枸杞多糖对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞中NLRP3炎症小体/细胞焦亡信号通路的影响

目的 观察枸杞多糖(LBP)对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体/细胞焦亡信号通路的影响。方法 将体外培养的ARPE-19细胞,随机分为5组,即正常组(5.5 mmol·L^-1葡萄糖)、高糖组(55.5 mmol·L^-1葡萄糖)、LBP低浓度组(55.5 mmol·L^-1葡萄糖+100μg·mL^-1LBP)、LBP中浓度组(55.5 mmol·L^-1葡萄糖+200μg·mL^-1LBP)和LBP高浓度组(55.5 mmol·L^-1葡萄糖+400μg·mL^-1LBP)。采用免疫荧光观察各组细胞中NLRP3蛋白的表达,Western blot检测炎症小体NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和其下游细胞焦亡蛋白消皮素D(GSDMD)的相对表达量,ELISA检测细胞上清液中白细胞介素(interleukm,...     

防风提取物对IgE致敏肥大细胞的改善作用及机制研究

[目的]探究防风(Saposhnikovia divaricata,SD)提取物对大鼠嗜碱性白血病细胞RBL-2H3脱颗粒的影响及作用机制。[方法]采用噻唑蓝(methylthialazole tetrazolium,MTT)比色法检测,根据5、25、50、100、200、400μg·mL^-1SD提取物对RBL-2H3细胞活性的影响,确定后续实验浓度。以免疫球蛋白E(immunoglobulinE,IgE)诱导建立RBL-2H3细胞脱颗粒模型。设立空白对照组、模型组、低剂量SD提取物组(5μg·mL^-1)、中剂量SD提取物组(25μg·mL^-1)、高剂量SD提取物组(50μg·mL^-1)和地塞米松(dexamethasone,DXMS)组(100μg·mL^-1),干预30 min。MTT法检测低、中、高剂量SD提取物对RBL-2H3细胞脱颗粒模型活性的影响。甲苯胺蓝染色观察脱颗粒细胞形态,计算细胞脱颗粒率。免疫荧光染色测定细胞F-肌动蛋白(F-actin)表达。酶联免疫吸附试验...     

吴茱萸碱调控PI3K/AKT信号通路抑制鼻咽癌细胞增殖和诱导凋亡

目的 研究吴茱萸碱对鼻咽癌5-8F细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法 (1)将5-8F细胞分为溶剂对照组、不同浓度吴茱萸碱组(0.5、1.0、2.0、4.0μmol·L^-1)、顺铂组(cisplatin,4.0μg·mL^-1);(2)将5-8F细胞设为5组：溶剂对照组、SC792.5μmol·L^-1组、SC79+吴茱萸碱2.0μmol·L^-1组、吴茱萸碱2.0μmol·L^-1组、LY294002 50μmol·L^-1组。采用实时无标记细胞功能分析仪(real time cellular analysis technology,RTCA)监测细胞增殖的情况;Annexin V-FITC/PI双荧光染色法检测细胞凋亡率,Hoechest 33342染色法观察细胞凋亡形态;Western blot法检测磷酸肌醇3-激酶蛋白(phosphatidylinositol 3-kiases,PI3K)、磷酸化蛋白质激酶蛋白B(phosphorylate...     

