白背叶根含药血清对脂多糖诱导下RAW264.7细胞分泌的影响

目的:观察不同浓度的白背叶根含药血清对脂多糖(lipopolysac-charide,LPS)诱导下RAW264.7细胞分泌的影响。方法:制作高、中、低浓度白背叶根含药血清,以CCK-8法检测不同浓度白背叶根含药血清对RAW264.7细胞活力的影响。以脂多糖刺激生长良好的RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型,检测白背叶根含药血清对细胞上清液中炎症介质一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2)、白三烯B4(LTB4)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响。结果:不同浓度的白背叶根含药血清均对RAW264.7细胞活力无影响;与模型组比较,10%、5%的白背叶根含药血清可显著抑制NO的释放(P<0.05或P<0.01),10%白背叶根含药血清可显著抑制LTB4的分泌(P<0.05),2.5%白背叶根含药血清可显著抑制IL-1β的分泌(P<0.05);但不同浓度的白背叶根含药血清对PGE2、TNF-α的分泌无显著影响。结论:白背叶根的抗炎机制可能是通过抑制炎症反应中NO,LTB4,IL-1β的释放而实现。     

四逆散对脂多糖诱导的RAW264.7细胞极化的影响

目的:探讨四逆散(Sinisan,SNS)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264. 7巨噬细胞极化的调控作用。方法:RAW264. 7分为5组,分别为空白组,模型组,SNS低、中、高质量浓度组(10,20,40 mg·L~(-1));以LPS(100μg·L~(-1))刺激的RAW264. 7细胞为体外模型,使用不同质量浓度的SNS提前干预细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测不同质量浓度SNS对RAW264. 7细胞增殖的影响;光学显微镜下观察各组细胞分化程度;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞培养基上清中M1极化因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-1β(IL-1β)以及M2极化因子白细胞介素-10(IL-10)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测RAW264. 7细胞M1极化因子TNF-α,IL-6以及M2极化因子IL-10,精氨酸酶-1(Arg~(-1))的mRNA水平。结果:与空白组比较,模型组促进细胞增殖(P 0. 05),刺激M1极化因子TNF-α,IL-6,IL-1β的释放和上调TNF-α,IL-6的mRNA含量(P 0. 01),减少M2极化因子IL-10释放和IL-10,Arg~(-1)的mRNA水平(P 0. 05,P 0. 01)。与空白组比较,SNS对RAW264. 7细胞的活性没有影响。与模型组比较,SNS可抑制LPS诱导的细胞增殖(P 0. 05),减少LPS刺激的细胞分化,减少M1极化因子TNF-α,IL-6,IL-1β的释放和TNF-α,IL-6的mRNA含量(P 0. 05,P 0. 01),并增加M2极化因子IL-10释放和IL-10,Arg~(-1)的mRNA水平(P 0. 05,P 0. 01)。结论:SNS可抑制LPS诱导的RAW264. 7细胞炎症,其机制可能与调控巨噬细胞M1/M2表型极化平衡相关。     

毛蕊花苷对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症模型的作用及其机制研究

目的采用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞的炎症模型,考察炎症相关指标,探讨毛蕊花苷的抗炎作用及其机制。方法用MTT比色法检测毛蕊花苷对RAW264.7细胞活性的影响;Griess法检测NO的含量;Westernblotting检测核转录因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白的表达,ELISA试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的释放,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)、Ca~(2+)的释放情况。结果毛蕊花苷浓度为20、40、80μmol/L时对RAW264.7细胞没有毒性。不同浓度的毛蕊花苷对LPS诱导RAW264.7细胞导致的NO、TNF-α、IL-6的释放,细胞内ROS、NO、Ca~(2+)释放的增加均有很好的抑制效果,对诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、环氧化酶-2(COX-2)、p-IKKα/β、p-p65、p-IκBα蛋白的表达也有抑制作用。结论毛蕊花苷具有明显的抗炎作用,其作用机制是通过抑制NF-κB信号通路而发挥抗炎作用。     

