Wnt/β-catenin信号通路对问充质干细胞衰老的影响及其作用机制

目的:研究不同年龄血清对Wnt/β-catenin信号通路激活水平的影响,探讨Wnt/β-catenin信号通路对间充质干细胞(MSCs)衰老、增殖、存活能力的作用及其机制.方法:提取年轻(8 ～12周)及老年(64—72周)SD大鼠血清,实验分为4组,分别为年轻血清(Young rat serum,YRS)组,YRS+ Wnt 3a组、老年血清(Old rat serum,ORS)组和ORS+ DKK1组.免疫细胞化学染色和Western blotting检测胞浆、胞核β-catenin的表达.SA-β-半乳糖苷酶染色检测各组细胞衰老,MTT法检测细胞增殖,AO/EB染色法检测MSCs存活和凋亡.为研究Wnt/β-catenin信号通路导致MSCs衰老的作用机制,免疫细胞化学染色和Western blotting检测γ-H2A.X和p53蛋白表达,RT-PCR法检测p53、p21 mRNA表达.结果:ORS组β-catenin表达较YRS组明显增强,尤其是胞核,出现β -catenin聚集现象,而ORS+ DKK1组β-catenin表达减弱.与YRS组相比,YRS+ Wnt 3a组细胞SA-β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数显著增多(P＜0.01),细胞增殖和存活能力减弱.而ORS+ DKK1组与ORS组相比,SA-β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数显著减少(P＜0.01),细胞增殖和存活能力增强.免疫细胞化学染色、Western blotting和RT-PCR检测结果显示,ORS组内γ-H2A.X、p53、p21表达较YRS组明显增强,而在ORS内加入DKK1后,γ-H12A.X、p53、p21表达较ORS组明显减弱.结论:ORS培养可以激活MSCs内Wnt/β-catenin信号通路.Wnt/β-catenin信号通路对MSCs衰老发挥重要调控作用.DNA损伤反应和p53/p21途径是Wnt/β-catenin信号通路导致MSCs衰老的重要介导因素.     

Wnt/β-catenin信号通路对间充质干细胞衰老的影响及其作用机制

目的:研究不同年龄血清对Wnt/β-catenin信号通路激活水平的影响,探讨Wnt/β-catenin信号通路对间充质干细胞(MSCs)衰老、增殖、存活能力的作用及其机制。方法:提取年轻(8～12周)及老年(64～72周)SD大鼠血清,实验分为4组,分别为年轻血清(Young rat serum,YRS)组,YRS+Wnt 3a组、老年血清(Old rat serum,ORS)组和ORS+DKK1组。免疫细胞化学染色和Western blotting检测胞浆、胞核β-catenin的表达。SA-β-半乳糖苷酶染色检测各组细胞衰老,MTT法检测细胞增殖,AO/EB染色法检测MSCs存活和凋亡。为研究Wnt/β-catenin信号通路导致MSCs衰老的作用机制,免疫细胞化学染色和Western blotting检测γ-H2A.X和p53蛋白表达,RT-PCR法检测p53、p21 mRNA表达。结果:ORS组β-catenin表达较YRS组明显增强,尤其是胞核,出现β-catenin聚集现象,而ORS+DKK1组β-catenin表达减弱。与YRS组相比,YRS+Wnt 3a组细胞SA-β-半乳糖苷酶染色阳性细胞...     

Wnt/β-catenin信号通路调控人神经干细胞衰老过程的研究

目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路对人神经干细胞（neural stem cells, NSCs）衰老的调控作用。方法将人胚胎干细胞分化为NSCs,经MPTP（1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶）处理后,检测细胞的衰老表型和Wnt/β-catenin相关蛋白表达变化。分别应用AR-A014418、DKK1蛋白激活、抑制Wnt/β-catenin通路后,检测Wnt/β-catenin信号通路改变对细胞衰老表型的影响。检测各实验组和对照组中促炎因子CCL3、CXCL10、CXCL11、TNF-α的表达变化。结果经MPTP处理后,NSCs显示衰老表型,表现为SA-β-gal阳性细胞明显增多,胞内ROS水平明显升高、细胞增殖活性受到抑制（P<0.01）。同时,Wnt1、β-catenin蛋白表达降低,磷酸化GSK3β表达升高。AR-A014418激活了Wnt/β-catenin通路,缓解了细胞的衰老表型;DKK1蛋白抑制了Wnt/β-catenin通路,加重了细胞的衰老表型。Wnt/β-catenin通路能调控NSCs衰老过程中促炎因子的表达。结论Wnt/β-catenin信号通路能够调控MPTP诱导的NSCs衰老过程。     

