TMEM16A在肿瘤中的研究进展

摘要: 跨膜 蛋 白 16A(transmembraneprotein16A,TMEM16A)是 一 种 钙 激 活 的 氯 离 子 通 道 (calcium-activated chloridechannel,CaCC),它在肿瘤中广泛过表达,对肿瘤的发生发展有着重要的影响。在各种肿瘤中,TMEM16A 的过 表达不仅可以促进癌细胞的增殖、转移和侵袭,抑制肿瘤细胞的凋亡,影响肿瘤的生长,还与肿瘤的治疗耐药、复发和预 后不良有关。因此,探索 TMEM16A 的体内表达情况与肿瘤各个方面的关系具有重要的意义,该综述旨在总结近十年 来 TMEM16A 在肿瘤中的研究进展,为以后 TMEM16A 在肿瘤中的进一步研究提供新的思路。     

TMEM16A在口腔癌前病变和鳞癌中的表达及意义

目的检测跨膜蛋白16A(TMEM16A)在口腔癌前病变组织及口腔鳞癌组织中的表达与分布情况,分析其在口腔癌变机制中的作用。方法采用免疫组织化学染色法检测10例正常黏膜组织、10例上皮单纯性增生、30例上皮异常增生和45例口腔鳞癌标本中TMEM16A的表达情况。结果 TMEM16A在正常黏膜组织上皮中为阴性表达,在口腔癌前病变组织出现不同程度的表达,且随着上皮异常增生程度增加,TMEM16A蛋白表达逐渐增强。TMEM16A在口腔鳞癌中表达显著高于口腔癌前病变,在口腔鳞癌I、II、III级中,TMEM16A的表达差异无统计学意义(χ2=1.74,P0.05)。结论 TMEM16A在不同级别口腔癌前病变及鳞癌中表达的差异提示其可能在口腔鳞癌发生早期有重要作用。     

TMEM 16A在胃腺癌中的表达及意义

目的探讨Ca2+激活的氯离子通道(CaCC)蛋白TMEM16A在胃癌中的表达和意义。方法收集72例胃癌标本,采用免疫组织化学SP法检测TMEM16A的表达,以癌旁胃粘膜组织和非肿瘤胃粘膜组织作为对照,胃间质瘤组织作为阳性对照。结果TMEM16A表达于胃癌细胞胞膜和胞质内,在72例胃癌中TMEM16A呈不同程度阳性表达,在胃癌组织中TMEM16A表达的总阳性率("阳性"和"强阳性")为80.56%(58/72);而在相应的癌旁组织中TMEM16A表达的总阳性率("阳性"和"强阳性")仅为4.17%(3/72),两者之间差异显著(P<0.005)。结论 TMEM16A高表达于胃癌组织,可作为胃癌的分子诊断和靶向治疗的一个新的候选靶点。     

钙激活氯通道蛋白TMEM16A在小鼠心肌组织的表达

目的探讨钙激活氯通道蛋白TMEM16A在小鼠心肌组织的表达。方法采用RT-PCR和免疫荧光染色方法,检测小鼠心肌组织中TMEM16A的表达。结果小鼠心肌组织中检测到TMEM16A mRNA和蛋白的表达。结论小鼠心肌存在TMEM16A通道蛋白。     

跨膜蛋白16A在人正常月经周期子宫内膜表达的初步研究

目的:研究跨膜蛋白16A(TMEM16A)在人正常月经周期子宫内膜的表达变化。方法:收集人正常月经周期增殖期及分泌期的子宫内膜,共48例。采用免疫组织化学染色法检测TMEM16A蛋白的定位表达,实时荧光定量PCR测定TMEM16A mRNA表达水平,Western Blot法测定TMEM16A蛋白表达水平。结果:TMEM16A蛋白主要表达于分泌中晚期子宫内膜的腔上皮和腺上皮细胞;与增殖期相比,分泌期子宫内膜中TMEM16A mRNA和蛋白的表达水平均明显升高(P<0.05)。结论:TMEM16A在人正常月经周期不同时期子宫内膜存在差异性表达,其可能受到卵巢雌孕激素的调节,并参与子宫内膜容受性的建立。     

