沉默RORα通过Wnt信号通路促进人胃癌细胞增殖与迁移侵袭

目的：在构建沉默RORα人胃癌MGC803细胞的基础上,观察沉默RORα对MGC803细胞增殖与迁移侵袭的影响。方法：软琼脂集落形成实验、流式细胞术、细胞迁移和侵袭实验检测RORα沉默对MGC803细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭能力的影响。RT-PCR与Western blot检测RORα、Wnt1、MMP-9与TIMP3 mRNA与蛋白表达。结果：集落形成实验显示,沉默组的集落形成率128.1%明显高于对照组和空载体组(P<0.05)。流式细胞术显示,沉默组S期细胞百分率39.9%较对照组26.1%和空载体组27.4%明显增加(P<0.05)。迁移实验显示,沉默组迁移距离(1.76±0.19) mm明显高于对照组(1.32±0.14) mm和空载体组(1.29±0.17) mm (P<0.05)。侵袭实验显示,沉默组穿膜细胞(172±27)个明显多于对照组(147±17)个和空载体组(149±14)个(P<0.05)。RT-PCR与Western blot表明,沉默RORα可显著上调Wnt1与MMP-9 mRNA与蛋白与下调RORα与TIMP3 mRNA与蛋白。结论：沉默RORα可通过Wnt信号通路上调MMP-9和下调TIMP3促进MGC803细胞增殖与迁移侵袭。     

全反式维甲酸通过DOK1/PPARγ信号通路抑制人乳腺癌细胞MCF-7的增殖

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响及可能机制。方法:MCF-7细胞培养于含10%胎牛血清、1%青霉素/链霉素的DMEM培养液,蛋白免疫印迹检测蛋白质的表达,MTT法和溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)掺入法测定细胞增殖,TUNEL法测定细胞凋亡,携带目标基因shRNA的慢病毒用于沉默目标基因,过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的活性采用商品化的试剂盒测定。结果:ATRA处理可抑制MCF-7细胞的增殖,促进其凋亡;同时,ATRA以时间依赖方式刺激停靠蛋白1(DOK1)的表达。沉默DOK1可降低ATRA对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。此外,DOK1基因沉默可抑制PPARγ的表达和活性。而PPARγ选择性抑制剂GW9662可减轻ATRA对MCF-7细胞增殖的抑制和对细胞凋亡的促进作用。结论:ATRA通过抑制细胞增殖、促进细胞凋亡而抑制MCF-7细胞的生存,这一作用经DOK1激活的PPARγ介导。     

组蛋白甲基化酶EZH2对人肥大心肌细胞AC16增殖和凋亡的影响

目的:探究组蛋白甲基化酶zeste基因增强子同源物2(EZH2)对人肥大心肌细胞AC16增殖和凋亡的影响。方法:通过在AC16细胞培养基中添加血管紧张素Ⅱ构建AC16肥大心肌细胞模型,细胞分为空白对照组、血管紧张素Ⅱ组、空载+血管紧张素Ⅱ组和EZH2过表达+血管紧张素Ⅱ组,并通过荧光定量PCR法检测EZH2和脑钠肽(BNP)基因的表达水平,Western Blot法检测EZH2、组蛋白H3第27位赖氨酸的三甲基化(H3K27me3)和BNP蛋白的表达水平,MTS法检测AC16肥大心肌细胞增殖,以及流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:与空白对照组相比,血管紧张素Ⅱ组EZH2和H3K27me3表达水平降低,BNP的表达水平升高,细胞增殖降低,凋亡水平升高(均P<0.001);与空载+血管紧张素Ⅱ组相比,EZH2过表达+血管紧张素Ⅱ组EZH2和H3K27me3表达水平升高,BNP的表达水平降低,细胞增殖水平升高,凋亡水平降低(均P<0.001);血管紧张素Ⅱ组和空载+血管紧张素Ⅱ组相比上述指标差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:组蛋白甲基化酶EZH2对AC16细胞的增殖和凋亡具有影响,为心肌肥厚的治疗以及揭示心肌肥厚的发病机制提供参考。     