乳腺癌干细胞的检测及Hedgehog信号通路关键分子的表达

目的:探讨乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中是否存在乳腺癌起始细胞(CD44+/CD24-/low)亚群;并分析Hedgehog信号通路在CD44+/CD24-/low乳腺癌起始细胞亚群中的表达.方法:应用荧光激活细胞分选方法检测与分选MCF-7和MDA-MB-231中的CD44+/CD24-/low细胞亚群和非CD44+/CD24-/low细胞亚群,并在激光共聚焦显微镜下进行观察确认.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测CD44+/CD24-/low细胞亚群和非CD44+/CD24-/low细胞亚群中Hedgehog信号通路重要基因PTCH(human patched gene)、SHH(sonic Hedgehog)、Gii-1(glioma-associated oncogene homoglog-1)和SMOH(smoothened homolog)的表达情况.结果:乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中CD44+/CD24-/low亚群,比例分别为(1.70±1.43)%和(94.2±1.2)%.乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231的CD44+/CD24-/low亚群中Hedgehog信号通路处于明显活化状态,其中Hedgehog信号通路中重要下游信号分子Gii-1在MCF-7和MDA-MB-231细胞系CD44+/CD24-/low细胞亚群中的表达要明显高于非CD44+/CD24-/low细胞亚群(P分别为0.007和0.005).结论:乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中存在CD44+/CD24-/low干细胞标志细胞亚群,其中Hedgehog信号通路处于明显活化状态.     

适度低氧微环境对体外培养脑胶质瘤干细胞生长的影响

目的 探讨低氧微环境对脑胶质瘤干细胞(GSCs)凋亡及增殖的影响.方法 原代培养脑胶质瘤干细胞,特殊培养基筛选;将GSCs分常氧组(21％02)和低氧组(3％02),给予不同的氧浓度,倒置显微镜下观察细胞形态、荧光显微镜及流式细胞仪检测细胞凋亡、MTT法检测细胞增殖情况.结果 倒置显微镜下可见低氧组细胞较常氧组生长更好;荧光显微镜下2组细胞的胞核形态完好,无凋亡像;流式细胞仪检测,与常氧组相比,低氧组细胞凋亡率无差异(P＞0.05);MTT示:于72 h、96 h及120 h时低氧组较常氧组明显增殖(P＜0.05).结论 适度低氧不会诱导脑胶质瘤干细胞凋亡;适度低氧微环境对胶质瘤干细胞有促增殖作用.     

Wnt/β-catenin 信号通路与器官纤维化的关系

Wnt 基因是一种原癌基因,1982年 Nusse 等［1］在用小鼠乳头瘤病毒（mouse mammary tumor virus, MMTV）诱导小鼠乳腺癌过程中发现了 Wnt 基因,由于该基因的激活依赖 MMTV 的插入（insertion）,因此被命名为 Int-1。后研究发现 Int-1基因与1973年 Sharma 报道的果蝇的无翅基因 Wingless （wg）为同源基因,因此将两者合并称为 Wnt 基因［2］。在人类已发现和经实验证实共有19个 Wnt基因家族成员［3］,其编码的 Wnt 蛋白属于分泌型糖蛋白,根据信号转导的不同方式方式,Wnt 信号转导途径可分为两条：经典 Wnt／β-catenin 途径（canonical Wnt／β-catenin signal pathway）和非经典的 Wnt 信号途径（noncanonical Wnt signal path-way）,后者又包括 Wnt-平面细胞极性途径（the pla-nar cell polarity,PCP,即 Wnt／PCP 途径）和 Wnt-Ca2＋途径［4］。Wnt 信号通路参与调控细胞的增殖、分化、凋亡、癌变及机体免疫等生理病理过程。近期研究证实：Wnt 信号通路的异常与肾脏、肝、肺、皮肤等各种组织器官纤维化疾病的发生与进展关系密切。     