稳定表达TMEM16A蛋白TE-1细胞株的构建与鉴定

目的建立稳定表达TMEM16A蛋白的TE-1肿瘤细胞株。方法用Lipofectamine 2000转染试剂将TMEM16A基因转染到TE-1细胞,经G418筛选,使用激光共聚焦显微镜和Western blot技术检测TMEM16A基因是否在TE-1细胞中已经稳定表达。结果通过使用G418进行筛选,阳性克隆于4周后培养形成。激光共聚焦显微镜观察稳定表达TMEM16A蛋白的TE-1细胞可见细胞发出绿色荧光。Western blot结果表明,未稳转细胞和稳转细胞系统均表达有TMEM16A蛋白,而稳转细胞系统的蛋白水平明显高于未转染细胞系统的蛋白水平。结论利用脂质体转染方法成功构建了稳定表达TMEM16A基因的TE-1细胞系。     

跨膜蛋白16F对阿尔茨海默病细胞模型铁死亡的调控作用

目的 探讨跨膜蛋白16F (TMEM16F)对β淀粉样蛋白（Aβ25-35）诱导的阿尔茨海默病（AD）细胞模型铁死亡的影响。方法 将SH-SY5Y细胞分为对照组、模型组、siRNA阴性对照组（siRNA-nc组）、siRNA-TMEM16F转染组（siRNA-TMEM16F组）。采用CCK-8检测Aβ25-35对SH-SY5Y细胞存活率的影响,Western blotting检测各组TMEM16F、AD相关指标（Aβ、p-Tau）、铁死亡相关蛋白（ACSL4、GPX4、Fpn1）的表达情况,免疫荧光法检测各组ACSL4表达情况,荧光探针法检测各组活性氧（ROS）水平。结果Aβ25-35≥20μmol/L作用≥12 h时对细胞有显著损伤作用。与对照组相比,模型组中TMEM16F、Aβ、p-Tau、ACSL4以及ROS水平显著增高,而GPX4、Fpn1水平显著降低（P <0.05）;沉默TMEM16F后,Aβ、p-Tau、ACSL4及ROS表达受到抑制,而GPX4、Fpn1表达水平上升（P <0.05）。结论 沉默TMEM16F能够抑制Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞发生...     

跨膜蛋白25与相关疾病的研究进展

跨膜蛋白25(transmembrane protein 25,TMEM25)是跨膜蛋白家族成员之一,也是免疫球蛋白超家族成员之一。多项研究表明,TMEM25在人中枢神经系统高度表达,与神经系统相关疾病关系密切;同时,TMEM25也被证实与某些肿瘤的发生发展、治疗及预后存在关联。本文对TMEM25的结构、生理病理学功能及其与疾病的关系进行综述,为进一步探究TMEM25在相关疾病中的发病机制、诊断和治疗方面的作用提供思路。     

钙离子激活的氯离子通道蛋白TMEM16A在女性生殖系统中的研究进展

作为钙离子激活的氯离子通道(CaCCs)分子基础的跨膜蛋白16A(TMEM16A)分布于人体多种组织器官中,对许多生理和病理过程具有重要意义.近年来,对TMEM16A在女性生殖系统中分布和作用的研究逐渐增多,比如参与子宫平滑肌的收缩、影响卵巢颗粒细胞雌激素的合成以及调节卵母细胞的形态等,这些都提示了TMEM16A在女性生殖系统中的生理重要性.现本文将就TMEM16A在女性生殖系统各方面的最新研究进展进行综述.     

