荣筋拈痛方对膝关节软骨细胞外基质代谢的作用及机制北大核心

背景:课题组前期动物实验研究表明,荣筋拈痛方可通过LncRNA GAS5/miR-21影响软骨基质分解和合成代谢,以达到防治膝骨关节炎的作用。LncRNA GAS5/miR-21能否作为防治膝骨关节炎的靶点,仍需从细胞水平研究验证。目的:从细胞水平探讨荣筋拈痛方防治膝骨关节炎的作用机制。方法:(1)8周龄SPF级雄性SD大鼠40只,随机分组后给予生理盐水、荣筋拈痛方(0.45 g/mL)、盐酸氨基葡萄糖胶囊(0.015 g/mL)灌胃,制备含药血清。(2)分离培养SD大鼠膝关节软骨细胞,采用白细胞介素1β干预软骨细胞,诱导退变软骨细胞模型,采用CCK-8法明确含药血清干预软骨细胞的量效时效关系。(3)将第2代软骨细胞分为空白组(空白血清)、模型组(白细胞介素1β+空白血清)、治疗组(白细胞介素1β+荣筋拈痛方含药血清)、对照组(白细胞介素1β+盐酸氨基葡萄糖胶囊含药血清)诱导干预48 h,Real-time PCR法和Western blot法检测各组软骨细胞血清干预后LncRNA GAS5、miR-21、基质金属蛋白酶抑制物3(tissue inhibitor of metalloproteinases 3,TIMP-3)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)3、MMP-9、MMP-13和解聚蛋白样金属蛋白酶5(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs,ADAMTS-5)基因及蛋白表达。(4)慢病毒转染软骨细胞过表达LncRNAGAS5,分为LncRNAGAS5空载体+空白血清组、LncRNAGAS5空载体+荣筋拈痛方含药血清组、LncRNA GAS5过表达+空白血清组、LncRNA GAS5过表达+荣筋拈痛方含药血清组,各组干预后Real-time PCR检测LncRNA GAS5、miR-21、TIMP-3、MMP-9、MMP-13、ADAMTS-5基因表达。结果与结论:(1)荣筋拈痛方含药血清体积分数为10%、培养48 h;盐酸氨基葡萄糖胶囊含药血清体积分数为15%、培养48 h,能显著提高软骨细胞活性;(2)干预48 h后,与模型组相比,荣筋拈痛方含药血清和盐酸氨基葡萄糖胶囊含药血清均能抑制Lnc RNA GAS5、MMP-3、MMP-9、MMP-13、ADAMTS-5基因和蛋白的表达(P<0.05),促进miR-21、TIMP-3基因和蛋白表达(P<0.05);(3)与空载体组相比,LncRNAGAS5过表达组LncRNA GAS5、MMP-9、MMP-13、ADAMTS-5基因表达量明显升高(P<0.05),miR-21、TIMP-3基因表达量明显降低(P<0.05);与LncRNAGAS5过表达+空白血清组相比,LncRNAGAS5过表达+荣筋拈痛方含药血清组MMP-9、MMP-13和ADAMTS-5mRNA表达量均降低(P<0.05),miR-21、TIMP-3基因表达量升高(P<0.05);(4)结果表明,荣筋拈痛方通过调控LncRNA GAS5/miR-21,促进TIMP-3的表达,抑制MMP-3、MMP-9、MMP-13、ADAMTS-5等表达,从而延缓退变软骨细胞外基质降解,起到防治膝骨关节炎的作用。     

骨关节炎诱导软骨细胞凋亡和细胞外基质降解的机制

背景:研究发现长链非编码RNA IFNG-AS1在类风湿关节炎中发挥调控作用,但是其在骨关节炎中的作用仍不明确.目的:探究长链非编码RNA IFNG-AS1调控miR-376b-3p/AKT丝氨酸/苏氨酸激酶3(AKT serine/threonine kinase 3,AKT3)轴对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡和细胞外...     