Wnt/β-catenin通路关键分子在NK/T细胞淋巴瘤组织中的表达及其临床意义

目的:研究Wnt/β-catenin通路的关键分子β-catenin、c-myc和cyclinD₁在NK/T细胞淋巴瘤(NKTCL)组织中的表达,阐明其与NKTCL患者临床特征的关系。方法:采用Real-time PCR法检测人NKTCL细胞株(SNK-6和YTS)及人正常NK细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关基因β-catenin、c-myc和cyclinD₁ mRNA的表达水平;采用免疫组织化学SP法检测NKTCL组织和反应性增生的淋巴组织中β-catenin、c-myc蛋白的表达阳性率,并分析蛋白表达与患者临床特征的关系;分析NKTCL患者中β-catenin和c-myc蛋白表达的相关性;Kaplan-Meier法分析β-catenin表达与NKTCL患者中位生存期的关系。结果:细胞株SNK-6和YTS中β-catenin、c-myc和cyclinD₁ mRNA的表达阳性率明显高于正常NK细胞(P<0.05);NKTCL组织中β-catenin和c-myc蛋白表达阳性率(24%和56%)明显高于淋巴结反应性增生组织(0%和25%)(P<0.05);β-catenin表达与Ann Arbor分期有关联(P<0.05),c-myc表达与Ann Arbor分期和Ki-67水平有关联(P<0.05),NKTCL患者中β-catenin和c-myc表达呈正相关关系(r=0.770,P<0.05);β-catenin阳性表达患者中位生存期低于β-catenin阴性表达患者(P<0.05)。结论:Wnt/β-catenin信号通路中关键分子β-catenin、c-myc、cyclinD₁在NKTCL组织中高表达,并且其表达水平与NKTCL患者临床分期有关联。     

葛根素对成骨细胞体外增殖及Wnt/β-catenin信号通路表达的影响

目的:葛根素对成骨细胞体外增殖及Wnt/β-catenin信号通路表达的影响。方法:培养成骨细胞MC3T3-E1并分为对照组及10-6 mol/L PUE组、10~(-7) mol/L PUE组、10~(-8) mol/L PUE组,处理24小时后检测成骨细胞标志基因、凋亡基因、Wnt/β-catenin通路基因的mRNA表达量。结果:10-6 mol/L PUE组、10~(-7) mol/L PUE组、10~(-8) mol/L PUE组细胞ALP、Runx2、OC。Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt10b、β-catenin的mRNA表达量均显著高于对照组,caspase-3、caspase-8、caspase-9、caspase-12的mRNA表达量均显著低于对照组(P<0.05);且葛根素剂量越大,细胞中ALP、Runx2、OC、Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt10b、β-catenin的mRNA表达量越高,caspase-3、caspase-8、caspase-9、caspase-12的mRNA表达量越低(P<0.05)。结论:葛根素能够有效促进成骨细胞的增殖及Wnt/β-catenin通路的活化。     

补肾活血方对薄型子宫内膜干细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探讨补肾活血方对薄型子宫内膜干细胞Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路的影响。方法选取薄型子宫内膜患者在确定排卵日后第7~9天,用一次性子宫内膜取样器吸取子宫内膜组织约100 mg,生理盐水冲洗干净后,投入4%多聚甲醛中固定。将取得的内膜组织分离培养子宫内膜干细胞,制备药物血清。将子宫内膜干细胞分为对照组、补肾活血方高、中、低剂量组、西药组。给予药物干预后双荧光素酶报告系统检测β-catenin/T细胞因子(TCF)转录活性,免疫荧光法检测CD34/CD117蛋白的表达,RT-PCR法检测Oct-4基因,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测腺苷三磷酸结合转运蛋白(ABCG2)的表达。结果转染相同量的质粒,补肾活血方中、高剂量组和西药组与对照组比较有显著性差异(P0.05)。CD34/CD117、Oct-4基因、ABCG2蛋白在子宫内膜干细胞中均呈阳性表达,CD34蛋白的表达补肾活血方中剂量组与对照组比较有显著性差异(P0.05),补肾活血方高剂量组、西药组与对照组比较有极显著性差异(P0.01),CD117蛋白的表达补肾活血方中剂量、高剂量组与对照组比较有显著性差异(P0.05),西药组与对照组比较有极显著性差异(P0.01)。RT-PCR检测结果显示,Oct-4 mRNA的表达率各给药组与对照组存在显著性差异(P0.05);Western blot检测结果显示,ABCG2蛋白的表达率各给药组与对照组比较均存在显著性差异(P0.05)。结论补肾活血方可以增加薄型子宫内膜干细胞的荧光活性,从而促进Wnt/β-catenin信号通路的激活,并可以不同程度的增加CD34/CD117、Oct4基因及ABCG2蛋白的表达。     