腺病毒介导hRAMP1基因转染血管平滑肌细胞的增殖和凋亡

背景：外源性受体活性修饰蛋白1基因转染可能对血管平滑肌细胞增殖调控具有重要的作用。 目的：探讨腺病毒载体介导人受体活性修饰蛋白1基因对体外培养的兔血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。 方法：分离培养获得兔主动脉血管平滑肌细胞,分别以携带人受体活性修饰蛋白1基因的腺病毒和空腺病毒转染后,分成人受体活性修饰蛋白1组、空病毒组和对照组。 结果与结论：腺病毒转染细胞后随时间延长,报告基因绿色荧光蛋白表达逐渐增加,72 h表达最强,感染率达80%,96 h时仍有绿色荧光蛋白表达。人受体活性修饰蛋白1组的受体活性修饰蛋白1蛋白表达增加,血管平滑肌细胞凋亡率增加,细胞增殖明显抑制,与空病毒组和对照组比较差异有显著性意义(P < 0.05)。提示人受体活性修饰蛋白1基因感染血管平滑肌细胞后明显抑制血管平滑肌细胞增殖,促进细胞凋亡。     

内皮细胞Jagged1下调促进PDGF诱导的大鼠平滑肌细胞增殖迁移

目的： 探讨内皮细胞Jagged1表达对PDGF诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖迁移的调节作用。方法: 分离培养大鼠主动脉内皮和平滑肌细胞,将内皮接种于下室、平滑肌接种于上室建立细胞共培养体系,根据内皮是否行Jagged1小RNA干扰分为对照组、空载体组和Jagged1小RNA干扰组。用Western blotting检测内皮细胞Jagged1的干扰效率。于下室加入PDGF（10 μg/L）干预24 h后分别用［3H］-TdR 掺入和平滑肌迁移计数检测平滑肌细胞增殖迁移能力,用Western blotting检测平滑肌细胞α-SM-actin蛋白表达。结果: 与对照组相比空载体组内皮细胞Jagged1蛋白表达无明显差异,Jagged1小RNA干扰组内皮细胞Jagged1蛋白吸光度相对值明显降低（0.26±0.02 vs 0.67±0.02, P<0.05）;PDGF+空载体组平滑肌［3H］-TdR 掺入量和迁移数与PDGF组相比无明显差异,PDGF+Jagged1小RNA干扰组平滑肌［3H］-TdR 掺入量和迁移数高于PDGF组{［3H］-TdR 掺入(23 074±2 702)counts·min-1·well-1 vs (16 442±1 803)counts·min-1·well-1,n=5,P<0.05;迁移(27±4)cells/field vs (15±3) cells/field, n=5,P<0.05};PDGF+空载体组平滑肌α-SM-actin蛋白表达与PDGF组相比无明显差异,PDGF+Jagged1小RNA干扰组平滑肌α-SM-actin吸光度相对值低于PDGF组（0.25±0.06 vs 0.49±0.04, n=3,P<0.05）。结论: 内皮细胞Jagged1下调促进PDGF诱导的平滑肌细胞增殖迁移,提示血管内皮细胞Jagged1表达在维持平滑肌收缩表型、抑制平滑肌过度增殖迁移中起一定调控作用。     