肺动脉平滑肌细胞上TMEM16A的表达及其阻滞剂对细胞增殖的作用

目的：研究TMEM16A在大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)上的表达及其阻滞剂(T16Ainh-A01)对PASMCs增殖的作用。方法组织块贴壁法分离正常大鼠PASMCs,原代培养。光镜下观察细胞形态,细胞免疫化学和细胞免疫荧光进行鉴定。细胞免疫荧光检测TMEM16A在PASMCs上表达。原代培养的3~6代PASMCs分别在10μmol/L T16Ainh-A01、20μmol/L T16Ainh-A01和50μmol/L T16Ainh-A01下培养24 h,用CCK-8法检测细胞增殖情况。结果倒置显微镜下PASMCs以长梭形为主,细胞核卵圆形,部分细胞重叠区域呈典型的“峰-谷”状结构。免疫学检测显示胞浆内与细胞长轴平行的肌丝被染成棕黄色,标记肌丝的红色荧光也与细胞长轴平行,标记细胞膜上的TMEM16A的绿色荧光可见表达,而细胞核不染色。CCK-8实验检测,相对于对照组,10μmol/L T16Ainh-A01组细胞活力均数为(96.74±0.92)%,20μmol/L T16Ainh-A01组均数为(92.21±1.25)%,50μmol/L T16Ainh-A01组均数为(87.41±3.27)%,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论正常大鼠PASMCs表达TMEM16A;T16Ainh-A01可抑制PASMCs增殖,其抑制作用呈浓度依赖性;TMEM16A可能参与调控PASMCs增殖。     

TMEM家族在乳腺癌中的研究进展

跨膜蛋白(transmembrane protein,TMEM)基因家族广泛参与细胞膜结构的组成,如内质网、溶酶体和高尔基体。研究发现TMEM蛋白在乳腺癌的发生发展过程中发挥重要作用,具有促癌和(或)抑癌的双重功能。TMEM不仅参与调控乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移等,同时与化疗耐药有关。因此,更好地表征TMEM家族成员在乳腺癌中的表达情况、临床意义和预后价值,探索其功能可以为肿瘤的预防和治疗提供新的思路。     

Aurora A、PCNA在脑胶质瘤中的表达及临床意义

目的:探讨Aurora A、PCNA在胶质瘤组织中的表达及两者的关系。方法:采用免疫组化SP法检测Aurora A和PCNA在80例手术切除的胶质瘤组织及10例正常脑组织标本中的表达情况。结果:Aurora A在胶质瘤组织中的阳性表达率57.5%(46/80),PCNA在胶质瘤组织中的阳性表达率65.0%(52/80),两者在正常脑组织中均未见表达。Aurora A和PCNA在高级别胶质瘤中的表达水平显著高于低级别组(P<0.01)。胶质瘤中Aurora A和PCNA的表达有显著相关性(P<0.01)。结论:Aurora A、PCNA的表达与胶质瘤的恶性程度密切相关,二者在胶质瘤中的发生、发展中有协同作用,并可以作为评价胶质瘤生物学行为的指标。     

STAT3和P16在人脑神经胶质瘤中的表达及临床意义

目的探讨STAT3和P16在人脑胶质瘤中的表达情况及临床意义。方法采取S-P免疫组化法检测STAT3和P16在10例正常脑组织、37例低级别胶质瘤(Ⅰ级、Ⅱ级)和38例高级别胶质瘤(Ⅲ级、Ⅳ级)中的表达情况,进一步探讨二者之间的关系及临床意义。结果与正常脑组织相比,STAT3蛋白在人脑胶质瘤中的表达显著增强,P16蛋白在人脑胶质瘤中的表达显著减弱。STAT3与P16在人脑神经胶质瘤中的表达呈负相关(P<0.05)。结论 STAT3高表达和P16低表达可能与人脑神经胶质瘤的发生发展有关。     