Wnt/β-catenin信号传导途径在肺癌细胞A549中的作用

目的 研究Wnt/β-catenin信号传导途径在肺腺癌细胞系A549中的激活及其作用.方法 用不同浓度的GSK-3β抑制剂Licl作用A549细胞,采用免疫组化法对β-catnin的细胞内表达定位,采用MTT细胞增殖实验观察细胞增殖活性,用克隆形成实验观察克隆形成能力,用Western blot检测β-catenin和干细胞分子标志OCT-4的表达.结果 10mmol/L Licl作用24h,A549细胞中的β-catenin表达增加并出现核转移,同时增殖能力与克隆形成能力增强,干细胞标记蛋白OCT-4的表达增加.结论 Wnt/β-catenin信号通路在维持A549细胞增殖和克隆形成能力及增强OCT-4的表达方面有着重要作用,可为肺癌治疗提供新的靶点.     

PTHrP和Notch双信号通路调控骨骺干细胞的增殖

目的 研究PTHrP、Notch双信号系统对骨骺干细胞增殖的调控作用.方法 体内实验:取24 h内新生大鼠股骨体外器官培养,分别用PTHrP信号系统激活剂PTHrP(1～34)和PTHrP受体竞争抑制物PTHrP(7～34),及Notch信号系统激活剂Jagged1/Fc和抑制剂DAPT处理,空白对照加PBS缓冲液,培养72 h后收集标本行HE、Brdu及免疫组化染色方法检测.体外实验:构建PTHrP重组质粒和RNAi慢病毒表达载体转染体外培养的骨骺干细胞,收集转染后细胞用免疫印迹检测.结果 与对照组相比,PTHrP(1～34)、Jagged1/Fc处理组静止区骨骺干细胞层长度在生长板全长中比值及Brdu阳性细胞率明显增高,促细胞增殖作用明显,而PTHrP(7～34)、DAPT处理组则抑制骨骺干细胞增殖.且PTHrP明显促进Notch信号通路配体Jagged1与受体NICD蛋白表达.结论 PTHrP、Notch信号通路均可促进骨骺干细胞增殖,且PTHrP可上调Notch表达进而促进骨骺干细胞的增殖.

Abstract：

Objective To study the regulation of the proliferation of epiphysis stem cells by the PTHrP (parathyroidhormone related peptide) and Notch signaling systems. Methods An organ culture system of femurs of SD rat in 24 h after birth was employed. PTHrP ( 1 - 34) was used as the activator of the PTHrP signaling pathway and PTHrP (7 - 34) as the antagonist of PTH (parathyroidhormone) -receptor. For Notch signaling system, Jaggedl/Fc was used as the activator and DAPT as its inhibitor. The femurs were cultured in DMEM ( Dulbecco's modified Eagle's medium)/F12 medium while phosphate buffered saline was used for the control groups. Hhematoxylin and eosin staining and bromodeoxyuridine analysis were used to analyze the length of the epiphysis stem cells zone and the proliferation of epiphysis stem cells. The expression of NICD (Notch intra-cellular domain) and Jaggedl were analyzed by immunohistochemistry. The epiphysis stem cells were transfected with the lentiviral vectors with rat PTHrP gene overexpression or inhibition properties, the cells transfected with the PGC-GFP-lentivirus or NC-GFP-lentivirus were used as control. Western blot was employed to detect the expression of NICD and Jaggedl genes. Results PTHrP (1 -34) and Jagged1/Fc could dramatically elevate the rate of epiphysis stem cells zone by the whole growth plate length measurement while PTHrP (7 - 34 ) and DAPT could decrease the rate. Brdu analysis also showed that the number of proliferative epiphysis stem cells could be up-regulated by the PTHrP (1 -34 ) or Jagged1/Fc signaling. By contrast, the treatment with PTHrP (7 -34) or DAPT reduced the number of proliferative epiphysis stem cells. Immunohistochemistry and Western blot showed a significantly elevated expression of NICD and Jagged1 when PTHrP signaling was activated while a reductive expression of NICD and Jagged1 when PTHrP signaling was inactivated. Conclusion Both of PTHrP and Notch signaling system could promote the proliferation of epiphysis stem cells. And the PTHrP signaling can stimulate Notch signaling to promote the proliferation of epiphysis stem cells.     