CoCl2诱导缺氧对Eca109细胞细胞周期及放射敏感性的影响

目的 观察化学缺氧剂二氯化钴(CoCl2)诱导缺氧条件下,Eca109食管癌细胞的细胞周期及凋亡变化,并观察缺氧对放射敏感性的影响.方法 CoCl2用于建立Eca109食管癌细胞体外缺氧培养模型,并设对照组(CoCl2浓度为0 μmol).流式细胞仪(FCM)检测缺氧培养不同时相(0、8、16、24h)Eca109细胞株细胞周期和凋亡的变化;集落形成实验观察细胞的放射敏感性.结果 CoCl2诱导Eca109细胞缺氧0-24h,随着缺氧时间的延长,处于G0/G1期的细胞明显增加,S期细胞减少.而G2/M期、凋亡无影响(P＞0.05);6℃oγ射线5Gy照射,缺氧加照射组G0/G1期细胞增加、G2/M期细胞减少.单纯照射组G0/G1期细胞减少,G2/M期细胞增加.克隆形成实验结果显示,缺氧组和对照组的Eca-109细胞的D0值分别为2.44Gy和2.48Gy,存活分数分别为97.33%和96.33%;缺氧组和对照组Eca-109细胞的Dq值分别为2.89Gy和0.52Gy,照射4Gy后,细胞存活分数分别为48.3%和21.7%,缺氧条件下Eca109细胞放射敏感性降低.结论 CoCl2诱导缺氧影响Eca109细胞的细胞周期,并使细胞放射敏感性降低.     

南方红豆杉水提物通过氧化应激和线粒体损伤影响口腔鳞癌细胞CAL27的增殖和凋亡

目的 研究南方红豆杉水提物(AETC)对口腔鳞癌(OSCC)细胞CAL27增殖、凋亡的影响及机制。方法CCK-8法检测不同质量浓度AETC(0、0.125、0.250、0.500、1.000、2.000、4.000和6.000 mg·mL^-1)处理CAL27细胞的存活率并筛选后续浓度;克隆形成实验检测细胞增殖;qRT-PCR检测增殖相关指标Ki67和p21 mRNA的表达;流式细胞术检测细胞凋亡;DCF染色法检测活性氧(ROS)含量;ELISA试剂盒检测氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)]的水平;JC-1染色法评估线粒体膜电位变化;Western blot法检测增殖、凋亡和线粒体损伤相关蛋白(p21、Ki67、Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2和Bax)的表达。结果 与0 mg·mL^-1AETC组比较,CAL27细胞的存活率随着AETC质量浓度的增加而降低,后续选择0.250、0.500、1.000 mg·mL^-1AETC;与0 mg·mL^-1     

CoCl2诱导缺氧对Eca109细胞细胞周期及放射敏感性的影响

目的 观察化学缺氧剂二氯化钴(CoCl2)诱导缺氧条件下,Eca109食管癌细胞的细胞周期及凋亡变化,并观察缺氧对放射敏感性的影响.方法 CoCl2用于建立Eca109食管癌细胞体外缺氧培养模型,并设对照组(CoCl2浓度为0 μmol).流式细胞仪(FCM)检测缺氧培养不同时相(0、8、16、24h)Eca109细胞株细胞周期和凋亡的变化;集落形成实验观察细胞的放射敏感性.结果 CoCl2诱导Eca109细胞缺氧0-24h,随着缺氧时间的延长,处于G0/G1期的细胞明显增加,S期细胞减少.而G2/M期、凋亡无影响(P＞0.05);6℃oγ射线5Gy照射,缺氧加照射组G0/G1期细胞增加、G2/M期细胞减少.单纯照射组G0/G1期细胞减少,G2/M期细胞增加.克隆形成实验结果显示,缺氧组和对照组的Eca-109细胞的D0值分别为2.44Gy和2.48Gy,存活分数分别为97.33%和96.33%;缺氧组和对照组Eca-109细胞的Dq值分别为2.89Gy和0.52Gy,照射4Gy后,细胞存活分数分别为48.3%和21.7%,缺氧条件下Eca109细胞放射敏感性降低.结论 CoCl2诱导缺氧影响Eca109细胞的细胞周期,并使细胞放射敏感性降低.     

