富血小板血浆来源的血小板细胞外囊泡分离技术与应用

背景：血小板细胞外囊泡是循环中最丰富的囊泡,富含丰富的生物活性分子、遗传物质及蛋白质等信息分子,参与细胞通讯和物质交换,不仅具有良好的促凝活性,还具有促进组织修复和再生的巨大潜力,在再生医学具有广泛的应用前景。目的：从血小板细胞外囊泡的分泌机制、在再生医学领域的应用及临床转化的限制因素进行阐述,为血小板细胞外囊泡的临床转化提供一些理论支撑。方法：应用计算机检索2005年1月至2023年8月PubMed数据库与血小板细胞外囊泡有关的文章,英文检索词为“platelet-derived,plateletrich plasma,extracellular vesicles,isolated,microvesicles exosomes,applications”,最后纳入符合主题标准的文献62篇进行综述分析。结果与结论：(1)活化的血小板细胞外囊泡可产生血小板微囊泡和血小板外泌体两种类型的囊泡,前者的分泌可能与肌动蛋白细胞骨架的不对称性相关,后者的分泌可能与H⁺-ATP酶的调节相关。(2)血小板细胞外囊泡是血小板浓缩物和血小板本身的潜在效应物,可能通过促进血管生成、影响...     

B细胞来源外泌体的免疫调控作用研究进展

外泌体(exosome)是一种由细胞释放的纳米级囊泡,表达大量的功能蛋白分子,囊泡内也能够携带诸多核酸分子,通过与靶细胞相互作用的方式进而发挥其生物学功能.B细胞作为一种重要的免疫细胞,活化后能够释放大量的主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)高表达的外泌体,发挥强大的抗原提呈功能.此外,过继转移B细胞来源的外泌体至小鼠体...     

富血小板血浆与透明质酸钠关节腔内注射治疗膝骨关节炎的疗效比较

目的：比较自体富血小板血浆（PRP）与透明质酸（HA）钠关节腔内注射治疗膝骨关节炎的临床效果。方法2011年10月至2013年11月,盐城市第一人民医院门诊205例（278膝）膝关节炎患者纳入了本研究,根据患者选择进行分组,186例（230膝）完成治疗及随访,HA组82例96膝、PRP组104例124膝,二组分别采用药物2 mL HA钠、3 mL自体PRP加4 mL 5％利多卡因关节腔注射,每周1次,共3次。治疗前和治疗后3、6、12个月对患者进行随访并进行安大略西部和麦克马斯特大学骨关节炎指数（WOMAC ）评分评估,对膝关节肿胀消退情况进行观察。两组间各时相点WOMAC评分比较采用t检验,组内不同时间点比较采用重复测量方差分析,组内不同时间点两两比较采用Bonferroni检验。结果 PRP 组和 HA 组患者治疗后 WOMAC 评分均得到显著改善（F＝206．430、122．984,P＜0．05）。治疗后3个月,两组间 WOMAC 评分比较差异无统计学意义（t ＝－0．046,P＞0．05）,治疗后6个月和治疗后12个月,PRP 组 WOMAC 评分[（21．43±4．92）分、（21．57±7．32）分]与HA组[（23．44±5．41）分、（29．12±8．27）分]比较,差异有统计学意义（t＝－2．519、－5．768,P＜0．05）。HA组与PRP组膝关节肿胀治疗后消退情况分别为22膝（31．4％）与41膝（56．9％）,两组比较差异有统计学意义（χ2＝9．362,P＜0．05）。结论 PRP关节腔注射治疗膝骨关节炎获得了更持久的症状缓解效果,更多患者膝关节肿胀消退。     

单采血小板来源外泌体的提取与鉴定

目的研究单采血小板来源外泌体提取和鉴定的常见影响因素,为后续开展单采血小板来源外泌体研究提供参考。方法利用超速离心法分离提取单采血小板来源外泌体,并通过透射电镜、Western Blotting验证提取产物;利用BCA试剂盒测定外泌体总蛋白浓度。结果 5天组外泌体蛋白浓度(1822.2±11. 4μg/mL)明显高于1天组(775. 7±11. 5μg/mL),P <0.001;未冻存组蛋白浓度(1822.2±11.4μg/mL)明显高于不含DMSO冻存组(1153.6±2.6μg/mL)和含5%DMSO冻存组(1403.4±6.1μg/mL),P<0. 001。结论单采血小板来源外泌体含量随标本保存时间延长逐渐增加;冻存处理会一定程度上降低外泌体提取产量和影响其形态观察。     