低氧对人骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的 探讨二氯化钴(CoCl2)诱导的化学性低氧对人骨髓间充质干细胞(hBMSC)增殖的影响.方法 采用密度梯度离心法分离、培养hBMSC;用流式细胞仪检测其表面标志物;用CoCl2建立化学性缺氧模型,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪检测hBMSC在不同CoCl2浓度(0、100、150、300 μmol/L)和不同时间(0,12 h及1、2、4、6、7 d)的增殖情况,0 μmol/L CoCl2组为常氧组,后3个浓度组为低氧组.结果 化学缺氧12 h内,hBMSC增殖被抑制;1、2、4 d时各低氧组细胞增殖均高于常氧组,但300 μmol/L CoCl2组与常氧组比差异无统计学意义(P＞0.05);而100μmol/L CoCl2组(0.139±0.003、0.178±0.005、0.224±0.005)和150 μmol/L CoCl2组(0.202±0.020、0.224±0.019、0.263±0.004)增殖明显高于常氧组(0.134±0.005、0.167±0.004、0.206±0.005),其中150μmol/L CoCl2组1 d时增殖最显著(均P＜0.05).6 d时100、150 μmol/LCoCl2组细胞增殖(0.258±0.020、0.264±0.008)仍高于常氧组(0.248±0.004),但优势逐渐减弱(P＜0.05).7 d时这种低氧促增殖的效应消失.结论 CoCl2诱导的化学性缺氧可以促进hBMSC增殖.     

胚胎干细胞向神经细胞诱导分化的实验研究

目的 探讨胚胎干细胞（ＥＳ）向神经细胞定向分化发育的可能性。方法 ＥＳ－Ｄ３在无小鼠白血病抑制因子（ｍＬＩＦ）存在的条件下培养ＥＳ细胞４ｄ,形成ＥＳ集落（即胚胎样小体）,经胰酶消化打散后种植于粘附性培养皿上。结果 上述细胞表达ＭＡＰ－２和ＧＦＡＰ蛋白。ＲＴ－ＰＣＲ分析进一步证明这些细胞能表达γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）γ亚单位和酷氨酸羟化酶以及脑因子－１神经相关基因。结论 ＥＳ细胞在体外能有效地被诱导成具有多种神经元特性的神经样细胞,可为神经移植提供源源不断的材料。     

JAK/STAT途径介导Aβ寡聚体诱导小胶质细胞TNF-α的释放

目的 研究β淀粉样蛋白（Aβ）寡聚体对晚期糖基化蛋白相关受体（RAGE）介导小胶质细胞产生炎症反应的影响,分析Janus 激酶/ 信号转导和转录激活子（JAK/STAT）途径与Aβ寡聚体诱导肿瘤坏死因子α（TNF-α）释放的关系。方法 取经过刺激及阻断处理原代培养的小胶质细胞,经酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清液TNF-α的水平。结果 经Aβ寡聚体处理24h后TNF-α表达增加,分别经抗RAGE IgG和AG490预处理后再经Aβ寡聚体处理小胶质细胞,TNF-α释放明显被抑制。 结论 RAGE是Aβ寡聚体诱导小胶质细胞炎症反应的受体,JAK/STAT途径可能参与Aβ寡聚体诱导小胶质细胞TNF-α的释放。     