青娥方含药血清对破骨细胞前体RAW 264.7细胞FAK/Src/p130Cas通路及上清液炎症因子的影响

目的观察青娥方含药血清对破骨细胞前体RAW 264.7细胞FAK/Src/p130Cas通路相关基因蛋白表达及上清液炎症因子的影响。方法制备青娥方含药血清和生理盐水血清,分别干预体外培养的破骨细胞前体RAW 264.7细胞。干预12 h和24 h后,提取mRNA和蛋白,荧光定量PCR(q PCR)检测FAK/Src/p130Cas及下游信号关键因子CRK、C3G和RAS mRNA表达的变化,应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测FAK/Src/p130Cas及下游信号关键因子CRK、C3G和RAS蛋白表达的变化;应用ELISA法检测细胞上清液IL-6、TNF-α、PGE2含量。结果与同期生理盐水血清组比较,青娥方含药血清组FAK、Src、p130Cas、CRK、C3G和RAS的RNA和蛋白表达均明显减少(P0.05,P0.01),以FAK、Src、p130Cas下降最为显著,而细胞上清液炎症因子IL-6,TNF-α和PGE2含量明显下降(P0.05,P0.01)。结论青娥方含药血清能够下调FAK/Src/p130Cas及其下游信号分子的表达,抑制RAW 264.7细胞分泌炎症因子,从而抑制RANKL+MCSF诱导的破骨细胞分化。     

凉膈散含药血清对内毒素刺激RAW264.7细胞CD14mRNA表达的影响

目的:研究凉膈散药物血清体外对内毒素刺激小鼠RAW264.7细胞CD14mRNA表达的影响.方法:大鼠以凉膈散灌胃,制备药物血清.以凉膈散药物血清或正常血清的培养液与LPS体外共同培养RAW264.7细胞,原位杂交法检测凉膈散药物血清对内毒素刺激RAW264.7细胞CD14mRNA表达变化.结果:与LPS刺激组比较,不同剂量药物血清组CD14mRNA表达量均比它低,呈剂量依赖性;正常血清组则无显著性差异.结论:凉膈散含药血清体外对LPS刺激小鼠单核细胞CD14mRNA转录具有抑制作用.减少LPS效应细胞的CD14mRNA的表达可能是凉膈散减轻LPS对机体损伤,发挥解毒作用的机制之一.     

槲皮素对LPS诱导小鼠RAW264.7细胞炎症的保护作用

目的研究槲皮素对脂多糖(LPS)诱导小鼠RAW264.7细胞炎症的保护作用。方法 CCK-8法检测细胞活力,Griess法检测NO释放,RT-PCR法检测TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS、COX-2、MCP-1、TLR2、TLR4、MyD88 mRNA表达,Western blot法检测iNOS、COX-2、TLR4、IκBα、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达。结果不同浓度(0～50μmol/L)槲皮素对细胞活力无明显影响(P0.05)。与LPS组比较,槲皮素组(25、50μmol/L)显著抑制NO释放(P0.05);槲皮素组(5、15、25μmol/L)显著降低TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS、COX-2、MCP-1、TLR4、MyD88 mRNA表达和iNOS、COX-2蛋白表达(P0.05,P0.01),并呈浓度依赖性;槲皮素组(25μmol/L)显著下调TLR4、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达(P0.05),显著上调IκBα蛋白表达(P0.05)。结论槲皮素可抑制LPS诱导小鼠RAW264.7细胞炎症,其机制可能与调节TLR4/NF-κB信号通路有关。     

蒙药阿拉坦五味丸对LPS诱导RAW264.7细胞的抗炎作用

目的：探究蒙药阿拉坦五味丸体外抗炎作用机制。方法：以脂多糖诱导RAW264.7细胞建立炎症细胞模型,考察蒙药阿拉坦五味丸对RAW264.7细胞活性以及释放一氧化氮水平的影响。结果：蒙药阿拉坦五味丸显著抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞释放一氧化氮水平(P<0.01)。结论：蒙药阿拉坦五味丸可以通过抑制细胞模型中NO释放水平改善炎症反应。     