外泌体与神经退行性疾病关系的研究进展

外泌体是一种内吞起源的纳米级细胞外囊泡(EV),可以由真核生物在生理和病理条件下分泌,它含有神经退行性疾病(NDs)发病相关的蛋白,有作为生物标志物的潜力,并可穿过血脑屏障,有助于将药物和其他治疗分子输送到大脑治疗NDs。所以,在本文中,我们将对外泌体在不同NDs发病机制中所起的作用,以及将它们作为疾病诊断生物标志物和治疗手段的相关研究进行综述。     

富血小板血浆与透明质酸钠修复兔膝骨关节炎

 背景：研究表明,透明质酸钠可抑制膝骨关节炎对软骨的破坏,加速软骨细胞的再生,达到稳定和修复关节软骨的目的。目的：观察富血小板血浆与透明质酸钠治疗兔膝骨关节炎的疗效。方法：将40只新西兰大白兔随机均分为5组,联合组、玻璃酸钠组、富血小板血浆组与模型组制作右侧膝骨关节炎模型,造模后分别向膝关节腔内注射透明质酸钠联合自体富血小板血浆、玻璃酸钠、自体富血小板血浆与生理盐水进行治疗,1次/周,连续5周;对照组不做任何处理,为正常对照。治疗完成1周后,ELISA法检测血液中白细胞介素1、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平,光镜下观察关节软骨的变化。结果与结论：与对照组比较,其余4组白细胞介素1、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平均升高(P < 0.01);联合组、透明质酸钠组、富血小板血浆组白细胞介素1、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平均低于模型组(P < 0.01或P < 0.05),且以联合组下降最显著。模型组关节软骨破坏明显,联合组、透明质酸钠组、富血小板血浆组关节软骨破坏程度轻于模型组,且以联合组破坏程度最轻。表明透明质酸钠配合自体富血小板血浆关节内注射可降低膝骨关节炎的炎症反应,保护关节软骨,效果优于单一药物注射。中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程     

富血小板血浆与透明质酸治疗膝骨关节炎疗效对比的Meta分析

文题释义：透明质酸：是细胞外基质的主要成分,是一种由氨基葡萄糖组成的多糖,主要分布于关节软骨、滑液、皮肤和房水中,具有调节生物化学过程、提供支持和润滑的功效,在维持关节的正常功能方面具有重要的作用。富血小板血浆：是自体外周血经离心后得到的血制品,对于自身无免疫排斥反应,含有大量生长因子,如血小板源性生长因子、血管内皮生长因子、转化生长因子等,这些因子能够刺激软骨细胞的增殖分化,诱导血管生成,对软组织损伤修复起着积极的作用。背景：透明质酸是治疗膝骨关节炎的常用药物,富血小板血浆治疗膝骨关节炎则是近年来的研究热点,对于这两者之间的有效性和安全性的比较尚存在争议。目的：系统评价富血小板血浆与透明质酸治疗膝骨关节炎的有效性及安全性。方法：按照Cochrane系统评价的方法,应用计算机检索CNKI、维普网、万方数据知识服务平台、中国生物医学文献数据库(CBM)、PubMed、Cochrane Library、Embase等数据库,检索有关富血小板血浆与透明质酸治疗膝骨关节炎的随机对照试验,文献发表时间为建库至2020年1月。对所有符合纳入标准的文献进行质量评价,采用Revman 5.3软件对其WOMAC评分、IKDC评分、目测类比评分、Lequesne指数及不良事件进行Meta分析。结果与结论：①纳入21篇文献,共1 872例患膝,其中富血小板血浆组963例,透明质酸组909例;②Meta分析结果显示,富血小板血浆组治疗后3,6,12个月的WOMAC评分明显低于透明质酸组[MD=-5.84,95%CI(-10.11,-1.57),P=0.007;MD=-9.48,95%CI(-13.02,-5.95),P < 0.000 01;MD=-10.47,95%CI(-13.95,-7.00),P < 0.000 01],治疗后6,12个月的目测类比评分低于透明质酸组[MD=-5.02,95%CI(-8.87,-1.18),P=0.01;MD=-3.33,95%CI(-4.89,-1.76),P< 0.000 1],治疗后3,6,12个月的IKDC评分高于透明质酸组[MD=7.10,95%CI(3.88,10.32),P < 0.000 1;MD=7.88,95%CI(5.12,10.65),P < 0.000 01;MD=6.85,95%CI(2.50,11.19),P=0.002],治疗后6,12个月的Lequesne指数低于透明质酸组[MD=-0.82,95%CI(-1.31,-0.32),P=0.001;MD=-2.37,95%CI(-2.93,-1.81),P < 0.000 01];两组不良事件发生率比较差异无显著性意义[OR=1.46,95%CI(0.94,2.24),P=0.09];③结果表明相较于透明质酸,富血小板血浆治疗膝骨关节炎更能缓解疼痛、改善功能、提高患者生活质量,疗效更持久。ORCID: 0000-0003-4045-0340(王养发)中国组织工程研究杂志出版内容重点：人工关节;骨植入物;脊柱;骨折;内固定;数字化骨科;组织工程     