敲降TMEM45A基因对卵巢癌细胞增殖、黏附及侵袭的影响

目的 观察跨膜蛋白45A(TMEM45A）基因对卵巢癌细胞增殖、侵袭能力的调节作用,并进一步探索其可能相关信号通路。方法 通过分析TCGA数据库卵巢癌组RNA测序数据和25对卵巢癌及其配对非癌组织样本的RT-PCR数据,比较卵巢癌组织和正常组织中TMEM45A的表达。在两种卵巢癌细胞系HO-8910和A2780中进行RNA干扰,抑制TMEM45A的表达;使用CCK-8、PI染色、细胞黏附和Transwell实验检测细胞增殖、细胞周期分布、黏附和侵袭能力;分析TGF-β信号传导途径、粘着斑途径与TMEM45A的高表达的相关性;采用RT-PCR和Western检测TGF-β1、TGF-β2、RhoA、ROCK2 mRNA和蛋白水平。结果 TMEM45A在卵巢癌中过表达（P＜0.001）;TMEM45A基因的沉默抑制了细胞增殖（P＜0.05）,增加了处于G1期的细胞群（P＜0.05）;敲降TMEM45A基因可以抑制细胞黏附和侵袭（P＜0.05）;抑制TMEM45A显著下调TGF-β1/2、RhoA和ROCK2的表达（P＜0.05）。结论 TMEM45A可能是卵巢癌的致癌基因,敲降TMEM45A基因可能成为卵巢癌的治疗靶点。     

Syndecan-1在胶质瘤中的研究进展

胶质瘤是成人颅内最常见的原发性恶性肿瘤,肿瘤细胞迁移、血管生成、增殖、凋亡等在胶质瘤的恶性进展中发挥重要作用,是影响治疗效果的主要因素之一。随着分子生物学、基因组学的发展,人们发现作为蛋白聚糖的重要成员之一的Syndecan-1在胶质瘤发生、发展及预后中发挥至关重要的作用。研究Syndecan-1在胶质瘤中的表达规律、意义及其调节机制,有望从分子水平揭示胶质瘤的发生机制,为临床治疗胶质瘤提供新的靶点。     

芍药苷靶向钙激活氯通道TMEM16A减少NFκB活化治疗急性胰腺炎

目的 探讨芍药苷通过抑制钙激活氯通道TMEM16A进而减少NFκB活性治疗急性胰腺炎作用.方法 采用细胞培养、ELISA、Western blot、细胞转染、全细胞膜片钳技术及分子模拟对接等方法,观察腺泡细胞炎症时芍药苷对TMEM16A蛋白以及通道电流,及其对下游核转移因子NFκB活性和炎性细胞因子的作用,以及芍药苷与...     

p16在人脑胶质瘤中的表达及其意义

目的: 探讨p16在脑胶质瘤中的表达及其意义。方法: 采用免疫组织化学、核酸原位杂交和多重PCR的方法,检测68例脑胶质瘤和10例正常脑组织标本中p16的表达。结果: p16和mRNA在胶质瘤Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级的阳性表达,差异均有统计学意义(P<0.01～P<0.005),而多重PCR检测p16在胶质瘤Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级的阳性表达,差异无统计学意义(P>0.05)。结论: p16基因缺失可能与胶质瘤的发生有关;p16低表达在人脑胶质瘤的恶性进展中起重要作用,可作为预后评估指标之一。     

钙粘素、P16在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的　探讨钙粘素 (E -cadherin ,E -cd)和P16在人脑胶质瘤中的表达及意义。方法　采用免疫组化方法检测 5 6例胶质瘤和 11例正常脑组织中的E -cd和P16蛋白的表达。结果　E -cd和P16在正常脑组织中的阳性表达率均为 10 0 % ;E-cd在Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤中异常表达率分别为 4 2 9%、85 7% ,组织学分级之间有显著差异 (P <0 0 5 ) ,与对照组之间有显著差异 (P <0 0 5 ) ;P16在Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤中异常表达率分别为 39 3%、82 1% ,组织学分级之间有显著差异 (P <0 0 5 ) ,与对照组之间有显著差异 (P <0 0 5 ) ;E -cd和P16的表达在胶质瘤中呈正相关 (P <0 0 5 )。结论　E -cd和P16均在胶质瘤的发生发展过程中起重要作用 ,且有可能与胶质瘤的恶性度及预后有关。     