长链非编码RNA参与调控成骨细胞分化和破骨细胞的生成

文题释义： 长链非编码RNA(Lnc RNA)：是长度超过200个核苷酸的RNA分子,缺乏明显的开放阅读框,不具有或具有少许蛋白编码功能。 骨关节炎：是一种慢性退行性关节病,主要表现为关节软骨的退化、软骨下骨的改变、邻近骨的广泛重塑以及骨赘的形成。 背景：长链非编码RNA能够在转录及转录后水平等多个方面发挥作用,参与骨再生的调控,同时与骨关节炎有着密切的联系。 目的：综述长链非编码RNA在骨再生和骨关节炎中的研究进展。 方法：计算机检索CNKI数据库、PubMed数据库以及Elsevier数据库的相关文献,中文检索词为：长链非编码RNA,骨,骨再生,骨关节炎;英文检索词为：LncRNA,bone,bone regeneration,osteoarthritis。查阅2000年1月至2019年6月期间收录的长链非编码RNA在骨再生和骨关节炎方面的研究和应用,包括综述、基础研究以及临床研究。通过阅读文题和摘要进行初步筛选,排除与文章主题不相关的文献,根据纳入标准和排除标准,最终纳入64篇文献进行结果分析。 结果与结论：①骨再生是一个涉及到成骨细胞和破骨细胞相互作用的复杂过程,长链非编码RNA参与成骨细胞的分化和破骨细胞的生成,对成骨细胞和破骨细胞的平衡起着重要的作用,因此是骨再生过程中的关键分子;②长链非编码RNA参与了骨关节炎的发生和发展,长链非编码RNA的表达在骨关节炎患者和健康人群中有着明显的差异,在骨关节炎患者中一些长链非编码RNA的表达升高,部分表达降低,明确各自的表达差异和功能对预防和治疗骨关节炎意义重大。 ORCID: 0000-0002-6311-4748(熊坤) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

KRTAP5-AS1负调控miR-335对甲状腺癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)KRTAP5-AS1是否通过负调控miR-335影响甲状腺癌细胞的增殖、迁移和凋亡.方法:qRT-PCR检测33例甲状腺癌组织中KRTAP5-AS1和miR-335的表达.甲状腺癌细胞SW579分为si-NC组、si-KRTAP5-AS1组、si-KRTAP5-AS1+miR-...     

NONHSAT248596.1内源性竞争miR-146a-5p调控骨关节炎软骨退变的机制

背景：目前已有针对lncRNAmiRNAmRNA的共表达网络对骨关节炎发生发展调控机制的研究，课题组前期研究已通过数据库筛选出符合条件的NONHSAT248596.1和miR-146a-5p，尚缺乏体内实验来验证上述调控机制。目的：探究NONHSAT248596.1在基质细胞衍生因子1/4型趋化因子受体轴介导体内骨关节炎软骨退变进程中对miR-146a-5p发挥的竞争性内源性RNA调控作用。方法：取36只新西兰兔，通过向右侧后肢膝关节注射基质细胞衍生因子1溶液建立骨关节炎模型，采用随机数字表法分4组，lncRNA组、mi RNA组、ce RNA组、对照组分别向造模膝关节内注射NONHSAT248596.1过表达的慢病毒载体、mi R-146a-5p过表达的慢病毒载体、mi R-146a-5p+NONHSAT248596.1过表达的慢病毒载体及空慢病毒载体。造模第4,8,12周，取膝关节软骨组织和软骨下骨组织进行相关检测。结果与结论：(1)苏木精-伊红与番红O固绿染色显示，4组软骨组织都有不同程度的退变表现，造模第4周时，lncRNA组软骨组织中的软骨细胞肿胀、细胞极性消失，细胞外基质破...     