不同浓度富血小板血浆修复兔膝骨关节炎软骨缺损的比较

背景:体内和体外的研究均表明,富血小板血浆对促进软骨细胞增殖和组织再生修复起重要作用,但对于不同浓度富血小板血浆修复兔膝骨关节炎软骨缺损的研究较少.目的:比较不同浓度富血小板血浆修复兔膝骨关节炎软骨缺损的效果,为临床治疗膝骨关节炎软骨损伤提供理论依据和选择方案.方法:50只健康新西兰大白兔随机被分为空白组、模型组、富血...     

自体、同种异体纯化富血小板血浆治疗兔膝骨关节炎的差异

背景:活化后的纯化富血小板血浆可促进软骨细胞的增殖,调控关节内炎症反应,有效治疗膝骨关节炎.目的:对比自体、同种异体纯化富血小板血浆修复膝骨关节炎的效果.方法:取32只3月龄新西兰大耳兔,采用随机数字表法分4组,每组8只:正常组不作任何处理;模型组、自体纯化富血小板血浆组、异体纯化富血小板血浆组通过关节内注射木瓜蛋白酶...     

细胞外囊泡在血栓形成中的作用

血栓形成是指血液在血管中发生凝固或血液中某些有形成分凝集形成固体质块的过程。细胞外囊泡(extracellular vesicle,EV)是一种成熟的细胞间通讯介质,可由不同细胞在活化或凋亡状态下释放。研究表明,EV在血栓形成过程中发挥重要作用。EV表面及胞体内有多种促凝物质表达,且EV与内皮细胞功能障碍、凝血因子VI...     

富血小板血浆在骨愈合治疗中的作用

背景：富血小板血浆可明显促进各种组织的修复和愈合。临床上运用其治疗骨软骨以及软组织缺损等骨科疾病方面已取得了很多成果。 目的：简要综述近年来富血小板血浆相关研究,总结其在骨科基础研究与临床应用中的进展。 方法：以“platelet-rich plasma, bone formation, tissue engineering”为检索词,检索Pubmed数据库(1999-01/2011-01),以“富血小板血浆,骨缺损,组织工程”为检索词,检索中国期刊全文数据库(1999-01/2011-01)。纳入与干细胞以及干细胞在骨科应用方面的基础和临床研究,排除不相关及重复研究。计算机初检得到301篇文献,根据纳入排除标准,最终纳入62篇。 结果与结论：尽管目前还存在争论,但富血小板血浆仍是一种非常有潜力的技术,尤其是作为细胞支架在组织工程中的应用如能被进一步研究证实有效,将对骨组织工程乃至其他各种组织工程研究产生重大的影响。因此除了规范研究在循证医学方面的要求之外,这应该是富血小板血浆今后研究的有一个重要方向。     

