改良PCR-ELISA的建立及初步应用

目的　建立操作简单、灵敏、特异的PCR -ELISA。方法　采用短DNA片段扩增 ,其中上游引物 5′端标记有生物素 ,使PCR扩增产物的一条链上带有生物素 ,随着PCR反应的结束 ,PCR反应液中的地高辛标记的探针与PCR产物中的生物素标记的DNA链杂交 ,形成杂交产物 ,然后杂交产物通过生物素与微孔板上固定的链霉亲合素结合 ,被固定在微孔板上 ,最后用ELISA检测被固定的杂交产物。结果　该方法可以检测出 1× 10 1拷贝的HBVDNA模板 ,对 10 0例乙型肝炎患者的血清进行检测 ,HBSAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)的血清 10 0 %(30 /30 )检出HBVDNA ;HBsAg(+)、抗HBe(+)、抗HBc(+)的血清HBVDNA阳性为 78 6 %(2 2 /2 8) ;HBsAg(+)、抗HBc(+)的血清HBVDNA阳性为 6 6 7%(16 /2 4) ,其余为阴性。非乙型肝炎血清的结果均为阴性。结论　该PCR -ELISA操作简单 ,方法灵敏、特异。     

PCR产物液相杂交检测的优化

目的 为了使液相杂交检测更加灵敏、特异、快速。方法 通过改进杂交液的成分,选择最佳的探针浓度,使5＇端标记生物素的PCR扩增产物与5＇端标记地高辛的探针在PCR反应管中进行液相杂交,杂交条件为:94℃ 10 s冷却到37℃ 10 s即完成杂交。杂交后产物通过链霉亲和素被固定在微孔表面,同时在含高浓度DMSO的杂交液中将非特异结合的探针解离,然后对被固定的特异杂交产物进行ELISA检测。结果 液相杂交的条件优化:杂交液中二甲基亚砜(DMSO)浓度为300 ml·L~(-1),探针浓度为0.5μmol·L~(-1),杂交温度为37℃。对60～600 bp的PCR产物的杂交特异性无明显差异,可以检测到1×10~4copy的PCR产物,对100例乙型肝炎患者的血清进行检测,HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)的血清检出HBV DNA阳性率为100％(30/30);HBsAg(+)、抗HBe(+)、抗HBe(+)的血清检出HBVDNA阳性率为78.6％(22/28);HBsAg(+)、抗HBe(+)的血清检出HBV DNA阳性率为66.7％(16/24),其余为阴性。结论 该液相杂交法操作简单、快速、灵敏、特异,适合临床实验室使用。     

聚合酶链反应荧光偏振技术在乙型肝炎病毒DNA检测中的应用及价值

目的　探讨聚合酶链反应荧光偏振技术 (PCR FP)检测乙型肝炎病毒 (HBV)DNA的临床应用价值。方法　将PCR扩增得到的HBVDNA特定片段 ,与荧光素标记探针和PCR产物中的一条DNA链杂交 ,形成特异杂交体 ,用荧光偏振光检测仪检测特异杂交体 ,最终判断HBVDNA是否存在。并对对 10 2份乙型肝炎患者和 30份非乙型肝炎患者血清进行检测结果比较。结果　PCR FP检测HBVDNA的最低检测限为 1× 10 1拷贝 ,在 4 0份乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)、乙型肝炎e抗体 (HBeAg)和抗乙型肝炎核心抗原 (抗HBc)均阳性患者血清标本中检出HBVDNA阳性率为 10 0 % ;33份HBsAg、抗乙型肝炎e抗体 (抗Hbe)和抗HBc均阳性患者血清HBVDNA阳性率为 81 8% ;2 9份HBsAg和抗HBc阳性患者血清HBVDNA阳性率为 72 4 % ;14份乙型肝炎患者和 30份非乙型肝炎患者血清均为阴性。方法的灵敏性和特异性分别为 86 %和 10 0 %。结论　PCR FP操作简单、灵敏、特异 ,适用于临床HBV基因检测。     