木瓜三萜对脂多糖诱导下RAW264.7细胞炎症模型细胞因子的影响

目的:研究木瓜三萜对脂多糖诱导下RAW264.7细胞炎症模型细胞因子的影响。方法:用脂多糖诱导RAW264.7细胞建立细胞炎症模型。MTT法检测不同浓度木瓜三萜对RAW264.7细胞增殖的影响,用Griess法和ELISA法检测上清液中NO、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-4、IL-10含量,实时定量PCR检测RAW264.7细胞中i NOS、TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-4、IL-10 mRNA表达,Western blot检测RAW264.7细胞中磷酸化核因子抑制蛋白-κB(p IκB-α)和核转录因子κB(NF-κB)p65和磷酸化NF-κBp65(p-NF-κBp65)蛋白表达。结果:当木瓜三萜浓度低于25μg/ml时,无论单用木瓜三萜还是与LPS联用均对RAW264.7细胞的生长无明显的影响;但是当木瓜三萜浓度大于50μg/ml时,单用和联用均对RAW264.7细胞生长呈现生长抑制效应;木瓜三萜可显著降低上清液中促炎因子NO、TNF-α、IL-1β、IL-6含量和细胞中i NOS、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达,升高上清液中抗炎因子IL-4、IL-6含量和细胞中IL-4、IL-10 mRNA表达,抑制p IκB-α和p-NF-κBp65蛋白表达。结论:木瓜三萜可通过抑制RAW264.7细胞分泌i NOS、TNF-α、IL-1β和IL-6等促炎因子,促进其分泌IL-4、IL-10抗炎因子来发挥抗炎作用,其作用机制与抑制IκB-α和NF-κBp65的磷酸化,进而恢复促炎因子和抗炎因子之间的平衡有关。     

冠心康含药血清对AS相关M1型巨噬细胞极化相关因子表达的干预作用

目的 探讨冠心康含药血清对极化相关细胞因子表达的干预作用.方法 通过对SD大鼠冠心康水煎剂、辛伐他汀溶液和0.9％生理盐水灌胃干预制备含药血清,常规培养小鼠骨髓源巨噬细胞RAW264.7,将细胞分为空白组、模型组、冠心康组、辛伐他汀组.氧化低密度脂蛋白、脂多糖联合干预建立M1型巨噬细胞模型.应用空白组、冠心康组和辛伐他...     

蘘荷根茎乙醇提取物对LPS诱导巨噬细胞RAW264.7炎症反应的影响北大核心CSCD

目的:探究蘘荷根茎乙醇提取物的抗炎活性及作用机制。方法:以70%乙醇为溶剂对蘘荷根茎回流提取制得提取物,测定其总酚酸和总黄酮含量,采用超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱串联质谱(UPLC-Q-Orbitrap MS)鉴定其化学成分;MTT法测定蘘荷根茎乙醇提取物对RAW264.7细胞和L929细胞存活率的影响;用脂多糖(LPS)对RAW264.7细胞进行诱导建立体外炎症模型,通过NO检测试剂盒、ROS检测试剂盒、ELISA、免疫印迹法检测其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和核转录因子κB(NF-κB)信号通路中一氧化氮(NO)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的释放量、活性氧(ROS)水平及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,探究蘘荷根茎乙醇提取物的抗炎作用及可能的作用机理。结果:蘘荷根茎乙醇提取物富含酚类成分[(15.07±0.13)mg GAE/g],鉴定出酚类化合物为L-酪氨酸、原儿茶酸、原儿茶醛、4-甲基水杨酸、对羟基安息香醛、咖啡酸、香兰素、对羟基肉桂酸、白果新酸;蘘荷根茎乙醇提取物在31.3、62.5、125、250μg/mL时对RAW264.7和L929细胞的存活率无显著影响;与空白对照组比较,模型对照组NO、IL-6、TNF-α和ROS含量显著升高(P<0.01),iNOS表达、P38、JNK、ERK、IκBα的磷酸化表达以及细胞核NF-κB p65表达明显上调(P<0.05或P<0.01),IκBα和细胞质NF-κB p65的表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,蘘荷根茎乙醇提取物31.3、62.5、125、250μg/mL组NO、IL-6的释放量明显降低(P<0.05或P<0.01);蘘荷根茎乙醇提取物62.5、125、250μg/mL组ROS水平显著降低,iNOS表达、JNK、ERK、IκBα的磷酸化表达以及细胞核NF-κB p65表达显著下调,细胞质NF-κB p65表达显著上调(P<0.01);蘘荷根茎乙醇提取物125、250μg/mL组IκBα表达明显上调(P<0.05或P<0.01);蘘荷根茎乙醇提取物250μg/mL组TNF-α的释放量明显降低和P38的磷酸化表达明显下调(P<0.05)。结论:蘘荷根茎乙醇提取物具有良好的抗炎作用,其抗炎机制可能与抑制LPS诱导的MAPK和NF-κB通路的活化有关。     