CCAAT增强子结合蛋白α对急性粒细胞白血病HL60细胞分化和凋亡的影响

目的 探讨CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)在体内和体外对急性粒细胞白血病HL60细胞分化和凋亡的影响及其可能机制.方法 将C/EBPα表达质粒pEGFP-C/EBPα经阳离子脂质体介导转染HL60细胞,用G418筛选出C/EBPα稳定表达细胞株为转染组;以转染pEGFP空载质粒HL60细胞为空载体组;未处理的HL60细胞为对照组.瑞氏染色观察细胞形态学变化;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术分析凋亡;RT-PCR及免疫印迹法(Western blot)检测c-myc基因的表达.20只BALB/c裸鼠按完全随机法分为3组:转染组7只、空载体组7只、对照组6只.将3组细胞分别皮下注射相应各组小鼠形成皮下瘤,20 d后处死小鼠,测量肿瘤质量及大小,TUNEL法检测皮下瘤组织细胞凋亡率.结果 筛选到C/EBPα基因稳定表达的细胞株pEGFP-C/EBPα-HL60,细胞出现明显分化.对照组、空载体组和转染组细胞的凋亡率分别为(5.4±1.4)%、(5.0±1.3)%、(21.9±4.5)%,转染组细胞的凋亡率显著高于对照组和空载体组(均P＜0.05).RT-PCR及免疫印迹显示C/EBPα明显抑制c-myc mRNA和蛋白的表达(均P＜0.05).对照组、空载体组和转染组细胞接种小鼠形成皮下瘤,其质量分别为(5.35±1.12)g、(5.12±1.31)g和(3.26±0.72)g,瘤体大小分别为(25±4)mm、(18±3)mm和(11±2)mm,转染组瘤体质量及瘤体大小明显低于对照组和空载体组(均P＜0.05).与对照组和空载体组比较,转染组皮下瘤组织细胞凋亡率明显增加(均P＜0.05).结论 C/EBPα在HL60细胞中具有促进细胞凋亡和抑制细胞增殖的能力,显示C/EBPα在急性粒细胞白血病中是一种肿瘤抑制因子.     

miR-145对血管平滑肌细胞生物活性及SM22α mRNA表达的作用*

目的：探究miR-145 对血管平滑肌细胞（VSMC）的生物活性及对SM22α mRNA 表达的作用。方法： VSMC分为3 组,增殖VSMC组（ 增殖组）、增殖VSMC + 转染miR-145-NC 组（ 空载体组）、增殖VSMC+转染 miR-145 组（ 增殖转染组）。采用RT-PCR 检测VSMC中SM22α mRNA、miR-145 的表达;免疫印迹检测cyclin E、p27 蛋白水平;Transwell 小室检测VSMC侵袭能力;MTT检测VSMC活力;流式细胞术检测VSMC凋亡率。 结果：增殖组VSMC中SM22α mRNA、miR-145 水平与空载体组相比数值较为接近;与增殖组及空载体组相比, 增殖转染组VSMC中miR-145、SM22α mRNA 表达升高。增殖组VSMC中cyclin E、p27 蛋白水平与空载体组相 比无差异;增殖转染组cyclin E 蛋白水平低于空载体组、增殖组,p27 蛋白水平高于空载体组、增殖组。增殖组 VSMC迁移数量与空载体组相比无差异;增殖转染组VSMC迁移数量明显低于空载体组、增殖组。增殖组与空载 体组VSMC在不同时间点的OD 值均较为接近;增殖转染组OD 值在不同时间点均低于空载体组、增殖组。增殖 组VSMC凋亡率与空载体组数值接近,组间比较差距较小;增殖转染组VSMC凋亡率较空载体组和增殖组升高。 结论：过表达miR-145 通过促进SM22α 水平增加,抑制血管平滑肌细胞的增殖,并促进其凋亡。     

过表达PGC-1α抑制高糖条件下小鼠视网膜感光细胞凋亡

目的:探讨过表达过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)对高糖条件下视网膜感光细胞凋亡的影响及其相关机制。方法:本研究建立小鼠视网膜感光细胞株RGC-5高糖模型,将细胞分为4组:正常组、高糖组、空载组和PGC-1α过表达组。MTT检测各组细胞的活力;Hoechst 33258染色和流式细胞术检测各组细胞凋亡水平;Western blot检测各组细胞Bax、p53、Bcl-2、神经生长因子(NGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、PGC-1α、线粒体转录因子A(TFAM)、DNA聚合酶γ(POLG)、ATP合酶O亚基(ATP5O)、细胞色素C氧化酶5b亚基(COX5b)、超氧化物歧化酶(SOD)1和SOD2蛋白的表达量。结果:与空载组相比,过表达PGC-1α组细胞的活力增强,凋亡率降低,Bax和p53蛋白的表达量显著降低,Bcl-2、NGF、VEGF、PGC-1α、TFAM、POLG、ATP5O、COX5b、SOD1和SOD2蛋白的表达量显著升高(P0.05)。结论:过表达PGC-1α可促进高糖条件下RGC-5细胞活力,抑制其凋亡,减轻氧化应激及线粒体损伤。     