人脂肪间充质干细胞成软骨分化过程中差异表达长链非编码RNA鉴定及功能

背景：人脂肪间充质干细胞成软骨分化过程受多种因素影响。研究证实,长链非编码RNAs在表观遗传调控、转录以及转录后水平调控等过程中扮演着重要角色,而目前其在人脂肪间充质干细胞成软骨分化过程中表达谱的改变以及调控作用鲜有报道。目的：探讨人脂肪间充质干细胞成软骨诱导分化过程中差异表达长链非编码RNAs及其功能。方法：以人脂肪间充质干细胞成软骨诱导分化0 d（未诱导组）、14 d（诱导组）细胞为研究对象,利用转录组测序技术筛选成软骨诱导分化前后差异表达倍数变化2倍及以上的长链非编码RNAs和m RNAs,并通过q RT-PCR对测序结果进行验证。采用生物信息学分析对差异表达基因行GO功能分析和KEGG通路富集分析,并筛选长链非编码RNAs邻近基因以及共表达基因。结果与结论：（1）与未诱导组相比,诱导组中显著差异表达的长链非编码RNAs共有816条,m RNAs共有5 138条;（2）GO功能和KEGG信号通路分析发现,差异表达基因富集的主要生物学过程包括细胞进程、生物调节和代谢过程等;主要通路包括黏附斑激酶、胰岛素信号通路、Wnt信号通路等;（3）对差异表达长链非编码RNAs行邻近基因和共表达...     

长链非编码RNA调控膝骨关节炎中软骨下骨稳态的作用与机制

背景：软骨下骨邻近软骨层,在膝骨关节炎进展机制中的重要作用已得到广泛认可,近年来干预软骨下骨稳态的因素逐渐成为研究热点。而长链非编码RNA作为目前研究的一大热点,其在调控骨稳态方面已凸显出一定的优势与价值。目的：了解长链非编码RNA在软骨下骨稳态中的作用机制,对探索膝骨关节炎的防治新途径具有重要意义。方法：以“长链非编码RNA、膝骨关节炎、软骨下骨、成骨细胞、破骨细胞、骨髓间充质干细胞、信号通路”为中文检索词检索中国知网、万方、维普数据库;以“Long non-coding RNA、Knee osteoarthritis、Subchondral bone、Osteoblasts、Osteoclasts、 Mesenchymal stem cells、Signal pathway”为英文检索词检索PubMed、Medline、Embase及Web of Science数据库,检索从各数据库建库至2022年7月的相关文献,根据纳入及排除标准最终纳入65篇文献。结果与结论：(1)软骨下骨稳态与骨髓间充质干细胞、成骨细胞和破骨细胞的增殖、分化、凋亡,周围细胞因子以及血管新生等密切相关。(2)长...     

基于生物学信息分析及推测PCGEM1在前列腺癌中的表达分子调控网络

非编码 RNA,包括以 miRNA、siRNA 和 piRNA 等为代表的短小 RNA 和长链非编码 RNA（long non-coding RNA,lncRNA）。长链非编码 RNA,有别于其他小分子非编码 RNA,是目前非编码 RNA 研究的热点。随着研究的不断推进,人们发现 lncRNA 与物种进化、胚胎发育、物质代谢以及肿瘤发生等都有着密切的联系[1]。miRNA 是一类长度为21~25个核苷酸（nt）的单链 RNA,属于非编码蛋白 RNA,广泛存在于生物界,miRNA 调节人类1/3基因的表达,miRNA 是一类新发现的基因调节剂,可以在转录水平或转录后水平调节基因的表达,在肿瘤的发生与发展中扮演着“癌基因”与“抑癌基因”的角色[2]。前列腺癌基因表达标记1（prostate cancer gene expression marker 1, PCGEM1）全长1643 nt,在前列腺组织及前列腺癌组织中呈特异表达的长链非编码 RNA,但其表达调控网络目前未知[3],本文旨在运用生物学软件对其进行生物学信息分析,为下一步实验验证其表达分子调控网络机制提供线索。     

长链非编码RNAs调控骨稳态研究进展

骨形成和骨吸收是骨稳态维持的两个重要过程,骨稳态失衡可导致多种骨代谢疾病的发生。长链非编码RNAs(lncRNAs)是一类几乎不具有编码功能的RNAs,在调节基因表达、生命发育及疾病发生发展中起重要调控作用。在骨代谢疾病中多种lncRNAs表达异常,lncRNAs通过调节成软骨分化、成骨分化和骨基质矿化过程,调控骨的形成。并通过影响破骨细胞的分化和成熟,参与骨吸收过程的调节。     

