋亡的影响。Western blotting法检测5、25、50μmol/L TRES作用于细胞24 h时凋亡相关蛋白(STAT3、pSTAT3、Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3)。 结果 Alamar blue实验结果表明TRES可以抑制HL-60细胞的增殖,Annexin V-FITC/PI双染色流式法结果显示TRES有诱导HL-60细胞凋亡的作用。Western blotting法检测凋亡相关蛋白的表达,随着TRES浓度升高,STAT3和Bax蛋白表达量无明显变化,pSTAT3表达量显著下调,Bcl-2表达显著下调,Cleaved caspase-3表达显著上调,Bcl-2/BAX比例下调,最终导致细胞凋亡。 结论 TRES在体外抑制HL-60细胞增殖,并通过STAT3-Bcl-2/Bax-caspase-3通路诱导HL-60凋亡。      

口虾蛄提取物对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨口虾蛄乙酸乙酯提取物对鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖及凋亡相关蛋白表达的影响.方法 用MTT比色法检测药物对细胞增殖的作用,流式细胞术和PI/Hoechst33258荧光双染法检测细胞凋亡,Western Blot法检测用药前后凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的改变.结果 口虾蛄乙酸乙酯提取物对CNE-2Z细胞的增殖有显著抑制作用,且可诱导细胞凋亡;随着口虾蛄乙酸乙酯提取物浓度升高,Bax蛋白的表达逐渐增多,而Bcl-2蛋白表达改变不明显.结论 口虾蛄乙酸乙酯提取物对CNE-2Z细胞有显著抗增殖及诱导凋亡作用,其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制与凋亡相关基因Bcl-2/Bax蛋白比值下降有关,但诱导凋亡不是主要机制.     

苦参碱对小鼠H22细胞抗肿瘤作用的实验研究

目的:观察苦参碱在体内和体外的抗肿瘤作用.方法:MTT法检测苦参碱对小鼠腹水瘤细胞H22的体外杀伤作用;Annexin V-FITC/PI双标记法检测苦参碱对体外培养的H22细胞的诱导凋亡作用;在BALB/C小鼠H22移植瘤模型上观察苦参碱的体内抑瘤活性,透射电镜观察苦参碱治疗后荷瘤小鼠肝癌细胞的超微结构改变;免疫组化法检测荷瘤小鼠肝癌组织中Bcl-2、Bax蛋白表达.结果:苦参碱在体外能够明显抑制H22细胞的生长和增殖,并可诱导细胞凋亡;对小鼠肿瘤生长也有明显抑制作用,高、低浓度组抑瘤率分别为60.71%和62.53%;用药组小鼠肿瘤组织中,电镜下可见较为典型的细胞凋亡的形态学改变;肿瘤组织中Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达增强,与荷瘤对照组相比有显著性差异(P＜0.01).结论:苦参碱在体内外对H22肿瘤细胞生长均有抑制作用,同时可促进肿瘤细胞表达Bax蛋白,抑制Bcl-2表达,诱导肿瘤细胞凋亡.     

黄芪皂苷对神经胶质瘤的体外抑制作用及机制研究

目的探讨黄芪皂苷体外抗神经胶质瘤活性及相关机制。方法采用体外培养的SHG44细胞株为研究对象,流式细胞仪检测黄芪皂苷作用后SHG44细胞凋亡率,免疫印迹法检测细胞凋亡关键蛋白p53、Bax、Bcl-2的表达变化。结果黄芪皂苷可诱导SHG44肿瘤细胞凋亡;黄芪皂苷可引发SHG44肿瘤细胞促凋亡蛋白p53、Bax高表达,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低。结论黄芪皂苷可通过p53信号通路激活和Bcl-2家族介导的细胞色素C途径诱导癌细胞凋亡,从而对神经胶质瘤细胞产生抑制作用。     