信号系统对骨骺干细胞增殖与分化调控作用的初步观察

目的 研究激活的Notch1信号系统对体外培养的骨骺干细胞增殖与分化的调控作用。方法向体外培养的骨骺于细胞中分别加入Notchl激活剂rhNF-kB和抑制剂γ-secretase inhibitorⅡ（MW167）,空白对照加PBS缓冲液。用RT-PCR、免疫组化、MTT、流式细胞仪、碱性磷酸酶染色和Western印迹方法检测。结果骨骺干细胞中有Notch1和Jagged1表达;与对照组相比,rhNF-kB诱导组表达PCNA、胶原Ⅱ蛋白明显增多,促细胞增殖作用明显（P=0．027）,并且进入分裂期（S期）的细胞增多（26．54％）,而MW167诱导组碱性磷酸酶、CollagenX蛋白表达明显增多,胶原Ⅱ蛋白及分化标志蛋白stathmin表达明显减少。结论当Notch信号系统被激活时,骨骺干细胞进行增殖;当Notch信号系统被抑制时,骨骺干细胞进行分化。     

促红细胞生成素对低氧状态下神经干细胞增殖、分化的影响

目的:探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对低氧状态下神经干细胞(neural stem cell,NSC)增殖、分化的影响。方法:采用10%低氧环境中无血清悬浮培养胚鼠脑源性NSC;加入EPO,观察和计数NSC克隆形成率,MTT法检测NSC的生长情况;胎牛血清诱导细胞分化,神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)和神经胶质原纤维酸性蛋白(gliafibrillary acidic protein,GFAP)免疫荧光染色检测NSC的分化情况。结果:培养的细胞经鉴定呈Nestin阳性,分化后部分细胞呈NSE阳性,部分细胞呈GFAP阳性。常氧和低氧组NSC的克隆形成率分别为(32.26±3.26)%和(48.93±4.34)%。低氧+EPO组NSC的克隆形成率比低氧组增加了17.26%;分化后,NSE阳性细胞数目增多。结论:低氧可促进NSC增殖,促进其向神经元方向分化;EPO能进一步促进NSC增殖及向神经元方向分化。     

神经干细胞增殖能力的组织差异性研究

目的从胚胎大鼠海马和上丘脑区中分离、培养神经干细胞,并进行体外增殖能力的比较。方法采用机械分离,无血清传代培养法从胚鼠海马和上丘脑获得神经干细胞。动态观察细胞生长情况,测定其体外生长曲线。使用免疫荧光法对两种来源的细胞克隆进行鉴定,激光共聚焦显微镜三维形态观察。使用扫描电镜观察神经干细胞克隆球的表面形态特征。将神经干细胞与Brdu共孵育,观察体外增殖情况。结果海马源胚胎神经干细胞的体外生长情况与上丘源干细胞基本相同,但前者的增殖速度相对较慢。两种来源的干细胞克隆球具有相似的超微结构。在相差显微镜和激光共聚焦显微镜下,两种来源的神经干细胞形态相似。与Brdu共孵育后,上丘源神经干细胞的阳性率高于海马源干细胞。从细胞生长曲线上可见两种来源的干细胞呈现了相同的增殖趋势,但生长曲线并不相同。从培养第8d起,上丘源胚胎神经细胞的活细胞记数就高于海马源干细胞。结论使用机械分离、无血清培养的方法可以获得胚胎海马源与上丘源神经干细胞,两者具有相似的形态结构,但上丘来源的神经干细胞增殖速度高于海马来源的神经干细胞。     

体外诱导胚胎干细胞来源表皮干细胞向汗腺细胞分化的研究

目的:探讨体外诱导胚胎干细胞来源表皮干细胞向汗腺上皮分化可行性及条件,为汗腺组织工程探索新的种子细胞提供来源。方法:体外分离培养、扩增并鉴定人汗腺细胞。将胚胎干细胞培养于人羊膜表面诱导其向表皮干细胞转化后,与人汗腺细胞直接共同培养,诱导其分化为汗腺细胞。采用倒置显微镜进行形态学观察,并用免疫细胞化学染色方法检测诱导分化结果。结果:体外培养的人汗腺细胞CK19、CEA阳性表达。培养于人羊膜表面的胚胎干细胞β1整合素呈强阳性表达,符合表皮干细胞的表面抗原标志。经与人汗腺细胞共培养2周后,有部分胚胎干细胞来源的表皮干细胞表达CEA,表明通过汗腺细胞分泌的细胞因子、细胞间直接接触等可能的作用途径,使其表型向汗腺细胞表型转化。结论:胚胎干细胞来源表皮干细胞可能成为汗腺组织工程种子细胞的重要来源。