旋复花提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞抑制作用的研究

目的:观察旋复花提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用,为烧伤后增生性瘢痕的治疗提供实验依据。方法:体外培养烧伤后的人增生性瘢痕成纤维细胞,加入不同浓度的旋复花提取物,24h后观察细胞形态学,以LDH为指标观察细胞毒性,用MTT法检测其增殖活性。结果:不同浓度的旋复花提取物均能改变成纤维细胞形态,抑制细胞增殖,浓度在500μg/mL以下无明显的细胞毒作用。结论:旋复花提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞具有抑制作用,并呈剂量依赖关系,具有防治增生性瘢痕的应用前景。     

黄藤乙醇提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞抑制作用的研究

目的:研究黄藤乙醇提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用.方法:体外培养烧伤后的人增生性瘢痕成纤维细胞,加入不同浓度的黄藤提取物,24 h后观察细胞形态学,以乳酸脱氢酶(LDH)为指标观察细胞毒性,用MTT法检测其增殖活性.结果:不同浓度的黄藤醇提取物均能改变成纤维细胞形态,抑制细胞增殖,浓度在300μg/mL以下无明显的细胞毒作用.结论:黄藤醇提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞具有抑制作用,并呈剂量依赖关系.     

芒柄花黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞生长的作用

目的探讨芒柄花黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞生长的作用。方法获取手术切除的人增生性瘢痕组织以及局部皮瓣转移修复后剩余的正常皮肤,提取成纤维细胞。通过MTT试验检测不同浓度的芒柄花黄素对成纤维细胞增殖的作用,应用流式细胞术对芒柄花黄素处理后的成纤维细胞周期进行分析。通过Annexin V-FITC/PI双染色法和Hoechest 33258染色观察成纤维细胞的凋亡情况。通过Western blot与RT-PCR试验,检测芒柄花黄素对细胞周期蛋白Cyclin D1和凋亡调节蛋白Bcl-2的作用。结果与对照组比较,芒柄花黄素对正常皮肤成纤维细胞的增殖影响较小,对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用,且药物浓度越高、作用时间越长,抑制作用越强。成纤维细胞大部分阻滞于G_1期,S期的细胞减少,细胞周期的进程受到阻断。芒柄花黄素能够通过抑制细胞周期蛋白Cyclin D1来影响细胞周期的进程,将细胞周期阻滞于G_1期;通过抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达诱导成纤维细胞的凋亡,从而实现对细胞生长的抑制作用。结论芒柄花黄素能够抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖并诱导其凋亡,可考虑用于增生性瘢痕的预防与临床治疗。     

积雪草总苷及其化学成分对瘢痕成纤维细胞增殖的抑制作用

目的研究积雪草总苷及从中分离得到的主要单体化合物对瘢痕增生的抑制作用。方法以体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞为试验对象,经不同浓度的样品作用后,用MTT法测定样品对瘢痕成纤维细胞增殖能力的影响,用LDH法测定样品对细胞的毒性作用。结果8个试验药物对瘢痕成纤维细胞增殖抑制作用由强到弱的顺序为：羟基积雪草酸〉积雪草酸〉羟基积雪草苷〉centellasaponinB〉积雪草总苷〉积雪草苷、积雪草苷B〉centellosideC。结论羟基积雪草酸、积雪草酸、羟基积雩草苷和centellasaponinB均可抑制瘢痕成纤维细胞的增殖,且作用强于积雪草总苷。     

脂多糖对人皮肤成纤维细胞表型变化的影响及意义

目的探讨被细菌脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激后的人正常皮肤成纤维细胞的表型改变与增生性瘢痕形成的关系。方法体外培养增生性瘢痕患者瘢痕组织和人正常皮肤成纤维细胞,正常成纤维细胞分别经不同浓度（0、0.005、0.010、0.050、0.100、0.500、1.000μg/ml）LPS刺激,并对刺激后细胞进行传代,通过病理学、免疫组化染色、电镜观察等方法,观察成纤维细胞表达增殖细胞核抗原（PCNA）、α1（Ⅰ）前胶原蛋白、α平滑肌肌动蛋白的规律及透射电镜下超微结构的变化,并以相同代数的瘢痕组织成纤维细胞作对照。结果经LPS刺激后,正常皮肤成纤维细胞被激活,随着刺激浓度的增加,光镜下核浆比例逐渐增大;免疫组化染色显示PCNA表达阳性细胞逐渐减少,α1（I）前胶原蛋白和α平滑肌肌动蛋白阳性细胞逐渐增多;电镜下显示细胞形态多样化,核浆比例增加,核膜变得不规则,胞浆内粗面内质网和高尔基复合体进一步增多,微丝微管增加,肌微丝出现。上述变化在LPS浓度为0.100μg/ml时最明显,接近瘢痕组织成纤维细胞,表明成纤维细胞逐渐向增殖表型、合成表型或收缩表型变化。此后,随着LPS浓度继续升高,上述表型标志的表达和细胞形态均趋向于正常成纤维细胞。结论一定浓度的LPS可能与增生性瘢痕形成有关。     