野菊花超临界二氧化碳萃取物对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的保护作用

摘要：目的 研究野菊花超临界二氧化碳萃取物（SCFE）对脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞炎症反应的保护作用。方法 体外培养RAW264.7细胞,LPS（100 ng.mL-1）诱导炎症模型,采用SCFE（75、150、300 μg.ml-1）进行干预。MTT法测定细胞活性,Griess 法测定细胞内一氧化氮（NO）水平,ELISA测定细胞内趋化因子PEG2及细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）的产量,RT-PCR法测定相关细胞因子和合成酶的mRNA表达。结果 与对照组相比,LPS可显著增加RAW264.7 细胞中NO、PEG2以及TNF-α、IL-1β、IL-6的产量,而SCFE 干预后上述指标含量均明显降低（p<0.05）。SCFE干预组中细胞内一氧化氮合成酶（iNOS）、环氧化酶-2（COX-2）、及细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA 表达水平较LPS 单独刺激组显着下降。结论 SCFE对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应具有显著保护作用。     

芳香新塔花总黄酮对脂多糖诱导的RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响及机制

目的观察芳香新塔花总黄酮(ZCF)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核/巨噬细胞系RAW264. 7细胞炎症模型中炎症因子的影响及机制。方法采用LPS刺激RAW264. 7细胞,建立细胞炎症模型。以MTT法检测不同浓度芳香新塔花总黄酮对RAW264. 7细胞的毒性作用。芳香新塔花总黄酮和阿托伐他汀钙(阳性药物)预处理,观察各组细胞的形态,以Griess法检测NO的含量,以酶联免疫吸附试验检测细胞上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的含量,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定TLR4和NF-κB p65 mRNA的表达。结果1μg/m L LPS刺激RAW264. 7细胞24 h,可成功构建炎症细胞模型。芳香新塔花总黄酮在1~100μg/m L浓度范围内对RAW264. 7细胞无显著的细胞毒性。LPS刺激RAW264. 7细胞后,细胞体积明显增大,形态不规则,伸出大量的伪足,而阿托伐他汀钙和芳香新塔花总黄酮干预后,RAW264. 7细胞变小,触角减少,形态较规则。脂多糖可明显诱导RAW264. 7细胞分泌NO、TNF-α、IL-1β和IL-6(P <0. 01),TLR4和NF-κB p65 mRNA表达增高,而芳香新塔花总黄酮和阿托伐他汀钙可使NO、TNF-α、IL-1β和IL-6的释放受到抑制(P <0. 05,P <0. 01)。芳香新塔花总黄酮和阿托伐他汀钙预处理可使TLR4和NF-κB p65 mRNA的表达降低(P <0. 05,P <0. 01)。结论芳香新塔花总黄酮可抑制LPS诱导的RAW264. 7细胞炎症反应,下调NO、TNF-α、IL-1β和IL-6的表达,其机制可能与其抑制TLR4/NF-κB信号转导通路的激活有关。     

粉防己碱对脂多糖诱导下RAW264.7细胞炎症模型细胞因子的作用

目的观察粉防己碱(tetrandrine,Tet)对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症模型促炎细胞因子和抗炎细胞因子的影响。方法 LPS(1μg/mL)刺激生长良好的RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度Tet对RAW264.7细胞增殖的影响,激光共聚焦显微镜观察Tet对细胞核因子-κB(NF-κB)核转运的作用,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)的变化。结果当Tet浓度<1μmol/L时,单独或与1μg/mL LPS共培养,均对RAW264.7细胞生长无影响;而当Tet浓度>10μmol/L时,单独或与LPS共培养均表现出明显的细胞生长抑制效应;Tet可使IL-6、TNF-α的释放受到抑制,相反可促进IL-10的表达。激光共聚焦显微镜观察Tet大剂量组细胞核红染的阳性细胞显著减少,以阴性细胞(红染p65亚基主要集中在胞浆部位,使胞浆染色较深,胞核染色较浅,整个细胞成空泡状)为主。结论 Tet可以抑制LPS所致的RAW264.7细胞炎症反应,其抗炎作用与抑制NF-κB活化,进一步减少炎性细胞因子IL-6、TNF-α的产生,并促进抗炎细胞因子IL-10的表达等有关。     