木犀草素对胃癌细胞MGC803增殖的抑制作用及其机制

目的 研究木犀草素对胃癌细胞MGC803的增殖抑制作用及其机制.方法 通过MTT法、克隆形成抑制实验观察木犀草素对胃癌细胞MGC803的增殖抑制作用,碘化丙啶(PI)单染色法检测细胞周期,AnnexinⅤ-PI双染法测定细胞凋亡,蛋白质印迹法检测Bcl-2家族蛋白、Caspase蛋白、周期及自噬相关蛋白的表达情况.结果 MTT法检测发现,木犀草素作用于MGC803细胞24、48和72 h后,IC50分别为127.37、76.12、16.84 μmol/L;木犀草素能抑制胃癌细胞MGC803的克隆形成.PI单染色法发现随着木犀草素浓度的增大,发生G2期阻滞的细胞比例增加.蛋白质印迹法的检测结果表明,随着木犀草素浓度的增加,CDK4、CDK6、CyclinE2表达减少,CyclinD1、CyclinD3和p-Wee1表达基本不变,CyclinA、CyclinB、Myt1、p-cdc2(Tyr15)表达增高.AnnexinⅤ-PI双染法发现随木犀草素浓度增加,细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率均增加.蛋白质印迹法的检测结果表明,Mcl-1、Bcl-xL、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白表达随木犀草素浓度增加而减少,Bcl-2蛋白表达量变化不大,Bax蛋白表达量增加,因而引起Bcl-2/Bax、Mcl-1/Bax和Bcl-xL/Bax的比例下降;同时可见到Caspase-3和PARP出现了切割的条带;P62表达下降,Beclin-1、LC3Ⅱ表达增加.结论 木犀草素使胃癌细胞MGC803发生G2期阻滞,诱导细胞自噬的发生并抑制细胞的生长,还通过线粒体途径诱导胃癌细胞MGC803凋亡.     

脱氧胆酸诱导正常人食管黏膜上皮细胞凋亡及其机制探讨

目的观察脱氧胆酸（deoxycholate,DC）能否诱导体外培养的人正常食管黏膜上皮细胞凋亡,并探讨其机制.方法采用无血清的角朊细胞培养基体外培养人正常食管黏膜上皮细胞;通过流式细胞仪（FCM）观察DC干预的细胞经碘化丙啶（PI）单染色后凋亡细胞百分比;Annexin V-FITC结合PI双染色观察早期凋亡细胞比率;TUNEL试验凝胶DNA梯度电泳确定凋亡的发生.通过FCM分析干预细胞激活的Caspase 3变化,免疫印迹法观察Fas蛋白、Bcl-2和Bax蛋白的表达情况.结果4种凋亡检测方法确定DC可诱导体外培养的食管黏膜上皮细胞凋亡,并成浓度时间正相关性变化.500lμmol/L DC干预30 min,含激活状态Caspase-3的细胞达21.3%,明显高于对照组的1.5%（P＜0.01）.免疫印记法示细胞经DC干预前后Fas受体蛋白均为阴性表达,但Bcl-2蛋白表达水平下降,而Bax蛋白则上升.结论DC可诱导人正常食管黏膜上皮细胞凋亡;此过程与Fas-L/Fas凋亡信号系统无关;而存在Caspase-3激活、Bcl-2减少和Bax增加,即与线粒体凋亡调节途径密切相关.     