外泌体miRNAs在器官纤维化中作用的研究进展

外泌体是由多种细胞主动分泌产生的可携带蛋白质、脂质、miRNAs等生物分子的微小囊泡。外泌体微小RNAs(miRNAs)稳定的存在于体液循环中,参与器官多项病理过程。在器官纤维化疾病中,外泌体miRNAs的含量与正常组织相比呈现出明显的差异性表达,通过调控不同信号通路促进或抑制器官纤维化。外泌体miRNAs可作为临床诊断器官纤维化及判断其纤维化程度的最新生物指标和纤维化疾病新的治疗靶点。     

外泌体调控树突状细胞免疫功能的研究进展

树突状细胞（DC）是机体内抗原提呈能力最强的一类抗原提呈细胞（APC）,是联系固有免疫和适应性免疫的纽带。外泌体为体内活细胞分泌的双层囊泡小体,携带多种生物活性物质,参与细胞间信息传递和物质交换。内容物含量、大小、细胞来源等特征的不同组合导致了外泌体的高度异质性,因此,外泌体对DC功能调节的方式及机制具有复杂性和不确定性。本文系统回顾近年外泌体参与DC功能调控的研究进展,并对工程化外泌体的开发策略与应用现状进行总结,以期为后续研究和应用提供参考。     

骨髓间充质干细胞来源外泌体保护软骨细胞延缓骨关节炎的发生发展

背景:骨关节炎是最常见的关节退行性疾病,目前骨髓间充质干细胞已应用于骨关节炎治疗中,但与骨髓间充质干细胞相比,骨髓间充质干细胞来源外泌体移植具有更多优势,例如非免疫原性、非致瘤性以及储存和运输方便.目的:探索骨髓间充质干细胞来源外泌体对骨关节炎的保护作用.方法:①提取SD大鼠骨髓间充质干细胞并通过细胞形态及流式细胞学进...     

富血小板血浆修复膝关节骨关节炎

BACKGROUND: Platelet-rich plasma (PRP) containing high levels of platelet-derived growth factor for knee osteoarthritis has achieved good clinical results; however, the effects of RPR on the repair of damaged articular cartilage are still controversial. OBJECTIVE: To study the effects of RPR on the repair of damaged articular cartilage in a rabbit model of knee osteoarthritis. METHODS:The model of osteoarthritis in the rabbit right knee was established by Hulth’s method. Autologous PRP (0.5 mL) (PRP group), sodium hyaluronate (0.5 mL) (sodium hyaluronate group), and normal saline (model group) were injected into the right knee joint cavity, respectively. The morphology of articular surface and nitric oxide contents in knee joint fluid were observed and determined at 8 weeks after surgery. RESULTS AND CONCLUSION: The morphology of articular cartilage in the PRP group was better than that in the other three groups. Mankin scores of articular cartilage and nitric oxide contents of knee joint fluid in the PRP group were significantly decreased compared with the model and sodium hyaluronate groups that in (P < 0.05), while increased compared with the sham-operation group (P < 0.05). Our results suggest that repair effects of PRP on the damaged articular cartilage are superior to sodium hyaluronate treatment. 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

富血小板血浆促进骨修复的机制及应用

背景：目前普遍认为富血小板血浆具有促进骨修复的作用,但其具体机制尚未完全阐明,富血小板的最佳应用方式仍不明确。 目的：综述近期富血小板血浆促进骨修复机制及应用的研究进展。 方法：由第一作者检索1995/2011 PubMed与CNKI数据库有关富血小板血浆促进骨修复机制及应用的相关文献,排除与研究目的相关性差及内容陈旧、重复的文献。中文关键词为“富血小板血浆,生长因子,骨修复”,英文关键词为“Platelet-rich plasma,Growth factor,Bone repair”。共纳入25篇符合标准的文献进行综述。 结果与结论：富血小板血浆含有多种高浓度生长因子,普遍的观点认为聚合过程中血小板脱颗粒释放多种生长因子联合作用加速了骨修复的过程。单独应用富血小板血浆对骨修复的治疗效果不如与其他物质复合使用效果明显。     