胶质瘤中p53基因突变p16基因缺失细胞增殖和凋亡及与临床病理特征的相关性研究

目的探讨P53基因突变、p16基因缺失、肿瘤细胞增殖活性(PCMNA)和凋亡在胶质瘤发生发展中的作用、相互关系及其与临床病理特征的相关性。方法应用LSAB免疫组化法检测96例不同类型胶质瘤中P53,P16蛋白表达及其肿瘤细胞增殖活性(PCNA);应用非同位素PCR-SSCP技术检测p53基因5-8外显子突变。应用PCR-DNA测序技术检测SSCP阳性标本中p53基因5-8外显子碱基突变谱和氨基酸顺序改变。应用TUNEL技术检测肿瘤细胞中凋亡的改变。结果结果显示96例不同类型胶质瘤中P53蛋白阳性表达率为41.7%(40/96),其中Ⅱ级肿瘤阳性率为27.3%(13/53),Ⅲ、Ⅳ级肿瘤阳性率分别为62.5%(20/32)、63.6%(7/11),低分级与高分级胶质瘤中P53蛋白阳性表达率有显著性差异(χ2=4.88,P<0.05)。SSCP检测结果显示34/96(35.4%)例胶质瘤出现p53基因异常移动的单链DNA电泳带,主要分布在5,7,8外显子。在40例P53蛋白阳性的病例中有32例呈现该基因的单链构象多态性改变,两种方法检测的符合率基本一致。DNA序列分析显示,17例SSCP有异常电泳带的标本中均存在p53基因突变,而且主要发生在5-8外显子,突变类型多数为点突变或碱基缺失,突变位点多分布在第5外显子130-175号密码子之间,第8外显子270-291密码子之间,突变类型主要为错义突变,且多为单碱基的改变,碱基突变以G→A或A→G最多。p16蛋白的表达缺失率为60.4%(58/96),其中Ⅱ级肿瘤为39.6%(21/53),Ⅲ、Ⅳ级肿瘤为81.2%(26/32)、100%(11/11),在高级别胶质瘤中P16表达缺失率均显著高于低级别的肿瘤。复合表达研究显示,p53蛋白的表达与p16缺失之间存在负相关性(P<0.05)。96例胶质瘤细胞增殖活性及凋亡检测显示,PCNA标记指数(PCNALabelIndex,PCNALI)随着肿瘤分级的升高而递增,而凋亡指数(Apoptosis Index,AI)随着肿瘤分级的升高而递减,PCNALI/AI之比随着肿瘤分级的升高而递增。结论p53异常表达和突变是胶质瘤中最常见的基因改变,与胶质瘤的组织学分级呈显著正相关;p53突变更常位于5、7、8外显子,突变类型主要为错义突变,且多为单碱基的改变,碱基突变以G→A或A→G最多。p53基因突变可以通过p53蛋白的表达来间接反映,p53基因的异常表达及突变与胶质瘤的发生和进展密切相关。p16的缺失更多见于高级别的胶质瘤,与胶质瘤的发生和进展密切相关。胶质瘤发生、发展与PCNA的高表达和细胞凋亡的抑制密切相关,PCNALI/AI比PCNALI或AI单独检测更能反映胶质瘤的病理特征及恶性行为。p53基因突变、p16基因表达的缺失及PCNALI的增高和细胞凋亡的抑制在胶质瘤发生、发展中可能起着重要协同作用并与肿瘤的分化和异常增生显著相关,而胶质瘤细胞凋亡的发生受p53、p16基因的调控,p53及p16抑癌基因的失活,是胶质瘤逃逸凋亡的重要原因之一。     

神经胶质瘤中ING4基因蛋白表达的研究

目的探讨ING4基因在神经胶质瘤发生、发展中的作用。方法采用免疫组织化学方法对34例神经胶质瘤患者和24例正常对照组ING4基因的蛋白表达进行研究。结果ING4基因在神经胶质瘤患者中的表达明显低于正常对照组（P〈0.001）。ING4基因的表达水平与神经胶质瘤的恶性程度呈负相关（rs=-0.470,P〈0.01）。结论ING4基因在神经胶质瘤的发生、发展中可能起重要的作用。