脂多糖对人皮肤成纤维细胞表型变化的影响及意义

目的 探讨被细菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激后的人正常皮肤成纤维细胞的表型改变与增生性瘢痕形成的关系.方法 体外培养增生性瘢痕患者瘢痕组织和人正常皮肤成纤维细胞,正常成纤维细胞分别经不同浓度(0、0.005、0.010、0.050、0.100、0.500、1.000 μg/ml)LPS刺激,并对刺激后细胞进行传代,通过病理学、免疫组化染色、电镜观察等方法,观察成纤维细胞表达增殖细胞核抗原(PCNA)、α1(Ⅰ)前胶原蛋白、α平滑肌肌动蛋白的规律及透射电镜下超微结构的变化,并以相同代数的瘢痕组织成纤维细胞作对照.结果 经LPS刺激后,正常皮肤成纤维细胞被激活,随着刺激浓度的增加,光镜下核浆比例逐渐增大;免疫组化染色显示PCNA表达阳性细胞逐渐减少,α1(I)前胶原蛋白和α平滑肌肌动蛋白阳性细胞逐渐增多;电镜下显示细胞形态多样化,核浆比例增加,核膜变得不规则,胞浆内粗面内质网和高尔基复合体进一步增多,微丝微管增加,肌微丝出现.上述变化在LPS浓度为0.100 μg/ml时最明显,接近瘢痕组织成纤维细胞,表明成纤维细胞逐渐向增殖表型、合成表型或收缩表型变化.此后,随着LPS浓度继续升高,上述表型标志的表达和细胞形态均趋向于正常成纤维细胞.结论 一定浓度的LPS可能与增生性瘢痕形成有关.     

瘢痕消复方提取工艺及其对增生性瘢痕的抑制作用研究

目的:在单因素试验的基础上,以乙醇体积分数、料液比、提取时间为影响因素,研究瘢痕消复方的提取工艺,并考察提取物对增生性瘢痕的抑制作用。方法:采用加热回流法提取瘢痕消复方,以丹参酮ⅡA、丹酚酸B、芦荟苷、没食子酸为主成分进行含量综合评分为评价指标,Box-Behnken响应面法研究提取工艺。采用CCK-8法检测不同浓度的提取液对人增生性瘢痕成纤维细胞(hypertrophic scar fibroblasts, HSFb)细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2水平。结果:最佳提取工艺为13倍量73%乙醇提取2次,每次2.1 h。低、中、高剂量提取液均能使HSFb细胞生长抑制率、细胞凋亡率、Bax水平明显升高,Bcl-2水平降低,而且较高剂量比较低剂量更明显。结论:瘢痕消复方提取工艺稳定、可行。复方提取物能有效抑制HSFb增殖,促进细胞凋亡,影响细胞凋亡蛋白的表达。     

氧化苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及凋亡的作用

目的探讨氧化苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及凋亡的影响。方法从人的增生性瘢痕组织中提取成纤维细胞进行培养,通过MTT实验观察不同浓度的氧化苦参碱对成纤维细胞增殖的影响。应用流式细胞术检测经氧化苦参碱处理后成纤维细胞的周期变化,并通过Annexin V-FITC/PI双染色法和Hoechst 33258染色观察细胞的凋亡情况。通过Western Blot和RT-PCR检测氧化苦参碱对细胞周期蛋白CDK4、CDK6,以及凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的作用。结果与对照组相比,氧化苦参碱的浓度为10μmol·L~(-1)时,24 h细胞增殖的抑制率为(18.92±3.77)%,成纤维细胞的早期和晚期凋亡率分别为(3.28±2.56)%和(2.98±1.78)%;氧化苦参碱的浓度为20μmol·L~(-1)时,24 h细胞增殖的抑制率为(32.93±2.68)%,成纤维细胞的早期和晚期凋亡率分别为(6.89±0.76)%和(1.47±2.57)%。氧化苦参碱能够通过抑制细胞周期蛋白CDK4、CDK6和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,诱导促凋亡蛋白Bax的表达来影响细胞周期进程,将细胞周期阻滞于G1期,使细胞增殖受到抑制,凋亡率增加。结论氧化苦参碱能够抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖并诱导其凋亡,可作为预防和治疗增生性瘢痕的潜在药物。     