过氧化物酶体增殖物活化的受体γ特异配体罗格列酮对肝星状细胞生物学特性的影响

目的　研究过氧化物酶体增殖物活化的受体γ(PPARγ)特异配体罗格列酮对肝星状细胞(HSC)PPARγ 表达以及对HSC生物学特性的影响。　方法　设立空白对照组、3μmol L罗格列酮组、10μmol L罗格列酮组;分别 用RT PCR、Western印迹、免疫细胞化学方法检测PPARγ的表达;用Western印迹和免疫细胞化学方法检测α 平滑肌 肌动蛋白(α SMA)及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达;四甲基偶氮唑盐(methythiazolyltetrazolium,MTT)法检测细胞增殖;流式细胞 仪分析细胞凋亡。　结果　10μmol L罗格列酮组HSC的PPARγmRNA表达明显高于对照组(t=10.87,P<0.01), PPARγ蛋白表达也明显高于对照组(t=4.627,P<0.01);10μmol L罗格列酮组HSC的增殖活性显著低于对照组(t ≥5.542,P<0.01),其α SMA及Ⅰ型胶原表达明显低于对照组(t≥4.627,P<0.01),其凋亡发生率显著高于对照组 (χ2=16.682,P<0.01)。　结论　PPARγ特异配体罗格列酮通过增加PPARγ的表达,能够抑制激活的HSC表达α SMA及Ⅰ胶原,抑制激活的HSC增殖,诱导激活的HSC凋亡。     

lncRNA PCGEM1通过靶向miR-155-5p抑制LPS诱导的气管平滑肌细胞增殖及炎症反应北大核心CSCD

目的研究lncRNA PCGEM1/miR-155-5p轴对LPS诱导的气管平滑肌细胞增殖和凋亡及炎症反应的影响。方法采用100μg/ml LPS刺激支气管平滑肌细胞BSMC 12 h以诱导细胞损伤。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞lncRNA PCGEM1和miR-155-5p表达水平;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞CyclinD1、Cleaved-caspase-3蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测lncRNA PCGEM1和miR-155-5p靶向关系。结果与NC组比较,LPS组细胞lncRNA PCGEM1表达水平显著降低,miR-155-5p表达水平显著升高(P<0.05)。与pcDNA+LPS组比较,pcDNA-lncRNA PCGEM1+LPS组lncRNA PCGEM1表达水平显著升高,吸光度值、CyclinD1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,TNF-α、IL-6、IL-33水平显著降低(P<0.05)。与anti-miR-NC+LPS组比较,antimiR-155-5p+LPS组miR-155-5p表达水平显著降低,吸光度值、CyclinD1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,TNF-α、IL-6、IL-33水平显著降低(P<0.05)。与miR-NC+pcDNA-lncRNA PCGEM1+LPS组比较,miR-155-5p+pcDNA-lncRNA PCGEM1+LPS组细胞miR-155-5p表达水平显著升高,吸光度值、CyclinD1蛋白表达显著升高,细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著降低,TNF-α、IL-6、IL-33水平显著升高(P<0.05)。结论lncRNA PCGEM1下调miR-155-5p降低LPS诱导的气管平滑肌细胞凋亡及炎症反应,抑制增殖。     

核受体NR6A1通过上调RIPK3基因表达诱导血管平滑肌细胞凋亡

目的:探讨核受体亚家族6A1(NR6A1)对血管平滑肌细胞凋亡的影响及可能的分子机制。方法:将腺病毒Ad-NR6A1感染大鼠血管平滑肌细胞,分别在感染后0 h、24 h和48 h时进行MTT实验,以时间为横坐标,A570为纵坐标绘制细胞生长曲线,观察NR6A1对细胞生长的影响;进行DAPI染色、TUNEL染色及caspase活性检测,观察细胞凋亡情况;进一步通过基因芯片技术,寻找NR6A1的靶基因;采用siRNA介导的基因沉默技术,观察受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3(RIPK3)基因沉默对NR6A1诱导的血管平滑肌细胞凋亡的影响。结果:腺病毒Ad-NR6A1感染细胞48 h时,NR6A1过表达组细胞数量较对照组(重组腺病毒载体Ad-Lac Z)明显减少;DAPI染色显示NR6A1过表达诱导血管平滑肌细胞出现核浓缩和核碎裂的凋亡表型,TUNEL染色显示NR6A1过表达引起细胞凋亡,caspase活性检测结果显示NR6A1过表达细胞内caspase-3、caspase-8和caspase-9活性均较对照组高;基因芯片技术检测发现,NR6A1过表达上调血管平滑肌细胞中RIPK3基因表达;RIPK3基因沉默可以显著抑制NR6A1诱导的平滑肌细胞凋亡。结论:NR6A1通过上调RIPK3基因表达诱导血管平滑肌细胞凋亡。     