猫棒束孢对IR-Hep G2细胞氧化应激的改善作用及机制

目的 探讨猫棒束孢(IF)对胰岛素抵抗Hep G2(IR-HepG2)细胞氧化应激的保护作用及其机制。方法 MTT法测定不同浓度IF和胰岛素对Hep G2细胞增殖的影响,用含10^-8 mol·L^-1胰岛素的高糖DMEM培养基诱导Hep G2细胞48 h,建立Hep G2细胞胰岛素抵抗模型。采用试剂盒测定葡萄糖消耗量、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、胰岛素受体底物1(IRS-1)、磷脂酰肌醇-3-羟基酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)的含量。结果 在IF浓度为5μg·mL^-1和10μg·mL^-1对细胞生长无显著促进作用,故浓度选用于5μg·mL^-1和10μg·mL^-1;胰岛素处理48 h后只有10^-8 mol·L^-1剂量组对照细胞生长无显著抑制作用,故选用胰岛素浓度为10^-8 mol·L^-1,培养48 h建立胰岛素抵抗模型。与正常组比较,模型组IR-Hep ...     

硒酸酯多糖对人食管鳞癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响

目的研究硒酸酯多糖(KSC)对人食管鳞癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法甲基噻唑基四唑(MTT)法检测不同浓度KSC对Eca109细胞增殖的影响;流式细胞术观察KSC对Eca109细胞凋亡的影响;Westernblot技术检测KSC对Eca109细胞核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平的影响。结果 KSC可明显抑制Eca109的增殖(P<0.05),并呈时间及浓度依赖性;经KSC作用后,Eca109细胞的凋亡率随KSC作用时间的延长(24、48、72h)及KSC浓度的增加(30、60、120μg/mL)而明显升高(P<0.01);KSC(60、120μg/mL)显著下调Eca109细胞核中NF-κB蛋白水平(P<0.01)。结论 KSC对Eca109细胞具有抑制增殖、诱导凋亡作用,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

当归红芪超滤物对X射线引起人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及其机制

目的：探讨当归红芪超滤物(UFE-AH)对X射线引起人脐静脉内皮细胞(HUVECs损伤的保护作用,阐明其可能的机制。方法：体外培养HUVECs,采用不同剂量(0、2、4、6、8和10 Gy) X射线辐射,筛选出最佳辐射剂量(6 Gy);用不同浓度(0、 50、100、200、400、600、800和1 000μg·L^-1 ) UFE-AH干预HUVECs,筛选出最佳促增殖浓度(100、200和400μg·L-1)。实验分为空白组、模型组(6 Gy X射线)、低剂量UFE-AH组(6 Gy X射线+100μg·L^-1 UFE-AH)、中剂量UFE-AH组(6 Gy X射线+200μg·L^-1 UFE-AH)和高剂量UFE-AH组(6 Gy X射线+400μg·L^-1 UFE-AH)。CCK-8法检测各组细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,透射电子显微镜下观察各组细胞超微结构,Western blotting法检测各组细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B (Akt)、磷酸化Akt (p...     

基于巨噬细胞焦亡探讨心脉康方抗动脉粥样硬化机制

【目的】 探讨心脉康方(由鳖甲、三棱、莪术、牡蛎、地龙、枳实、胆南星、党参等组成)对动脉粥样硬化的防治作用及机制。【方法】 J774A.1巨噬细胞实验分为对照组(10%胎牛血清),氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)组[100 μg·mL^-1ox-LDL],阿托伐他汀组(100 μg·mL^-1ox-LDL+ 10%阿托伐他汀含药血清),心脉康方低、中、高浓度组(100 μg·mL^-1ox-LDL+相应 5%、10%、20%的心脉康方含药血清),阿托伐他汀+ Toll 样受体 4(TLR4)组(100 μg·mL^-1ox-LDL+10%阿托伐他汀含药血清+2 μg·mL^-1TLR4过表达质粒),心脉康方+ TLR4组(100 μg·mL^-1ox-LDL+20%的心脉康方含药血清+2 μg·mL^-1TLR4过表达质粒),各组细胞加药处理 48 h 后进行后续实验。采用油红 O 染色法观察巨噬细胞泡沫化,采用生化法检测细胞中总胆固醇(TC)、甘...     