金雀异黄素对脂多糖诱导RAW264.7细胞分泌功能的影响

目的：研究金雀异黄素对脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞RAW264.7分泌功能的影响,探讨金雀异黄素抗炎作用及其机制,为临床应用提供理论基础。方法：用脂多糖诱导巨噬细胞株Raw264.7建立体外细胞炎症模型,金雀异黄素与巨噬细胞株Raw264.7温孵1h后,加入100ng·mL-1脂多糖以诱导巨噬细胞的活化,采用Griess试剂检测细胞培养液中NO的含量,通过双抗体夹心酶联分析法和细胞转染技术观察不同浓度金雀异黄素对脂多糖刺激巨噬细胞分泌细胞因子TNF-α、IL-6和IL-10含量及对核转录因子NF-κB和AP-1表达的影响。结果：金雀异黄素（4～111μmolL-1）能明显抑制脂多糖刺激巨噬细胞生成一氧化氮产生（P〈0.05）;显著抑制脂多糖诱导巨噬细胞分泌细胞因子TNF-α、IL-6和IL-10（P〈0.01）,并能抑制核转录因子NF-κB和AP-1的表达。结论：本实验证明了金雀异黄素有抗炎作用,其能显著降低脂多糖诱导巨噬细胞分泌NO及细胞因子TNF-α、IL-6和IL-10的释放,通过抑制这些炎症因子的释放来达到抗炎作用,金雀异黄素抑制核转录因子NF-κB和AP-1的表达来实现的。     

灯盏乙素对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症介质分泌的影响

[目的]研究灯盏乙素对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症的影响,初步探讨其抗炎作用机制。[方法]用噻唑蓝(MTT)法检测灯盏乙素对RAW264.7细胞活力的影响;用Griess法检测灯盏乙素对LPS诱导的RAW264.7细胞中一氧化氮(NO)生成的影响;用荧光素酶报告质粒法检测灯盏乙素对LPS诱导的核转录因子(NF-κB)转录活性的影响;用实时定量聚合酶链反应(PCR)法检测灯盏乙素对LPS诱导的RAW264.7细胞中NF-κB靶基因肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)m RNA表达的影响。[结果]0.01~10μmol/L的灯盏乙素处理24 h后对RAW264.7活力无显著影响;1、10μmol/L的灯盏乙素可以显著抑制LPS诱导的NO的生成及NF-κB转录活性;灯盏乙素可以不同程度的抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NF-κB靶基因TNF-α、IL-1β、IL-6m RNA的上调作用。[结论]灯盏乙素可能通过抑制NF-κB的活化及炎症因子的表达发挥一定的抗炎作用。     

异黄柏酮酸对LPS诱导RAW264.7细胞炎症的抑制作用

目的 探讨异黄柏酮酸对脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)炎症的作用及机制。方法 采用CCK-8法检测异黄柏酮酸对RAW264.7细胞活性的影响,Griess法及荧光法测定一氧化氮(NO)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、前列腺素E₂(PGE₂)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平,免疫荧光法检测NF-κB p65核转位,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)和NF-κB、MAPK信号通路相关蛋白表达。结果 异黄柏酮酸能降低LPS刺激RAW264.7细胞释放的NO水平(P<0.05),其IC₅₀为(39.6±3.05)μmol/L;同时,异黄柏酮酸降低了炎性介质PGE₂、TNF-α、IL-6、IL-1β和MCP-1水平(P<0.05),且在0～200μmol/L浓度条件下对RAW2...     

芎芍胶囊含药血清对RAW264.7源性泡沫细胞胆固醇流出的影响

目的观察芎芍胶囊大鼠含药血清中脂质对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响。方法采用80 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞24 h,建立RAW264.7源性泡沫细胞模型,添加大鼠含药血清,将细胞分为对照组(正常巨噬细胞)、模型组(80 mg/L ox-LDL)、正常血清组(10%正常大鼠血清)及正常血清对照组(80 mg/L ox-LDL+10%正常大鼠血清)、辛伐他汀组(80 mg/L ox-LDL+10%辛伐他汀血清)、芎芍胶囊血清组(80 mg/L ox-LDL+10%芎芍胶囊血清)。通过油红O染色观察细胞内胆固醇分布;以胆固醇检测试剂盒检测正常血清组、辛伐他汀血清组、芎芍胶囊血清组血清总胆固醇(TC)及游离胆固醇(FC)含量,检测各组细胞内TC及FC含量。结果模型组细胞形态及染色结果符合泡沫细胞标准;正常血清组、正常血清对照组、辛伐他汀血清组、芎芍胶囊血清组细胞内均含有大量脂滴,且各组细胞内脂质着色无明显差异。与正常血清组比较,辛伐他汀血清、芎芍胶囊血清组TC差异均无统计学意义(P>0.05),辛伐他汀血清组FC含量升高(P<0.0...     