核呼吸因子1抑制高糖环境下成骨细胞的凋亡和促炎症细胞因子分泌*

目的： 探讨核呼吸因子1（ NRF1） 调控高糖环境下成骨细胞的凋亡和促炎症细胞因子的分泌。方法：用 LipofectamineTM 2000 将NRF1 或空载体质粒转染hFOB 1.19 成骨细胞，分别为NRF1 组和空载体组。采用免疫印 迹检测高糖处理后成骨细胞NRF1 蛋白表达水平。采用流式细胞术检测高糖处理后各组细胞凋亡率，ELISA 法检 测培养基中肿瘤坏死因子α（ TNF-α）、白细胞介素（ IL）1-β（ IL-1β）和IL-6 的水平。结果： 高糖处理后，成骨 细胞NRF1 表达明显低于空白对照组，NRF1 组成骨细胞凋亡率明显低于空载体组。高糖处理后，过表达NRF1 的 成骨细胞分泌的促炎症细胞因子水平显著较低。结论： NRF1 可抑制高糖导致的成骨细胞凋亡，其机制可能与抑 制TNF-α、IL-1β 和IL-6 分泌有关。     

趋化素通过上调磷酸化JNK促进小鼠血管平滑肌细胞的增殖

 目的: 利用慢病毒构建趋化素基因缺陷性小鼠血管平滑肌细胞株,观察沉默趋化素基因后血管平滑肌细胞的增殖情况并探讨其机制。方法: 将正常血管平滑肌细胞、趋化素基因干扰对照血管平滑肌细胞株和趋化素基因缺陷性血管平滑肌细胞株分成正常组、增殖组、对照组和沉默组,增殖组加入血小板源性生长因子BB促进增殖,采用细胞计数和BrdU法检测血管平滑肌细胞增殖,采用Western blot检测丝裂原激活蛋白激酶( MAPK)信号通路的蛋白水平。结果: 增殖组血管平滑肌细胞的细胞数目和BrdU的A值显著高于正常组(P<0.05);与正常组相比,沉默组的血管平滑肌细胞数目和BrdU的A值显著降低(P<0.05);与此同时,对照组与正常组之间的血管平滑肌细胞增殖情况无明显差异。各组血管平滑肌细胞之间的p-ERK1/2、ERK1/2、p-p38 MAPK和p38 MAPK水平无明显变化,增殖组血管平滑肌细胞的p-JNK蛋白表达增加,而沉默组血管平滑肌细胞的p-JNK水平下降。结论: 趋化素具有促进小鼠血管平滑肌细胞增殖的作用,该作用可能与p-JNK表达上调相关。     

转录调节因子Ets-1在大鼠血管平滑肌细胞增殖与凋亡中的作用

目的： 研究转录调节因子Ets-1对大鼠血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响及其可能的机制。 方法： 用定量细胞DNA片段的方法观察大鼠血管平滑肌细胞增殖与凋亡。用Western印迹法检测磷酸化视网膜母细胞瘤（RB-P）蛋白表达。 结果： Ets-1抑制大鼠血管平滑肌细胞凋亡。反义P21WAF1/CIP1能够阻断Ets-1的抗凋亡作用，并抑制Ets-1诱导的平滑肌细胞增殖。Ets-1能够上调RB-P蛋白表达，反义P21WAF1/CIP1可以阻断Ets-1诱导的RB-P蛋白表达。 结论： 在大鼠血管平滑肌细胞中，Ets-1通过P21WAF1/CIP1旁路发挥抑制凋亡和促进增殖作用。     