高表达软骨调素1骨髓间充质干细胞来源外泌体促进骨关节炎软骨细胞的增殖

背景：软骨调素1(chondromodulin-1,Chm-1)在正常软骨中大量表达,具有抑制血管生成、阻止软骨细胞肥大、缓解骨关节炎发展的功能,在骨关节炎发生和发展中发挥着重要作用。目的：探讨高表达Chm-1骨髓间充质干细胞来源外泌体对骨关节炎环境中软骨细胞增殖的影响。方法：分离大鼠骨髓间充质干细胞并进行培养及鉴定;Chm-1慢病毒和空载慢病毒转染骨髓间充质干细胞,超高速离心法提取细胞培养上清液中外泌体(Chm-1-Exos和NC-Exos)。白细胞介素1β作用软骨细胞24 h构建体外骨关节炎模型,随后分别用2种外泌体处理7 d,将PBS处理的骨关节炎软骨细胞作为对照组。共聚焦显微镜观察骨关节炎软骨细胞对外泌体的摄取情况;CCK-8评估各组骨关节炎软骨细胞增殖能力;Western blot检测2种外泌体中Chm-1的表达;Western blot和RT-qPCR方法分别检测各组骨关节炎软骨细胞中Ⅱ型胶原、SOX9、AGG蛋白和mRNA的表达。结果与结论：(1)骨髓间充质干细胞呈典型纺锤状形态且具备三系分化能力;(2)带有绿色荧光的慢病毒成功转染骨髓间充质干细胞;(3)外泌体直径在40...     

富血小板血浆与洗涤血小板对人牙髓细胞矿化的作用**○

背景：此前课题组的研究表明富血小板血浆和洗涤血小板在一定浓度范围内均可促进人牙髓细胞的增殖。 目的：进一步观察不同浓度富血小板血浆和洗涤血小板对人牙髓细胞矿化的作用效果。 方法：实验使用健康志愿者正畸拔除牙齿内牙髓培养的4~6代牙髓细胞。将由该志愿者采集的静脉血制备富血小板血浆和洗涤血小板作用于牙髓细胞,使用碱性磷酸酶及蛋白定量试剂盒测定矿化诱导7 d后牙髓细胞的碱性磷酸酶活性,并通过茜素红染色观测牙髓细胞经矿化诱导10 d及20 d后的矿化结节形成情况。 结果与结论：10%~30%的洗涤血小板与富血小板血浆均明显提高了牙髓细胞碱性磷酸酶活性,其中,以20%浓度尤为明显;10%~30%的洗涤血小板与富血小板血浆均明显促进了矿化诱导后10 d的牙髓细胞矿化结节形成,其中,10%浓度在矿化诱导后20 d促进牙髓细胞形成的矿化结节最大。但相同浓度的洗涤血小板与富血小板血浆之间在作用效果上没有明显差异。     

富血小板血浆的作用机制及其骨科临床应用进展

富血小板血浆(PRP)是利用自身血液离心制作的富含血小板的高浓度血浆,含有多种高浓度生长因子,在应用凝血酶激活后能够大量释放,可以促进创伤组织愈合和骨缺损修复,并能抑制感染,临床应用研究证实PRP具有良好的生物相容性和多功能性,组织修复效果确切,故已被运用于多个医学领域.主要介绍富血小板血浆的作用机制和骨科领域应用情况,对富血小板血浆促进骨与软组织修复以及抗炎的机制进行探讨,提出目前富血小板血浆在临床应用方面存在的问题.     

外泌体的生物学作用与失神经肌萎缩

背景:外周神经损伤在临床十分常见,但其再生速度很慢,通常在神经恢复过程中肌肉就已经发生不可逆萎缩,从而严重影响患者的生活质量,因此寻找一种有效的治疗失神经肌萎缩的方法显得尤为重要.目的:总结外泌体的生物学特性及其参与骨骼肌生成与萎缩的作用机制,重点综述失神经肌萎缩的过程以及外泌体在治疗失神经肌萎缩中的作用,以期为治疗失...