应用荧光PCR技术检测6500例患者血清HBV DNA的实验研究

目的　揭示血清乙肝病毒标志物 (HBVM)与血清HBVDNA含量相关性。方法　采用ELISA法对血清、HB VM进行检测 ;对HBVM阳性 6 5 0 0例患者血清采用荧光PCR法定量检测HBVDNA。结果　在HBVM阳性的 6 5 0 0例血清中 ,有 3982例占 6 1 3% ,HBVM标志物阳性者血清均有HBVDNA阳性。血清HBsAg、HBeAg、抗 HBc阳性者HBVDNA阳性率占 96 9% ,大于 10 6copies/ml者占 72 1% ,HBsAg、抗 HBe、抗 HBc阳性者HBVDNA阳性率占 2 1 9% ,HBVDNA定量大于 10 3 copies/ml,且小于等于 10 4copies/ml者占 78 1%。结论　血清HBVM阳性患者中约 6 0 %的血清HBVDNA阳性 ,且HBeAg阳性中HBVDNA阳性率及血清HBVDNA均明显高于抗 HBe阳性者。在抗 HBs、抗 HBc阳性者血清内也有HBVDNA阳性者 ,采用荧光PCR定量检测HBVDNA技术先进结果准确。     

应用荧光偏振技术检测HBV DNA

目的　建立一种简便、灵敏、特异的DNA检测方法。方法　用荧光偏振技术检测 10 2例乙型肝炎患者血清中的HBVDNA ,并与多聚酶链反应 酶联免疫吸附试验 (PCR ELISA)方法作比较。结果　该方法可以检测出 1× 10 1拷贝的HBVDNA模板 ,CV为 6 .4 4 % ,对 10 2例乙型肝炎患者的血清进行检测 ,HBsAg( )、HBeAg( )、抗HBc( )血清HBVDNA阳性率为 10 0 % ( 4 0 / 4 0 ) ;HBsAg( )、抗HBe( )、抗HBc( )血清HBVDNA阳性率为 81.8% ( 2 7/ 33) ;HBsAg( )、抗HBc( )血清HBVDNA阳性率为 72 .4 % ( 2 1/ 2 9) ,其余为阴性。 30例非乙型肝炎患者血清中HBVDNA的检测结果均为阴性。结论　该方法简单、灵敏、特异 ,适用于临床进行大样本核酸检测     

HBsAg阴性献血者血清(浆)HBV DNA检测的意义

目的　明确HBsAg阴性献血者血清 (浆 )HBVDNA检测的应用价值。 方法　采用聚合酶链反应 (PCR)检测HBsAg阴性献血者血清 (浆 )HBVDNA。如HBVDNA为阳性 ,则进一步检测乙肝“两对半”血清学指标。结果　 5 0 0份标本中有 1 4份为HBVDNA阳性 ,检出率为 2 .8%。进一步检测其它HBV感染的血清学指标 ,发现这 1 4份标本中有 5份表现为抗 HBs、抗 HBe和抗 HBc一项或两项阳性。对HBVDNA的定量测定表明 ,其含量在 1 0 4～ 1 0 6拷贝数 /ml。结论　为尽可能减少输血后HBV感染的发生 ,有必要采用PCR方法检测HBsAg阴性献血者血清 (浆 )HBVDNA     

乙型肝炎病毒核酸定量与血清标志物模式及肝功能的关系探讨

目的　探讨乙型肝炎患者病毒核酸定量检测与血清标志物模式 (HBV M )及肝功能的关系。方法　31 5例乙型肝炎患者血清分别用酶联免疫吸附试验 (ELISA)、荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)检测HBV M、HBVDNA含量 ,并对其中 1 1 5例慢性乙型肝炎 (CHB)患者的丙氨酸氨基转移酶 (ALT)水平作统计分析。结果　血清HBVDNA含量与HBV M有关 ,模式Ⅰ (HBsAg阳性 +HBeAg阳性 +抗HBc阳性 )与HBeAg阴性的各种模式比较 ,模式Ⅱ (HBsAg阳性 +抗HBc阳性 )、Ⅲ (HBsAg阳性 +抗HBe阳性 +抗HBc阳性 )与HBsAg阴性的各种模式比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 1 )。对于CHB患者 ,随着病毒在体内的活动 ,血清HBVDNA含量和ALT水平相应升高。结论　HBeAg与HBVDNA含量明显相关 ;HBeAg阴性或HBeAg/抗 HBe血清转换 ,不表示病毒停止复制 ;CHB患者肝功能状态与血清HBVDNA含量有关     