eNOS基因体外转染对大鼠颈总动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖规律的影响

目的将内皮型一氧化氮合酶(endothilialnitircoxidesynthase,eNOS)基因,通过基因工程技术转染至体外培养的大鼠颈总动脉球囊损伤后的血管平滑肌细胞中,观察其对血管平滑肌细胞增殖规律的影响。方法三月龄雄性Wastar大鼠20只,分为正常对照组、空白对照组、pcDNA3.1(-)转染组和pcDNA3.1-eNOS转染组,每组各5只。除正常对照组外15只Wastar大鼠,施行经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)。术后一月,处死所有20只大鼠,取出左侧颈总动脉,以组织块贴壁法培养损伤后血管平滑肌细胞,采用脂质体载体Fugene6介导真核表达载体pcDNA3.1-eNOS和空载体pcDNA3.1(-)分别转染eNOS转染组和pcDNA3.l(-)转染组的平滑肌细胞,以RT-PCR法、原位杂交法和免疫荧光法检测eNOS基因的表达;以MTT法检测细胞增殖程度。结果在转染pcDNA3.l-eNOS基因的损伤后血管平滑肌细胞中可以检测出eNOSmRNA和蛋白的表达,且其细胞增殖程度显著低于未转染eNOS基因者(P<0.05)。结论eNOS基因体外转染可以明显抑制大鼠颈总动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞的增殖活性。     

RNAi沉默Survivin与ER-α36基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖与凋亡的影响

目的：靶向沉默人乳腺癌细胞Survivin与雌激素受体-α(ER-α) 36双基因的表达,探讨其对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖与凋亡的影响。方法：采用生物信息学技术设计并构建RNAi片段（siRNA-ER-α36）,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞株。采用噻唑蓝染色法检测细胞增殖情况。采用RT-PCR、Western blot方法检测细胞中Survivin、ER-α36与凋亡蛋白Caspase-3的mRNA及蛋白表达情况;流式细胞术检测转染细胞凋亡率。结果：RNAi片段成功转染MDA-MB-231细胞,24 h转染率的平均值为68%,48 h转染效率可达76%(P<0.01)。与空白对照组比较,RNAi片段转染后MDA-MB-231细胞Survivin和ER-α36基因的mRNA和蛋白含量明显下降（P<0.05）,而上调Caspase-3凋亡蛋白的表达;MDA-MB-231细胞增殖能力降低（P<0.05）,凋亡率升高（P<0.05）。结论：RNAi靶向沉默并下调Survivin与ER-α36基因的表达,上调Caspase-3凋亡蛋白的表达,从而抑制乳腺癌...     

沉默α-catulin基因对子宫内膜癌lshikawa细胞生物学行为的影响

目的利用siRNA沉默子宫内膜癌lshikawa细胞中α-catulin基因的表达,探讨其对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡与侵袭的影响。方法将培养的Ishikawa细胞分为pGCsi-α-catulin组、pGCsi-NC组与空白对照组(未加入任何试剂的细胞组)。构建α-catulin siRNA的表达载体,并转染Ishikawa细胞。Western blot方法检测转染前后Ishikawa细胞中α-catulin蛋白的表达;MTT实验检测细胞生长抑制率,流式细胞技术分析转染前后Ishikawa细胞的凋亡变化,Transwell实验检测转染前后Ishikawa细胞侵袭能力的变化。结果与pGCsi-NC组与空白对照组相比,pGCsi-α-catulin组Ishikawa细胞中α-catulin蛋白表达水平显著降低,Ishikawa细胞的增殖能力明显降低,凋亡率明显升高,侵袭能力明显减弱(P<0.05)。结论α-catulin可成为治疗子宫内膜癌细胞的靶点。     

Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5抑制巨噬细胞焦亡的作用机制

背景：Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5(fibronectin type Ⅲ domain-containing protein 5,FNDC5)是一种肌肉因子，具有调节糖脂代谢、抗炎、抗氧化及改善胰岛素抵抗等功能，并且具有调节多种细胞焦亡的能力。目的：探讨FNDC5对巨噬细胞焦亡的作用及潜在机制。方法：(1)构建FNDC5基因过表达和沉默慢病毒载体，将慢病毒载体转染至THP-1细胞株，通过观察细胞绿色荧光表达、qPCR和Western blot验证转染效果。(2)佛波酯诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞，通过氧化性低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)构建巨噬细胞焦亡模型，分组：NC组、ox-LDL组、ox-LDL+MOCK1组、ox-LDL+Ov-FNDC5组、ox-LDL+MOCK2组和ox-LDL+shFNDC5组。(3)采用Hoechst 33342/PI荧光双染和乳酸脱氢酶释放实验评估细胞焦亡程度，采用qPCR和Western blot检测相关分子mRNA和蛋白表达水平，采用ELISA检测细胞上清液中白细胞介素1β和白细胞介...     