温阳益髓中药干预兔膝骨关节炎软骨基质金属蛋白酶的表达

背景：目前临床上关于温阳益髓中药治疗膝骨关节炎对软骨基质金属蛋白酶表达影响的研究还较少有报道。 目的：制作兔膝骨关节炎模型观察温阳益髓中药对软骨基质金属蛋白酶表达的影响。 方法：健康成年新西兰大白兔96只,随机选取72只采用石膏外固定方法制作兔膝骨关节炎模型。确定造模成功后再随机分为3组,模型组不做处理;中药治疗组每日灌胃方药提取液24 mL/kg,药物对照组每日灌胃葡立胶囊(盐酸氨基葡萄糖)24 mg/kg,1次/d,至造模成功后8周。另外24只新西兰大白兔作为空白对照。 结果与结论：PCR方法定量分析骨关节炎模型组软骨组织中基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶13表达水平均显著高于其他3组。中药治疗组及药物对照组中基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶3及基质金属蛋白酶13的表达较模型组明显降低。说明温阳益髓中药治疗兔膝骨关节炎能够有效抑制兔骨关节炎软骨基质金属蛋白酶的表达。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

Lnc-CLRN3与肠道天然免疫的相关性及其功能研究

目的研究一个全新的长链非编码RNA Lnc-CLRN3在肠道天然免疫中的作用。方法应用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激人结肠癌细胞SW480,然后收集细胞提取RNA并通过RT-qPCR筛选表达变化的长链非编码RNA,进一步通过基因过表达、敲除和RNA免疫共沉淀等技术手段对该基因的功能进行深入分析。结果筛选出1个在SW480细胞中高表达且LPS刺激基因表达上调的长链非编码RNA Lnc-CLRN3,该基因主要分布于细胞核内,其转录受到MAPK通路的调控,进一步研究表明该基因通过结合SFPQ蛋白进而影响下游IL12P40等免疫因子的表达。结论长链非编码RNA Lnc-CLRN3参与了肠道细胞的天然免疫调控。     

miR-210 介导 CH25H 免疫信号通路调控骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡 新机制研究

目的：探讨miR-210调控骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡免疫通路的新机制。方法：Hulth法构建大鼠骨关节炎模型,分离软骨细胞并进行鉴定。HE染色和番红O染色观察两组大鼠关节软骨组织变化。IL-1β体外诱导软骨细胞并检测miR-210表达。细胞增殖和流式细胞术检测sh-miR-210、NC-miR-210和mimics-miR-210分别转染软骨细胞后其增殖和凋亡变化。RT-PCR、免疫荧光和Western blot检测IL-1β刺激及RNA转染后软骨细胞IL-6和MMP-13表达变化。RT-PCR和Western blot检测软骨细胞胆固醇25-羟化酶（CH25H）表达。共同转染mimics-miR-210和CH25H过表达质粒及sh-miR-210和shRNACH25H质粒后观察软骨细胞增殖能力变化。结果：骨关节炎大鼠体内软骨组织和体外IL-1β刺激软骨细胞中miR-210表达均下调。软骨细胞增殖能力随着miR-210表达沉默而减弱,随着miR-210过表达而增强。miR-210抑制免疫细胞因子IL-6和MMP-13表达。CH25H在骨关节炎组软骨中表达显著增加,且CH25H随着mi...     

lncRNA HCG18调节miR-3619-5p/ITGB2轴对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lnc RNA)人类白细胞抗原复合体18(HCG18)能否通过调控微小RNA(mi R)-3619-5p/整合素β2(ITGB2)轴参与乳腺癌细胞的迁移和侵袭。方法 体外培养人乳腺癌MCF-7细胞系及人乳腺上皮MCF-10A细胞系，qRT-PCR和Westernblot检测lncRNAHCG18、miR-3619-5p、ITGB2的表达水平；Starbase数据库预测lncRNA HCG18、ITGB2与miR-3619-5p的结合位点；利用转染技术将MCF-7细胞分为Control组、si-NC组、siHCG18组、si-HCG18+inhibitor NC组、si-HCG18+miR-3619-5p inhibitor组、miR-NC组、miR-3619-5p mimics组、miR-3619-5p mimics+pcDNA-NC组、miR-3619-5p mimics+ITGB2组，qRT-PCR和Western blot技术检测各组lncRNA HCG18、miR-3619-5p与ITGB2的表达水平，CCK-8、细胞划痕和Transwell实验分别...     