全血乙型肝炎病毒定量检测方法的初步研究

目的探讨聚合酶链反应(PCR)检测全血中乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量及临床应用价值。方法取20μl血清裂解液提取HBVDNA、和取同样量的全血经不同裂解液提取血液中血清及白细胞内总HBVDNA,同时经PCR检测。对78份乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性患者两种取材方法检测HBVDNA含量进行比较。结果检测HBVDNA的最低检测限为1×103拷贝/ml,29份乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)和抗乙型肝炎核心抗体(抗HBc)均为阳性患者全血检测HBVDNA阳性率为100%,血清阳性率为100%,P>0.05;37份HBsAg、抗乙型肝炎e抗体(抗HBe)和抗HBc均为阳性患者全血检测HBVDNA阳性率为97.30%,血清阳性率为48.65%,P<0.01;12份HBsAg和抗HBc均为阳性患者全血检测HBVDNA阳性率为91.67%,血清阳性率为25%,P<0.01;20份非乙型肝炎患者血清均为阴性。血清HBVDNA阳性多数是ALT升高患者,其拷贝数均小于全血测定的拷贝数。结论全血检测HBVDNA阳性率高,避免血液中白细胞内HBV漏检,它能准确地反应血液HBV含量,更好地为临床治疗效果作监测。     

荧光定量PCR检测HBVDNA与血清HBV标志物的关系

目的　探讨荧光定量 PCR检测血清 HBVDNA与血清 HBV标志物的关系。方法　采用酶联免疫吸附法(ELISA)和荧光定量 PCR(FQ- PCR)两种方法同时检测 357份肝炎患者血清 ,并对结果进行对比分析。结果　肝硬化组HBVDNA含量明显低于 HBs Ag携带者组 (P<0 .0 5)。血清 HBs Ag、抗 - HBc、HBe Ag阳性组 HBVDNA含量明显高于HBs Ag、抗 - HBc、抗 - HBe和 HBs Ag、抗 - HBc阳性组 (P<0 .0 1 ) ,而后两组 HBVDNA检出率仍较高。结论　 FQ- PCR可真实反映 HBV感染、复制及病程变化 ,对乙型肝炎临床诊断及治疗均有较大的指导意义     

内标荧光定量PCR技术在乙型肝炎病毒定量中的应用

目的　建立内标荧光定量PCR技术检测乙型肝炎病毒 (HBV)DNA ,以避免PCR扩增过程中可能出现的假阴性或部分抑制。方法　在TaqMan荧光探针杂交PCR技术检测HBV载量的基础上 ,结合内标参照的方法指示PCR的扩增效率。结果本检测方法具有很好的特异性、重复性 ,检测敏感度达到 1× 10 3 copies/ml。经过对 382例乙肝患者标本测定证实 ,标志物为HBsAg( )、HBeAg( )、抗HBc( )的血清检出率为 10 0 % ,标志物为HBsAg( )、抗HBe( )、抗HBc( )的血清检出率为 72 .0 % ,与Roche试剂比较 ,两者的相关系数为 0 .987。结论　本法快速、简便、特异性好、能指示病毒感染程度。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

31例误诊哮喘原因分析

目的通过对中央气道不全性梗阻和支气管结核、术后痰栓形成误诊为支气管哮喘的分析,探讨误诊原因及正确诊断的方法。方法对误诊为支气管哮喘的3l例患者的临床资料进行分析。结果临床特征以刺激性咳嗽为主,其次为活动后胸闷、气促,肺部闻及哮鸣音,胸部影像学多无特征性改变或极易漏诊,支气管舒张试验阳性率低,诊断前缺乏气管镜及病理检查,均误诊为支气管哮喘。结论中央气道不全梗阻性病变或炎性病变包括支气管结核、术后痰栓形成时原发疾病症状不典型,肺部影像学检查无异常表现或极易漏诊,故该类以表现为咳嗽、喘息、活动后胸闷,进而出现严重呼吸困难的患者常被误诊为支气管哮喘,延误诊治。支气管镜及病理检查再结合肺CT是鉴别诊断的重要方法。     

血液透析患者家庭护理提供者的生活质量调查

目的:了解江汉油田血液透析(血液透析)患者家庭护理提供者(护理者)的生活质量。方法:对60例血液透析患者的家庭护理提供者进行一般情况和生活质量综合评定问卷(QOLI-74)调查,并进行相关性和多因素回归分析。结果:家庭护理提供者各维度的主观生活满意度与其客观指标相关,但也与其需求、年龄、文化程度、与患者的关系有关。结论:客观状态是影响主观生活满意度的重要因素,同时应考虑护理者的需求、年龄、文化程度、与患者的关系对护理者主观生活满意度的影响。     