bFGF对成纤维细胞增殖和胶原及纤维连接蛋白的影响

目的：探讨碱性成纤维细胞因子（ bFGF）调节皮肤创伤修复的作用机制。方法采用组织块贴壁法培养来源于正常皮肤和增生性瘢痕的成纤维细胞（FB）,加入含有不同浓度bFGF（0,0.1,1,10,100,1000 ng·mL-1）的无血清培养液培养72 h,采用细胞计数法和锥虫蓝染色检测各组FB增殖和凋亡,酶联免疫吸附法（ ELISA）和逆转录PCR （ RT-PCR）分别检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白浓度及基因表达情况。结果 bFGF促进FB增殖,当浓度过高时则抑制FB增殖,促进其凋亡,并且增生性瘢痕FB增殖较来源于正常皮肤的FB缓慢;bFGF明显抑制增生性瘢痕FB Ⅰ型胶原产生,对来源于正常皮肤FB无影响;bFGF上调来源于正常皮肤FB的纤维连接蛋白基因表达,对增生性瘢痕FB中的表达无影响;bFGF对两种来源的FBⅢ型胶原的分泌和表达均无显著作用。结论 bFGF对来源正常皮肤和增生性瘢痕的FB具有不同的影响和作用机制,可能对创伤修复早期和瘢痕形成过程发挥作用。     

抑制活化素受体样激酶5对增生性瘢痕成纤维细胞中胶原蛋白沉积的影响

目的研究抑制活化素受体样激酶(ALK)5对增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白(COL1A2)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法手术取增生性瘢痕组织进行成纤维细胞体外原代培养,采用不同浓度(1、5、10μM)的ALK5抑制剂CP-639180对增生性瘢痕成纤维细胞干预3 h后,分别采用定量逆转录PCR和Western blot方法检测Ⅰ型胶原蛋白和α平滑肌肌动蛋白的表达。结果与对照组比较,ALK5抑制剂处理后,成纤维细胞中COL1A2的mRNA和蛋白含量均明显降低,且COL1A2的mRNA和蛋白水平与抑制剂的浓度呈反比(P<0.05,P<0.01)。同样,ALK5抑制剂在转录水平和蛋白翻译水平降低了瘢痕成纤维细胞中α-SMA的表达(P均<0.05)。结论应用小分子ALK5抑制剂CP-639180可以抑制增生性瘢痕成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原蛋白和α-SMA,进一步抑制胶原纤维的合成,为增生性瘢痕治疗研究提供新的思路。     

粉防已碱对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及细胞周期的影响

目的观察粉防己碱对培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及周期的影响。方法培养人体增生性瘢痕的成纤维细胞,设实验组和对照组,实验组加入粉防己碱,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察细胞的增殖率,用流式细胞仪观察细胞周期,比较两组之间的细胞增殖率和细胞周期。结果细胞增殖率实验组吸光度为(0.31±0.03),对照组为(0.53±0.04),两组比较差异有统计学意义(P<0.05);对照组处于增殖期的细胞占细胞总数的68.3%,实验组处于增殖期的细胞明显减少,为占总数的40.8%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论粉防己碱通过阻止成纤维细胞由静止期进入增殖期而抑制其增殖,可能具有防治瘢痕的作用。     

Lapachol suppresses cell proliferation and secretion of interleukin-6 and plasminogen activator inhibitor-1 of fibroblasts derived from hypertrophic scars