长链非编码RNA与病毒和微小非编码RNA关系的研究进展

非编码RNA,包括以miRNA、siRNA和piRNA等为代表的短小RNA和长链非编码RNA.长链非编码RNA,有别于其他小分子非编码RNA,是目前非编码RNA研究的热点.随着研究的不断推进,人们发现lncRNA与物种进化、胚胎发育、物质代谢以及肿瘤发生等都有着密切的联系.microRNA是一类长度为19～ 23个核苷酸的内源性非编码RNA,可以在转录水平或转录后水平调节基因的表达.     

长链非编码RNA调控乳腺癌发生发展的研究进展

乳腺癌是女性最常见的疾病之一,由于本身的复杂性和异质性,使其仍然是公共卫生领域的一大难题。近几年来随着技术的发展,长链非编码RNA（lncRNA）受到了广泛的关注。大量研究表明,长链非编码RNA由于其关键的生物调控功能,在肿瘤的发生、发展中发挥着重要作用。尽管长链非编码RNA的具体分子机制尚未完全明确,但最近的研究表明,许多长链非编码RNA在多种肿瘤中表达异常,其中包括乳腺癌。本文主要对长链非编码RNA与乳腺癌的最新研究进行了综述,并进一步探索长链非编码RNA在影响乳腺癌增殖、凋亡、侵袭、转移中的分子机制。     

长链非编码RNA HOXD-AS1通过RUNX3促进骨肉瘤细胞增殖

目的观察长链非编码RNA HOXD-AS1对骨肉瘤细胞增殖的影响及可能机制。方法应用Western blot与real-time PCR方法检测长链非编码RNA HOXD-AS1与RUNX3在骨肉瘤组织及癌旁组织中的表达,CCK-8法检测过表达长链非编码RNA HOXD-AS1后对骨肉瘤细胞增殖活力的影响以及RUNX3的表达变化,过表达RUNX3后检测长链非编码RNA HOXD-AS1对骨肉瘤细胞增殖活力的影响。结果长链非编码RNA HOXD-AS1在骨肉瘤组织中表达水平高于癌旁正常组织,而RUNX3在骨肉瘤组织中的表达低于癌旁正常组织,过表达长链非编码RNA HOXD-AS1表达后骨肉瘤细胞增殖活力显著增强,RUNX3的表达水平减少,过表达RUNX3后过表达长链非编码RNA HOXD-AS1,长链非编码RNA HOXD-AS1对骨肉瘤细胞的促增殖抑制作用减弱。结论长链非编码RNA HOXD-AS1促进骨肉瘤细胞增殖与RUNX3相关。     

LncRNA CASC9和MiR-193a-5p在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义

目的 检测长链非编码RNA 肿瘤易感候选者9(long non-coding RNA cancer susceptibility candidate 9,lncRNA CASC9)、微小RNA-193a-5p(microRNA-193a-5p,miR-193a-5p)在子宫内膜癌组织中的表达水平,并探讨在子宫内膜癌组织...     

LINC00659靶向miR-149-5p调控食管鳞癌细胞Eca-109的增殖、迁移、侵袭及放射敏感性

目的 探讨长基因间非编码RNA 00659(LINC00659)是否靶向miR-149-5p调控食管鳞癌Eca-109细胞的增殖、 迁移侵袭及放射敏感性.方法 实时定量PCR(RT-qPCR)分析30对食管鳞癌组织、 对照组织中LINC00659和miR-149-5p表达量.将Eca-109细胞分为si-NC组、si-...     

长链非编码RNA PCBP1-AS1下调微RNA-196a抑制口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭

探讨长链非编码RNA（LncRNA） PCBP1-AS1对口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其对微RNA-196a（miR-196a）的靶向调控作用。研究发现PCBP1-AS1在口腔鳞癌组织中低表达,而miR-196a表达上调;转染pcDNA-PCBP1-AS1或转染anti-miR-196a均可抑制细胞增殖、迁移及...