基于双位点同步微透析技术的青藤碱微乳凝胶皮肤及血液药代动力学研究

目的 采用双位点同步微透析技术研究青藤碱微乳凝胶(Sinomenine-loaded microemulsion gel, SMG)的大鼠皮肤与血液药代动力学过程,探究SMG的经皮药代动力学特征。方法 建立青藤碱的超高液相色谱(UPLC)含量测定方法,开展专属性、线性、精密度、回收率等方法学考察。SD大鼠经麻醉,腹部脱毛处理后,植入线性探针和血液探针,局部涂抹青藤碱微乳凝胶,采用微透析技术结合UPLC技术测定皮肤和血液透析液中青藤碱浓度。结果 青藤碱的UPLC分析方法在0.5～20μg·mL^-1浓度范围内线性良好,色谱的专属性、精密度及回收率等均符合微透析样品检测要求。药代动力学研究中青藤碱在皮肤中C_max为(10.91±3.05)μg·mL^-1,T_max为(180.00±39.80)min,AUC_0→t为(736.51±45.30)μg·min·mL^-1;在血液中C_max为(6.74±1.91)μg·mL^-1,...     

莫特塞尼与EZH2抑制剂GSK126联合应用对肝癌Huh7细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：探讨多激酶抑制剂莫特塞尼联合果蝇zeste基因增强子的人类同源物2 (EZH2)抑制剂GSK126对肝癌Huh7细胞体外增殖和凋亡的影响,初步阐明其相关机制。方法：不同浓度(0、1、5、10、20、40和60μmol·L^-1)莫特塞尼处理Huh7细胞,采用CCK-8法检测各组Huh7细胞增殖率,采用Western blotting法检测不同浓度(0、2.5、5.0、10.0和20.0μmol·L^-1)莫特塞尼组Huh7细胞中EZH2和磷酸化EZH2 (p-EZH2)蛋白表达水平。莫特塞尼和GSK126联合作用于Huh7细胞,采用CCK-8法和克隆形成实验确定后续实验合适的药物浓度。Huh7细胞分为对照组、莫特塞尼(10μmol·L^-1)组、GSK126 (5μmol·L^-1)组和联合组(莫特塞尼+GSK126),采用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)荧光染色法检测各组Huh7细胞增殖率,流式细胞术检测各组Huh7细胞凋亡率,Western blotting法检测各组Huh7细胞中细胞外信...     

冰片与顺铂联用对Eca109/DDP细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的：探讨冰片与顺铂(cisplatin,DDP)联用对耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr)增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法：采用递增药物质量浓度持续作用诱导法建立耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr)。冰片联合DDP作用于Eca109(DDPr)细胞,MTT法检测Eca109(DDPr)细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。结果：递增药物质量浓度持续作用诱导6个月后,细胞可以在含1μg/ml DDP的培养液中正常生长,其对DDP的耐药指数为15.886,所得细胞命名为耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr)。单用冰片浓度≤1.560μg/ml时,对Eca109(DDPr)细胞无明显抑制作用(P＞0.05),但与DDP1μg/ml合用能显著促进DDP抑制Eca109(DDPr)细胞的增殖（P＜0.05）,并促进DDP诱导Eca109(DDPr)细胞周期改变、细胞凋亡增加。细胞周期表现为G1期细胞明显增多（P＜0.05）,S期细胞、G2期细胞明显减少（P＜0.05）;细胞的凋亡率明显增加（P＜0.05）。结论：冰片促进DDP抑制Eca109(DDPr)细胞增殖可能与改变Eca109(DDPr)细胞周期、增加细胞凋亡有关。     