Objectives The pathogenesis and therapy of hypertrophic scar have not yet been established. Our aim was to investigate the antiproliferative and antisecretory effects of lapachol, isolated from the stem bark of Avicennia rumphiana Hall. f., on hypertrophic scar fibroblasts. Methods The effects of lapachol on hypertrophic scar fibroblast proliferation were measured using the MTT assay, cell‐cycle analyses and lactate dehydrogenase assays. The type I collagen α‐chain (COL1A1), interleukin‐6 (IL‐6) and plasminogen activator inhibitor‐1 (PAI‐1) mRNA and/or protein levels of hypertrophic scar‐fibroblasts were quantitated by real‐time PCR and ELISA. Key findings Lapachol at 25 and 50 µm significantly inhibited the in vitro proliferation of hypertrophic scar fibroblasts, but not fibroblasts from non‐lesional skin sites. In addition, lapachol had no apparent effect on cell cycle and lactate dehydrogenase activity in conditioned medium from lapachol‐treated hypertrophic scar fibroblasts was nearly equal to that in medium from vehicle‐treated cells. Lapachol treatment also inhibited COL1A1 and PAI‐1 mRNA levels in hypertrophic scar fibroblasts, but did not affect IL‐6 mRNA levels. The protein levels of IL‐6 and PAI‐1 in conditioned medium from hypertrophic scar fibroblasts treated with 50 µm lapachol were lower than those from vehicle‐treated hypertrophic scar fibroblasts. Conclusions Lapachol decreased the proliferation rate of hypertrophic scar fibroblasts. As IL‐6 and PAI‐1 secretion was also lowered in lapachol‐treated hypertrophic scar fibroblasts, our findings suggested that lapachol may have suppressed extracellular matrix hyperplasia in wound healing and possibly alleviated the formation of hypertrophic scar.     

体外培养创面成纤维细胞的生物学特性及其意义

目的 研究创面成纤维细胞的生物学特性有利于揭示创面愈合过程中瘢痕形成的机理。方法 采用体外成纤维细胞培养技术，开展创面成纤维细胞的分离培养，建立细胞库；细胞的生长动力学和增殖型、合成型、收缩型等表型变化；细胞因子对不同时期来源创面成纤维细胞增殖活怀、蛋白合成及其收缩功能的影响。结果 体外培养的创面成纤维细胞保持其在体内的生物学特性；春增殖、合成、收缩等表型间转化存在着一定的规律性；不同时期来源的创面成纤维细胞对细胞因子的反应性不同。结论 体外控制条件下创面成纤维细胞的生物学活动及其影响因素在细胞水平上揭示了瘢痕形成的理论基础与调控机理，为指导临床防治烧伤后瘢痕增生或／和瘢痕挛缩提供了依据。     

rIL-2体外对烧伤脓毒症的细胞免疫功能的影响

目的：为探讨烧伤脓毒症的防治措施，采用烫伤后盲肠结扎穿刺术建立烧伤脓毒症小鼠模型。方法：体外观察ｒＩＬ－２（重组白细胞介素２）对鼠模型和临床烧伤患者的细胞免疫功能的作用。结果：①烧伤脓毒症小鼠脾细胞对ＣｏｎＡ刺激的应答和ＮＫ细胞毒活性均显著降低；②烧伤患者的Ｔ细胞和ＮＫ细胞免疫功能也明显降低，并随烧伤严重程度而加重；③ｒＩＬ－２在体外对烧伤后受损的细胞免疫功能有一定的改善作用，但对脓毒症感染患者无明显作用。结论：ｒＩＬ－２对烧伤后免疫功能的降低有一定的恢复作用。     

Effect of enoxaparin and onion extract on human skin fibroblast cell line – Therapeutic implications for the treatment of keloids

Context: Keloids and hypertrophic scars are hyperproliferative skin disorders resulting in abnormal wound healing. In the prevention and treatment of keloids and hypertrophic scars, ointments containing heparin and onion extract are very popular. Their therapeutic effects, however, are still controversial and the mechanism of action is not fully understood.

Objective: The aim of this study was to assess the effect of enoxaparin and dry onion extract on proliferation, apoptosis and β1 integrin expression in human fibroblasts.

Materials and methods: Fibroblast human cell lines (46 BR.1?N) were treated for 48?h with various concentrations of enoxaparin sodium (20, 100, 500?µg/mL) and/or onion [Allium cepa L. (Alliaceae)] extract (50, 250, 1000?µg/mL). The cell proliferation was evaluated by [³H]-thymidine incorporation assay. Furthermore, the expression of β1 integrin and apoptosis was determined by flow cytometry.

Results and discussion: The results demonstrate that enoxaparin and onion extract inhibited the proliferation of human fibroblasts. Almost complete inhibition of cell proliferation was achieved by enoxaparin in 500?µg/mL concentration (91.5% reduction). The onion extract at a concentration of 250?µg/mL also strongly inhibited the proliferation of cells (50.8% reduction). Depending on concentration, enoxaparin and onion extract induced apoptosis (500 and 1000?µg/mL, respectively) and, depending on concentration, downregulated the expression of β1 integrin on human fibroblasts.

Conclusion: This work points at possible mechanism of action of enoxaparin and onion extract, when administered in the treatment of patients with keloids and hypertrophic scars.