桂枝汤含药血清对小鼠巨噬细胞Toll样受体3、4型及其下游信号转导通路元件的影响

目的:研究桂枝汤含药血清对LPS和Poly(I:C)刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7的Toll样受体(TLR)及其下游主要信号转导通路元件的影响,从mRNA和蛋白水平探讨桂枝汤含药血清防治感染性疾病的免疫学基础。方法:用LPS或Poly(I:C)分别刺激RAW264.7细胞,加桂枝汤含药血清干预24h后,取细胞上清液测定炎症因子TNF-α和IFN-β的含量;荧光定量PCR方法测定TLR3、TLR4和下游信号转导通路元件MyD88、TRAF-6、TRAM和TRIF mRNA的表达;Western blotting法分析TLR3、TLR4蛋白的表达;细胞免疫荧光法分析MyD88、TRAF-6蛋白表达的强弱。结果:桂枝汤含药血清可显著降低LPS刺激诱导的MyD88、TRAM和TRIF的高表达;Poly(I:C)刺激后,桂枝汤含药血清显著降低TLR3、MyD88和TRAM的高表达。结论:桂枝汤能直接作用于TLR3,抑制其高表达,阻断TLR3胞内信号转导的MyD88依赖和非依赖两条途径,抑制相关基因表达产物TNF-α、IFN-β过度分泌,具有TLR3拮抗剂样作用。桂枝汤也可直接作用于接头蛋白MyD88、TRAM和TRIF,影响TLR4信号转导的MyD88依赖和非依赖性途径,抑制TNF-α、IFN-β的过度分泌。     

橙皮苷对RAW264.7 巨噬细胞泡沫化及ICAM-1 表达的影响

目的：探讨橙皮苷对RAW264.7巨噬细胞泡沫化及细胞间黏附因子-1表达的影响。方法：体外培养RAW264.7 巨噬细胞,橙皮苷作用于未经诱导的RAW264.7 巨噬细胞及ox-LDL(50 μg?mL- 1）诱导后的RAW264.7巨噬细胞,将细胞分为空白对照组、ox-LDL模型组和橙皮苷给药组。MTT法检测不同浓度的橙皮苷对RAW264.7细胞活性的影响;用油红O染色观察橙皮苷对RAW264.7巨噬细胞内脂类堆积与泡沫细胞形成。观察橙皮苷对ox-LDL诱导RAW264.7巨噬细胞泡沫化的影响;免疫印迹法检测RAW264.7巨噬细胞中ICAM-1的蛋白表达。逆转录聚合酶链反应法检测RAW264.7巨噬细胞中ICAM-1的mRNA表达。结果：橙皮苷浓度大于或等于5 μM时,RAW264.7巨噬细胞存活率大于80%。橙皮苷抑制RAW264.7巨噬细胞泡沫化。橙皮苷能减少泡沫细胞的ICAM-1蛋白表达水平。橙皮苷能减少泡沫细胞ICAM-1 mRNA表达水平。结论：橙皮苷能抑制RAW264.7巨噬细胞泡沫化及ICAM-1的蛋白和mRNA表达,提示橙皮苷具有抗动脉粥样硬化临床应用价值。     

金雀异黄素对巨噬细胞RAW 264.7 增殖、形态和细胞周期的影响

目的研究金雀异黄素对巨噬细胞RAW264．7增殖、细胞形态及细胞周期的影响,以探讨其对免疫系统的作用。方法以鼠源巨噬细胞系RAW264．7为细胞模型,将金雀异黄素用二甲基亚砜（DMSO）溶解,再用培养液稀释成所需终浓度为12．5、25、50、100kcmol&#183;L^-1的4组及溶剂对照组（DMSO体积含量比低于0．1％）。通过WST-1细胞增殖实验、倒置相差显微镜及流式细胞仪分别检测金雀异黄素对巨噬细胞的增殖、细胞形态及细胞周期的影响。结果金雀异黄素对巨噬细胞的影响呈时间和剂量依赖关系。50-100μmol&#183;L^-1,浓度的金雀异黄素作用巨噬细胞24h和48h后均能抑制细胞增殖,细胞增殖率分别为77％～81％、58％-73％（P〈0．01）;并能影响细胞形态改变,表现为细胞体积增大,并形成较长伪足。流式细胞结果显示．该浓度金雀异黄素可将巨噬细胞阻滞在S-G2／M期。结论金雀异黄素能抑制巨噬细胞细胞增殖,影响巨噬细胞形态,可能与干扰细胞周期有关。