AG490对食管鳞癌Eca-109细胞增殖、凋亡及放疗敏感性的影响

目的研究Janus激酶抑制剂AG490对食管鳞癌Eca-109细胞增殖、凋亡及放疗敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法用不同浓度(0、25、50、100μmol/L)的AG490处理Eca-109细胞,采用MTT法检测细胞增殖,AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,克隆形成实验检测细胞放疗敏感性,Western blot检测各组细胞Stat3、p-Stat3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与对照组比较,AG490各浓度组(25、50、100μmol/L)在AG490作用后第1～5天Eca-109细胞增殖减慢,呈量效-时效关系(P<0.05,P<0.01)。与对照组比较,AG490各浓度组(25、50、100μmol/L)在AG490作用48 h后Eca-109细胞凋亡率增加,呈量效关系(P<0.01)。与对照组比较,各剂量X射线照射后50μmol/L组细胞存活率降低,放射生物学参数SF2、D0、Dq、N值均降低(P<0.05),SERD0和SERDq值增加(P<0.05)。与对照组比较,AG49050μmol/L+4Gy组和AG490 50μmol/L组p-Stat3蛋白表达下调(P<0.05,P<0.01)。与对照组比较,AG490各浓度(50和100μmol/L)组Bcl-2的表达降低(P<0.05)、Bax的表达增加(P<0.05)。结论 AG490抑制Eca-109细胞增殖,增加细胞凋亡,增加放疗敏感性,其机制可能是通过阻断Stat3蛋白的活化,调控凋亡蛋白(Bcl-2和Bax)的表达。     

抗体特异性抑制赖氨酰氧化酶对胃癌SGC-7901转移能力的影响

目的 探讨抗体特异性抑制赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)作用于胃癌SGC-7901细胞后,基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)的变化和体外黏附、迁移的改变。方法 培养胃癌SGC-7901细胞,用0、5、10和15μg·mL^-1的LOX特异性抗体(anti-LOX)干预细胞,Western blot法检测MMP-9的相对表达量,同质黏附实验和异质黏附实验检测细胞黏附能力,体外划痕实验检测细胞迁移能力。结果 15μg·mL^-1anti-LOX干预后,胃癌细胞MMP-9的表达降低(P<0.05);0、5、10和15μg·mL^-1的anti-LOX干预后,细胞的同质黏附数量随着anti-LOX浓度的升高而增多(P均<0.05),异质黏附数量随着anti-LOX浓度的升高而减少(P均<0.05);anti-LOX干预后,各个时间点SGC-7901迁移细胞个数随抗体浓度的升高而减少(P均<0.05)。结论 抗体特异性抑制LOX作用于胃癌细胞...     

安罗替尼联合放射治疗对食管鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及放射治疗敏感性的影响

目的 探讨安罗替尼联合放射治疗对食管鳞状细胞癌细胞的增殖、凋亡及放射治疗敏感性的影响。方法 将对数生长期的食管鳞状细胞癌KYSE-150细胞随机分为0μmol·L^-1安罗替尼组、2μmol·L^-1安罗替尼组、4μmol·L^-1安罗替尼组、8μmol·L^-1安罗替尼组、16μmol·L^-1安罗替尼组、32μmol·L^-1安罗替尼组、64μmol·L^-1安罗替尼组、128μmol·L^-1安罗替尼组,分别用含终浓度为0、2、4、8、16、32、64、128μmol·L^-1安罗替尼的培养基进行培养。采用细胞计数试剂盒-8法检测8组食管鳞状细胞癌KYSE-150细胞的增殖能力,并计算细胞增殖抑制率。应用Graphpad Prism8软件绘制细胞增殖抑制曲线并计算半抑制浓度(IC₅₀),选择IC₅₀值最小时的安罗替尼浓度及处理时间作为后续实验的药物处理条件。另...     