沉默α-catulin基因对子宫内膜癌lshikawa细胞生物学行为的影响

目的利用siRNA沉默子宫内膜癌lshikawa细胞中α-catulin基因的表达,探讨其对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡与侵袭的影响。方法将培养的Ishikawa细胞分为pGCsi-α-catulin组、pGCsi-NC组与空白对照组(未加入任何试剂的细胞组)。构建α-catulin siRNA的表达载体,并转染Ishikawa细胞。Western blot方法检测转染前后Ishikawa细胞中α-catulin蛋白的表达;MTT实验检测细胞生长抑制率,流式细胞技术分析转染前后Ishikawa细胞的凋亡变化,Transwell实验检测转染前后Ishikawa细胞侵袭能力的变化。结果与pGCsi-NC组与空白对照组相比,pGCsi-α-catulin组Ishikawa细胞中α-catulin蛋白表达水平显著降低,Ishikawa细胞的增殖能力明显降低,凋亡率明显升高,侵袭能力明显减弱(P<0.05)。结论α-catulin可成为治疗子宫内膜癌细胞的靶点。     

慢病毒介导沉默P75神经营养因子受体联合神经生长因子过表达促进大鼠骨髓间充质干细胞的增殖

文题释义：P75神经营养因子受体(P75 Neurotrophin receptor,P75^NTR)：属于一种Ⅰ型糖蛋白,在非神经系统组织及多种肿瘤细胞中表达。p75^NTR与Trk受体通过不同的信号传递对细胞增殖与凋亡发挥着双重的生物效应。神经生长因子：在神经生长因子信号通路中,p75^NTR可以与神经生长因子相结合,引起神经酰胺的释放而激活JNK通路来调节细胞的增殖和凋亡。  摘要背景：P75神经营养因子受体(P75 Neurotrophin receptor,P75^NTR)是神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的受体之一。在各种细胞组织中发挥着促进增殖或凋亡的双重作用,且P75^NTR在骨折不愈合处存在高表达,而过量的NGF可关闭P75^NTR受体,从而挽救受损的细胞。因此研究沉默P75^NTR联合NGF过表达共转染对骨髓间充质干细胞增殖的影响,可为临床治疗骨折不愈合提供新思路。目的：观察慢病毒介导沉默P75^NTR联合NGF过表达共转染对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响。方法：体外培养至第3代SD大鼠骨髓间充质干细胞分为空白对照组、阴性对照组、沉默p75^NTR组、NGF过表达组、沉默p75^NTR联合NGF过表达组。将慢病毒介导沉默P75^NTR、过表达NGF转染至大鼠骨髓间充质干细胞,倒置荧光学显微镜观察慢病毒转染第3天细胞形态变化,流式细胞仪检测转染效率及Western blot方法检测P75^NTR和NGF的表达,最后用MTT法和CCK-8法检测各组细胞增殖活性。结果与结论：①共转染慢病毒后的细胞生长、分布良好;双基因慢病毒载体的转染效率已超过70%;②与空白对照组和阴性对照组比较,沉默P75^NTR联合NGF过表达组P75^NTR蛋白表达明显下调,NGF蛋白表达明显增加;③与空白对照组与阴性对照组相比,沉默P75^NTR联合NGF过表达组、沉默P75^NTR组、NGF过表达组细胞增殖明显加快,差异有显著性意义(P < 0.05),其中沉默P75^NTR联合NGF过表达组增殖最快;④结果显示：沉默P75^NTR联合NGF过表达共转染可促进SD大鼠骨髓间充质干细胞的增殖。ORCID: 0000-0003-3826-7213(王宁) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程