胰腺癌治疗的Cochrane系统评价证据

目的评价胰腺癌治疗的Cochrane系统评价证据,以及纳入系统评价的临床随机对照试验（RCT）的方法学质量。方法检索Cochrane Library数据库（2009年第4期）中有关胰腺癌治疗的系统评价,并运用RewMan5.0.21对所纳入研究的偏倚进行评估。结果共检索到胆道支架置入术姑息治疗梗阻型胰腺癌的系统评价、放化疗治疗不能手术的进展期胰腺癌的系统评价共2篇系统评价,共纳入79个RCT。依照Cochrane协作网推荐的质量评价方法,对所纳入RCT的偏倚进行评估,表明均存在不同程度的偏倚,方法学质量普遍较低。结论 Cochrane系统评价是公认的最高质量的研究证据,但目前缺少足够强度的证据来支持胆道支架置入术姑息治疗梗阻型胰腺癌的疗效。其他治疗手段的疗效如胰腺癌围手术期的营养支持治疗等还需要通过进一步的完成系统评价来评估。建议推行临床试验透明化,实施临床试验注册制度以及按照CONSORT声明严格规范RCT的报告,以便于总结胰腺癌治疗的临床证据。     

护理干预对提高中风患者生活质量的效果观察

目的探讨提高中风患者生活质量的护理方法。方法将50例中风患者随机分为对照组23例和实验组27例,对照组给予针灸内科常规护理,实验组在此基础上给予心理护理和康复训练。结果两组患者治疗护理后日常生活活动(ADL)能力和贝克抑郁量表(BDI)评分均有好转,但实验组疗效明显优于对照组(P<0.05)。结论实施针对性心理护理和康复训练可明显提高中风患者的治疗效果。     

中国人四肢瘫日常生活能力评定量表的信度研究

目的研究四肢瘫日常生活能力评定量表评测四肢瘫患者的重测信度及观察者间信度。方法由1位评定者应用四肢瘫日常生活能力评定量表对20例四肢瘫患者进行评定,评定后1周内再次对该患者进行评定;另1位评定者在第1位评定者初次评定后2 d内对该患者进行评定。结果第1位评定者两次评定总分的组内相关系数为0.994(P<0.01);第1位评定者与第2位评定者评定总分的组内相关系数为0.971(P<0.01)。结论四肢瘫日常生活能力评定量表具有良好的重测信度及观察者间信度。     

超声评价放疗对颈动脉溃疡斑块形成的影响

目的 探讨超声在评价放疗对颈动脉溃疡斑块形成的影响的价值。方法 回顾性收集经病理学证实为头颈部肿瘤、放疗前后的颈动脉超声资料以及其他基线资料完整的患者93例,比较放疗前后放疗侧颈动脉和非放疗侧颈动脉粥样硬化斑块和溃疡斑块的总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积。结果 放疗前后颈动脉超声检查的平均间隔时间为（6.1±1.9）年;放疗前放疗侧斑块总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、溃疡斑块的总数量、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积与非放疗侧比较差异均无统计学意义（P均>0.05）;放疗后放疗侧斑块总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、溃疡斑块的总数量、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积均较非放疗侧加重,差异有统计学意义（P均<0.05）。结论 放疗可导致头颈部肿瘤患者颈动脉粥样硬化斑块的形成和进展,且斑块具有易损性特点。     

乳腺叶状肿瘤的影像分析

目的 分析乳腺叶状肿瘤的X线钼靶摄片和超声表现.方法 收集经手术病理证实的19例乳腺叶状肿瘤,术前均行超声检查,其中15例行X线钼靶摄片,回顾分析其临床特点和影像学表现.结果 19例乳腺叶状肿瘤中,良性8例,交界性6例,恶性5例.15例患者X线钼靶摄片中病灶均为高密度孤立肿块影,呈圆形(8例)或浅分叶状(7例),边界清晰(10例)或部分不清(5例),部分肿块周边见"晕"征(4例).超声检查6例发现囊性变,6例表现为后方回声增强.病灶为圆形(8例)、浅分叶状(8例)或有角状突起(3例).所有病例均未发现腋下转移淋巴结及周围组织浸润等恶性征象.结论 认识乳腺叶状肿瘤的病理类型和临床特点,结合影像表现综合分析,可提高术前诊断率.     

肇庆市居民颈椎病流行病学调查

目的 :调查肇庆市居民颈椎病发病情况及相关问题。方法 :通过分层随机抽样选择该市区18～70岁居民5000人为研究对象 ,入户或至单位询问调查。结果 :该市居民颈椎病发病率为8.11% ,男女差异无显著性 ,随着年龄的增长 ,发病率逐渐增加。经多因素分析 :体位姿势不正确、情绪紧张、潮湿、疲劳是发病的主要诱因。结论 :该病严重影响肇庆市居民的健康 ,做好防治应从早做起 ,综合防治。