枸杞多糖预处理对APAP诱导L02细胞损伤的保护作用

目的 探讨枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)预处理对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的正常人肝细胞(L02)损伤的保护作用及机制。方法 将体外培养的L02细胞分为正常对照组、模型组(APAP组)、300、600μg·mL^-1LBP+APAP组、300、600μg·mL^-1LBP组,L02细胞经不同浓度的LBP预处理12 h后,300、600μg·mL^-1LBP+APAP组和模型组给予10 mmol·L^-1APAP诱导细胞24 h。CCK-8法检测细胞存活能力,光镜下观察各组细胞形态变化,qRT-PCR检测细胞色素P450 2E1(cytochrome P450 2E1,CYP2E1)和HNF4α的mRNA水平,Western blot检测IRE1α、eLF2α、Nrf2、Bax、Bcl-2、Caspase-12的蛋白表达。结果 与正常对照组相比,模型组细胞经APAP诱导后,出现细胞损伤改变,CYP2E1 mRNA水平升高、HNF...     

2-DG对体外培养人食管癌细胞周期及凋亡的影响

目的:研究2-脱氧葡萄糖(2-Deoxy-D-glucose,2-DG)对体外培养人食管癌Eca109细胞周期及凋亡的影响。方法:建立体外低氧模型,实验分常氧组和低氧组,利用体外细胞培养及流式细胞分析术等方法,测定不同浓度的2-DG对Eca109细胞周期、凋亡和增殖指数(PI)的影响。结果:常氧条件下2-DG浓度为0 mmol/L、80 mmol/L作用食管癌细胞24 h后,G1期细胞的比例分别为(44.87±0.99)%、(64.60±2.17)%,凋亡细胞的比例分别为(3.90±1.61)%、(7.23±1.43)%;低氧条件下G1期细胞的比例分别为(54.23±1.42)%、(87.74±2.19)%,凋亡细胞的比例分别为(38.02±1.42)%、(68.72±1.47)%,两组间比较有统计学差异(P<0.05)。结论:2-DG能剂量依赖性地导致细胞周期阻滞及细胞凋亡,使G1期细胞增多,同时伴有S期、G2/M期细胞比例的相应减少,且在低氧条件下作用更加明显。     

欧当归内酯A对人胶质瘤细胞U251细胞凋亡及自噬的影响

目的 探讨欧当归内酯A(LA)对人胶质瘤细胞U251凋亡及自噬的影响。方法 将对数生长期的U251细胞随机分为空白组、30μmol·L^-1LA组、60μmol·L^-1LA组、90μmol·L^-1LA组,分别用含有0、30、60、90μmol·L^-1的LA培养基培养24、48、72 h,应用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测4组细胞的增殖能力,应用流式细胞术检测4组细胞培养24 h时的细胞凋亡率。将对数生长期的U251细胞分为空白组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、90μmol·L^-1LA组、30μmol·L^-1LA+3-MA组、60μmol·L^-1LA+3-MA组、90μmol·L^-1LA+3-MA组,空白组不加LA和3-MA,其余5组分别加入含0、90、30、60、90μmol·L^-1 LA和1、0、1、1、1 mmol·L^-1 3-MA的培养基培养24 h,采用CCK-...     

顶空气相色谱法检测水溶性SHR0410中多种水溶性差的残留溶剂

目的：建立水溶性样品SHR0410原料药中3种水溶性差的残留溶剂二氯甲烷、异丙醚、三异丙基硅烷的测定方法,为SHR0410原料药中这3种残留溶剂风险评估打下基础。方法：采用顶空气相色谱外标法,色谱柱为CP-Volamine(30 m×0.32 mm)型毛细管柱,载气为氮气,氢火焰离子化检测器,柱温程序升温。结果：3种残留溶剂二氯甲烷、异丙醚和三异丙基硅烷,在此条件下能有效分离,线性范围分别为16.58～99.50μg·mL^-1(r=0.999)、2.47～14.83μg·mL^-1(r=0.999)、123.24～739.46μg·mL^-1(r=0.998),平均回收率分别为97.2%(RSD=2.3%,n=6)、95.5%(RSD=2.0%,n=6)、99.6%(RSD=1.4%,n=6),检测限(LOD)分别为0.07μg·mL^-1、0.01μg·mL^-1、0.005μg·mL^-1。对3批样品进行检验,均未检出以上3种残留溶剂。结论：该方法适用于测定水溶...