牛蒡子苷与苷元诱导人前列腺癌PC3细胞非凋亡性死亡的研究

[目的]观察牛蒡子苷(ARC)与牛蒡子苷元(ARG)对人前列腺癌PC3细胞增殖的影响,并探讨其相关机制.[方法]采用不同浓度的ARC与ARG作用于PC3细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其对细胞增殖的影响;瑞姬氏染色观察用药前后细胞形态变化;Annexin V-异硫氰酸荧光素-碘化丙啶(FITC/PI)双染结合流式细胞术检测细胞凋亡或坏死情况;Western-blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase 3的表达情况.[结果]ARC与ARG均能抑制PC3细胞的增殖,此抑制作用具有时间和浓度依赖性,两药物作用48 h组细胞存活率均显著低于24 h组(P＜0.01);ARC与ARG处理组的细胞形态变化表现为细胞膜回缩,细胞质减少,胞膜紧贴胞核,胞液纤维网状结构;流式细胞术检测发现:与空白对照组比较,ARC组与ARG组可显著增加Annexin V-FITC/PI双染阳性率(P＜0.05或P＜0.01),PI单染阳性率在浓度为20μmol/L和5μmol/L时也显著增加(P＜0.01),但Annexin V-FITC单染阳性率均无显著变化(P＞0.05).Western-blot分析结果显示:ARC或ARG作用细胞48 h时,可显著降低Bcl-2表达水平(P＜0.01),但对Bax和Caspase-3蛋白的表达无显著影响(P＞0.05).[结论]ARC与ARG可诱导PC3细胞发生非凋亡性死亡,其作用机制可能与诱导Bcl-2表达下调相关.     

甲磺酸阿帕替尼对结肠癌HCT-116细胞增殖的抑制作用及其机制

目的 检测阿帕替尼对结肠癌HCT-116细胞的抑制作用,探讨其可能的作用机制及其影响的信号通路.方法 MTT方法检测不同浓度(0、0.5、1、1.5、2 μmol/L)的阿帕替尼对结肠癌HCT-116细胞的毒性作用,并设置卡培他滨阳性对照组;Annexin V-FITC/PI双染法检测上述不同浓度的阿帕替尼处理后结肠癌HCT-116细胞的凋亡情况,实时荧光定量PCR及Western Blotting技术检测其对凋亡相关基因及蛋白Bcl-2,Bax,Caspase-3的影响,Western blotting技术检测其对Akt、p-Akt、Erk 1/2和p-Erk1/2蛋白表达的影响.结果 MTT细胞毒性检测结果表明,阿帕替尼在体外能有效抑制HCT-116细胞的增殖,IC50为1.335 μmol/L.Annexin-V/PI双染法细胞凋亡检测结果表明,阿帕替尼能显著的诱导HCT-116细胞凋亡,并且呈浓度依赖性实时荧光定量PCR和Western blotting结果表明,阿帕替尼可以诱导促凋亡基因 Bax和Caspase-3的表达,并抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达.Western blotting检测信号通路蛋白的结果表明,在阿帕替尼处理后p-Akt 和p-Erkl/2的表达显著降低,而Akt和Erk总蛋白水平没有变化.结论 阿帕替尼可通过抑制MAPK/Erk、PI3K/Akt信号转导通路来实现诱导细胞凋亡,从而达到抑制HCT-116细胞增殖的目的.     

川芎嗪调控肝癌HepG2细胞凋亡及对相关蛋白表达的影响

目的 通过研究川芎嗪（Tetramethypyrazine,TMP）对肝癌HepG2细胞凋亡及相关蛋白表达的影响,探讨TMP抑制肝癌细胞增殖的作用机制。方法 通过实时细胞分析技术（Real-time cell analyzer,RTCA DP）检测TMP对HepG2细胞增殖的影响;应用流式细胞仪检测TMP对HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响;通过全自动Western blot实验检测TMP对p53蛋白及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。结果 TMP对肝癌HepG2细胞的增殖有明显抑制作用,并呈现时间剂量依赖关系;TMP可显著诱导肝癌HepG2细胞凋亡,显著增加G0/G1期细胞,且呈一定的时间相关性;TMP能够显著促进p53蛋白的表达（P<0.01）和降低Bcl-2/Bax表达比值（P<0.01）。结论 TMP具有抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用,其机制可能与影响肝癌HepG2细胞周期,导致细胞周期阻滞有关;同时TMP可促进p53蛋白的表达,抑制Bcl-2蛋白的表达从而降低Bcl-2/Bax表达比值,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肝癌细胞的增殖。